De RAW 264.7-cellijn in onderzoek naar macrofagen en immunologie

De RAW 264.7-cellijn fungeert als een robuust in-vitro-model voor muizenmacrofagen en is van fundamenteel belang voor het immunologisch onderzoek. Deze cellen, afkomstig van een mannelijke BALB/c-muis, werden getransformeerd door het Abelson-muizenleukemievirus, wat resulteerde in een macrofaagachtige cellijn. Vanwege hun functionele stabiliteit en het inherente vermogen om zowel fagocytose als pinocytose uit te voeren, zijn RAW 264.7-cellen essentieel voor de studie van interacties tussen gastheer en pathogeen, waardoor ze een hoeksteen vormen in immunologisch onderzoek [1,2].

Morfologische kenmerken en groeigedrag

Bij onderzoek vertonen RAW 264.7-cellen een semi-adherente groei met de neiging om zowel spindelvormige, aanhechtende cellen als bolvormige, zwevende levensvatbare cellen te vormen, met een celdiameter variërend van 10 tot 20 µm. Deze polymorfe aard en het aanpassingsvermogen aan kweekomstandigheden maken RAW 264.7-cellen tot een veelzijdig hulpmiddel voor experimentele manipulatie en observatie.

Immunologische functie en antigeenpresentatie

Als antigeenpresenterende cellen spelen RAW 264.7-cellen een cruciale rol in het immuunsysteem. Hun functie reikt verder dan louter de herkenning van pathogenen en omvat ook de verwerking en presentatie van antigenen aan T-cellen, waardoor een alomvattende immuunrespons wordt georkestreerd. Deze dynamiek draagt bij aan een dieper inzicht in hoe het immuunsysteem vreemde entiteiten identificeert en neutraliseert.

Polarisatie van macrofagen: het M0-, M1- en M2-paradigma

RAW 264.7-cellen beschikken in hun basale toestand als M0-macrofagen over het opmerkelijke vermogen om te polariseren naar het pro-inflammatoire M1-fenotype of het anti-inflammatoire M2-fenotype. Dit polariseringsvermogen biedt onderzoekers een model om de invloeden en effecten van diverse cytokines en omgevingsfactoren op de macrofaagfunctie en immuunreacties te bestuderen [3,4].

Osteoclastogenese en botremodellering

Hoewel RAW 264.7-cellen zelf geen osteoclasten zijn, hebben ze een cruciale rol gespeeld bij het onderzoek naar osteoclastogenese – het proces van osteoclastvorming. Deze cellen maken het mogelijk om de genexpressie van osteoclasten en hun reactievermogen op receptoractivering te onderzoeken. Dit onderzoek heeft verstrekkende implicaties voor het begrip van de pathofysiologie van aandoeningen zoals osteoporose, waarbij ontregelde botremodellering een kenmerkend aspect is.

Voor- en nadelen van RAW 264.7-cellen

Voordelen

• Eenvoudige kweek: De RAW 264.7-cellijn is eenvoudig te kweken en te onderhouden in het laboratorium, zonder ingewikkelde vereisten.
• Goed gekarakteriseerd: RAW 264.7 is een goed gekarakteriseerde cellijn, wat betekent dat deze stabiele fenotypische en functionele kenmerken heeft.
• In-vitro-model van macrofagen: Aangezien RAW 264.7-cellen macrofagen zijn, vertonen ze essentiële macrofaagachtige functies zoals fagocytose en pinocytose. Daarom worden ze vaak gebruikt als in-vitro-model van macrofagen.
• Differentiatie tot osteoclasten: RAW 264.7-cellen kunnen met behulp van specifieke moleculaire factoren worden gedifferentieerd tot osteoclasten. Deze gedifferentieerde cellen zijn in staat tot botremodellering, net als osteoclasten.

Nadelen

• Slechte weergave van primaire macrofagen: Als getransformeerde cellijn geeft RAW 264.7 mogelijk geen nauwkeurige weergave van de kenmerken van primaire macrofagen en kunnen er enkele verschillen zijn in genexpressie, fenotype en functie.
• Beperkingen bij het screenen van geneesmiddelen: RAW 264.7-cellen zijn mogelijk niet geschikt voor alle soorten screeningstests voor geneesmiddelen, en hun reacties op sommige geneesmiddelen kunnen afwijken van die van primaire macrofagen.
• Sterke celadhesie: RAW 264.7-cellen hechten zich sterk aan het oppervlak van de kweekfles en kunnen soms lastig los te maken zijn.

Toepassingen van RAW 264.7-cellen bij het nabootsen van macrofagen en immunologische onderzoeken

Modellering van cellulaire immunologische reacties

De RAW 264.7-cellijn, die de functionaliteiten van authentieke macrofagen weerspiegelt, is een belangrijk model voor het onderzoek naar celreacties op pathogenen en immunologische prikkels. Een studie die dit aspect belicht, beoordeelde de immunomodulerende en antioxiderende effecten van door hitte gedode melkzuurbacteriën op deze cellen, wat belangrijke bevindingen opleverde voor de regulering van het immuunsysteem [5 ].

In aanvulling hierop bracht onderzoek uit 2019 de immunologische impact aan het licht van blootstelling van RAW 264.7-cellen aan polysacchariden uit de plant Polygonatum sibiricum. De studie concludeerde dat deze verbindingen een immuunreactie opwekken door de activering van NF-κB/MAPK-signaalroutes, wat diepgaand moleculair inzicht biedt [6].

Onderzoek naar osteoclastogenese

RAW 264.7-cellen fungeren als model voor onderzoek naar de differentiatie van osteoclasten en dragen bij aan het ophelderen van het gedrag en de differentiatiepaden van osteoclasten. Dergelijk onderzoek vergroot onze kennis over de mechanismen van botresorptie en de pathogenese van osteoporose. Er wordt vaak gebruikgemaakt van geavanceerde beeldvormingstechnieken om intracellulaire veranderingen te volgen en het heemmetabolisme binnen deze cellen te analyseren.

Moleculair inzicht in osteoclastogenese

Ondanks hun primaire rol als macrofaagmodel worden RAW 264.7-cellen ook ingezet voor in-vitroonderzoek naar osteoclastogenese. Door in deze cellen osteoclastachtige kenmerken te induceren, krijgen onderzoekers inzicht in het differentiatieproces en het gedrag van pre-osteoclasten, hoewel het bij deze studies van cruciaal belang is om rekening te houden met de inherente kenmerken en de oorsprong van de cellijn.

Screening van de bioactiviteit van natuurlijke producten

Het screenen op bioactiviteit in natuurlijke producten is een andere toepassing waarin RAW 264.7-cellen uitblinken. Zo toonde het gebruik ervan in een Koreaans onderzoek naar de immuunstimulerende eigenschappen van een kruidenmengsel de effectiviteit van de cellijn aan bij het identificeren van bioactieve verbindingen in natuurlijke stoffen [ 7 ].

Wees een pionier in je onderzoek met onze RAW 264.7-cellen

Wetenschappelijke publicaties waarin gebruik wordt gemaakt van RAW 264.7-cellen

Er zijn veel onderzoekspublicaties beschikbaar over de muizenmacrofaagcellijn RAW 264.7:

• Polysacchariden uit Polygonatum sibiricum Delar. ex Redoute induceren een immuunrespons in de RAW 264.7-cellijn via een NF-κB/MAPK-signaalroute: Deze studie stelde dat polysacchariden verkregen uit de Polygonatum sibiricum-plant een immuunrespons kunnen opwekken in de muizenmacrofaagcellijn RAW 264.7 via regulering van de NF-κB/MAPK-signaalcascade.
• Immunomodulerende effecten van het extract van Tinospora crispa en de belangrijkste bestanddelen daarvan op de immuunfuncties van RAW 264.7-macrofagen: Dit artikel, gepubliceerd in het tijdschrift International Immunopharmacology, beschrijft dat het extract van de Tinospora crispa-plant en de belangrijkste bestanddelen daarvan een immuunmodulerend en immuunstimulerend effect hebben op de RAW 264.7-macrofaagcellijn.
• Door hitte gedode melkzuurbacteriën remmen de productie van stikstofmonoxide via induceerbare stikstofmonoxide-synthase en cyclo-oxygenase-2 in RAW 264.7-cellen: Deze studie suggereerde dat door hitte gedode melkzuurbacteriën mogelijk kunnen worden gebruikt bij de synthese van probiotische producten, omdat ze immuunmodulerende en antioxiderende eigenschappen bezitten. Onderzoekers gebruikten RAW 264.7-cellen om deze biologische activiteiten te bestuderen.
• Effect van een kruidenformule op de versterking van de immuunrespons in RAW 264.7-macrofagen: In deze studie werden RAW 264.7-cellen gebruikt om het immuunstimulerende effect van een kruidenformule met de naam KM1608 te onderzoeken. De studie suggereerde dat KM1608 een potentieel middel is voor het versterken van de immuunrespons.
• Een screening van planten die in de traditionele Colombiaanse geneeskunde worden gebruikt, bracht het ontstekingsremmende potentieel van de kelken van Physalis angulata aan het licht: Dit artikel, gepubliceerd in het Saudi Journal of Biological Sciences, onderzocht het ontstekingsremmende potentieel van 10 veelgebruikte traditionele Colombiaanse planten met behulp van LPS-gestimuleerde RAW 264.7-cellen.

RAW 264.7-cellen: bronnen, protocollen, video’s en meer

RAW 264.7-cellen worden vaak gebruikt in transfectieonderzoeken. De volgende bronnen geven uitleg over verschillende transfectiemethoden die worden toegepast voor de RAW 264.7-cellijn.

• Transfectie van RAW 264.7-cellen: Op deze website vindt u een protocol voor de transfectie van RAW 264.7-macrofagen met behulp van een lipofectamine-reagens.
• Transfectieprotocol: Dit gepubliceerde artikel beschrijft een gedetailleerd protocol voor de transfectie van RAW 264.7-cellen.
• Efficiënte transfectiemethode voor RAW 264.7-cellen: Dit document beschrijft een andere praktische transfectiemethode met RAW 264.7-cellen.

Video's over de RAW 264.7-cellijn

• RAW 264.7-cellen kweken: Deze video legt het passageprotocol voor RAW 264.7-cellen uit.
• Transfectiemethode: Deze video gaat over het transfecteren van RAW 264.7-cellen met een reportergen.

Belangrijke veelgestelde vragen over de RAW 264.7-cellijn: inzichten in onderzoek naar macrofaag-mimicry en osteoclastogenese

Referenties

1. Taciak, B., et al., Evaluatie van de fenotypische en functionele stabiliteit van de RAW 264.7-cellijn door middel van seriële passages. PloS one, 2018. 13(6): p. e0198943.
2. Wang, S., et al., Ontstekingsmacrofagen verstoren de rijping en mineralisatie van osteocyten door regulering van de Notch-signaalroute. Molecular Medicine, 2022. 28(1): p. 102.
3. Orekhov, A.N., et al., Differentiatie van monocyten en polarisatie van macrofagen. Vessel Plus, 2019. 3: p. 10.
4. Khabipov, A., et al., Polarisatie van RAW 264.7-macrofagen door alvleesklierkankercellen – een model voor het bestuderen van tumorbevorderende macrofagen. Anticancer Research, 2019. 39(6): p. 2871-2882.
5. Kang, C.-H., et al., Door hitte gedode melkzuurbacteriën remmen de productie van stikstofmonoxide via induceerbare stikstofmonoxide-synthase en cyclo-oxygenase-2 in RAW 264.7-cellen. Probiotics and Antimicrobial Proteins, 2021. 13(6): p. 1530-1538.
6. Zhang, J., et al., Polysacchariden uit Polygonatum sibiricum Delar. ex Redoute induceren een immuunrespons in de RAW264.7-cellijn via een NF-κB/MAPK-route. RSC Advances, 2019. 9(31): p. 17988-17994.
7. Trinh, T.A., et al., Effect van een kruidenformule op de versterking van de immuunrespons in RAW 264.7-macrofagen. Biomolecules, 2020. 10(3): p. 424.