NCI-H1299-cellen: onderzoek en klinische implicaties van NCI-H1299-longkankercellen
NCI-H1299 is een geïmmortaliseerde menselijke niet-kleincellige longkankercellijn die op grote schaal wordt gebruikt in onderzoek op het gebied van immuunoncologie, kanker en geneesmiddelenontwikkeling. Bovendien hebben onderzoekers deze cellen gebruikt om de gevoeligheid voor geneesmiddelen, onderliggende signaalroutes en moleculaire mechanismen in verband met longkanker te onderzoeken. Daarnaast worden deze cellen ingezet om virale infecties zoals SARS-CoV-2 te bestuderen.
- Groeimedium
- RPM1 1640 is een ideaal kweekmedium voor de NCI-H1299-cellijn. Het is aangevuld met 10% foetaal runderserum, 4500 mg/L glucose, 2,0 mM L-glutamine, 1 mM natriumpyruvaat, 1500 mg/L NaHCO₃ en 10 mM HEPES. Het medium moet 2 tot 3 keer per week worden ververst.
- Verdubbelingstijd
- De verdubbelingstijd van NCI-H1299 ligt tussen 22 en 30 uur.
- Groeitype
- NCI-H1299 is een hechtende cellijn.
- Bioveiligheidsniveau
- BSL-1
- Verkrijgbaar bij
- Cytion — Bestel NCI-H1299
- Algemene kenmerken en oorsprong van NCI-H1299-cellen
- Informatie over het kweken
- Koop de NCI-H1299-cellijn: hoogwaardige onderzoeksinstrumenten voor onderzoek naar de biologie van longkanker
- Voor- en nadelen van NCI-H1299-cellen
- Toepassingen van NCI-H1299-cellen in onderzoek
- Wetenschappelijke publicaties over NCI-H1299-cellen
- Bronnen voor de NCI-H1299-cellijn: protocollen, video's en meer
- Veelgestelde vragen over de NCI-H1299-cellijn
- Referenties
- Veelgestelde vragen
Algemene kenmerken en oorsprong van NCI-H1299-cellen
Het eerste wat u over een cellijn moet weten, is de oorsprong en de algemene kenmerken ervan, aangezien deze u helpen bij het bepalen van het gebruik ervan in uw onderzoek. Dit gedeelte van het artikel helpt u bij het verkrijgen van belangrijke informatie over de oorsprong en kenmerken van NCI-H1299. Bijvoorbeeld: wat zijn NCI-H1299-longkankercellen? Wat voor soort cel is NCI-H1299? Hoe groot zijn NCI-H1299-cellen? Wat is het verschil tussen A549 en NCI-H1299?
- De NCI-H1299-cellijn is afkomstig van een lymfekliermetastase in de long van een 43-jarige blanke mannelijke kankerpatiënt.
- Deze cellen vertonen een homozygote gedeeltelijke deletie van het p53-gen; ze brengen het p53-eiwit dus niet tot expressie. Het ontbreken van p53-eiwitexpressie in NCI-H1299 draagt bij aan de proliferatieve neiging van H1299-longkankercellen.
- Naast p53 hebben deze geïmmortaliseerde cellen naar verluidt een NCI-H1299 KRAS-mutatie, die verantwoordelijk is voor hun groei, proliferatie, migratie en invasieve eigenschappen.
- Het karyotype van NCI-H1299 is nagenoeg diploïd.
- NCI-H1299-cellen hebben een epitheelcelachtige morfologie.
- Deze cellen zijn afgeplat en hebben een dikte van minder dan 5 µm.
NCI-H1299 en A549
NCI-H1299 en A549 zijn celijnen van niet-kleincellige longkanker. NCI-H1299-cellen zijn agressiever en gevoeliger dan A549-cellen. Beide vertonen relatief vergelijkbare mutaties, zoals KRAS. In tegenstelling tot NCI-H1299-cellen brengen A549-cellen echter het P53-gen tot expressie.
Informatie over het kweken van celculturen
Het onderhouden van een cellijnkweek is niet eenvoudig totdat u alle belangrijke informatie erover kent, waaronder: Wat is de verdubbelingstijd van NCI-H1299? Wat is de zaaidichtheid van NCI-H1299? Wat is het kweekmedium voor NCI-H1299? Hoe kweek je NCI-H1299-cellijnen? In dit gedeelte vind je de antwoorden op al deze vragen over het kweken van NCI-H1299-cellen.
Belangrijke punten voor het kweken van NCI-H1299-cellen
Verdubbelingstijd:
De verdubbelingstijd van NCI-H1299 ligt tussen de 22 en 30 uur.
Hechtend of in suspensie:
NCI-H1299 is een hechtende cellijn.
Subcultiveringsverhouding:
NCI-H1299-cellen worden gesubcultiveerd in een aanbevolen verhouding van 1:3 tot 1:6. Voor het uitzaaien worden de hechtende cellen gewassen met 1x PBS en gedurende 8 tot 10 minuten bij kamertemperatuur geïncubeerd met Accutase-passageoplossing. Losgekomen cellen worden toegevoegd aan vers kweekmedium en gecentrifugeerd. De celpellet wordt vervolgens opnieuw gesuspendeerd en de cellen worden overgebracht naar nieuwe flessen met groeimedium.
Groeimedium:
RPM1 1640 is een ideaal kweekmedium voor NCI-H1299-cellen. Het wordt aangevuld met 10% foetaal runderserum, 4500 mg/L glucose, 2,0 mM L-glutamine, 1 mM natriumpyruvaat, 1500 mg/L NaHCO₃ en 10 mM HEPES. Het medium moet 2 tot 3 keer per week worden ververst.
Groeiomstandigheden:
NCI-H1299-longkankercelculturen worden gekweekt in een bevochtigde incubator bij 37 °C met een CO₂-toevoer van 5%.
Opslag:
De NCI-H1299-cellijn kan voor langdurige opslag worden bewaard in de dampfase van vloeibare stikstof of in ultralage-temperatuurvriezers bij een temperatuur van minder dan -150 °C.
Invriesproces en medium:
CM-1 of CM-ACF zijn invriesmedia voor NCI-H1299-cellen. De cellen worden ingevroren met behulp van een langzaam invriesproces waarbij de temperatuur slechts met 1 graad per minuut daalt, om de levensvatbaarheid van de cellen te waarborgen.
Ontdooiproces:
Ingevroren NCI-H1299-cellen worden gedurende 40 tot 60 seconden snel geroerd in een voorverwarmd waterbad bij 37 graden Celsius, totdat er nog slechts een klein stukje ijs overblijft. Aan de ontdooide cellen wordt vers medium toegevoegd en ze kunnen direct in nieuwe kweekflessen worden gekweekt of worden gecentrifugeerd. In het eerste geval moet het medium na 24 uur incubatie worden vervangen. Centrifugeren helpt bij het verwijderen van bestanddelen van het invriesmedium. Daarna worden de geoogste cellen opnieuw gesuspendeerd in vers medium en in de nieuwe kweekfles gebracht voor kweek.
Bioveiligheidsniveau:
Voor het werken met de NCI-H1299-celkweek is een laboratorium van bioveiligheidsniveau 1 vereist.
Koop de NCI-H1299-cellijn: hoogwaardige onderzoeksinstrumenten voor onderzoek naar de biologie van longkanker
Voor- en nadelen van NCI-H1299-cellen
Net als andere menselijke kankercellijnen bezit ook NCI-H1299 een aantal onderscheidende kenmerken die gepaard gaan met specifieke voor- en nadelen. Hieronder hebben we enkele belangrijke kenmerken samengevat.
Voordelen
De belangrijkste voordelen van de NCI-H1299-cellijn voor niet-kleincellige longkanker zijn:
-
In-vitro-longkankermodel
NCI-H1299-cellijnen zijn ontwikkeld uit lymfekliermetastasen van longcarcinoom en hebben daardoor relatief vergelijkbare eigenschappen. Daarom kunnen deze cellen dienen als in-vitro-model voor onderzoek naar de biologie van longkanker, cellulaire en moleculaire mechanismen en het screenen en testen van potentiële therapieën.
-
Eenvoudig te kweken
NCI-H1299-cellen zijn eenvoudig te kweken en te onderhouden in een onderzoekslaboratorium. Er zijn geen ingewikkelde vereisten of procedures voor de celkweek.
-
NCI-H1299 P53 en NCI-H1299 KRAS-mutatie
NCI-H1299-cellen vertonen geen expressie van het p53-gen, waardoor de cellen zich krachtig kunnen vermenigvuldigen. Bovendien bezitten ze een KRAS-mutatie die bijdraagt aan celgroei, proliferatie, invasie en migratie. Gezien deze eigenschappen gebruiken onderzoekers H1299-cellen om moleculaire mechanismen te onderzoeken die relevant zijn voor KRAS- en p53-mutaties.
Nadelen
De nadelen van NCI-H1299-cellen zijn:
-
Weefselspecificiteit
NCI-H1299 is afkomstig uit longweefsel. Daarom is de toepasbaarheid ervan grotendeels beperkt tot onderzoek naar longcarcinoom. Het geeft mogelijk geen volledig beeld van de heterogeniteit en algemene kenmerken van andere kankertypen.
Toepassingen van NCI-H1299-cellen in onderzoek
De NCI-H1299-cellijn wordt op grote schaal gebruikt in onderzoek naar longkanker. Hieronder worden enkele veelbelovende toepassingen van deze cellijn genoemd.
- Kankerbiologie: NCI-H1299-cellen vormen een uitstekend onderzoeksinstrument om de ontwikkeling en progressie van kanker en de daarmee samenhangende cellulaire en moleculaire mechanismen te bestuderen. Deze cellen bezitten bepaalde mutaties, waardoor onderzoekers het gedrag van kankercellen, signaalroutes en genexpressieprofielen kunnen onderzoeken. In verschillende studies is de NCI-H1299-cellijn voor niet-kleincellig longcarcinoom gebruikt om de biologie van longkanker te bestuderen. Zo werd in een studie uit 2018 de signaalroute onderzocht die betrokken is bij de apoptose van longkankercellen, waarbij gebruik werd gemaakt van NCI-H1299-cellen. De onderzoekers ontdekten dat de PI3K/AKT-route bijdraagt aan celproliferatie en dat remming ervan de dood van kankercellen kan veroorzaken [1]. Evenzo onderzocht een ander onderzoek de mechanismen die betrokken zijn bij de epitheliale-naar-mesenchymale overgang (EMT) van NCI-H1299. Deze studie stelde dat het extracellulaire eiwit SPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine) bijdraagt aan de EMT en migratie van NCI-H1299-cellen en daarmee de tumorontwikkeling in cellen bevordert — het SPARC-eiwit fungeert als mediator van de TGF-β1-signaalroute [2].
- Ontdekking en screening van geneesmiddelen: NCI-H1299, een menselijke longkankercellijn, wordt op grote schaal gebruikt om de toxiciteit en werkzaamheid van potentiële geneesmiddelen te beoordelen. Daarnaast wordt deze cellijn door onderzoekers gebruikt om het werkingsmechanisme van antitumormiddelen te onderzoeken. In studies zijn deze cellen ook gebruikt om mogelijke medicijndoelwitten en resistentiemechanismen te identificeren. Zo werd in onderzoek onder leiding van Xiao-Yun Shen en collega’s het antikankerpotentieel van de natuurlijke verbinding bruceine D (BD) onderzocht. Uit de bevindingen bleek dat BD de proliferatie, invasie en migratie van NCI-H1299-cellen aanzienlijk remt. Daarom kan het worden beschouwd als een potentiële adjuvante therapie voor de behandeling van niet-kleincellig longcarcinoom [3]. Evenzo werden in een studie de cytotoxische effecten van xanthohumol, zowel afzonderlijk als in combinatie met het chemotherapeutische middel cisplatine, op NCI-H1299-longkankercellen geëvalueerd [4].
Wetenschappelijke publicaties over NCI-H1299-cellen
Hier vindt u enkele belangrijke en veel geciteerde onderzoekspublicaties over de NCI-H1299-longcarcinoomcellijn.
Dit artikel is gepubliceerd in het tijdschrift *Human and Experimental Toxicology* (2021). De studie suggereert dat indool-3-carbinol apoptose induceert in H1299-cellen door het gehalte aan reactieve zuurstofsoorten (ROS) te verhogen.
Dit onderzoek werd in 2018 gepubliceerd in het tijdschrift *Cellular Physiology and Biochemistry*. Uit de onderzoeksresultaten bleek dat de combinatie van cafeïnezuur en paclitaxel een synergetisch antikankereffect uitoefent in de niet-kleincellige longkankercellijn NCI-H1299.
Dit onderzoeksartikel is gepubliceerd in *Molecular Medicine Reports* (2018). In de studie werden het antitumorale effect van tubeimoside-1, een triterpenoïde saponine, en de onderliggende mechanismen in de NCI-H1299-cellijn geëvalueerd.
Pristimerin induceert apoptose en remt de proliferatie en migratie in H1299-longkankercellen
Dit artikel, gepubliceerd in het Journal of Cancer (2020), stelde dat Pristimerin, een natuurlijke verbinding, de proliferatie en migratie van NCI-H1299-cellen onderdrukt.
Mechanisme van het VIPR1-gen bij de regulering van menselijke H1299-adenocarcinoomcellen
Deze studie in Medical Oncology (2019) onderzocht de mogelijke effecten van overexpressie van het VIPR1-gen op de NCI-H1299-adenocarcinoomcellijn.
Bronnen voor de NCI-H1299-cellijn: protocollen, video’s en meer
Hieronder vindt u enkele online bronnen over de NCI-H1299-cellen.
- Transfectie van NCI-H1299: In deze video wordt het protocol voor tijdelijke transfectie van NCI-H1299-cellijnen uitgelegd.
- Subcultiveren van een hechtende cellijn: Deze video helpt u bij het leren van een algemene subcultiveringsprocedure voor een hechtende cellijn.
De volgende link bevat informatie over het kweken van NCI-H1299-cellen.
- NCI-H1299-cellijn: via deze link kunt u meer te weten komen over het passageren en het transfectieprotocol voor de NCI-H1299-cellen.
Veelgestelde vragen over de NCI-H1299-cellijn
Referenties
- Gu, J., et al., Onderzoek naar door EGCG geïnduceerde apoptose in longkankercellen door remming van de PI3K/Akt-signaalroute. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci, 2018. 22(14): p. 4557-4563.
- Sun, W., et al., SPARC fungeert als mediator van TGF-β1 bij het bevorderen van de epitheliale-naar-mesenchymale overgang in A549- en H1299-longkankercellen. Biofactors, 2018. 44(5): p. 453-464.
- Shen, X.-Y., et al., Een onderzoek naar het werkingsmechanisme van bruceine D bij de behandeling van H1299-cellen van niet-kleincellige longkanker. World Journal of Traditional Chinese Medicine, 2020. 6(4): p. 500.
- Long, B., et al., Cytotoxische effecten van xanthohumol en de combinatie daarvan met cisplatine op menselijke H1299-cellen van gemetastaseerde longkanker. Journal of Advances in Medicine and Medical Research, 2019. 30(9): p. 1-15.