B16-cellen – Basisgids voor B16-melanoomcellen in oncologisch onderzoek
B16 is een cellijn van huidkanker (melanoom) afkomstig van muizen. Deze cellijn is een effectief in-vitro-model voor het bestuderen van huidkanker bij mensen. Ze wordt vaak gebruikt om de vorming van solide tumoren en de uitzaaiing van kankercellen te onderzoeken.
- Groei-medium
- B16-cellen worden gekweekt in EMEM-medium (Eagle's Minimum Essential Medium) dat 10 % foetaal runderserum (FBS) bevat. Het groeimedium moet 2-3 keer per week worden ververst.
- Verdubbelingstijd
- De gemiddelde verdubbelingstijd van de populatie voor B16-cellen wordt geschat op 24 uur.
- Groeitype
- B16-cellen zijn hechtend en groeien in monolaagjes.
- Bioveiligheidsniveau
- BSL-1
- Verkrijgbaar bij
- Cytion — Bestel B16
Dit artikel helpt u de basisprincipes van de B16-melanoomcellijn te begrijpen. Het behandelt met name het volgende:
Algemene kenmerken en oorsprong van de B16-cellijn
In dit deel van het artikel worden de kenmerkende eigenschappen van de B16-melanoomcellijn besproken. U vindt hier de antwoorden op de volgende veelgestelde vragen. Zoals: Wat is de B16-kankercellijn? Waar komen B16-cellen vandaan? Hoe groot zijn B16-cellen?
- De B16-cellijn werd in 1954 opgericht. Deze cellen zijn afkomstig van C57BL/6J-muizen die spontaan een tumor in de huid kregen bij de Jackson Laboratories in Maine.
- Dit zijn melanineproducerende epitheelcellen die kunnen uitzaaien naar de milt, lever en longen.
- De B16-melanoomcellen groeien als monolaagjes en vertonen een epitheelachtige en spoelvormige celmorfologie.
- De grootte van de B16-cellijn is ongeveer 15,4 μm.
- Er zijn verschillende subklonen van B16-cellen, waaronder B16GMCSF, B164A5, B16FLT3 en B16F10. Deze sublijnen verschillen van de oorspronkelijke B16-cellen en behouden enkele specifieke kenmerken. Zo vertonen ze verschillen in morfologie, celgrootte en andere eigenschappen. B16F10 heeft een hoog vermogen tot longmetastasen, en B164A5 is de meest agressieve huidkankercellijn in vergelijking met B16F10, B16-GMCSF en B16FLT3 [1].
Informatie over het kweken van de B16-cellijn
Voordat u een cellijn in stand houdt of kweekt, wilt u wellicht belangrijke informatie vinden over de verdubbelingstijd, het celtype, de groeimedia, de kweekomstandigheden, enz. Dit gedeelte bevat alle benodigde informatie voor het kweken van B16-cellen.
Belangrijke punten voor het kweken van B16-cellen
Verdubbelingstijd van de populatie:
De gemiddelde verdubbelingstijd van de populatie voor B16-cellen wordt geschat op 24 uur.
Hechtend of in suspensie:
B16-cellen zijn hechtend en groeien in monolaagjes.
Zaaidichtheid:
Het wordt aanbevolen om B16-cellen te zaaien met een celdichtheid van 1 tot 2 x 104 cellen/cm2. Gehechte B16-cellen worden gespoeld met 1x PBS en losgemaakt van het oppervlak met behulp van Accutase-oplossing. De cellen worden gecentrifugeerd en het celpellet wordt opnieuw gesuspendeerd in het groeimedium. Vervolgens worden deze cellen in een nieuwe kolf gedoseerd voor groei.
Groeimedium:
B16-cellen worden gekweekt in EMEM-medium (Eagle's Minimum Essential Medium) dat 10 % foetaal runderserum (FBS) bevat. Het groeimedium moet 2-3 keer per week worden ververst.
Groeicondities:
Voor de kweek van de B16-cellijn wordt een bevochtigde incubator met een CO2-toevoer van 5 % en een temperatuur van 37 °C gebruikt.
Opslag:
Deze cellen worden bewaard bij een temperatuur van minder dan -150 °C of in de dampfase van vloeibare stikstof om de levensvatbaarheid van de cellen te beschermen.
Invriesproces en medium:
CM-1- of CM-ACF-invriesmedium wordt gebruikt om B16-cellen in te vriezen met behulp van een langzaam invriesproces.
Ontdooiproces:
Ingevroren B16-cellen worden ontdooid bij 37 °C in een waterbad met een antimicrobieel middel. Ontdooide cellen kunnen direct worden gekweekt door ze in kolven met groeimedium te doen. Daarnaast kunnen deze cellen worden gecentrifugeerd om componenten van het invriesmedium te verwijderen en vervolgens in nieuw medium worden gekweekt.
Bioveiligheidsniveau:
De B16-cellijn moet worden gehanteerd of bewaard in een laboratorium met bioveiligheidsniveau 1.
B16-cellijn: voor- en nadelen
Net als andere cellijnen heeft B16 een unieke mix van voor- en nadelen. In dit gedeelte worden enkele belangrijke voor- en nadelen van deze melanoomcellijn opgesomd.
Voordelen
B16 is het eerste effectieve muizenmodel dat op grote schaal wordt gebruikt in metastaseonderzoek vanwege de voordelen die het biedt. Enkele voordelen van deze huidkankercellijn zijn:
Gemakkelijk te kweken
De B16-cellijn is eenvoudig te kweken in onderzoekslaboratoria. Ze wordt op grote schaal gebruikt voor onderzoek naar de biologie van kankercellen, signaalroutes en meer.
Snelgroeiend
De B16-melanoomcellijn vertoont een hoge proliferatiesnelheid, waardoor deze geschikt is voor het bestuderen van celdeling en groeiprocessen.
Tumorigeniciteit
B16 is een tumorogene cellijn met tumorachtige eigenschappen zoals invasie, migratie en proliferatie. De cellijn is waardevol voor het bestuderen van tumorvorming, progressie en metastase.
Nadelen
De nadelen van de B16-cellijn zijn:
Gebrek aan relevantie voor de mens
Omdat B16 een muizenmelanoomcellijn is, geeft deze mogelijk geen nauwkeurig beeld van de biologie van huidkanker bij mensen, wat de toepasbaarheid van onderzoeksresultaten beperkt.
Heterogeniteit
B16-cellen zijn heterogeen en vertonen uiteenlopende genetische en fenotypische eigenschappen binnen dezelfde kweek. Dit kan van invloed zijn op de betrouwbaarheid en reproduceerbaarheid van de resultaten.
Toepassingen van B16-cellen
De B16-cellijn wordt op grote schaal gebruikt in onderzoek. Enkele veelbelovende toepassingen van deze cellijn zijn:
- Tumorbiologie: Deze muizenhuidkankercellijn is tumorigenisch en wordt veel gebruikt om inzicht te krijgen in de tumorbiologie. Er zijn verschillende studies uitgevoerd om de cellulaire mechanismen achter de groei, proliferatie en metastase van tumorcellen te onderzoeken met behulp van B16-cellen. In een onderzoek uit 2020 werden B16-cellen gebruikt om de rol van lang niet-coderend RNA, LncRNA MEG3, bij de vorming, groei en metastase van melanoom te onderzoeken. Dit onderzoek wees uit dat het niet-coderende RNA de miRNA-21/E-cadherine-as moduleert om deze cellulaire gebeurtenissen te stimuleren [2]. Op dezelfde manier werd onderzoek uitgevoerd om de mogelijke rol van Notch1-signalering bij tumor-geïnduceerde immunosuppressie te onderzoeken met behulp van B16-cellen [3].
- Ontwikkeling van geneesmiddelen: B16-cellen worden gebruikt om de potentiële therapeutische effecten van kandidaat-geneesmiddelen te valideren en te testen. In een studie werd het antitumorale effect van neogamboginezuur, een natuurlijke verbinding, geëvalueerd met behulp van een B16-cellijn. De resultaten van de studie toonden aan dat deze verbinding de PI3K/Akt/mTOR-signaalroute moduleert om kankerceldood te veroorzaken [4]. Een andere studie onderzocht het antimaligne effect van ginsenoside Rg3, een saponine, met behulp van de B16-cellijn. Het onderzoek stelde dat deze natuurlijke verbinding antitumoractiviteit veroorzaakte door de ERK- en Akt-routes te onderdrukken [5].
5. Wetenschappelijke publicaties over B16-cellen
Hieronder volgen enkele belangrijke onderzoekspublicaties over de B16-melanoomcellijn.
Deze publicatie in het tijdschrift Cancer Cell International (2020) stelde dat lang niet-coderend RNA MEG3 de vorming, groei en uitzaaiing van B16-melanoomcellen versterkt door de miRNA-21/E-cadherine-as te moduleren.
Dit artikel is in 2018 gepubliceerd in het International Journal of Molecular Medicine. Deze studie onderzocht het melanogene effect en de mechanismen van een psoralenderivaat – 4-methyl-6-fenyl-2H-furo[3,2-g]chromen-2-on (MPFC) – in B16-cellen. De studie stelde dat dit derivaat de melanogenese bevordert door de PKA- en p38 MAPK-celsignalering te stimuleren.
Dit onderzoek werd in 2018 gepubliceerd in het Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. De bevindingen van de studie suggereren dat activering van Notch1-signalering in B16-cellen antitumorimmuniteit kan verhinderen door de expressie van het TGF-β1-gen te verhogen.
Neogamboginezuur induceert apoptose van B16-melanoomcellen via de PI3K/Akt/mTOR-signaalroute
Dit onderzoek werd in 2020 uitgevoerd door Chunlan Wu en zijn collega's en gepubliceerd in het tijdschrift Acta Biochimica Polonica. Dit onderzoek stelt dat neogamboginezuur, een natuurlijke verbinding, de dood van B16-melanoomcellen kan veroorzaken door de PI3K/Akt/mTOR-signaalcascade te moduleren.
Dit onderzoeksartikel werd in 2018 gepubliceerd in het European Journal of Medicinal Chemistry. In deze studie onderzochten onderzoekers de antikankeractiviteit van een verbinding, een iridium(III)-complex, met behulp van B16-melanoomcellen.
Ailanthone induceert celcyclusstilstand en apoptose in B16- en A375-melanoomcellen
Deze studie stelde dat een bioactieve stof uit planten, Ailanthone, potentieel heeft tegen kanker, aangezien het apoptose en celcyclusstilstand kan induceren in B16- en A375-melanoomcellen. Dit artikel werd in 2019 gepubliceerd in Biomolecules.
Bronnen voor de B16-cellijn: protocollen, video's en meer
Er zijn maar weinig bronnen over de B16-cellijn waarin de protocollen voor het kweken en transfectie worden uitgelegd.
- Melanoomcellen kweken: deze video biedt waardevolle tips voor het kweken van melanoomcellijnen.
- Subcultivering van een cellijn: Deze video legt een algemeen subcultiveringsprotocol voor een cellijn uit.
- Transfectie van de B16F10-cellijn: Deze video legt het transfectieprotocol uit voor een sublijn van B16-melanoomcellen. Het kan u helpen het transfectieprotocol voor B16-cellen te optimaliseren.
Hieronder volgen enkele protocollen voor het kweken van B16-cellen.
- B16-cellen kweken: Deze website bevat alle benodigde informatie voor het kweken van B16-cellen, inclusief groeimedia, subcultivering, ontdooien en invriezen van cellen.
Referenties
- Danciu, C., et al., Gedrag van vier verschillende sublijnen van B16-muizenmelanoomcellen: C57 BL/6J-huid. International journal of experimental pathology, 2015. 96(2): p. 73-80.
- Wu, L., et al., LncRNA MEG3 bevordert de groei, uitzaaiing en vorming van melanoom door de miR-21/E-cadherine-as te moduleren. Cancer Cell International, 2020. 20: p. 1-14.
- Yang, Z., et al., Notch1-signalering in melanoomcellen bevorderde tumor-geïnduceerde immunosuppressie via opregulatie van TGF-β1. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research, 2018. 37(1): p. 1-13.
- Wu, C., et al., Neogamboginezuur induceert apoptose van B16-melanoomcellen via de PI3K/Akt/mTOR-signaalroute. Acta Biochimica Polonica, 2020. 67(2): p. 197-202.
- Meng, L., et al., Antitumoractiviteit van ginsenoside Rg3 bij melanoom door downregulatie van de ERK- en Akt-routes. International Journal of Oncology, 2019. 54(6): p. 2069-2079.