B16-F10-cellen – Onderzoek naar de B16-F10-melanoomcellijn in het onderzoek naar uitzaaiingen
B16-F10-cellen vormen een melanoomcellijn afkomstig van de C57BL/6J-muis. Ze worden op grote schaal gebruikt in onderzoek naar huidkanker. Onderzoekers gebruiken deze cellen om de ontwikkeling en progressie van tumoren en therapeutische interventies te bestuderen. Dit artikel behandelt de fundamentele aspecten van B16-F10-melanoomcellen. Het omvat met name:
- Groei-medium
- B16-F10-cellen worden gekweekt in DMEM-medium. Het medium wordt aangevuld met 10% FBS, 4 mM L-glutamine, 1,5 g/l NaHCO3, 4,5 g/l glucose en 1,0 mM natriumpyruvaat voor een optimale celgroei. Het medium moet 2 tot 3 keer per week worden ververst.
- Verdubbelingstijd
- De verdubbelingstijd van B16-F10-cellen is ongeveer 20,1 uur. Deze kan variëren van 17 tot 21 uur, afhankelijk van de kweekomstandigheden.
- Groeitype
- B16-F10 is een hechtende cellijn. De cellen groeien snel en vormen monolaagjes.
- Bioveiligheidsniveau
- BSL-1
- Verkrijgbaar bij
- Cytion — Bestel B16-F10
- Oorsprong en algemene kenmerken van de B16-F10-cellijn
- Kweekinformatie van B16-F10-cellen
- B16-F10-cellen: voor- en nadelen
- Onderzoekstoepassingen van B16-F10-cellen
- Publicaties over de B16-F10-cellijn
- Bronnen voor de B16-F10-cellijn: protocollen, video's en meer
Oorsprong en algemene kenmerken van de B16-F10-cellijn
In dit gedeelte krijgt u inzicht in de oorsprong en de onderscheidende kenmerken van B16-F10-melanoomtumorcellen. Dit helpt u de cellijn efficiënt te gebruiken in uw onderzoek. U leert voornamelijk: Wat zijn B16-F10-cellen? Waar is B16F10 van afgeleid? Wat is de morfologie van de B16F12-cellijn? Hoe groot is de B16F10-cel?
- B16-F10 is een subkloon van de B16-tumorcellijn, afkomstig van huidweefsel van C57BL/6J-muizen. Hierin werden B16F10-melanoomcellen ontwikkeld na intraveneuze injectie van de B16-lijn in immuungecompromitteerde of syngene muizen. Deze cellen werden geselecteerd vanwege hun potentieel om in vivo uitgezaaide longkolonies te vormen en werden vervolgens vastgesteld na tien cycli van longkolonievorming in vitro [1]. De lijn werd in 1976 ontwikkeld door Fidler en collega's.
- B16-F10-cellijnen hebben een epitheelachtig en spoelvormig uiterlijk.
- De geschatte grootte van B16-F10-cellen is 15,4 ± 1,4 μm [2].
B16-F1- en B16-F10-cellen
B16-F1- en B16-F10-cellen zijn afgeleid van de B16-moedercellijn. Beide zijn afkomstig van dezelfde bron en bezitten vrijwel dezelfde kenmerken. Het belangrijkste verschil is echter hun metastatisch vermogen. B16-F10-cellen hebben een hoog, terwijl B16-F1 een laag metastatisch potentieel heeft [3].
Informatie over het kweken van B16-F10-cellen
Voordat u een cellijn gaat hanteren en kweken, moet u op de hoogte zijn van de verdubbelingstijd, de groeimedia, de omstandigheden en de protocollen voor de celkweek. In dit gedeelte wordt het volgende besproken: Wat is de verdubbelingstijd van B16-F10-cellen? Hoe kweekt u B16-F10-cellen? Wat zijn de B16-F10-celmedia? Welke kweekomstandigheden worden aanbevolen voor B16-F10-cellen?
Belangrijke punten voor het kweken van B16-F10-cellen
Verdubbelingstijd:
De verdubbelingstijd van B16-F10-cellen is ongeveer 20,1 uur. Deze kan variëren van 17 tot 21 uur, afhankelijk van de kweekomstandigheden.
Hechtend of in suspensie:
B16-F10 is een hechtende cellijn. De cellen groeien snel en vormen monolaagjes.
Splitsingsverhouding:
B16-F10-cellen worden gesubcultiveerd met een splitsingsverhouding van 1:2 tot 1:4. De cellen worden gewassen met fosfaatgebufferde zoutoplossing (1x) en vervolgens gedurende 8 tot 10 minuten bij kamertemperatuur geïncubeerd met Accutase-passageoplossing. Er wordt vers medium aan de cellen toegevoegd en ze worden gecentrifugeerd. Het geoogste celpellet wordt opnieuw gesuspendeerd en de cellen worden verdeeld over de nieuwe kolf met vers kweekmedium volgens de splitsingsverhouding.
Groei-medium:
B16-F10-cellen worden gekweekt in DMEM-medium. Het medium wordt aangevuld met 10% FBS, 4 mM L-glutamine, 1,5 g/l NaHCO3, 4,5 g/l glucose en 1,0 mM natriumpyruvaat voor een optimale celgroei. Het medium moet 2 tot 3 keer per week worden ververst.
Groeicondities:
B16-F10-cellen worden gekweekt in een bevochtigde incubator bij 37 °C met een CO2-toevoer van 5%.
Opslag:
Ingevroren cellen worden bij een temperatuur onder -150 °C bewaard in een elektrische ultralage-temperatuurvriezer of in de dampfase van vloeibare stikstof om de levensvatbaarheid van de cellen te behouden.
Invriesproces en medium:
B16-F10-cellen worden voor opslag ingevroren in CM-1- of CM-ACF-media. Hiervoor wordt een langzaam invriesproces aanbevolen waarbij de temperatuur slechts 1 °C per minuut daalt, om te voorkomen dat de cellen een schok ondergaan.
Ontdooiproces:
Ingevroren B16-F10-cellen worden gedurende 40 tot 60 seconden ontdooid in een vooraf ingesteld waterbad van 37 °C. Vervolgens worden de cellen toegevoegd aan vers medium en gecentrifugeerd om componenten van het invriesmedium te verwijderen. De verzamelde cellen worden opnieuw gesuspendeerd in een groeimedium en in kolven gegoten voor kweek.
Bioveiligheidsniveau:
Voor het hanteren en onderhouden van de B16-F10-cellijn is een laboratorium met bioveiligheidsniveau 1 vereist.
B16-F10-cellen: voor- en nadelen
Net als andere cellijnen heeft ook B16-F10 enkele voor- en nadelen. In dit gedeelte worden enkele belangrijke voor- en nadelen van deze huidmelanoomcellijn besproken.
Voordelen
De B16-F10-cellijn wordt veel gebruikt in kankeronderzoek. De voordelen van B16-F10-cellen zijn:
Metastatisch potentieel
B16F10-cellen van huidmelanoom vertonen een hoog metastatisch potentieel, waardoor ze waardevol zijn voor het bestuderen van kankermetastasen en de onderliggende mechanismen.
In-vitrotumormodel
B16-F10-cellen dienen als in-vitro-model voor het bestuderen van de progressie en groei van kanker, waardoor onderzoekers inzicht krijgen in de cellulaire en moleculaire mechanismen die kanker aansturen.
Nadelen
De nadelen van de B16-F10-cellijn zijn:
Van muizen afkomstige cellijn
B16-F10 is een van muizen afkomstige cellijn, waardoor de toepasbaarheid ervan voor specifiek op mensen gerichte studies beperkt is. Onderzoeksresultaten van deze cellen zijn mogelijk niet altijd volledig toepasbaar op de menselijke biologie.
Toepassingen van B16-F10-cellen in onderzoek
De B16-F10-cellijn wordt op grote schaal gebruikt in kankeronderzoek. Hier worden enkele veelbelovende toepassingen van deze cellijn besproken.
- Kankeronderzoek: De B16-F10-cellijn is een waardevol model voor het bestuderen van kankercelprocessen, waaronder proliferatie, invasie, migratie en celdood of apoptose. Bovendien helpt het onderzoekers om inzicht te krijgen in de moleculaire mechanismen en routes die deze cellulaire processen aansturen. Een studie uit 2018 onderzocht de rol van CCR5 (C-C-chemokine-receptor type vijf) in de epitheliale-naar-mesenchymale celtransitie en metastase van melanoomcellen. De bevindingen toonden aan dat een tekort aan CCR5 de tumorgroei en metastase beperkt, terwijl een hoge expressie leidt tot versterkte groei en metastase van B16-F10-cellen. Verder onderzoek toonde aan dat CCR5 de TGFβ1-expressie reguleert, wat op zijn beurt de PI3K/AKT/GSK3β-signaalroute reguleert om de epitheliale-mesenchymale overgang en celmigratie te bevorderen [4].
- Testen en ontwikkeling van geneesmiddelen: B16F10-melanoomtumorcellen zijn zeer agressief en daarom geschikt voor het testen van potentiële antitumormiddelen en behandelingen. Onderzoekers gebruiken deze cellen en beoordelen het effect van verschillende verbindingen op celgroei, proliferatie en metastase, wat de ontwikkeling van geneesmiddelen ondersteunt. Een studie uitgevoerd in 2018 door Valentina Nanni en collega's onderzocht de therapeutische effecten van het hydro-alcoholische extract van Spartiumjunceum-bloemen. De studie stelde dat bloemextract effectief was in het induceren van senescentie in B16-F10-cellen, wat leidt tot remming van celgroei en melanogenese en dus potentiële antikankeractiviteiten kan uitoefenen [5].
5. Publicaties over de B16-F10-cellijn
Hieronder volgen enkele belangrijke onderzoekspublicaties over de B16-F10-melanoomcellijn:
Deze studie is gepubliceerd in Nutrients (2020). Hierin wordt gesteld dat het ethanol-extract van Sorghum bicolor een anti-melanogeen effect heeft in B16F10-huidmelanoomcellen.
Calcitriol remt proliferatie en induceert mogelijk apoptose in B16–F10-cellen
Het onderzoek, gepubliceerd in Medical Science Monitor Basic Research (2022), stelde dat het medicijn calcitriol antitumorale effecten uitoefent in B16-F10-melanoomcellen door proliferatie te remmen en apoptose te induceren.
Dit artikel is gepubliceerd in Biochemical and Biophysical Research Communications (2022). De bevindingen toonden aan dat cardolen, resorcinolische lipiden, een intense cytotoxiciteit uitoefenen op de B16-F10-cellijn.
De studie, gepubliceerd in Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2018), onderzocht het antimetastatische potentieel van Ginkgo biloba-exocarp-extract met behulp van B16-F10-cellen.
Dit onderzoek in World Neurosurgery (2018) stelde dat thymoquinon een effectieve therapie kan zijn tegen intracerebrale metastatische laesies, aangezien het de groei van B16-F10-cellen onderdrukt en apoptose induceert.
Bronnen voor de B16-F10-cellijn: protocollen, video's en meer
B16F10-endotheelcellen worden veel gebruikt in onderzoek naar huidkanker. Hier zijn enkele online bronnen die de protocollen voor het kweken en transfectie ervan uitleggen:
- Transfectie van B16F10-melanoomcellen: deze videotutorial helpt u het transfectieprotocol voor B16-F10-cellen te leren.
- Transfectie van B16-F10: Dit document legt het in-vitro-DNA-transfectieprotocol voor B16F10-huidmelanoomcellen uit.
De volgende link bevat het celkweekprotocol voor B16-F10-cellen:
- Subcultivering van B16-F10: Deze website bevat nuttige informatie over B16F10-melanoomtumorcellen. Het omvat groeimedia, verdubbelingstijd, kweekomstandigheden en het protocol voor het subcultiveren van cellen, en het omgaan met cryogepreserveerde en proliferatieve culturen.
Referenties
- Poste, G., et al., Vergelijking van de metastatische eigenschappen van B16-melanoomklonen geïsoleerd uit gekweekte cellijnen, subcutane tumoren en individuele longmetastasen. Cancer Research, 1982. 42(7): p. 2770-2778.
- Nakamura, M., D. Ono en S. Sugita, Mechanofenotypering van B16-melanoomcelvarianten voor de beoordeling van de werkzaamheid van (-)-epigallocatechinegallaatbehandeling met behulp van een taps toelopend microfluïdisch apparaat. Micromachines, 2019. 10(3): p. 207.
- Danciu, C., et al., Gedrag van vier verschillende B16-sublijnen van muizenmelanoomcellen: C57BL/6J-huid. Int J Exp Pathol, 2015. 96(2): p. 73-80.
- Liu, J., et al., Hoge expressie van CCR5 in melanoom versterkt de epitheliaal-mesenchymale overgang en metastase via TGFβ1. The Journal of Pathology, 2019. 247(4): p. 481-493.
- Nanni, V., et al., Hydroalcoholisch extract van Spartium junceum L.-bloemen remt de groei en melanogenese in B16-F10-cellen door senescentie te induceren. Phytomedicine, 2018. 46: p. 1-10.