AGS-cellen – Onderzoek naar AGS-cellen van maagadenocarcinoom in kankeronderzoek
AGS-cellen vormen een menselijke maagadenocarcinoomcellijn die op grote schaal wordt gebruikt in biomedisch onderzoek. Ze worden met name ingezet om de biologie van maagkanker te bestuderen, waaronder tumorgroei, ontwikkeling, progressie en therapeutische interventies. Daarnaast worden ze gebruikt om interacties tussen gastheer en ziekteverwekker te onderzoeken.
- Groei-medium
- Voor het kweken van AGS-cellen wordt DMEM-medium gebruikt dat 10% FBS, 4 mM L-glutamine, 4,5 g/l glucose, 1,5 g/l NaHCO3 en 1,0 mM natriumpyruvaat bevat. Het medium moet 2 tot 3 keer per week worden ververst.
- Verdubbelingstijd
- De verdubbelingstijd van AGS-cellen ligt tussen 24 en 48 uur.
- Groeitype
- AGS-cellen zijn hechtend. Ze groeien uit tot monolaagjes.
- Bioveiligheidsniveau
- BSL-2
- Verkrijgbaar bij
- Cytion — Bestel AGS
Algemene kenmerken en oorsprong van AGS-cellen
Voordat u met een cellijn gaat werken, is het noodzakelijk om de oorsprong en algemene kenmerken ervan te kennen. In dit gedeelte komt het volgende aan bod: Wat zijn AGS-cellen? Wat is de oorsprong van de AGS-cel? Wat is de morfologie van de AGS-kankercellijn?
- De AGS-cellijn is afkomstig van het maagweefsel van een 54-jarige blanke vrouw met maagadenocarcinoom. De cellijn werd in 1979 geïsoleerd [1].
- AGS-cellen hebben een epitheelachtige morfologie.
- De maagepitheliale AGS-cellen zijn hyperdiploïd. Het modale chromosoomaantal voor AGS-cellen is 49, wat in bijna 60% van de cellen voorkomt. Polyploïdie komt ook voor in ongeveer 3,6% van de cellen.
Informatie over het kweken van de AGS-cellijn
Voor een juiste omgang met en beheer van een cellijn moet u de basisbegrippen van het kweken kennen. U moet met name het volgende leren: Wat is de verdubbelingstijd van AGS-cellen? Wat is het AGS-celmedium? Hoe kweekt u AGS-cellen? Welke bevriezingsmedia worden gebruikt voor AGS-cellen van het maagepitheel?
Belangrijke punten voor het kweken van AGS-cellen
Verdubbelingstijd:
De verdubbelingstijd van AGS-cellen ligt tussen de 24 en 48 uur.
Hechtend of in suspensie:
AGS-cellen zijn hechtend. Ze groeien uit tot monolaagjes.
Zaaidichtheid:
AGS-cellen worden gezaaid met een celdichtheid van 1 x 104 cellen/cm2. Bij deze dichtheid vormen de cellen binnen 3 tot 5 dagen een confluente monolaag. Na het verwijderen van het oude medium worden de cellen gespoeld met 1 x PBS en geïncubeerd met Accutase-dissociatieoplossing. Losgekomen cellen werden opnieuw gesuspendeerd in kweekmedia en gecentrifugeerd. Het celpellet werd opnieuw gesuspendeerd en na het tellen van de AGS-cellen worden ze in de nieuwe kolf gedoseerd voor groei.
Groeimedium:
Voor het kweken van AGS-cellen wordt DMEM-medium gebruikt dat 10% FBS, 4 mM L-glutamine, 4,5 g/l glucose, 1,5 g/l NaHCO3 en 1,0 mM natriumpyruvaat bevat. Het medium moet 2 tot 3 keer per week worden ververst.
Groeicondities:
AGS-cellen worden bewaard in een bevochtigde incubator (bij een temperatuur van 37 °C) met een CO2-toevoer van 5%.
Opslag:
Ingevroren AGS-cellen worden bewaard in elektrische vriezers bij een temperatuur van minder dan -150 °C of voor langere tijd in de dampfase van vloeibare stikstof.
Invriesproces en medium:
CM-1- of CM-ACF-medium wordt gebruikt om AGS-cellen in te vriezen. Het invriezen van cellen gebeurt via een langzaam invriesproces waarbij de temperatuur slechts 1 °C per minuut daalt, waardoor de levensvatbaarheid van de cellen behouden blijft.
Ontdooiproces:
Ingevroren maagepitheelcellen worden gedurende 40 tot 60 seconden snel geschud in een waterbad van 37 °C. Ontdooide cellen worden opnieuw gesuspendeerd in vers kweekmedium en in nieuwe kolven gegoten om te groeien. Na 24 uur incubatie wordt het medium vernieuwd om componenten van het invriesmedium te verwijderen. Daarentegen worden ontdooide cellen gecentrifugeerd en worden elementen van het invriesmedium verwijderd. Vervolgens worden de geoogste cellen opnieuw gesuspendeerd en in de kolf met het kweekmedium gedoseerd.
Bioveiligheidsniveau:
Voor het kweken van AGS-cellen is een laboratoriumomgeving met bioveiligheidsniveau 2 essentieel.
AGS-cellijn: voordelen en beperkingen
In dit artikel worden enkele van de belangrijkste voordelen en beperkingen van AGS-cellen belicht.
Voordelen
De belangrijkste voordelen van AGS-cellen uit het maagepitheel zijn:
Eenvoudig te kweken
De AGS-cellijn van maagcarcinoom is gemakkelijk te onderhouden in celkweeklaboratoria. Er zijn geen ingewikkelde en veeleisende vereisten voor de celkweek. Bovendien vertoont de cellijn goede groeikenmerken, waardoor deze een ideale keuze is voor het bestuderen van de biologie van maagkanker.
Relevantie voor maagkanker
AGS-cellen zijn afkomstig van humaan maagadenocarcinoom, waardoor ze op grote schaal worden gebruikt voor het bestuderen van de biologie van maagcarcinomen en therapeutische interventies.
Beperkingen
De beperking van de AGS-cellijn is:
In-vitro-celmodel
AGS-cellen worden in biomedische onderzoekslaboratoria onder kunstmatige omstandigheden gekweekt. Daarom geven ze mogelijk geen volledig beeld van de in vivo micro-omgeving van maagkanker en andere cellulaire en moleculaire interacties.
Toepassingen van AGS-cellen
AGS-cellen worden specifiek gebruikt om de biologie van maagkanker te bestuderen. Ze hebben vele andere veelbelovende toepassingen op biomedisch gebied. Enkele interessante onderzoekstoepassingen van AGS-cellen zijn:
- Onderzoek naar maagkanker: AGS-cellen zijn een uitstekend onderzoeksinstrument om de cellulaire en moleculaire mechanismen te onderzoeken die ten grondslag liggen aan de groei, uitzaaiing en invasie van maagkanker. Onderzoekers gebruiken AGS-cellen van het maagepitheel ook om verschillende cellulaire processen, genetische mutaties en signaalroutes in de ontwikkeling van maagkanker te bestuderen. Een studie in Oncology Reports (2019) toonde aan dat microRNA-183-5p.1 de proliferatie, migratie en invasie van tumorcellen bevordert door de Bcl-2/P53-signaalcascade te remmen. Bovendien reguleert het ook het TPM1-gen naar beneden om deze effecten te bewerkstelligen. Daarom worden zowel microRNA als TPM1 voorgesteld als effectieve moleculaire doelwitten voor de ontwikkeling van gerichte therapieën tegen maagkanker [2].
- Geneesmiddelenscreening: AGS-cellen worden vaak gebruikt voor het screenen van nieuwe en effectieve geneesmiddelen tegen maagkanker. Onderzoekers evalueren de cytotoxiciteit en werkzaamheid van potentiële geneesmiddelen met behulp van de AGS-cellijn. Er is ook onderzoek gedaan naar het identificeren van nieuwe moleculaire doelwitten en het ontwikkelen van nieuwe gerichte therapieën om maagcarcinomen te bestrijden. In 2021 is er onderzoek gedaan met AGS-maagkankercellen naar het therapeutische effect van het geneesmiddel paclitaxel. De bevindingen lieten zien dat paclitaxel een mitotische catastrofe veroorzaakt, een essentieel mechanisme van apoptose of celdood in AGS-cellen. Daarnaast bevorderde het ook autofagie in maagkankercellen [3].
- Interacties tussen gastheer en ziekteverwekker: De AGS-kankercellijn wordt ook gebruikt voor onderzoek naar interacties tussen gastheer en ziekteverwekker. Dit helpt onderzoekers de cellulaire mechanismen en reacties te begrijpen die bij een infectie betrokken zijn. Zo werd in een in 2020 uitgevoerd onderzoek waargenomen dat kleine niet-coderende RNA's die aanwezig zijn in de buitenmembraanvesikels van Helicobacter pylori de secretie van interleukine 8 in menselijke AGS-cellen verminderen [4].
5. Wetenschappelijke publicaties over de AGS-cellijn
In dit deel van het artikel worden enkele interessante en meest geciteerde onderzoekspublicaties over AGS-cellen besproken.
Deze studie in Biomedicine & Pharmacotherapy (2020) stelde dat salidroside, een natuurlijke verbinding, beschermende autofagie en celdood induceert in AGS-cellen van het maagepitheel via modulatie van de PI3K/AKT/mTOR-signaalroute.
Deze studie is gepubliceerd in Biomedicine & Pharmacotherapy (2018). Hierin werden de synergetische antikankereffecten van astragaluspolysaccharide en het geneesmiddel apatinib in AGS-cellen onderzocht. De bevindingen van de studie toonden aan dat astragalus de antitumorale effecten van apatinib versterkt door de AKT-signaalroute te onderdrukken.
Dit onderzoek in het Journal of Ethnopharmacology (2018) stelde dat curcuzedoalide, een natuurlijke verbinding uit de Curcuma zedoaria Roscoe-plant, bijdraagt aan het cytotoxische potentieel tegen AGS-cellen.
Overexpressie van FOXA1 remt de celproliferatie en EMT van menselijke AGS-maagkankercellen
Deze publicatie in Gene (2018) stelde dat opregulatie van FOXA1 de proliferatie van AGS-maagadenocarcinoomcellen en de epitheliale-mesenchymale overgang (EMT) en invasie onderdrukt.
Dit onderzoeksartikel werd in 2020 gepubliceerd in het International Journal of Medical Microbiology. In deze studie werden AGS-cellen gebruikt om interacties tussen gastheer en pathogeen te bestuderen. De bevindingen toonden aan dat Helicobacter pylori in zijn buitenmembraanvesikels niet-coderend RNA bevat dat de IL-8-niveaus in AGS-cellen beïnvloedt.
Bronnen voor de AGS-cellijn: protocollen, video's en meer
Hieronder volgen enkele bronnen over AGS-cellen.
- Transfectieprotocol voor AGS-cellen: Deze video is een stapsgewijze handleiding voor het leren van het transfectieprotocol voor maagepitheelcellen (AGS-cellen).
De volgende link bevat het AGS-celkweekprotocol.
- Protocol voor AGS-celkweek: Deze website bevat nuttige informatie over AGS-celmedia en protocollen voor celkweek. Kort gezegd biedt deze een protocol voor het subcultiveren van AGS-cellen van het maagepitheel en het omgaan met prolifererende en cryogepreserveerde AGS-culturen.
- Subcultiveren van AGS-cellen: Op deze site wordt de subcultiveringsprocedure voor AGS-cellen gedetailleerd uitgelegd.
Referenties
- Phuc, B.H., et al., Vergelijkende genomica van twee Vietnamese Helicobacter pylori-stammen, CHC155 van een patiënt met maagkanker buiten de cardia en VN1291 van een patiënt met een duodenale ulcus. Scientific Reports, 2023. 13(1): p. 8869.
- Lin, J., et al., miRNA‑183‑5p. 1 bevordert de migratie en invasie van AGS-cellen van maagkanker door zich te richten op TPM1 Corrigendum in/10.3892/or. 2020.7902. Oncology reports, 2019. 42(6): p. 2371-2381.
- Khing, T.M., et al., Het effect van paclitaxel op apoptose, autofagie en mitotische catastrofe in AGS-cellen. Scientific Reports, 2021. 11(1): p. 23490.
- Zhang, H., et al., sncRNA's verpakt door Helicobacter pylori-buitenmembraanvesikels verzwakken de IL-8-secretie in menselijke cellen. International Journal of Medical Microbiology, 2020. 310(1): p. 151356.