De A375-cellijn – Een gids voor onderzoek naar melanoom

A375 is een menselijke melanoomcellijn die veel wordt gebruikt in toxicologisch en immuno-oncologisch onderzoek. Onderzoekers gebruiken deze cellijn om de biologie van kanker en signaalroutes te bestuderen, potentiële antikankermiddelen te testen of te screenen, en nieuwe en effectieve therapieën te ontwikkelen.

Oorsprong en algemene kenmerken van A375-cellen

Als u de oorsprong en algemene kenmerken van een cellijn kent, kunt u het gebruik ervan in onderzoek beter plannen. In dit deel van het artikel worden de oorsprong en kenmerken van de A375-cellijn besproken. Wat is bijvoorbeeld de A375-cellijn? Wat zijn de kenmerken van de A375-cellijn? Waar komen A375-cellen vandaan? Wat is de morfologie van A375-melanoomcellen? Wat is de celgrootte van A375?

• De huidkankercellijn A375 is afkomstig van de explantaatcultuur van een solide tumor van een 54-jarige vrouw met maligne melanoom [1].
• A375-cellen hebben een epitheelachtige morfologie.
• De A375-celgrootte is relatief kleiner in vergelijking met andere cellijnen. Ze hebben een diameter van ongeveer 12 µm.
• De A375-melanoomcellen zijn hypotriploïd. Het modale chromosoomgetal voor deze cellijn is 62. Gewoonlijk heeft elke cel negen markerchromosomen en één kopie van de normale N2-, N6- en N22-chromosomen.

A375-cellen: Informatie over celkweek

A375-celculturen zijn eenvoudig te onderhouden. Ze stellen geen hoge eisen aan de celkweek. In dit gedeelte vindt u de benodigde informatie over celkweek. Zoals: wat is de verdubbelingstijd van A375? Wat is het medium voor de A375-cellijn? Wat is de bezaaidichtheid van A375? Zijn A375-melanoomcellen hechtend?

Belangrijke punten voor het kweken van A375-cellen

Verdubbelingstijd van de populatie:

De verdubbelingstijd van A375 is 20 uur.

Hechtend of in suspensie:

A375 is een hechtende menselijke melanoomcellijn.

Zaaidichtheid:

Een celdichtheid van 1 x 10⁴ cellen/cm² is ideaal voor A375-celculturen. Hechtende cellen worden gespoeld met 1 x fosfaatbufferzoutoplossing (PBS) en geïncubeerd met een passageringoplossing (Accutase). Daarna werden de cellen toegevoegd aan kweekmedia en gecentrifugeerd. De geoogste cellen werden opnieuw gesuspendeerd in een kweekmedium en verdeeld over nieuwe flessen voor groei.

Groeimedium:

DMEM wordt aanbevolen als ideaal A375-medium wanneer het wordt aangevuld met 10% foetaal runderserum (FBS), 4,5 g/l glucose, 1,5 g/l NaHCO3, 4 mM L-glutamine en 1,0 mM natriumpyruvaat. A375-medium moet 2-3 dagen per week worden ververst.

Kweekomstandigheden:

A375-melanoomcellen worden gekweekt in een bevochtigde incubator (37 °C) met een CO2-toevoer van 5%.

Opslag:

Ingevroren A375-cellen moeten bij een temperatuur onder -150 °C worden bewaard in de dampfase van vloeibare stikstof of in een elektrische vriezer.

Invriesproces en medium:

CM-1- of CM-ACF-media worden gebruikt om de A375-cellijn in te vriezen. Er is gekozen voor een langzaam invriesproces waarbij de temperatuur geleidelijk met 1 °C daalt om de levensvatbaarheid van de cellen te beschermen.

Ontdooiproces:

Het flesje met bevroren A375-melanoomcellen wordt gedurende 40 tot 60 seconden snel geschud in een waterbad totdat er slechts een klein klompje ijs overblijft. Er wordt vers medium aan de cellen toegevoegd en deze worden gecentrifugeerd om de elementen van het invriesmedium te verwijderen. Het verkregen celpellet werd opnieuw gesuspendeerd en in nieuwe kolven gegoten.

Bioveiligheidsniveau:

A375-culturen worden behandeld en onderhouden in een laboratoriumomgeving met bioveiligheidsniveau 1.

Toepassingen van de A375-cellijn in onderzoek

De A375-cellijn kent uitgebreide onderzoekstoepassingen in het kankeronderzoek. Hieronder volgen enkele veelvoorkomende gebieden waarop A375-cellen worden gebruikt.

• Kankeronderzoek: A375-cellen worden op grote schaal toegepast in het onderzoek naar melanoom. Onderzoekers gebruikten deze cellen om de biologie, processen en onderliggende celsignaleringsmechanismen van huidkanker te onderzoeken, waaronder celproliferatie, migratie en invasie. Dit kan onderzoekers ook helpen bij het identificeren van nieuwe moleculaire therapeutische doelwitten. In een studie uitgevoerd door Lin Zhu en collega's in 2019 werd gebruik gemaakt van zeer agressieve A375-melanoomcellen en werd de rol van microRNA-3662 bij de groei en invasie van A375-melanoomcellen vastgesteld. De bevindingen van de studie stellen dat microRNA-3662 zich richt op het ZEB1-gen en de groei van melanoomcellen in vitro en in vivo in het A375-tumormodel reguleert [2]. Evenzo bleek uit onderzoek uit 2018 dat de PI3K/AKT- en MAPK/ERK-routes betrokken zijn bij de proliferatie en metastase van de A375-cellijn [3].
• Ontdekking en testen van geneesmiddelen: de A375-cellijn is een nuttig in-vitrotumormodel voor het testen en screenen van potentiële antikankermiddelen. Onderzoekers evalueren de toxiciteit en werkzaamheid van nieuwe chemotherapeutische geneesmiddelen, verbindingen en andere therapieën met behulp van deze A375-melanoomcellen. Zo werd in een studie de antikankereigenschappen van uit grapefruit afkomstige micro- en nanovesikels op A375-melanoomkankercellen onderzocht. De resultaten toonden aan dat micro- en nanovesikels celcyclusstilstand en apoptose induceren en de genexpressie bij celproliferatie, migratie en invasie belemmeren [4].

A375-cellen: Publicaties

Hier worden enkele belangrijke onderzoekspublicaties over A375-cellen genoemd.

Vitamine D en zijn laagcalcemische analogen moduleren de antikankereigenschappen van cisplatine en dacarbazine in de menselijke A375-melanoomcellijn

Deze studie werd in 2019 gepubliceerd in het Journal of Oncology. De studie stelde dat een gelijktijdige behandeling met vitamine D en analogen de antikankeractiviteit van cisplatine en dacarbazine in A375-melanoomcellen verbetert.

In-vitro-evaluatie van de antimalignante effecten (A375-cellijn) van de gel en extracten van hele bladeren van geselecteerde aloë-soorten

Dit onderzoek werd in 2022 gepubliceerd in het Journal of Herbal Medicine. Deze studie onderzocht de anti-melanoomeffecten van aloë vera-gel in A375-melanoomcellen.

Fermitin-familielid 2 bevordert de progressie van melanoom door de binding van p-α-Pix aan Rac1 te versterken om de MAPK-route te activeren

Deze studie in Oncogene (2021) stelde dat fermitinefamilielid 2 (FERMT2 of kindlin-2) de progressie van melanoom bevordert door MAPK te activeren via binding met p-α-Pix en Rac1.

FARP1 bevordert celproliferatie door de MAPK-signaalroute bij huidmelanoom te moduleren

Deze studie in The American Journal of Dermatopathology (2019) stelde dat FARP1 de ontwikkeling en progressie van cutaan melanoom kan bevorderen. Het kan dus een nuttig therapeutisch doelwit zijn.

Cytotoxisch en apoptotisch potentieel van extracten van Phyllodium elegans op menselijke kankercellijnen

Dit onderzoeksartikel is gepubliceerd in Bioengineered (2019). Deze studie onderzocht de cytotoxische en apoptotische activiteit van een extract van de plant Phyllodium elegans op menselijke carcinoomcellijnen, waaronder A375.

Bronnen voor de A375-cellijn: protocollen, video's en meer

Hieronder volgen enkele online bronnen over A375-cellen.

• Transfectie van A375-cellen: deze videotutorial helpt u stap voor stap de transfectie van A375-cellen te leren.
• Celkweek: deze video bevat zeer nuttige informatie over het kweken van cellijnen.

De protocollen voor het kweken van A375-cellen staan hier vermeld.

• A375-cellijn: Deze link bevat nuttige informatie over het kweken en onderhouden van de A375-cellijn, inclusief A375-media en de omgang met ingevroren en prolifererende A375-culturen.

Referenties

1. Avram, S., et al., Standaardisatie van A375-modellen voor humaan melanoom op het chorioallantoïsmembraan van kippenembryo's en Balb/c-naakte muizen. Oncol Rep, 2017. 38(1): p. 89-99.
2. Zhu, L., et al., MicroRNA-3662 richt zich op ZEB1 en vermindert de invasie van de zeer agressieve melanoomcellijn A375. Cancer Manag Res, 2019. 11: p. 5845-5856.
3. Peng, X., et al., Oxyfadichalcone C remt de celproliferatie en metastase van het A375-melanoom door de PI3K/Akt- en MAPK/ERK-routes te onderdrukken. Life sciences, 2018. 206: p. 35-44.
4. Stanly, C., et al., Van grapefruit afgeleide micro- en nanovesikels vertonen verschillende metabolomprofielen en antikankeractiviteiten in de menselijke melanoomcellijn A375. Cells, 2020. 9(12): p. 2722.