Gepubliceerd: 2023 | Laatst herzien: mei 2026

Inzicht in het 'passagenummer'

Het concept 'passagenummer' staat centraal in de celkweek en verwijst naar het aantal keren dat een cellijn is gesubcultiveerd of overgebracht naar een vers groeimedium na de eerste reanimatie uit cryopreservatie of ontvangst van een referentiecelbank. Deze maatstaf is cruciaal voor het traceren van de afstamming en geschiedenis van een celkweek.

Procesoverzicht

• In de dagelijkse praktijk van celkweek worden cellen, wanneer ze een bepaalde dichtheid bereiken, overgebracht naar een nieuw medium om de groei te ondersteunen en overbevolking te voorkomen. Elke dergelijke overdracht wordt geregistreerd als een passage.
• Traditioneel, wanneer we bijvoorbeeld een cellijn ontvingen bij passage 60 van de deposant, gingen we verder vanaf dit passagenummer en verhoogden we dit bij elke subcultuur. Deze praktijk zorgde weliswaar voor een historische continuïteit, maar leidde vaak tot hoge passagenummers vanaf het begin. Gezien het uitgebreide en vaak decennialange gebruik van bepaalde cellijnen, zoals de in 1951 opgerichte HeLa-lijn, is het niet haalbaar om het totale aantal passages sinds het ontstaan van de cellijn te bepalen.
• Om de duidelijkheid en kwaliteit van onze celkweekprocessen te verbeteren, hebben we deze aanpak begin 2023 herzien. Wanneer we nu een kweek starten vanuit een nieuw flesje, ongeacht het passagegetal van de deponent, resetten we het tellen en beginnen we voor elke geproduceerde batch opnieuw bij passage één.

Rationale

Passageren is een essentiële procedure om de gezondheid en bruikbaarheid van celculturen voor onderzoek te waarborgen. Wanneer cellen te dicht op elkaar groeien, treedt contactremming op, waardoor hun proliferatiesnelheid afneemt, wat de experimentele resultaten negatief kan beïnvloeden. Om deze problemen te beperken, voert Cytion strenge controles uit op de celdichtheden waarbij subcultivering plaatsvindt, waardoor lage passageaantallen worden gehandhaafd tijdens de productie van hun cellijnen. Deze voorzorgsmaatregel helpt de nadelige effecten van overmatig passeren te voorkomen, zoals morfologische afwijkingen, veranderingen in de groeisnelheid en genetische drift, waardoor de cellen aanzienlijk kunnen afwijken van hun oorspronkelijke staat. Langdurige subcultivering kan ook het risico op microbiële besmetting vergroten.

Onze belofte

Wij zorgen ervoor dat de aan onderzoekers geleverde cellen zo dicht mogelijk bij de oorspronkelijke genetische samenstelling en fenotypische kenmerken blijven, waardoor de betrouwbaarheid van de experimentele gegevens wordt vergroot. Bovendien draagt Cytion, door elke passage nauwkeurig te documenteren, bij aan de traceerbaarheid en reproduceerbaarheid van onderzoek, een toewijding die de hoge praktijknormen in de celcultuur weerspiegelt. Onderzoekers worden aangemoedigd om nauwkeurige gegevens bij te houden van het aantal passages, zowel op de kweekvaten als in hun laboratoriumnotitieboeken, als referentie voor de gezondheid en geschiedenis van hun celculturen.

Tips en veelgemaakte fouten

Het volgen van het juiste protocol is essentieel, maar inzicht in veelvoorkomende valkuilen kan net zo belangrijk zijn. Celkweekprocedures zijn gevoelig voor kleine afwijkingen in techniek, timing en de kwaliteit van reagentia. De volgende tips weerspiegelen de beste praktijken die worden aanbevolen door het wetenschappelijke team van Cytion op basis van uitgebreide ervaring met celkweek.

• Verwarm reagentia altijd voor op 37 °C voor gebruik om thermische schokken voor de cellen te minimaliseren.
• Werk snel maar zorgvuldig — beperk de tijd dat cellen buiten de incubator doorbrengen tot een minimum.
• Gebruik gecertificeerde, op mycoplasma geteste reagentia om besmetting te voorkomen die de experimentele resultaten in gevaar kan brengen.
• Documenteer elke stap, inclusief het passage-nummer, de datum en observaties van de celmorfologie.
• Valideer uw protocol met een klein proefexperiment voordat u opschaalt, om verspilling van dure reagentia te voorkomen.

Aanbevolen Cytion-reagentia

Cytion biedt een reeks gevalideerde celkweekreagentia die specifiek zijn ontworpen ter ondersteuning van dit protocol. Alle reagentia zijn getest op prestaties met veelgebruikte cellijnen en zijn verkrijgbaar met volledige documentatie. Ga naar cytion.com/Media-Reagents om het volledige assortiment te bekijken.