B16 Cellen - Fundamentele gids voor B16 melanoomcellen in oncologisch onderzoek

B16 is de huidkankercellijn (melanoom) van murine oorsprong. Deze cellijn is een effectief in vitro model voor het bestuderen van menselijke huidkankers. Het wordt vaak gebruikt om de vorming van vaste tumoren en metastase van kankercellen te onderzoeken.

Dit artikel zal je helpen om de basisprincipes van de B16 melanoom cellijn te begrijpen. Meer specifiek wordt het volgende besproken:

1.algemene kenmerken en oorsprong van de B16-cellijn

Dit deel van het artikel gaat over de karakteristieke eigenschappen van de B16 melanoomcellijn. Je leert de antwoorden op de volgende veelgestelde vragen. Zoals Wat is de B16 kankercellijn? Waar komen B16 cellen vandaan? Wat is de grootte van B16-cellen?

De B16-cellijn werd in 1954 ontwikkeld. Deze cellen zijn afkomstig van C57BL/6J muizen die spontaan een tumor in de huid kregen in de Jackson Laboratories in Maine.
Dit zijn melanine-producerende epitheelcellen die het vermogen hebben om uit te zaaien in de milt, lever en longen.
De melanoom B16-cellen groeien als monolagen en vertonen een epitheelachtige en spoelvormige celmorfologie.
De grootte van de B16-cellijn is ongeveer 15,4 μm.
Er zijn verschillende subklonen van B16-cellen, waaronder B16GMCSF, B164A5, B16FLT3 en B16F10. Deze sublijnen verschillen van de ouder B16-cellen en hebben een aantal specifieke kenmerken. Ze verschillen bijvoorbeeld in morfologie, celgrootte en andere eigenschappen. B16F10 heeft een hoog longmetastatisch vermogen en B164A5 is de meest agressieve huidkankercellijn in vergelijking met B16F10, B16-GMCSF en B16FLT3 [1].

3D-animatie van een close-up van een groeiende huidkanker, zoals kwaadaardig melanoom, dat het omliggende weefsel doet ontsteken.

2.kweekinformatie van B16-cellijn

Voordat je een cellijn gaat onderhouden of kweken, kun je op zoek gaan naar belangrijke informatie over verdubbelingstijd, celtype, groeimedia, kweekomstandigheden, etc. Deze sectie bevat alle benodigde informatie voor het kweken van B16-cellen.

Belangrijke punten voor het kweken van B16-cellen

Populatieverdubbelingstijd:	De gemiddelde populatieverdubbelingstijd voor B16-cellen wordt geschat op 24 uur.
Adherent of in suspensie:	B16 cellen zijn adherent en groeien in monolayers.
Zaaidichtheid:	B16-cellen worden aanbevolen om te zaaien bij een celdichtheid van 1 tot 2 x¹⁰⁴ ^cellen/cm2. Aangehechte B16-cellen worden gespoeld met 1 x PBS en losgemaakt van het oppervlak met Accutase-oplossing. De cellen worden gecentrifugeerd en de celpellet wordt geresuspendeerd in het groeimedium. Later worden deze cellen in een nieuwe kolf gedaan om te groeien.
Groeimedium:	B16-cellen worden gekweekt in EMEM (Eagle's Minimum Essential Medium) medium met 10% foetaal runderserum (FBS). Het groeimedium moet 2-3 keer per week worden ververst.
Groeicondities:	Een bevochtigde incubator met een toevoer van 5%_CO2 en een temperatuur van 37 °C wordt gebruikt om de B16-cellijn te kweken.
Opslag:	Deze cellen worden opgeslagen bij een temperatuur lager dan -150 °C of in de dampfase van vloeibare stikstof om de levensvatbaarheid van de cellen te beschermen.
Invriesproces en medium:	CM-1 of CM-ACF invriesmedium wordt gebruikt om B16 cellen in te vriezen met behulp van een langzaam vriesproces.
Ontdooiproces:	Bevroren B16 cellen worden ontdooid bij 37 °C in een waterbad met een antimicrobieel middel. Ontdooide cellen kunnen direct worden gekweekt door ze in kolven met groeimedium te gieten. Bovendien kunnen deze cellen worden gecentrifugeerd om de bestanddelen van het vriesmedium te verwijderen en vervolgens in nieuwe media worden gekweekt.
Bioveiligheidsniveau:	De B16-cellijn moet worden gehanteerd of gehandhaafd in het bioveiligheidsniveau één laboratorium.

Semi-confluente laag van B16 melanoomcellen onder 10x en 20x vergroting.

3. b16-cellijn: Voordelen en nadelen

Net als andere cellijnen heeft B16 een unieke combinatie van voor- en nadelen. Enkele belangrijke voor- en nadelen van deze melanoomcellijn worden in dit gedeelte opgesomd.

Voordelen

B16 is het eerste effectieve murine instrument dat veel gebruikt wordt in metastaseonderzoek vanwege de voordelen die het biedt. Enkele voordelen van deze huidkankercellijn zijn:

Gemakkelijk te kweken	De B16-cellijn is gemakkelijk te kweken in onderzoekslaboratoria. Ze wordt veel gebruikt om de biologie van kankercellen, signaalwegen en nog veel meer te bestuderen.
Snel groeiend	De B16 melanoomcellijn vertoont een hoge proliferatiesnelheid, waardoor deze geschikt is voor het bestuderen van celdeling en groeiprocessen.
Tumorigeniciteit	B16 is een tumorigene cellijn met tumorachtige eigenschappen zoals invasie, migratie en proliferatie. Het is waardevol voor het bestuderen van tumorvorming, progressie en metastase.

Nadelen

De nadelen van de B16-cellijn zijn:

Gebrek aan menselijke relevantie	Omdat B16 een melanoomcellijn is die in muizen wordt gebruikt, is het mogelijk dat de menselijke huidkankerbiologie niet nauwkeurig wordt weergegeven, waardoor de vertaalbaarheid van onderzoeksresultaten wordt beperkt.
Heterogeniteit	B16-cellen zijn heterogeen en vertonen binnen dezelfde kweek gevarieerde genetische en fenotypische eigenschappen. Dit kan de betrouwbaarheid en reproduceerbaarheid van resultaten beïnvloeden.

4. toepassingen van B16 cellen

De B16-cellijn wordt veel gebruikt in onderzoek. Enkele veelbelovende toepassingen van deze cellijn zijn:

Tumorbiologie: Deze murine huidkankercellijn is tumorigenic en wordt veel gebruikt om tumorbiologie te begrijpen. Er zijn verschillende onderzoeken uitgevoerd om de cellulaire mechanismen achter tumorgroei, proliferatie en metastase te onderzoeken met behulp van B16-cellen. Een onderzoek dat in 2020 werd uitgevoerd, gebruikte B16-cellen om de rol van lang niet-coderend RNA, LncRNA MEG3, bij de vorming, groei en uitzaaiing van melanoom te onderzoeken. Uit dit onderzoek bleek dat het niet-coderende RNA de miRNA-21/E-Cadherine-as moduleert om deze cellulaire gebeurtenissen te stimuleren [2]. Zo werd er ook onderzoek gedaan naar de mogelijke rol van Notch1-signalering in tumorgeïnduceerde immunosuppressie met behulp van B16-cellen [3].
Ontdekking van geneesmiddelen: B16-cellen worden gebruikt om de potentiële therapeutische effecten van kandidaat-geneesmiddelen te valideren en te testen. In een onderzoek werd het antitumoreffect van neogamboginezuur, een natuurlijke verbinding, geëvalueerd met behulp van een B16-cellijn. De onderzoeksresultaten onthulden dat deze verbinding de PI3K/Akt/mTOR-signaleringsroute moduleert om kankerceldood te veroorzaken [4]. Een andere studie onderzocht het anti-melanoom effect van Ginsenoside Rg3, een saponine, met behulp van de B16-cellijn. Het onderzoek suggereerde dat deze natuurlijke verbinding anti-tumoractiviteit veroorzaakte door de ERK- en Akt-routes te downreguleren [5].

€ 430,00*

Inhoud: 1.5 milliliter

Prijzen excl. btw plus verzendkosten

cryovial

Productnummer: 305154

5.onderzoekspublicaties met B16-cellen

Hier volgen enkele belangrijke onderzoekspublicaties met de B16 melanoomcellijn.

LncRNA MEG3 bevordert groei, metastase en vorming van melanoom door modulatie van miR-21/E-cadherine-as

In deze publicatie in het tijdschrift Cancer Cell International (2020) wordt voorgesteld dat lang niet-coderend RNA MEG3 de vorming, groei en metastase van B16 melanoomcellen bevordert door de miRNA-21/E-cadherine-as te moduleren.

Een nieuw psoralenederivaat-MPFC versterkt melanogenese via activering van p38 MAPK en PKA signaalwegen in B16 cellen

Dit artikel werd in 2018 gepubliceerd in het International Journal of Molecular Medicine. Deze studie onderzocht het melanogene effect en de mechanismen van een psoralenederivaat 4-methyl-6-fenyl-2H-furo[3,2-g] chromen-2-one (MPFC) in B16-cellen. Het onderzoek stelde dat dit derivaat melanogenese bevordert door PKA- en p38 MAPK-celsignalering te stimuleren.

Notch1-signalering in melanoomcellen bevorderde tumorgeïnduceerde immuunsuppressie via upregulatie van TGF-β1

Dit onderzoek werd in 2018 gepubliceerd in het Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. De bevindingen van de studie suggereren dat activering van Notch1-signalering in B16-cellen antitumorimmuniteit kan voorkomen door de expressie van het TGF-β1-gen te upreguleren.

Neogamboginezuur induceert apoptose van melanoom B16-cellen via de PI3K/Akt/mTOR-signaleringsroute

Dit onderzoek werd in 2020 uitgevoerd door Chunlan Wu en zijn collega's en gepubliceerd in het tijdschrift Acta Biochimica Polonica. Dit onderzoek stelt dat neogamboginezuur, een natuurlijke verbinding, de celdood van B16-melanoom kan veroorzaken door de PI3K/Akt/mTOR-signaleringscascade te moduleren.

Een iridium(III)-complex als krachtig antikankermiddel induceert apoptose en autofagie in B16-cellen door remming van de AKT/mTOR-route

Dit onderzoeksartikel werd in 2018 gepubliceerd in het European Journal of Medicinal Chemistry. In deze studie onderzochten onderzoekers de antikankeractiviteit van een verbinding, iridium (III) complex, met behulp van B16 melanoomcellen.

Ailanthone induceert celcyclusstilstand en apoptose in melanoom B16- en A375-cellen

In dit onderzoek werd voorgesteld dat Ailanthone, een bioactieve stof uit de plant, kanker kan bestrijden omdat het apoptose en celcyclusstilstand kan induceren in B16- en A375-melanoomcellen. Dit artikel werd in 2019 gepubliceerd in Biomolecules.

6. bronnen voor B16-cellijn: Protocollen, video's en meer

Er zijn beperkte bronnen over de B16-cellijn waarin de kweek- en transfectieprotocollen worden uitgelegd.

Het kweken van melanoomcellen: Deze video geeft waardevolle tips voor het kweken van melanoomcellijnen.
Een cellijn subculturen: In deze video wordt een algemeen subcultuurprotocol voor een cellijn uitgelegd.
Transfectie van B16F10-cellijn: In deze video wordt het transfectieprotocol voor een sublijn van B16-melanoomcellen uitgelegd. Het kan je helpen om het transfectieprotocol voor B16-cellen te optimaliseren.

Hieronder volgen enkele celkweekprotocollen voor B16-cellen.

B16 cellen kweken: Deze website bevat alle benodigde informatie voor het kweken van B16-cellen, inclusief groeimedia, subkweken, ontdooien en invriezen van cellen.

Referenties

Danciu, C., et al., Behaviour of four different B 16 murine melanoma cell sublines: C57 BL/6J huid. Internationaal tijdschrift voor experimentele pathologie, 2015. 96(2): p. 73-80.
Wu, L., et al., LncRNA MEG3 bevordert de groei, metastase en vorming van melanoom door de miR-21/E-cadherine-as te moduleren. Cancer cell international, 2020. 20: p. 1-14.
Yang, Z., et al., Notch1 signaling in melanoma cells promoted tumor-induced immunosuppression via upregulation of TGF-β1. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research, 2018. 37(1): p. 1-13.
Wu, C., et al., Neogamboginezuur induceert apoptose van melanoom B16-cellen via de PI3K/Akt/mTOR-signaleringsroute. Acta Biochimica Polonica, 2020. 67(2): p. 197-202.
Meng, L., et al., Antitumoractiviteit van ginsenoside Rg3 in melanoom via downregulatie van de ERK- en Akt-routes. International Journal of Oncology, 2019. 54(6): p. 2069-2079.