Neuro-2a-cellijn
Neuro-2a is een op muizen gebaseerde neurale cellijn die op grote schaal wordt gebruikt in neurowetenschappelijk onderzoek. Deze cellen worden voornamelijk ingezet voor het bestuderen van neurale ontwikkeling, differentiatie, neurotoxiciteit, celsignaleringsroutes en axonale groei. Daarnaast worden ze gebruikt voor de ontwikkeling en screening van geneesmiddelen.
Dit artikel richt zich op belangrijke aspecten van Neuro-2a-neuroblastomacellen die u kunnen helpen voordat u ermee aan de slag gaat. Het behandelt voornamelijk:
- Algemene kenmerken en oorsprong van Neuro-2a-cellen
- Informatie over het kweken van de Neuro-2a-cellijn
- Voor- en nadelen van de Neuro-2a-cellijn
- Toepassingen van de Neuro-2a-cellijn in onderzoek
- Wetenschappelijke publicaties over Neuro-2a-cellen
- Bronnen voor Neuro-2a-cellen: protocollen, video's en meer
Algemene kenmerken en oorsprong van Neuro-2a-cellen
In dit deel van het artikel worden de achtergrond en basiskenmerken van de Neuro-2a-cellijn besproken die essentieel zijn om te weten voordat u ermee aan de slag gaat. Hier leert u: Wat is de Neuro-2a-cellijn? Wat is de oorsprong van de Neuro-2a -cellijn? Wat is celdifferentiatie van Neuro-2a-cellen? Hoe groot is een Neuro-2a-cel? Wat is de morfologie van Neuro-2a-cellen?
- Neuro-2a-cellen zijn afkomstig van een spontane tumor (neuroblastoom) van een albino-muis (stam A). De cellijn werd opgezet door R.J. Klebe en F.H. Ruddle.
- De Neuro-2a-neuroblastoomcellen vertonen zowel neuronale als amoeboïde stamcelmorfologie.
- De hoogte van een Neuro-2a-cel bedraagt 12 micrometer [1].
- Het aantal chromosomen van Neuro-2a-cellen kan variëren van 59 tot 193, met een modaal aantal van 95. Het karyotype van deze neuroblastoomcellen is instabiel binnen een bereik van 94 tot 98 chromosomen.
Informatie over het kweken van de Neuro-2a-cellijn
Neuro-2a-cellen worden op grote schaal gebruikt in onderzoekslaboratoria op het gebied van de neurowetenschappen. Voordat u met deze cellen aan de slag gaat, dient u de hieronder genoemde essentiële informatie over celkweek te bestuderen. Dit kan u helpen om er soepel mee om te gaan. U komt te weten: Wat is een Neuro-2a celkweekmedium? Hoe kweekt u Neuro-2a-cellen? Wat is de verdubbelingstijd van Neuro-2a-cellen? Wat is de zaaidichtheid van Neuro-2a ? Wat is het kweekprotocol voor Neuro-2a-cellen? Wat is het kweekmedium voor Neuro-2a-cellen?
Belangrijke punten voor het kweken van Neuro-2a-cellen
Verdubbelingstijd:
De verdubbelingstijd van Neuro-2a-cellen bedraagt ongeveer 70 uur.
Hechtend of in suspensie:
Neuro-2a is een hechtende cellijn.
Uitzaaidichtheid:
De geoptimaliseerde bezaaidichtheid voor de Neuro-2a-cellijn is 1 x 10⁴ cellen/cm². Voor het bezaaien worden de cellen gewassen met magnesium- en calciumvrije fosfaatbufferzoutoplossing (1x). Vervolgens wordt een passageringoplossing (Accutase) toegevoegd en worden de cellen gedurende 8 tot 10 minuten bij kamertemperatuur geïncubeerd. Na dissociatie van de cellen wordt vers medium toegevoegd en worden de cellen gecentrifugeerd. Het geoogste celpellet wordt zorgvuldig opnieuw gesuspendeerd en de cellen worden in een kweekvat gegoten voor verdere groei.
Kweekmedium:
Voor het kweken van Neuro-2a-cellen wordt EMEM gebruikt. Dit bevat 10% FBS, 2 mM L-glutamine, 1,5 g/L NaHCO₃, EBSS, 1 mM natriumpyruvaat en NEAA voor een optimale celgroei. Het medium moet 1 tot 2 keer per week worden ververst.
Kweekomstandigheden:
Neuro-2a-culturen worden gehouden in een bevochtigde incubator bij 37 °C, aangesloten op een 5% CO₂-toevoer.
Opslag:
Cellen moeten voor langdurige opslag worden bewaard bij een temperatuur onder -150 °C in een elektrische vriezer voor ultralage temperaturen of in de dampfase van vloeibare stikstof.
Invriesproces en medium:
Voor het invriezen van Neuro-2a-cellen worden CM-1- of CM-ACF-media gebruikt. De cellen worden ingevroren via een langzaam invriesproces waarbij de temperatuur slechts met 1 °C per minuut daalt. Dit beschermt de cellen tegen schokken en behoudt hun levensvatbaarheid.
Ontdooiproces:
Om ingevroren culturen te ontdooien, wordt het flesje gedurende 40 tot 60 seconden in een waterbad van 37 °C geplaatst totdat er slechts een klein klompje ijs overblijft. Vervolgens wordt kweekmedium toegevoegd en worden de cellen gecentrifugeerd. Deze stap helpt bij het verwijderen van componenten van het invriesmedium. Het celpellet wordt vervolgens opnieuw gesuspendeerd en de cellen worden overgebracht naar een nieuwe kweekfles gevuld met kweekmedium. Daarna worden de cellen gedurende minimaal 24 uur in een incubator bij 37 °C geplaatst.
Bioveiligheidsniveau:
Voor het hanteren en onderhouden van Neuro-2a-culturen is een laboratoriumomgeving van bioveiligheidsniveau 1 verplicht.
- Voor- en nadelen van de Neuro-2a-cellijn
- Toepassingen van de Neuro-2a-cellijn in onderzoek
- Informatie over het kweken van de Neuro-2a-cellijn
- Algemene kenmerken en oorsprong van Neuro-2a-cellen
- 5. Wetenschappelijke publicaties over Neuro-2a-cellen
- Bronnen voor Neuro-2a-cellen: protocollen, video's en meer
- Veelgestelde vragen
Voor- en nadelen van de Neuro-2a-cellijn
Neuro-2a-cellen hebben een aantal voor- en nadelen die hen onderscheiden van andere neuronale cellijnen. Hieronder staan enkele opvallende voor- en nadelen van deze cellen opgesomd.
Voordelen
De voordelen van de Neuro-2a-muizen-neuroblastomacellijn zijn:
-
Eenvoudig te onderhouden:
De Neuro-2a-cellijn vereist geen complexe of ingewikkelde kweekprocedures. De cellen zijn eenvoudig te kweken en te onderhouden in onderzoekslaboratoria.
-
In-vitro-neuronale celmodel:
Neuro-2a is een handig neuronale celmodel dat op grote schaal wordt gebruikt door onderzoekers in studies naar de ontwikkeling en differentiatie van neuronen.
Nadelen
De nadelen van Neuro-2a-cellen zijn:
-
Van muizen afkomstig:
Neuro-2a is afkomstig van muizen, en onderzoekers moeten voorzichtig zijn bij het extrapoleren van resultaten uit op muizen gebaseerde studies naar de gezondheid en ziekten bij mensen, aangezien de biologie van muizen en mensen aanzienlijk kan verschillen.
Toepassingen van de Neuro-2a-cellijn in onderzoek
Neuro-2a-cellen bieden talrijke toepassingen op het gebied van neurowetenschappelijk onderzoek. Hieronder worden enkele veelbelovende toepassingen van deze cellijn besproken:
- Neurale ontwikkeling: Neuro-2a is een in-vitro-neuronaal celmodel dat op grote schaal wordt gebruikt voor het bestuderen van neuronale ontwikkeling en aanverwante processen, zoals differentiatie, axonale groei en synapsvorming. In een studie uit 2020 werden Neuro-2a-cellen gebruikt om de rol van microRNA-124 bij door retinoïnezuur geïnduceerde neuronale celdifferentiatie te onderzoeken [2]. Een andere studie onderzocht de expressie van de retinoïnezuurreceptor gamma (RARG) en miRNA-124 in de neuroblastoomcellijn (N2A). Deze studie stelde dat RARG het doelwit is van miR-124 en de uitgroei van neurieten onderdrukt [3].
- Neurotoxiciteit: Neuro-2a wordt ook gebruikt om de toxische effecten van geneesmiddelen, chemische stoffen of omgevingsfactoren op zenuwcellen te beoordelen. Zo onderzochten Zhihong Yin en collega’s in een studie de neurotoxiciteit van bisfenol A (BPA), een chemische stof in het milieu, met behulp van Neuro-2a-cellen. Zij constateerden dat BPA de differentiatie en proliferatie van neuronale cellen remt door de cellulaire en synaptische integriteit ervan te verstoren [4].
- Geneesmiddelenscreening: Neuro-2a-cellen worden ook ingezet om de therapeutische werking van diverse geneesmiddelen, verbindingen en natuurlijke producten te evalueren. Zo werd in een studie met behulp van Neuro-2a-cellen het antioxiderende potentieel van het extract van de Ginkgo biloba-plant onderzocht. Bovendien suggereerde het onderzoek dat dit een afname van de Aβ-aggregatie veroorzaakt en een potentiële behandeling voor de ziekte van Alzheimer kan zijn [5].
5. Wetenschappelijke publicaties waarin de Neuro-2a-cellen aan bod komen
Hieronder volgen enkele interessante onderzoeksartikelen over de Neuro-2a-cellijn.
Deze studie, gepubliceerd in het Journal of Natural Medicines in 2018, onderzocht de therapeutische effecten van uit witte peper (P. nigrum) geïsoleerde alkamiden op Neuro-2a-neuronale cellen.
Dit onderzoek, gepubliceerd in *Acta Biochimica et Biophysica Sinica* in 2020, suggereerde dat het Nkx2.1-gen een belangrijke rol speelt in de ontwikkeling van de hersenen van muizen door de Shh-signaalcascade te reguleren.
Dit artikel, gepubliceerd in *Toxicology and Industrial Health* (2023), stelt dat de milieuchemische stof bisfenol A neurotoxiciteit veroorzaakt in neuro-2a-cellen en hun synaptische en cytoskeletale functies verstoort.
Dit artikel in *Pharmaceuticals* (2021) stelt dat het geneesmiddel hexarelin de PI3K/AKT- en MAPK-cascade in neuroblastomacellen (Neuro-2a) moduleert en door waterstofperoxide geïnduceerde apoptose in Neuro-2a-cellen remt.
Dit onderzoeksartikel in Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2021) stelt dat het fruitextract van Emblica officinalis neuro-ontsteking in Neuro-2a-cellen onderdrukt en daardoor gunstig kan zijn bij neuro-inflammatoire aandoeningen.
Bronnen voor Neuro-2a-cellen: protocollen, video’s en meer
Hieronder volgen de online bronnen die beschikbaar zijn over Neuro-2a-cellen. Deze omvatten onder meer protocollen voor het kweken en transfectie van Neuro-2a-cellen.
- Transfectieprotocol voor Neuro-2a: Neuro-2a is een geschikte gastheer voor transfectie. Via deze link vindt u informatie over het transfectieprotocol voor deze cellijn. De transfectie-efficiëntie van Neuro-2a varieert per reagens.
De volgende link bevat het protocol voor het kweken van Neuro-2a-cellen.
- Protocol voor het kweken van Neuro-2a-cellen: via deze link leert u het protocol voor het subcultiveren van Neuro-2a-cellen kennen.
- Neuro-2a-cellen: De website bevat uitgebreide informatie over Neuro-2a-celmedia, bezaaidichtheid en protocollen voor het subcultiveren en hanteren van cryogepreserveerde en proliferatieve culturen.
Referenties
- Lulevich, V., et al., Single-cell mechanics biedt een gevoelige en kwantitatieve methode voor het onderzoeken van interacties tussen het amyloïde-bèta-peptide en neuronale cellen. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(31): p. 13872-7.
- You, Q., et al., De rol van miR-124 bij de regulering van door retinoïnezuur geïnduceerde differentiatie van Neuro-2A-cellen. Neural Regen Res, 2020. 15(6): p. 1133-1139.
- Su, X., et al., De retinoïnezuurreceptor gamma is het doelwit van microRNA-124 en remt de uitgroei van neurieten. Neuropharmacology, 2020. 163: p. 107657.
- Yin, Z., et al., Blootstelling aan bisfenol-A veroorzaakte neurotoxiciteit en hield verband met synapsen en het cytoskelet in Neuro-2A-cellen. Toxicology in Vitro, 2020. 67: p. 104911.
- Chen, L., et al., Ginkgo biloba-extract (EGb) remt oxidatieve stress in Neuro-2A-cellen die APPsw tot overexpressie brengen. BioMed Research International, 2019. 2019.