Gepubliceerd: 2023 | Laatst herzien: mei 2026

Uitgebreide gids voor het invriezen van cellen: levensvatbaarheid en steriliteit waarborgen

Het invriezen van cellen is een cruciaal proces in het beheer van celculturen, dat zorgt voor langdurige opslag en behoud van waardevolle cellijnen. Of u nu met menselijke of dierlijke cellen werkt, het volgen van nauwkeurige protocollen en het handhaven van strikte aseptische technieken zijn van het grootste belang voor een succesvolle cryopreservatie.

Deze gids biedt gedetailleerde instructies over de benodigde materialen, reagentia en stapsgewijze procedures om cellen effectief in te vriezen met behoud van hun levensvatbaarheid en steriliteit. Door deze richtlijnen te volgen, kunnen onderzoekers celculturen met vertrouwen opslaan en later weer tot leven wekken met minimaal verlies aan levensvatbaarheid, waardoor de integriteit en betrouwbaarheid van hun experimentele resultaten behouden blijven.

Om te beginnen is het essentieel om een steriele werkomgeving te creëren. De juiste aseptische technieken spelen een cruciale rol bij het voorkomen van besmetting en het waarborgen van de steriliteit van de culturen.

Aseptische techniek

Volg aseptische technieken gedurende het hele proces om de steriliteit van de culturen te waarborgen.

Uitgebreid proces voor het invriezen van cellen

Dit stroomschema biedt een gedetailleerde visuele gids voor de essentiële stappen die nodig zijn voor het correct invriezen van cellen. Volg deze procedures om een hoge celviabiliteit en integriteit tijdens het cryopreservatieproces te garanderen.

Bereiding van het invriesmedium

Bereid cryoprotectief invriesmedium voor op basis van het celtype:

FBS-bevattende kweekmedia: 90% FBS + 10% DMSO of 70% groeimedium, 20% FBS en 10% DMSO
Cellen die glycerol nodig hebben: 90% FBS + 10% glycerol

Overweeg de aanschaf van ons vooraf samengestelde vriesmedium:

Vriesmedium CM-1: voor protocollen die een medium vereisen dat foetaal runderserum (FBS) bevat
Vriesmedium CM-ACF - serumvrij: voor een FBS-vrij alternatief

Etikettering en documentatie

Label cryovials met de volgende gegevens:

Datum
Naam van de onderzoeker
Celnummer
Passagenummer
Celtype
Eventuele aanvullende informatie (bijv. genetische modificaties)

Celpreparatie

Voor hechtende cellen:

Houd de cellen in de gaten totdat ze 85–95% confluentie bereiken
Zuig het oude kweekmedium af
Spoel de celmonolaag met calcium- en magnesiumvrij PBS
Maak de cellen los met Accutase, trypsine of trypsine-EDTA en neutraliseer indien nodig met kweekmedium
Breng de celsuspensie over in een Falcon-buis van 50 ml

Voor suspensiecellen:

Controleer de celdichtheid en gezondheid onder een microscoop
Breng de celsuspensie direct over in een Falcon-buis van 50 ml

Celtelling en centrifugeren

Tel de cellen met behulp van een hemocytometer of een automatische celteller
Centrifugeer bij 300 g gedurende 3-5 minuten bij kamertemperatuur om de cellen te pelletiseren
Zuig het supernatant voorzichtig af, waarbij u ervoor zorgt dat de celpellet niet wordt verstoord
Verwarm het bereide invriesmedium tot 37 °C voor gebruik

Cryopreservatie

Resuspendeer het celpellet in invriesmedium tot een dichtheid van 2,0 miljoen cellen/ml voor hechtende cellen en 5 miljoen cellen/ml voor suspensiecellen, of tot de door u gewenste concentratie
Verdeel 1,0 ml (of meer indien nodig) van de celsuspensie in gelabelde cryoflesjes
Gebruik een langzame invriesmethode voordat u de cellen overbrengt naar langetermijnopslag

? Methode: ? Stappen
❄️ Handmatig invriezen: 1️⃣ Plaats de cellen in het invriesmedium in een vriezer bij 4 °C gedurende 40 minuten.
2️⃣ Breng ze vervolgens over naar een vriezer bij -80 °C voor 24 uur.
3️⃣ Bewaar de cellen in vloeibare stikstof voor langdurige bewaring.
? Met behulp van Mr. Frosty: 1️⃣ Bereid de cellen voor in cryovials met invriesmedium.
2️⃣ Plaats de cryovials in de Mr. Frosty-container.
3️⃣ Bewaar ze 24 uur bij -80 °C voordat u ze overbrengt naar vloeibare stikstof.
? Vriezer met geregelde snelheid: 1️⃣ Programmeer het apparaat om de temperatuur geleidelijk te verlagen.
2️⃣ Plaats de voorbereide cellen in de vriezer.
3️⃣ Breng de cellen na de vriescyclus over naar vloeibare stikstof.

Bewaar de cryovials bij temperaturen onder -130 °C of in vloeibare stikstof voor langdurige bewaring.

Materialen en reagentia

Cryovials van 1–2 ml
CoolCell®-vriesunit of vriezer met geregelde snelheid
Cryoprotectief invriesmedium (bijv. zelfgemaakte cryoprotectieve media, CM-1, CM-ACF of gespecialiseerde media)
Foetaal runderserum (FBS) of geconditioneerde media
DMSO of glycerol
Calcium- en magnesiumvrij PBS
Accutase, trypsine of trypsine-EDTA (voor hechtende cellen)
Falcon-buisjes van 15 ml of 50 ml
Hemocytometer of automatische celteller
Centrifuge