SH-SY5Y ląstelės - Neuroblastomos tyrimai ir SH-SY5Y ląstelių reikšmė neurobiologijai
SH-SY5Y ląstelių linija, gauta iš žmogaus neuroblastomos, plačiai naudojama medicininiuose tyrimuose tiriant neurodegeneracines ligas ir kuriant vaistus. Tyrėjai naudoja šias ląsteles pradiniu nediferencijuotu pavidalu arba diferencijuoja jas į ląsteles, panašias į neuronus.
Bendra informacija apie SH-SY5Y ląstelių liniją ir jos kilmę
Šiame skyriuje pateikiama pagrindinė informacija apie SH-SY5Y ląstelių liniją, įskaitant jos kilmę, apibrėžimą ir ląstelių struktūrą. Nagrinėsime tokius klausimus kaip jos morfologija ir ląstelių kilmė.
- SH-SY5Y yra žmogaus ląstelių linija, atsiradusi 1970 m. subklonavus SK-N-SH neuroblastomos ląstelių liniją.
- Pirminė ląstelių linija SK-N-SH buvo sukurta iš ketverių metų neuroblastoma sergančios moters kaulų čiulpų biopsijos.
- SH-SY5Y ląstelės fenotipiškai yra adrenerginės ir ekspresuoja dopaminerginius žymenis, todėl jos yra naudingas in vitro modelis neurodegeneracinėms ligoms, neurogenezei ir smegenų ląstelių savybėms tirti [1].
- SH-SY5Y ląstelės auga kaip gyvybingų neuroblastinių ląstelių gniužulai su neuritais ir yra silpnai adherentiškos.
- SH-SY5Y ląstelių dydis yra 12 μm.
- SH-SY5Y ląstelių modalinis chromosomų skaičius yra 47, ir jos turi retą 1 chromosomos numerio žymenį - 1q trisomiją, kurią lemia papildomos 1q segmento kopijos įterpimas į ilgąjį 1 chromosomos petį.
SH-SY5Y ląstelių kultivavimas
Neurobiologinių tyrimų laboratorijose SH-SY5Y ląstelės yra dažniausiai kultivuojamos neuroblastomos ląstelės. Norint dirbti su šiomis ląstelėmis, būtina suprasti, kokia augimo terpė tinka jų auginimui, jų augimo ypatybes, optimalų sėjimo tankį ir tinkamą jų užšaldymo metodą. Šiame skyriuje pateikiama esminė informacija apie SH-SY5Y ląstelių kultivavimą, kuri padės jums šiais aspektais.
Pagrindiniai SH-SY5Y ląstelių kultivavimo aspektai
|
Populiacijos padvigubėjimo trukmė: vidutinė SH-SY5Y ląstelių populiacijos padvigubėjimo trukmė yra maždaug 3-4 dienos. |
|
Prigludusios arba suspenduotos: SH-SY5Y yra silpnai prigludusios ląstelės. Pasėjus dideliu tankumu, jos auga kaip gumulėliai. |
|
Sėjimo tankis: Optimalus SH-SY5Y ląstelių sėjimo tankis yra 1 x 104 ląstelės/cm2. SH-SY5Y kultūros susideda iš prigludusių ir plaukiojančių ląstelių. |
|
Auginimo terpė: DMEM:Ham's F12 terpė, papildyta 3,1 g/l gliukozės, 10 % FBS ir 1,6 mM L-glutamino, idealiai tinka SH-SY5Y ląstelių linijai auginti. |
|
Augimo sąlygos (temperatūra, CO2): SH-SY5Y ląstelės auginamos 37 °C temperatūroje, drėkinamame inkubatoriuje, kuriame tiekiamas 5 % CO2. |
|
Laikymas: Siekiant išlaikyti SH-SY5Y ląstelių gyvybingumą, jos laikomos skysto azoto garų fazėje žemesnėje nei -150 °C temperatūroje. |
|
Šaldymo procesas ir terpė: SH-SY5Y ląstelėms užšaldyti naudojama CM-1 arba CM-ACF šaldymo terpė. Šiai neuroblastomos ląstelių linijai užšaldyti pasirenkamas lėtas šaldymo metodas, kai temperatūra palaipsniui mažinama 1 °C. |
|
Atšildymo procesas: Užšaldyti buteliukai su SH-SY5Y ląstelėmis dedami į 37 °C temperatūros vandens vonelę. Buteliukas greitai maišomas, kol ląstelės atšyla ir lieka tik nedidelis ledo gabalėlis. |
|
Biologinės saugos lygis: SH-SY5Y ląstelės gali būti auginamos 1 biologinės saugos lygio laboratorijoje. |
SH-SY5Y ląstelės: Privalumai ir apribojimai
Privalumai
- Diferenciacija į neuronus: SH-SY5Y ląstelės gali būti diferencijuojamos į funkcinius neuronus, naudojant specialius junginius, todėl tai yra patogesnė alternatyva pirminiams neuronams ir išvengiama etinių problemų, susijusių su jų naudojimu [2].
- Neurodegeneracinių ligų in vitro modelis: Dėl molekulinių žymenų, įskaitant dopaminerginių neuronų žymenis, raiškos SH-SY5Y ląstelės tinka neurodegeneraciniams sutrikimams, tokiems kaip Parkinsono liga, tirti.
Apribojimai
- Nesinchronizuotas ląstelių ciklas: SH-SY5Y ląstelių kultūros pasižymi nesinchronizuotais ląstelių ciklais, yra nediferencijuotos būsenos [3].
- Neapibrėžta diferenciacijos būsena: SH-SY5Y ląstelės yra neapibrėžtos diferenciacijos būsenos, kuri svyruoja nuo navikinės neuroblastomos būsenos iki postmitotinių neuronų ar neuronų progenitorių ląstelių. Jos neišreiškia molekulinių žymenų, kuriuos turi subrendusios neuronų ląstelės [4].
SH-SY5Y ląstelės, skirtos in vitro neurofarmakologijai ir vaistų atradimui
SH-SY5Y ląstelių panaudojimas
Neurodegeneracinių ligų tyrimai: SH-SY5Y ląstelės naudojamos tiriant neurodegeneracinius sutrikimus, tokius kaip Alzheimerio ir Parkinsono ligos. Pavyzdžiui, atliekant tyrimą SH-SY5Y ląstelės buvo apdorotos amiloido β peptidu 1-42, siekiant sukurti Alzheimerio ligos in vitro modelį. Tuomet sukurta ląstelių linija buvo užkrėsta pcDNA-17A ir 17A shRNA, siekiant ištirti ilgos nekoduojančios RNR 17A poveikį į Alzheimerio ligą panašioms ląstelėms. Tyrimas parodė, kad LncRNA-17A reguliuoja SH-SY5Y ląstelių apoptozę ir autofagiją, imituojant Alzheimerio ligą [5].
Vaistų kūrimas: SH-SY5Y ląstelės naudojamos vaistų atrankai ir jų terapiniam poveikiui neurodegeneracinėms ligoms patikrinti. Pavyzdžiui, 2021 m. atliktame tyrime SH-SY5Y ląstelėse naudojant herbicidą (parakvatą) buvo sukeltas parkinsonizmas, o vėliau šios ląstelės panaudotos flavonoido naringenino terapiniam potencialui tirti. Šis junginys parodė apsauginį poveikį nuo Parkinsono ligos sukeltos neurodegeneracijos ir neurotoksiškumo ląstelių modeliuose, o tai rodo jo potencialą kuriant PD gydymo būdus [6].
Mokslinės publikacijos su SH-SY5Y ląstelėmis
Yra daug mokslinių tyrimų, susijusių su SH-SY5Y ląstelėmis. Šiame skyriuje bus pateikti keli svarbūs pavyzdžiai.
- LncRNA17A reguliuoja SH-SY5Y ląstelių linijos, kaip Alzheimerio ligos in vitro modelio, autofagiją ir apoptozę: Šioje publikacijoje buvo pasiūlyta, kad LncRNA17A tarpininkauja SH-SY5Y ląstelių, eksperimentiškai paverstų Alzheimerio ligos modeliu, apoptozei ir autofagijai.
- Naringeninas sušvelnina parakvato sukeltą dopaminerginių neuronų nykimą SH-SY5Y ląstelėse ir žiurkių Parkinsono ligos modelyje: Šis tyrimas parodė, kad Naringenino junginiai yra neuroprotektorius, apsaugantis nuo eksperimentiniu būdu sukurto Parkinsono ligos ląstelių ir gyvūnų modelio.
- Biocheminis proliferacinės ir diferencijuotos SH-SY5Y ląstelių linijos, kaip Parkinsono ligos modelio, apibūdinimas: Diferencijuotos SH-SY5Y ląstelės buvo panaudotos apibūdinti ir įvertinti keletą biocheminių procesų, dažnai tiriamų Parkinsono ligos atveju.
- Acitretino poveikis žmogaus neuroninėms SH-SY5Y ląstelėms in vitro: SH-SY5Y ląstelės buvo naudojamos neuronų diferenciacijai tirti. Mokslininkai ištyrė, kad acitretinas skatina neuronų diferenciaciją ir gydo neurodegeneracinius ir neurologinius sutrikimus bei smegenų navikus.
- SH-SY5Y ląstelių linijos transformacija į į neuronus panašias ląsteles: Elektrofiziologinių ir biomechaninių pokyčių tyrimas: Šiame tyrime SH-SY5Y nervų blastomos ląstelės buvo paverstos neuronais, apdorojant jas retinoine rūgštimi ir smegenų neurotrofinio faktoriaus (BDNF) molekulėmis, ir ištirti biocheminiai bei elektrofiziologiniai pokyčiai.
SH-SY5Y ląstelių šaltiniai: Protokolai, vaizdo įrašai ir kt
Apie šią garsią neuroblastomos ląstelių liniją galima rasti keletą internetinių išteklių. Šiuose šaltiniuose galite sužinoti apie SH-SY5Y kultūrų tvarkymą ir priežiūrą.
Ląstelių kultūrų protokolai
Toliau pateikiami svetainės straipsniai gali padėti sužinoti SH-SY5Y ląstelių kultivavimo, užšaldymo ir atšildymo metodus.
- SH-SY5Y ląstelių kultivavimas: Pagrindinėinformacija apie SH-SY5Y ląsteles, įskaitant ląstelių atšildymą, užšaldymą ir subkultūravimą.
- SH-SY5Y subkultūrinimas: SH-SY5Y ląstelės: pateikiama informacija apie naudojamą auginimo terpę ir subkultūrinimo etapus.
- SH-SY5Y ląstelių transfekcija: Šiame dokumente aprašomas SH-SY5Y ląstelių linijos tranzientinės transfekcijos protokolas.
- Diferencijavimo protokolas: Šiame vaizdo įraše paaiškinamas SH-SY5Y ląstelių diferencijavimo protokolas.
Tikimės, kad šis straipsnis suteiks naudingos informacijos apie SH-SY5Y ląstelių tvarkymą, kultivavimą ir naudojimą moksliniuose tyrimuose; jei norite dirbti su šia neuroblastomos ląstelių linija, apsvarstykite galimybę užsisakyti iš mūsų.
SH-SY5Y ląstelių linija: Dažnai užduodami klausimai
Nuorodos
- Carvajal-Oliveros, A. ir kt., BE (2)-M17 ląstelių linija turi geresnį dopaminerginį fenotipą nei tradiciškai Parkinsono ligos tyrimams naudojama SH-SY5Y, kuri dažniausiai yra serotoninerginė. IBRO Neuroscience Reports, 2022. 13: p. 543-551.
- Kovalevich, J. ir D. Langford, SH-SY5Y neuroblastomos ląstelių naudojimo neurobiologijoje aspektai. Neuroninių ląstelių kultūros: metodai ir protokolai, 2013: p. 9-21.
- Martin, E.-R., J. Gandawijaya ir A. Oguro-Ando, A novel method for generating glutamatergic SH-SY5Y neuron-like cells utilizing B-27 supplement. Frontiers in Pharmacology, 2022: p. 4042.
- Feles, S., et al., Neuroblastomos ląstelių linijos SH-SY5Y kultivavimo sąlygų supaprastinimas: būtina sąlyga funkciniams tyrimams. Metodai ir protokolai, 2022. 5(4): p. 58.
- Wang, X., M. Zhang ir H. Liu, LncRNA17A reguliuoja SH-SY5Y ląstelių linijos, kaip Alzheimerio ligos in vitro modelio, autofagiją ir apoptozę. Bioscience, biotechnology, and biochemistry, 2019. 83(4): p. 609-621.
- Ahmad, M.H., et al, Naringeninas sušvelnina parakvato sukeltą dopaminerginių neuronų nykimą SH-SY5Y ląstelėse ir žiurkių Parkinsono ligos modelyje. Neuropharmacology, 2021. 201: p. 108831.