OP9 Cellen
Karakterisering van de OP9-cellijn
Beschrijving | De OP9-cellijn, een stromale cellijn afkomstig van de calvariae van op/op muizen, heeft een mutatie die leidt tot een gebrek aan macrofaagkoloniestimulerende factor (M-CSF), een essentieel cytokine dat betrokken is bij de differentiatie, overleving en functie van verschillende celtypen, waaronder macrofagen en osteoclasten. OP9-cellen zijn op grote schaal gebruikt bij onderzoek naar hematopoëse als voedingslagen in co-cultuursystemen om de differentiatie en expansie van zowel hematopoëtische stamcellen (HSC's) als embryonale stamcellen (ESC's) te ondersteunen. Deze co-cultuursystemen hebben de studie van hematopoëtische differentiatiepaden vergemakkelijkt, waardoor MSCs konden differentiëren in volwassen erytroïde cellen, erytroblasten en rode bloedcellen en osteocyten, chondrocyten, myocyten, tenocyten en adipocyten. De ondersteunende rol van OP9 cellen in deze systemen wordt toegeschreven aan hun vermogen om een gunstige micro-omgeving te produceren die rijk is aan cytokinen en groeifactoren die essentieel zijn voor stamcelproliferatie en lineage-specifieke differentiatie. Verder is de OP9 cellijn instrumenteel in het bestuderen van de leukocytenreactie en de ontwikkeling van immuuncellen zoals natural killer (NK) cellen, wat het nut van de OP9 muislijn in immunologisch onderzoek aantoont. De secretoire factoren geproduceerd door OP9 cellen, inclusief groeifactoren zoals bFGF, IGF-1, IL-3, PDGF-BB, TGF-β1 en TGF-β3, spelen een cruciale rol in celmigratie en differentiatieprocessen. OP9 cellen vertonen een fibroblastachtig uiterlijk, gekenmerkt door een spoelvormige, platte morfologie. Deze morfologische eigenschap is typerend voor mesenchymale stromale cellen, die bekend staan om hun ondersteunende functies in de beenmergmicro-omgeving. Ondanks hun enorme potentieel hebben OP9 cellen beperkingen vanwege hun niet-geïmmortaliseerde aard, waardoor ze alleen gebruikt kunnen worden voor kortlopende en kleinschalige projecten. |
---|---|
Organisme | Muis |
Weefsel | Beenmerg, stroma |
Synoniemen | OP-9 |
Kenmerken
Leeftijd | Embryo |
---|---|
Morfologie | Fibroblast-achtige |
Groei eigenschappen | Aanhangend |
Documentatie
Citeren | OP9 (Cytion catalogusnummer 305174) |
---|---|
Bioveiligheidsniveau | 1 |
Genetische make-up
Kweekmethoden van OP9 stromale cellen
Kweekmedium | Alpha MEM, w: 2,0 mM stabiele Glutamine, w/o: Ribonucleosiden, w/o: Deoxyribonucleosiden, w: 1,0 mM Natriumpyruvaat, w: 2,2g/L NaHCO3 |
---|---|
Medium supplementen | Vul het medium aan met 10% FBS |
Oplossing voor passeren | Accutase |
Subcultuur | Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten. |
Splitsingsverhouding | 1:2 tot 1:4 |
Vloeistofvernieuwing | 2 tot 3 keer per week |
Middel invriezen | CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100) of CM-ACF (Cytion catalogusnummer 806100) |
Behandeling van gecryopreserveerde culturen |
|
Kwaliteitsborging voor de authentieke mesenchymale stamcellijn OP9
Steriliteit | Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden. Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties. |
---|