Volume: 100 ml
Conservazione: ≤ –15 °C
Sterilità: filtrato sterile
La soluzione stabile di glutammina (L-alanil-L-glutammina, 200 mM) è una forma di dipeptide altamente stabile di L-glutammina progettata come sostituto diretto della L-glutammina convenzionale nei terreni di coltura cellulare. La L-glutammina è un amminoacido essenziale e una delle principali fonti di energia per le cellule in coltura, che svolge un ruolo fondamentale nella crescita cellulare, nel metabolismo e nella sintesi proteica.
Applicazione e vantaggi
Nei terreni di coltura liquidi standard, la L-glutammina si degrada relativamente rapidamente a 37 °C, portando alla formazione di sottoprodotti tossici come gli ioni ammonio che possono influire negativamente sulla vitalità delle cellule e sui risultati sperimentali. La glutammina stabile supera questa limitazione fornendo una forma di dipeptide non degradabile che rimane intatta in condizioni di coltura.
Le cellule scindono enzimaticamente il legame dipeptidico per rilasciare L-glutammina secondo necessità, garantendo un apporto continuo e fresco e prevenendo l'accumulo di prodotti di scarto nocivi. Ciò rende la soluzione particolarmente vantaggiosa per colture cellulari a lungo termine e sistemi di crescita ad alta densità.
Formulazione e utilizzo
La soluzione di L-alanil-L-glutammina è preparata in acqua per colture cellulari ad una concentrazione di 200 mM ed è filtrata in modo sterile per applicazioni sensibili alla contaminazione. Può essere diluita direttamente in terreni di coltura completi in base alle esigenze sperimentali. Conservare a ≤ –15 °C ed evitare ripetuti cicli di congelamento-scongelamento per mantenere la stabilità del prodotto.
Solo per uso di ricerca. Non utilizzare in procedure diagnostiche o terapeutiche. Non utilizzare su esseri umani o animali.
Volume: 100 ml
Conservazione: da +2 °C a +8 °C
Sterilità: filtrato sterile
La soluzione tampone HEPES (1 M), nota anche come acido N-2-idrossietilpiperazina-N-2-etansolfonico, è un agente tampone organico zwitterionico ampiamente utilizzato nei terreni di coltura cellulare. È progettato per mantenere condizioni di pH stabili nell'intervallo fisiologico compreso tra 6,7 e 8,6, supportando la funzione cellulare ottimale durante le applicazioni in vitro.
Applicazione e vantaggi
L'HEPES fornisce una capacità tampone affidabile nei sistemi di coltura cellulare, in particolare quando le cellule vengono manipolate al di fuori di un incubatore a CO₂. L'aggiunta di 10-25 mM di HEPES ai terreni di coltura offre una maggiore stabilità del pH durante i periodi di manipolazione prolungati, contribuendo a mantenere condizioni sperimentali costanti.
Questo tampone è impermeabile alle membrane, ha un'interferenza minima con le reazioni biochimiche e dimostra una forte stabilità chimica ed enzimatica. Queste proprietà lo rendono adatto a un'ampia gamma di applicazioni di coltura cellulare e biochimiche.
Formulazione e utilizzo
La soluzione è fornita come concentrato 1 M preparato in acqua per colture cellulari ed è filtrata in modo sterile per l'uso in ambienti sensibili alla contaminazione. Può essere diluita alla concentrazione di lavoro desiderata a seconda dei requisiti dell'applicazione. Conservare a una temperatura compresa tra +2 °C e +8 °C e maneggiare in condizioni asettiche per preservare l'integrità del prodotto.
Solo per uso di ricerca. Non utilizzare in procedure diagnostiche o terapeutiche. Non utilizzare su esseri umani o animali.
Volume: 50 ml
Conservazione: da +2 °C a +8 °C
Sterilità: filtrato sterile
La soluzione di D-(+)-glucosio (soluzione di destrosio) è un integratore sterile e pronto all'uso contenente lo zucchero naturale D-(+)-glucosio, un componente fondamentale del metabolismo cellulare. Il glucosio è coinvolto in processi biologici essenziali quali la produzione di energia, la glicosilazione e la formazione di glicani che contribuiscono alla struttura e alla funzione cellulare.
Applicazione e vantaggi
Questa soluzione di glucosio è ampiamente utilizzata come integratore nei terreni di coltura cellulare e in numerose applicazioni di biologia cellulare e molecolare. Come fonte primaria di carbonio ed energia, il glucosio supporta la crescita cellulare, la proliferazione e l'attività metabolica. Il suo coinvolgimento nei percorsi biosintetici lo rende fondamentale anche per il mantenimento della normale fisiologia cellulare e della coerenza sperimentale.
Formulazione e utilizzo
La soluzione è fornita ad un'alta concentrazione di 250 g/L di glucosio, consentendo una diluizione flessibile nei terreni di coltura in base alle esigenze sperimentali. È filtrata in modo sterile per garantire l'idoneità ad applicazioni sensibili alla contaminazione. Conservare a una temperatura compresa tra +2 °C e +8 °C e maneggiare in modo asettico per mantenere la qualità e la stabilità del prodotto.
Solo per uso di ricerca. Non utilizzare in procedure diagnostiche o terapeutiche. Non utilizzare su esseri umani o animali.
Volume: 10 ml
Conservazione: da +2 °C a +8 °C
Sterilità: filtrato sterile
La soluzione di insulina-transferrina-selenio (ITS) (100x) è un integratore chimicamente definito progettato per un'ampia gamma di applicazioni di coltura cellulare. È comunemente utilizzata come additivo nei terreni di coltura cellulari basali per favorire la crescita cellulare in condizioni di siero ridotto o in assenza di siero.
Applicazione e vantaggi
Il nostro integratore ITS fornisce i componenti essenziali necessari per le prestazioni ottimali dei terreni di coltura privi di siero. Integrando i terreni di coltura nutrienti convenzionali con ITS, è possibile ridurre significativamente il fabbisogno di siero fetale bovino (FBS) per il mantenimento di routine di molte linee cellulari. Ciò contribuisce a minimizzare la variabilità associata all'uso del siero, mantenendo al contempo una crescita e una vitalità cellulare costanti.
L'insulina favorisce l'assorbimento cellulare e il metabolismo dei nutrienti chiave, la transferrina facilita il trasporto del ferro e il selenio contribuisce alla difesa antiossidante e all'attività enzimatica. Insieme, questi componenti promuovono un metabolismo cellulare equilibrato e una migliore riproducibilità in sistemi di coltura definiti.
Formulazione e utilizzo
L'insulina-transferrina-selenio (ITS) è fornita come soluzione concentrata 100x in soluzione salina bilanciata di Earle (EBSS) senza rosso fenolo. Per applicazioni standard, diluire 1:100 nel terreno di base appropriato per ottenere la concentrazione di lavoro raccomandata. Conservare a una temperatura compresa tra +2 °C e +8 °C e maneggiare in condizioni asettiche per mantenere la stabilità e la sterilità del prodotto.
Solo per uso di ricerca. Non utilizzare in procedure diagnostiche o terapeutiche. Non utilizzare su esseri umani o animali.
Volume: 5 ml
Conservazione: da +2 °C a +8 °C
Sterilità: filtrato sterile
La soluzione di insulina umana ricombinante è un integratore chimicamente definito comunemente utilizzato per la coltura di linee cellulari di mammiferi, comprese le cellule di ovaio di criceto cinese (CHO). Questa soluzione per colture cellulari contiene insulina umana ricombinante espressa in Saccharomyces cerevisiae, garantendo elevata purezza e prestazioni costanti nelle applicazioni di ricerca.
Applicazioni e vantaggi
L'insulina viene abitualmente aggiunta a terreni di coltura privi di siero e chimicamente definiti per favorire la crescita e la produttività cellulare. In quanto ormone regolatore chiave, l'insulina supporta l'assorbimento, l'utilizzo e l'immagazzinamento cellulare di glucosio, aminoacidi e acidi grassi. Inoltre inibisce la degradazione di glicogeno, proteine e lipidi, contribuendo così a migliorare la vitalità cellulare e la stabilità metabolica nei sistemi di coltura. La formulazione chimicamente definita favorisce la riproducibilità e riduce al minimo la variabilità nei flussi di lavoro sensibili della coltura cellulare.
Proprietà biologiche e utilizzo
L'insulina è un ormone polipeptidico a due catene prodotto naturalmente dalle cellule β delle isole pancreatiche. Ha un peso molecolare di circa 5.800 Da. Le catene α e β sono collegate da due legami disolfuro intercatena, mentre la catena α contiene un legame disolfuro intracatena. Per le applicazioni di coltura cellulare, la soluzione deve essere manipolata in condizioni asettiche e conservata a una temperatura compresa tra +2 °C e +8 °C per mantenerne la stabilità e le prestazioni.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a procedure diagnostiche o terapeutiche. Non destinato all'uso su esseri umani o animali.
Volume: 100 ml
Conservazione: da +2 °C a +8 °C
Sterilità: filtrato sterile
La soluzione di piruvato di sodio (100 mM) è un integratore sterile e pronto all'uso progettato per fornire una fonte di energia aggiuntiva e facilmente accessibile per i terreni di coltura cellulare. Il piruvato di sodio svolge un ruolo chiave nel metabolismo energetico cellulare e supporta la crescita di cellule metabolicamente attive e a rapida proliferazione, come le cellule tumorali. L'integrazione può migliorare la vitalità cellulare e aiutare a mantenere la stabilità metabolica nei sistemi di coltura.
Applicazione e vantaggi
Questa soluzione è ampiamente utilizzata nella coltura cellulare di routine per arricchire i terreni con piruvato e promuovere condizioni di crescita ottimali. Supporta la produzione di ATP, può aiutare a ridurre lo stress ossidativo e contribuisce a migliorare le prestazioni metaboliche delle cellule coltivate. Prodotto con acqua di grado cellulare e filtrato in modo sterile, il prodotto garantisce qualità costante e riproducibilità nei flussi di lavoro di ricerca.
Uso e compatibilità
La concentrazione finale raccomandata per la maggior parte delle applicazioni di coltura cellulare è di 1 mM di piruvato di sodio, ottenuta diluendo la soluzione madre da 100 mM in rapporto 1:100 in un terreno di coltura completo. La soluzione è compatibile con un'ampia gamma di terreni di base e linee cellulari di mammiferi. Conservare a una temperatura compresa tra +2 °C e +8 °C e proteggere dalla contaminazione per mantenere la stabilità del prodotto.
Solo per uso di ricerca. Non utilizzare in procedure diagnostiche o terapeutiche. Non utilizzare su esseri umani o animali.
Volume: 100 ml Conservazione: ≤-15°C Sterilità: Filtrato sterile
Lasoluzione antibiotica/antimicotica (100x) è un concentrato sterile pronto all'uso, progettato per ridurre i rischi di contaminazione microbica nelle colture cellulari e nelle relative applicazioni di laboratorio. Questa soluzione 100x contiene una combinazione consolidata di penicillina, streptomicina e amfotericina B, che fornisce un'attività antimicrobica ad ampio spettro contro batteri Gram-positivi e Gram-negativi, lieviti e funghi filamentosi. La formulazione è adatta all'uso in colture cellulari eucariotiche, terreni di coltura batterici e altri sistemi sensibili alla contaminazione, a sostegno di operazioni di laboratorio pulite e coerenti.
Applicazione e vantaggi Ottimizzata per i protocolli di ricerca di routine, questa soluzione è ampiamente utilizzata per mantenere condizioni asettiche nei flussi di lavoro delle colture cellulari. Offre prestazioni affidabili in ambienti sensibili alla contaminazione, aiutando i ricercatori a ridurre il rischio di crescita microbica senza compromettere la salute delle cellule o la riproducibilità degli esperimenti. La formulazione filtrata sterile elimina la necessità di ulteriori fasi di solubilizzazione, favorendo una preparazione semplificata dei terreni di coltura e riducendo la variabilità delle procedure quotidiane di laboratorio.
Uso e compatibilità Per ottenere concentrazioni standard di lavoro, diluire la soluzione 1:100 nel terreno di coltura completo. Il prodotto è compatibile con un'ampia gamma di linee cellulari di mammifero e di terreni di coltura basali. Grazie alla disponibilità costante delle scorte, i ricercatori possono beneficiare di una continuità di approvvigionamento affidabile e di una pianificazione logistica semplificata. La soluzione deve essere conservata a ≤ -15 °C e protetta da ripetuti cicli di congelamento e scongelamento per mantenerne la stabilità. Solo per uso di ricerca. Non per l'uso in procedure diagnostiche o terapeutiche. Non per uso umano o animale.
Volume: 100 ml Conservazione: da +2°C a +8°C Sterilità: Filtrato sterile
MEM Non-Essential Amino Acids (100x) è un integratore sterile progettato per migliorare la crescita e la vitalità delle cellule nei sistemi di coltura cellulare di mammifero. La formulazione corrisponde a un concentrato 100x degli aminoacidi non essenziali presenti nel terreno minimo essenziale (MEM) standard, consentendo l'integrazione diretta dei terreni di base con una preparazione minima.
Applicazione e vantaggi Questo integratore fornisce un pool supplementare di aminoacidi per le cellule in rapida proliferazione o per le linee cellulari che hanno perso la capacità di sintetizzare de novo gli aminoacidi non essenziali. Alleggerendo il carico metabolico della biosintesi, favorisce una migliore cinetica di crescita, una vitalità prolungata e una maggiore coerenza sperimentale, soprattutto nelle colture sensibili ai nutrienti o ad alta densità.
Composizione e uso La soluzione comprende glicina, L-alanina, L-asparagina, acido L-aspartico, acido L-glutammico, L-prolina e L-serina. È compatibile con il MEM e con la maggior parte degli altri terreni di coltura standard. Per l'uso, diluire 1:100 nel terreno di coltura finale. Questo prodotto è filtrato sterilmente e pronto all'uso senza ulteriori fasi di manipolazione. Solo per uso di ricerca. Non per l'uso in procedure diagnostiche o terapeutiche. Non per uso umano o animale.
Accutase è una soluzione per il distacco cellulare pronta all'uso e filtrata sterilmente, progettata come alternativa delicata alla tripsina/EDTA per la dissociazione delle cellule mammifere aderenti da strumenti standard in plastica per coltura tissutale e da superfici rivestite per l'adesione. Combina l'attività degli enzimi proteolitici e collagenolitici in una soluzione salina bilanciata per garantire una dissociazione efficace ma controllata, preservando le proteine della superficie cellulare e favorendo un'elevata vitalità post-passaggio e un rapido riattaccamento.
La formulazione di Accutase si basa sulla soluzione salina tamponata con fosfato di Dulbecco (DPBS) con EDTA e rosso fenolo come indicatore visivo del pH. Gli enzimi sono di origine non mammifera e non batterica, rendendo Accutase particolarmente adatto alla ricerca sulle cellule staminali, ai flussi di lavoro relativi ai vaccini e a qualsiasi applicazione in cui sia necessario ridurre al minimo i contaminanti di origine animale o microbica. La soluzione si autoinibisce a 37 °C, quindi dopo il distacco non sono necessari reagenti neutralizzanti o terreni di coltura contenenti siero: le cellule possono essere trasferite direttamente in un terreno fresco.
Caratteristiche principali
Liquido 1x filtrato sterile pronto all'uso – non richiede diluizione o ricostituzione
Attività enzimatica combinata proteolitica e collagenolitica per una dissociazione delicata
Ogni lotto è standardizzato a un'attività di dissociazione definita per garantire l'uniformità tra i lotti
Enzimi di origine non mammifera e non batterica
Autoinibizione a 37 °C – non è necessaria alcuna soluzione neutralizzante
Formulato in PBS di Dulbecco con EDTA
Fenolo rosso incluso come indicatore visivo del pH
pH 6,8 – 7,8
Applicazioni tipiche
Accutase dissocia delicatamente un'ampia varietà di tipi di cellule aderenti e sensibili, tra cui cellule staminali embrionali umane (hESC), cellule staminali pluripotenti indotte umane (iPSC), cellule staminali neurali, neuroni primari e linee aderenti coltivate di routine come HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 e A549. I casi d'uso tipici includono:
Subcoltura e passaggi di routine di cellule mammifere aderenti
Delicata dissociazione di singole cellule di hESC, iPSC e altre linee sensibili
Preparazione dei campioni per la citometria a flusso e l'analisi FACS
Analisi dei marcatori di superficie cellulare in cui l'integrità dell'epitopo è fondamentale
Test di migrazione, proliferazione e apoptosi cellulare
Test di quiescenza mediante privazione di siero e studi di trasfezione di oncogeni
Test di migrazione delle cellule tumorali e delle cellule della cresta neurale
Aumento della produzione nei flussi di lavoro dei bioreattori
Per il lavoro di routine, applicare circa 10 ml di Accutase per 75 cm2 di superficie di coltura e incubare per 5-10 minuti a temperatura ambiente. Il tempo di incubazione ottimale deve essere determinato per ciascuna linea cellulare e non deve superare un'ora. Prima dell'aggiunta, risciacquare lo strato cellulare con una soluzione salina priva di Ca2+/Mg2+, come il DPBS senza calcio e magnesio, per rimuovere il siero residuo e i cationi bivalenti.
Manipolazione e conservazione
Conservare il flacone chiuso congelato a -15 °C o a temperature inferiori. Scongelare a temperatura ambiente o durante la notte a una temperatura compresa tra +2 °C e +8 °C. Non scongelare Accutase in un bagno d’acqua a 37 °C, poiché le temperature elevate riducono l’attività enzimatica. Dopo lo scongelamento, la soluzione può essere conservata per un massimo di 2 mesi a una temperatura compresa tra +2 °C e +8 °C; non conservare a temperatura ambiente. Non preriscaldare il reagente a 37 °C prima dell'applicazione: aggiungerlo direttamente alle cellule lavate a temperatura ambiente. Per una conservazione a lungo termine, si raccomanda l'aliquotazione monouso per evitare cicli di scongelamento ripetuti. Lavorare sempre in condizioni asettiche.
Qualità
Prodotto secondo rigorosi standard di qualità. Ogni lotto di Accutase viene filtrato in modo sterile e testato per sterilità, pH, aspetto e attività di dissociazione per garantire prestazioni costanti e riproducibili da lotto a lotto.
Specifiche del prodotto
Specifiche
Dettagli
Tipo di prodottoReagente per il distacco/la dissociazione cellulare
FormatoLiquido filtrato sterile, pronto all'uso
Volume100 ml
Concentrazione di lavoro1x (pronto all'uso)
Attività enzimaticaProteolitica e collagenolitica combinata
Origine dell'enzimaNon mammifera e non batterica
Sistema tamponePBS di Dulbecco con EDTA
Indicatore di pHRosso fenolo
Intervallo di pH6,8 – 7,8
AspettoSoluzione limpida, di colore da rosso pallido ad arancione
Temperatura di conservazione-15 °C o inferiore
Stabilità dopo lo scongelamentoFino a 2 mesi a una temperatura compresa tra +2 °C e +8 °C
Volume d'uso raccomandato~10 ml per 75 cm² di superficie di coltura
Tempo di incubazione tipico5 – 10 minuti a temperatura ambiente
Condizioni di spedizioneCongelato in ghiaccio secco
Destinazione d'usoSolo per uso di ricerca e ulteriore produzione
Formulazione (Composizione per litro)
Componente
Concentrazione (mg/L)
Sali inorganici
Cloruro di sodio (NaCl)8000,00
Idrogenofosfato disodico (Na2HPO4)1150,00
Cloruro di potassio (KCl)200,00
Dihidrogenofosfato di potassio (KH2PO4)200,00
Altri componenti
EDTA · 4Na (EDTA tetrasodico)220,00
Rosso fenolo3,00
Miscela enzimatica brevettata (attività proteolitica e collagenolitica)1x
Accutase è un marchio registrato di Innovative Cell Technologies, Inc.
Questa formulazione liquida pronta all'uso e filtrata sterilmente è integrata con la soluzione salina bilanciata di Earle (EBSS), 2 mM di L-glutammina, D-glucosio (1,0 g/L) e 2,2 g/L di bicarbonato di sodio (NaHCO3), rendendola adatta all'uso in un'atmosfera di incubatore a CO2 controllata (tipicamente 5 % di CO2). Il fenolo rosso incluso funge da indicatore di pH, consentendo un comodo monitoraggio visivo delle condizioni del terreno durante la coltura cellulare.
Caratteristiche principali
Formulazione MEM di Eagle classica con soluzione salina bilanciata di Earle (EBSS)
2 mM di L-glutammina inclusa – pronto per l’uso immediato
2,2 g/L di bicarbonato di sodio – tamponato per l’incubazione al 5% di CO2
Con D-glucosio (1,0 g/L) come fonte primaria di carbonio
Con fenolo rosso come indicatore di pH
Senza HEPES e senza piruvato di sodio
Terreno liquido filtrato sterile, pronto all'uso
pH 7,0 – 7,6
Applicazioni tipiche
L'EMEM supporta la coltura di un'ampia varietà di linee cellulari di mammiferi, tra cui HeLa, HEK 293, Vero, MRC-5, L-929, BHK-21 e molte cellule primarie. Le applicazioni comuni includono:
Manutenzione di routine ed espansione di linee cellulari aderenti
Flussi di lavoro per la propagazione di virus e la produzione di vaccini
Applicazioni di citotossicità e bioanalisi
Studi di trasfezione ed espressione proteica
Ricerca di base in biologia cellulare e biologia molecolare
Per una crescita cellulare ottimale, l’EMEM viene tipicamente integrato con il 5–10 % di siero fetale bovino (FBS) e, a seconda della linea cellulare, con aminoacidi non essenziali (NEAA) e antibiotici quali penicillina/streptomicina.
Manipolazione e conservazione
Conservare il flacone chiuso a una temperatura compresa tra +2 °C e +8 °C, al riparo dalla luce. Dopo l'apertura, utilizzare in condizioni asettiche. L'L-glutammina in soluzione è soggetta a graduale degradazione: per ottenere prestazioni ottimali, si consiglia di utilizzare il terreno entro 4 settimane dall'apertura o, in caso di conservazione per periodi più lunghi, di integrare con L-glutammina fresca prima dell'uso. Lasciare che il terreno si riscaldi a 37 °C prima di aggiungerlo alle cellule.
Qualità
Prodotto secondo rigorosi standard di qualità. Ogni lotto viene testato per verificare sterilità, pH, osmolalità e livelli di endotossine, al fine di garantire prestazioni costanti nelle applicazioni di coltura cellulare.
Specifiche del prodotto
Specifiche
Dettagli
Tipo di prodottoMEM
Categoria del prodottoTerreni di coltura cellulare
FormatoLiquido
SterileSì
Dimensioni500 ml
L-glutamminaCon L-glutammina (2 mM)
GlucosioCon glucosio (1,0 g/L)
Bicarbonato di sodioCon NaHCO3 (2,2 g/L)
HEPESSenza HEPES
Piruvato di sodioSenza piruvato di sodio
Rosso fenoloCon rosso fenolo
Soluzione salinaSoluzione salina bilanciata di Earle (EBSS)
pH7,0 – 7,6
Contenuto di endotossineNon specificato
ConservazioneDa +2 °C a +8 °C
Formulazione (Composizione per litro)
Componente
Concentrazione (mg/L)
Sali inorganici
Cloruro di calcio · 2H2O265,00
Solfato di magnesio97,72
Cloruro di potassio400,00
Cloruro di sodio6.800,00
Dihidrogenofosfato di sodio, anidro122,00
Bicarbonato di sodio (NaHCO3)2.200,00
Aminoacidi
L-Arginina · HCl126,00
L-Cistina · 2HCl31,30
L-Glutammina292,00
L-Istidina · HCl · H2O42,00
L-isoleucina52,00
L-Leucina52,00
L-lisina · HCl72,50
L-metionina15,00
L-fenilalanina32,00
L-treonina48,00
L-triptofano10,00
L-tirosina · 2Na · 2H2O51,90
L-valina46,00
Vitamine
D-pantotenato di calcio1,00
Cloruro di colina1,00
Acido folico1,00
mio-inositolo2,00
Nicotinamide1,00
Piridossale · HCl1,00
Riboflavina0,10
Tiamina · HCl1,00
Altri componenti
D(+)-Glucosio1.000,00
Rosso fenolo10,00
Le caratteristiche principali del Freeze Medium CM-1 includono:
Ampia compatibilità: Efficace per un'ampia gamma di tipi di cellule, tra cui cellule primarie, cellule staminali e linee cellulari consolidate.
Alta vitalità: Ottimizzato per massimizzare il recupero e la vitalità delle cellule dopo lo scongelamento, garantendo risultati sperimentali affidabili.
Pronto all'uso: Comodamente preparato e sterilizzato per l'applicazione immediata, riducendo i tempi di preparazione e il rischio di contaminazione.
Maggiore stabilità: Mantiene prestazioni costanti in condizioni di crioconservazione standard, garantendo risultati riproducibili.
Lunga durata di conservazione: CM-1 è un terreno di crioconservazione contenente siero, pronto all'uso, che può essere conservato in frigorifero fino a un anno.
Uso del CM-1 per il congelamento delle cellule
Per utilizzare CM-1 per il congelamento di cellule aderenti e in sospensione, procedere come segue
Per le cellule aderenti, lavarle e dissociarle dal substrato di coltura. Per le cellule in sospensione, passare direttamente alla fase successiva.
Contare le cellule per assicurarsi che siano alla giusta concentrazione.
Centrifugare le cellule per pellettizzarle, quindi risospenderle nel terreno di coltura CM-1.
Trasferire le cellule risospese in crioviali.
Utilizzare un metodo di congelamento lento prima di trasferire le cellule alla conservazione a lungo termine
Metodo
Descrizione
Passi
❄️
Congelamento manuale
Un metodo graduale che prevede una riduzione graduale della temperatura per garantire la vitalità delle cellule
1️⃣ Mettere le cellule nel terreno di coltura in un congelatore a 4°C per 40 minuti.
2️⃣ Trasferire in un congelatore a -80°C per 24 ore.
3️⃣ Conservare le cellule in azoto liquido per la conservazione a lungo termine
❄️
Utilizzo di Mr. Frosty
Un comodo dispositivo che consente di controllare la velocità di congelamento senza l'uso di energia elettrica
1️⃣ Preparare le cellule in crioviali con terreno di congelamento.
2️⃣ Collocare le crioviali nel contenitore Mr. Frosty.
3️⃣ Conservare a -80°C per 24 ore prima di trasferire in azoto liquido
❄️
Congelatore a velocità controllata
Un congelatore di alta precisione di Thermo Fisher o di altri produttori progettato per la riduzione controllata della temperatura
1️⃣ Programmare il dispositivo per ridurre gradualmente la temperatura.
2️⃣ Collocare le cellule preparate nel congelatore.
3️⃣ Dopo il ciclo di congelamento, trasferire le cellule in azoto liquido
Conservare le crioviali a temperature inferiori a -130°C o in azoto liquido per la conservazione a lungo termine.
Ingredienti
Contiene FBS, DMSO, Glucosio, Sali
Capacità tampone: pH = 7,2
- 7,6
Il terreno di congelamento CM-1 di Cytion offre una soluzione affidabile per la crioconservazione, garantendo un'elevata vitalità cellulare e funzionalità dopo il disgelo per un'ampia gamma di applicazioni di ricerca.
Il terreno Ham's F-12K (Kaighn's) è stato accuratamente formulato per ottimizzare le condizioni di coltura cellulare. Presenta una composizione arricchita, che fornisce livelli elevati di componenti essenziali come aminoacidi e piruvato di sodio, oltre a elementi aggiuntivi come putrescina, timidina, ipoxantina e zinco. Queste aggiunte consentono ai ricercatori di integrare il terreno di coltura con una quantità minima di siero o di componenti definiti per specifici tipi di cellule, facilitando condizioni sperimentali precise.
In particolare, il terreno Ham's F-12K (Kaighn's) non contiene proteine o fattori di crescita. Di conseguenza, spesso è necessaria un'integrazione con fattori di crescita e siero bovino fetale (FBS), consentendo ai ricercatori di adattare il terreno di coltura ai requisiti delle loro specifiche linee cellulari. Per ottenere prestazioni ottimali, la concentrazione di FBS deve essere accuratamente ottimizzata per ogni linea cellulare, garantendo una crescita e una funzionalità ottimali.
Per mantenere il pH fisiologico, il terreno Ham's F-12K (Kaighn's) impiega un sistema tampone di bicarbonato di sodio (2,5 g/L), che richiede un ambiente controllato al 5-10% di CO2 durante la coltivazione. Ciò garantisce che il pH del terreno rimanga nell'intervallo ideale per la crescita e la vitalità delle cellule
Controllo di qualità
pH = 7,2 +/
- 0,02 a 20-25°C.
Ogni lotto è stato testato per verificare la sterilità e l'assenza di micoplasmi e batteri.
Manutenzione
Conservare in frigorifero a +2°C a +8°C al buio. Il congelamento e il riscaldamento fino a +37°C riducono la qualità del prodotto.
Non riscaldare il terreno di coltura a più di 37°C e non utilizzare fonti di calore incontrollabili (ad esempio, apparecchi a microonde).
Se si deve utilizzare solo una parte del terreno di coltura, prelevare questa quantità dal flacone e riscaldarla a temperatura ambiente.
La durata di conservazione di qualsiasi terreno di coltura, tranne quello di base, è di 8 settimane dalla data di produzione.
Composizione
Componenti
mg/L
Sali inorganici
Cloruro di calcio x 2H2O
135,24
Solfato di rame(II) x 5H2O
0,00
Solfato di ferro (II) x 7H2O
0,83
Cloruro di magnesio x 6H2O
105,72
Solfato di magnesio x 7H2O
394,49
Cloruro di potassio
283,29
Potassio diidrogeno fosfato
58,52
Cloruro di sodio
7597,20
idrogeno fosfato di sodioanidro
115,02
Solfato di zinco x 7H2O
0,14
Altri componenti
D(+)-Glucosio anidro
1260,00
Ipossantina
4,08
Acido DL-α-Lipoico
0,21
Rosso fenolo
3,00
Putrescina x 2HCl
0,32
Sodio piruvato
220,00
NaHCO3
2500,00
Timidina
0,73
Aminoacidi
L-alanina
17,82
L-Arginina x HCl
421,40
L-Asparagina x H2O
30,02
Acido L-aspartico
26,62
L-cisteina x HCl x H2O
70,24
L-Glutammina
292,20
Acido L-Glutammico
29,42
Glicina
15,01
L-istidina x HCl x H2O
41,92
L-Isoleucina
7,87
L-leucina
26,24
L-lisina x HCl
73,04
L-metionina
8,95
L-fenilalanina
9,91
L-Prolina
69,06
L-Serina
21,02
L-treonina
23,82
L-triptofano
4,08
L-tirosina
10,87
L-Valina
23,42
Vitamine
D(+)-Biotina
0,07
D-pantotenato di calcio
0,48
Cloruro di colina
13,96
Acido folico
1,32
mio-inositolo
18,02
Nicotinamide
0,04
Piridossina x HCl
0,06
Riboflavina
0,04
Tiamina x HCl
0,34
Vitamina B12
1,36
La soluzione salina fosfato-bufferata (PBS) è una soluzione tampone ampiamente utilizzata nella ricerca biologica e chimica. Svolge un ruolo cruciale nel mantenere l'equilibrio del pH e l'osmolarità durante varie procedure sperimentali, tra cui l'elaborazione dei tessuti e la coltura cellulare. La nostra soluzione PBS è formulata meticolosamente con ingredienti di elevata purezza per garantire stabilità e affidabilità in ogni esperimento. L'osmolarità e le concentrazioni di ioni del nostro PBS imitano fedelmente quelle del corpo umano, rendendolo isotonico e non tossico per la maggior parte delle cellule.
Composizione della nostra soluzione PBS
La nostra soluzione PBS è una miscela regolata in base al pH di tamponi fosfatici e soluzioni saline di grado ultrapuro. A una concentrazione di lavoro 1X, contiene:
8000 mg/L di cloruro di sodio (NaCl)
200 mg/L Cloruro di potassio (KCl)
1150 mg/L Fosfato di sodio bibasico anidro (Na2HPO4)
200 mg/L Fosfato di potassio monobasico anidro (KH2PO4)
Questa composizione garantisce un pH e un equilibrio ionico ottimali, adatti a un'ampia gamma di applicazioni biologiche.
Applicazioni della nostra soluzione PBS
La nostra soluzione PBS è ideale per diverse applicazioni nella ricerca biologica. Le sue proprietà isotoniche e non tossiche la rendono adatta alla diluizione delle sostanze e al risciacquo dei contenitori cellulari. Le soluzioni PBS contenenti EDTA sono efficaci per staccare le cellule attaccate e raggrumate. Tuttavia, i metalli divalenti come lo zinco non devono essere aggiunti al PBS, poiché possono causare precipitazioni. In questi casi, si consiglia di utilizzare i tamponi Good's. Inoltre, la nostra soluzione di PBS è un'alternativa accettabile al terreno di trasporto virale per il trasporto e la conservazione dei virus a RNA, compreso il SARS-CoV-2.
Controllo di qualità
Filtrato sterile
Conservazione e durata di conservazione
Conservare a +2°C a +25°C, al riparo dalla luce.
Una volta aperto, conservare a 2°C
- 25°C e utilizzare entro 24 mesi.
Condizioni di spedizione
Temperatura ambiente
Manutenzione
Conservare in frigorifero a +2°C a +8°C al buio. Evitare il congelamento e il riscaldamento frequente a +37°C, in quanto riduce la qualità del prodotto.
Non riscaldare il terreno di coltura oltre i 37°C e non utilizzare fonti di calore non controllate come le microonde.
Se si deve utilizzare solo una parte del terreno di coltura, prelevare la quantità necessaria e riscaldarla a temperatura ambiente prima dell'uso.
Composizione
Categoria
Componenti
Concentrazione (mg/L)
Sali
Cloruro di potassio
200
Potassio fosfato monobasico anidro
200
Cloruro di sodio
8000
Sodio fosfato bibasico anidro
1150
Inizialmente progettato per supportare la crescita di cellule leucemiche umane in colture in sospensione e monostrato, il terreno RPMI 1640 si è evoluto attraverso le modifiche apportate dai ricercatori e dai fornitori commerciali per diventare adatto a una vasta gamma di cellule di mammifero. È eccezionalmente compatibile con linee cellulari come HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrociti e carcinomi.
Il terreno RPMI 1640 si distingue dagli altri terreni di coltura cellulare per la sua composizione unica. Contiene una quantità sostanziale di fosfati, aminoacidi e vitamine. In particolare, contiene biotina, vitamina B12 e PABA, assenti in Eagle's Minimal Essential Medium o Dulbecco's Modified Eagle Medium. Inoltre, RPMI 1640 Medium presenta concentrazioni significativamente elevate di vitamine inositolo e colina. Tuttavia, non contiene proteine, lipidi o fattori di crescita. Di conseguenza, per garantire le condizioni ottimali per la crescita cellulare, è comunemente necessaria un'integrazione con il 10% di siero fetale bovino (FBS).
Il sistema tampone del terreno RPMI 1640 si basa sul bicarbonato di sodio e richiede un ambiente al 5-10% di CO2 per mantenere un pH fisiologicamente appropriato. L'inclusione dell'agente riducente glutatione distingue ulteriormente questo terreno da altri.
Controllo di qualità
Filtrato sterile
Conservazione e durata di conservazione
Conservare a +2°C a +8°C, al riparo dalla luce.
Una volta aperto, conservare a 4°C e utilizzare entro 6-8 settimane.
Condizioni di spedizione
Temperatura ambiente
Manutenzione
Conservare in frigorifero a +2°C a +8°C al buio. Evitare il congelamento e il riscaldamento frequente a +37°C, in quanto riduce la qualità del prodotto.
Non riscaldare il terreno di coltura oltre i 37°C e non utilizzare fonti di calore non controllate come le microonde.
Se si deve utilizzare solo una parte del terreno di coltura, prelevare la quantità necessaria e riscaldarla a temperatura ambiente prima dell'uso.
Composizione
Categoria
Componenti
Concentrazione (mg/L)
Aminoacidi
Glicina
10.00
L-alanil-L-glutammina
434.40
L-Arginina
200.00
L-AsparaginaH2O
56.82
Acido L-Aspartico
20.00
L-cistina 2HCl
65.20
Acido L-Glutammico
20.00
L-istidina HClH2O
20.27
L-idrossi-L-prolina
20.00
L-Isoleucina
50.00
L-Leucina
50.00
L-lisina HCl
40.00
L-metionina
15.00
L-fenilalanina
15.00
L-Prolina
20.00
L-Serina
30.00
L-treonina
20.00
L-triptofano
5.00
L-Tirosina 2Na 2H2O
28.83
L-Valina
20.00
Vitamine
acido p-amino-benzoico
1.00
D-Biotina
0.20
Cloruro di colina
3.00
D-pantotenato di calcio
0.25
Acido folico
1.00
myo-Inositolo
35.00
Nicotinamide
1.00
Piridossina HCl
1.00
Riboflavina
0.20
Tiamina HCl
1.00
Vitamina B12
0.005
Sali inorganici
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Altri componenti
D-Glucosio
2000.00
L-Glutatione ridotto
1.00
Sale sodico di rosso fenolo
5.30
Questa formulazione unica combina il Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) e l'Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) in un rapporto preciso di 1:1. L'aggiunta di L-glutammina ne migliora ulteriormente la composizione.
Il DMEM, derivato dall'Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), offre una maggiore concentrazione di aminoacidi e vitamine rispetto al suo predecessore. Al contrario, l'Ham's F-12 si basa sul terreno Ham's F-10, fornendo una serie complementare di componenti essenziali.
Per favorire una crescita cellulare ottimale, è prassi comune integrare il DMEM:Ham's F12 con FBS a una concentrazione tipica del 5-10%. Questa aggiunta è necessaria poiché il terreno è privo di ormoni della crescita, lipidi e proteine fondamentali per lo sviluppo cellulare.
Il DMEM:Ham's F12 incorpora un sistema tampone del pH ed è spesso integrato con fenolo rosso, un indicatore di pH. Le cellule coltivate in DMEM:Ham's F12, o in qualsiasi altro terreno che utilizzi il sistema tampone al bicarbonato, richiedono un ambiente con CO2 controllata al 5-10% per mantenere livelli di pH adeguati.
Controllo di qualità
Filtrato sterile
Conservazione e durata di conservazione
Conservare a una temperatura compresa tra +2 °C e +8 °C, al riparo dalla luce.
Una volta aperto, conservare a 4 °C e utilizzare entro 6-8 settimane.
Condizioni di spedizione
Temperatura ambiente
Conservazione
Conservare in frigorifero a una temperatura compresa tra +2 °C e +8 °C al buio. Evitare il congelamento e il riscaldamento frequente a +37 °C, poiché ciò riduce la qualità del prodotto.
Non riscaldare il terreno oltre i 37 °C né utilizzare fonti di calore non controllate, come gli apparecchi a microonde.
Se si intende utilizzare solo una parte del terreno, prelevare la quantità necessaria e portarla a temperatura ambiente prima dell'uso.
Composizione
Categoria
Componenti
Concentrazione (mg/L)
Acidi amminici
Glicina
18,75
L-alanina
4,45
L-Arginina HCl
147,50
L-asparagina H₂O
7,50
Acido L-aspartico
6,65
L-cisteina HCl H₂O
17,56
L-cistina 2 HCl
31,29
Acido L-glutammico
7,35
L-glutammina
365,00
L-istidina HCl H₂O
31,48
L-isoleucina
54,47
L-Leucina
59,05
L-lisina HCl
91,25
L-metionina
17,24
L-fenilalanina
35,48
L-prolina
17,25
L-serina
26,25
L-treonina
53,45
L-triptofano
9,02
L-tirosina 2 Na 2 H2O
55,79
L-valina
52,85
Vitamine
D-biotina
0,0035
Cloruro di colina
8,98
D-pantotenato di calcio
2,24
Acido folico
2,66
mio-inositolo
12,60
Nicotinamide
2,02
Piridossina HCl
0,031
Piridossal HCl
2,00
Riboflavina
0,219
Tiamina HCl
2,17
Vitamina B12
0,68
Sali inorganici
CaCl₂ 2 H₂O
154,50
CuSO4 5 H2O
0,0013
Fe(NO3)3 9 H2O
0,05
FeSO4 7 H2O
0,417
KCl
311,80
MgCl2 6 H2O
61,20
MgSO4 7 H2O
100,00
NaCl
6996,00
NaHCO3
1200,00
Na₂HPO₄
71,02
NaH₂PO₄·2H₂O
70,87
ZnSO4 7 H2O
0,432
Altri componenti
D-glucosio
3151,00
Ipoxantina
2,40
HEPES
3574,50
Acido linoleico
0,042
Acido lipoico
0,105
Sale sodico del rosso fenolo
8,63
Putrescina 2 HCl
0,081
Piruvato di sodio
55,00
Timidina
0,365
- 0,02 a 20-25 °C. Ogni lotto è stato testato per verificarne la sterilità e l'assenza di micoplasmi e batteri. Conservazione Conservare in frigorifero a una temperatura compresa tra +2 °C e +8 °C al riparo dalla luce. Il congelamento e il riscaldamento fino a +37 °C compromettono la qualità del prodotto. Non riscaldare il terreno a temperature superiori a 37 °C né utilizzare fonti di calore incontrollabili (ad es. forni a microonde). Se si intende utilizzare solo una parte del terreno, prelevare la quantità necessaria dalla bottiglia e riscaldarla a temperatura ambiente. La durata di conservazione di qualsiasi terreno, ad eccezione del terreno di base, è di 6-8 settimane dalla data di apertura. Composizione Componenti mg/L Sali inorganiciCloruro di calcio x 2H2O132,00 Solfato di magnesio97,67 Cloruro di potassio400,00 Cloruro di sodio6.460,00 Idrogeno fosfato disodico (anidro)504,00 Altri componentiD(+)-Glucosio (anidro)3.000,00 Glutatione (ridotto)0,50 Peptone di carne600,00 Sale sodico del rosso fenolo11 AminoacidiL-alanina13,36 L-arginina x HCl42,14 L-asparagina x H2O45,03 Acido L-aspartico19,97 L-Cisteina x HCl x H2O31,75 L-glutammina (stabile)219,15 Acido L-glutammico22,07 Glicina7,51 L-istidina x HCl x H2O20,96 L-idrossiprolina19,67 L-isoleucina39,36 L-leucina39,36 L-lisina x HCl36,54 L-metionina14,92 L-fenilalanina16,52 L-Prolina17,27 L-Serina26,28 L-treonina17,87 L-triptofano3,06 Sale disodico della L-tirosina26,10 L-Valina17,57 VitamineAcido p-amminobenzoico1,00 Acido ascorbico0,56 D(+)-biotina0,20 D-calcio pantotenato0,20 Cloruro di colina5,00 Acido folico10,0 Mio-inositolo36,00 Nicotinamide0,50 Acido nicotinico0,5 Piridossal HCl0,50 Piridossina HCl0,50 Riboflavina0,20 Cloridrato di tiamina0,20 Vitamina B122,00
Il Medium 199 offre una serie di applicazioni in campo. Può mantenere efficacemente il complesso cumulo-ovocita (COC) e sostenere la maturazione in vitro degli ovociti. Inoltre, viene utilizzato per il risciacquo delle linee di aspirazione durante la raccolta di ovuli da vacche tedesche di razza Holstein. Inoltre, il Medium 199 è un terreno eccellente per la coltura di cellule endoteliali cardiache derivate da ratti. Queste applicazioni dimostrano la versatilità e l'adattabilità del Medium 199 alle varie esigenze sperimentali.
La storia
Lo sviluppo del Medium 199 negli anni '50 ha segnato un significativo progresso nei terreni di coltura dei tessuti. Prima della sua introduzione, molti terreni di coltura si basavano su prodotti di origine animale ed estratti di tessuto. Tuttavia, Morgan e colleghi rivoluzionarono il campo formulando una fonte nutrizionale completamente definita per le colture cellulari. Grazie agli esperimenti condotti con diverse combinazioni di vitamine, amminoacidi e altri fattori, hanno scoperto le eccezionali proprietà di promozione della crescita del Medium 199.
Controllo di qualità
pH = 7,2 +/
- 0,02 a 20-25°C.
Ogni lotto è stato testato per verificare la sterilità e l'assenza di micoplasmi e batteri.
Manutenzione
Conservare in frigorifero a +2°C a +8°C al buio. Il congelamento e il riscaldamento fino a +37°C riducono la qualità del prodotto.
Non riscaldare il terreno di coltura a più di 37° C e non utilizzare fonti di calore incontrollabili (ad es. apparecchi a microonde).
Se si deve utilizzare solo una parte del terreno di coltura, prelevare questa quantità dal flacone e riscaldarla a temperatura ambiente.
La durata di conservazione di qualsiasi terreno, ad eccezione del terreno di base, è di 8 settimane dalla data di produzione.
Composizione
Componenti
mg/L
Sali inorganici
Cloruro di calcio x 2H2O
264,92
Nitrato di ferro (III) x 9H2O
0,72
Solfato di magnesio
97,67
Cloruro di potassio
400,00
Sodio acetato x 3H2O
82,95
Cloruro di sodio
6,800.00
Sodio diidrogeno fosfato x H2O
140,00
Altri componenti
Adenina solfato
10,00
AMP
0,20
ATP
1,00
Colesterolo
0,20
2'-deossiribosio
0,50
D(+)-Glucosio anidro
1,000.00
Glutatione (rosso)
0,05
Guanina x HCl
0,30
Ipossantina
0,30
Rosso fenolo
10,00
D-Ribosio
0,50
Timina
0,30
Tween 80
4,90
Uracile
0,30
Xantina
0,30
NaHCO3
2,200.00
Aminoacidi
L-alanina
25,00
L-Arginina x HCl
70,00
Acido L-aspartico
30,00
L-cisteina x HCl x H2O
0,10
L-cistina
20,00
L-Glutammina stabile
149,00
Acido L-Glutammico
67,00
Glicina
50,00
L-istidina x HCl x H2O
21,88
L-idrossiprolina
10,00
L-Isoleucina
20,00
L-leucina
60,00
L-lisina x HCl
70,00
L-metionina
15,00
L-fenilalanina
25,00
L-Prolina
40,00
L-Serina
25,00
L-treonina
30,00
L-triptofano
10,00
L-Tirosina
40,00
L-Valina
25,00
Vitamine
acido 4-amino benzoico
0,05
Acido ascorbico
0,05
D(+)-Biotina
0,01
Calciferolo
0,10
D-pantotenato di calcio
0,01
Cloruro di colina
0,50
Acido folico
0,01
mio-inositolo
0,05
Menadione
0,01
Acido nicotinico
0.025
Nicotinamide
0.025
Piridossale x HCl
0.025
Piridossolo x HCl
0.025
Riboflavina
0,01
DL-α-Tocoferolo fosfato sale disodico
0,01
Tiamina x HCl
0,01
Vitamina A acetato
0,14
L'IMDM è adatto per colture cellulari ad alta densità e a rapida proliferazione, tra cui cellule Jurkat, COS-7 e macrofagi. Le varie modifiche di IMDM disponibili per una serie di applicazioni di coltura cellulare possono essere trovate utilizzando lo strumento di selezione dei terreni. I terreni liquidi forniscono nutrienti essenziali per tutte le applicazioni di coltura cellulare. Tutti i nostri terreni di coltura cellulare di alta qualità sono prodotti in base alla formula inizialmente pubblicata o alle modifiche necessarie per garantire prestazioni e stabilità costanti del terreno di coltura.
IMDM vs. DMEM
L'IMDM contiene nitrato di potassio anziché nitrato ferrico, HEPES e piruvato di sodio. I componenti aggiuntivi dell'IMDM lo rendono più adatto a tipi di cellule specializzate e ad applicazioni specifiche rispetto al DMEM.
IMDM vs. RPMI
IMDM e RPMI hanno formulazioni diverse che possono essere rilevanti per la stimolazione con PMA/ionomicina. Una differenza significativa è la concentrazione di Ca2+. Mentre RPMI contiene 0,42 mM di Ca2+, IMDM ne contiene 1,49 mM.
Controllo di qualità
pH = 7,2 +/
- 0,02 a 20-25°C.
Ogni lotto è stato testato per la sterilità e l'assenza di micoplasmi e batteri.
Manutenzione
Conservare in frigorifero a +2°C a +8°C al buio. Il congelamento e il riscaldamento fino a +37°C riducono la qualità del prodotto.
Non riscaldare il terreno di coltura a più di 37° C e non utilizzare fonti di calore incontrollabili (ad es. apparecchi a microonde).
Se si deve utilizzare solo una parte del terreno di coltura, prelevare questa quantità dal flacone e riscaldarla a temperatura ambiente.
La durata di conservazione di qualsiasi terreno, ad eccezione del terreno di base, è di 8 settimane dalla data di produzione.
Composizione
Componenti
mg/L
Sali inorganici
Cloruro di calcio x 2 H2O
219,00
Cloruro di potassio
330,00
Nitrato di potassio
0.076
Solfato di magnesio anidro
97,73
Cloruro di sodio
4,505.00
Sodio diidrogeno fosfato anidro
109,00
Selenito di sodio
0,02
Altri componenti
D(+)-Glucosio anidro
4,500.00
HEPES
5,958.00
Sodio piruvato
110,00
Rosso fenolo
15,00
Aminoacidi
L-alanina
25,00
L-Arginina x HCl
84,00
L-Asparagina x H2O
25,00
Acido L-Aspartico
30,00
L-cistina x 2HCl
91,24
L-Glutammina
584,00
Acido L-Glutammico
75,00
Glicina
30,00
L-istidina x HCl x H2O
42,00
L-Isoleucina
104,80
L-leucina
104,80
L-lisina x HCl
146,20
L-metionina
30,00
L-fenilalanina
66,00
L-Prolina
40,00
L-Serina
42,00
L-treonina
95,20
L-triptofano
16,00
L-Tirosina x 2Na
104,20
L-Valina
93,60
Vitamine
D(+)-Biotina
0.013
D-pantotenato di calcio
4,00
Cloruro di colina
4,00
Acido folico
4,00
mio-inositolo
7,20
Terreni di coltura cellulare: una panoramica
Nel campo delle scienze della vita, una delle metodologie più importanti è la coltura cellulare. Con l'espressione "coltura cellulare" si intende il prelievo di cellule, tessuti o organi da un animale o da una pianta e il successivo impianto di tali cellule, tessuti o organi in un ambiente artificiale favorevole alla loro sopravvivenza e/o crescita. I requisiti ambientali fondamentali per uno sviluppo cellulare ottimale sono: temperatura controllata, un substrato per l’adesione cellulare, un terreno di coltura adeguato e un’incubatrice che mantenga il pH e l’osmolalità ottimali. Le cellule devono disporre di queste condizioni per poter crescere al massimo del loro potenziale.
La scelta di un terreno di coltura adeguato per la coltivazione in vitro rappresenta la fase più critica e al contempo più vitale della coltura cellulare. Un terreno di coltura, noto anche come mezzo di coltura, è un liquido o un gel formulato per favorire lo sviluppo degli organismi su scala microscopica, cellulare o vegetale. Il terreno utilizzato per la coltura delle cellule contiene spesso un apporto adeguato di energia e sostanze che regolano il ciclo cellulare. I componenti principali di un terreno di coltura includono aminoacidi, vitamine, sali inorganici, glucosio e siero. Il siero viene aggiunto al terreno perché funge da fonte di fattori di crescita, ormoni e fattori di adesione. Oltre a fornire nutrienti, il terreno contribuisce anche al mantenimento dei livelli di pH e osmolalità.
Tipi di terreno utilizzati nella coltura cellulare
Sia le cellule umane che quelle animali possono essere coltivate in un terreno artificiale o sintetico oppure in un terreno interamente naturale, integrato con elementi naturali. Di seguito vi forniremo una panoramica dei diversi tipi di terreni attualmente disponibili.
Terreni naturali
Nei terreni naturali si trovano solo fluidi biologici presenti allo stato naturale. I terreni naturali sono molto utili e semplici da utilizzare per la coltura di un’ampia varietà di tipi di cellule animali. La scarsa comprensione dei componenti precisi che costituiscono i terreni naturali è il fattore principale che contribuisce alla bassa ripetibilità dei risultati ottenuti utilizzando tali terreni.
Terreni artificiali
La preparazione di terreni di coltura artificiali o sintetici comporta l’aggiunta di nutrienti (sia organici che inorganici), proteine sieriche, carboidrati, cofattori, vitamine e sali, nonché delle fasi gassose di O₂ e CO₂ [1].
Sono stati sviluppati vari tipi di terreni di coltura artificiali al fine di soddisfare una o più delle seguenti funzioni: 1) Sopravvivenza immediata (una soluzione salina bilanciata con pH e pressione osmotica precisi). 2) Sopravvivenza prolungata (una soluzione salina bilanciata integrata con diverse formulazioni di sostanze chimiche organiche e/o siero). 3) Sviluppo a tempo indeterminato. 4) Funzioni specializzate.
Esistono quattro classificazioni distinte per i terreni di coltura artificiali:
Terreni contenenti siero
Il tipo più comune di integratore presente nei terreni di coltura utilizzati per la crescita delle cellule animali è il siero fetale bovino. Viene aggiunto al terreno di coltura come integratore a basso costo al fine di ottenere le migliori condizioni di crescita possibili. Oltre a fungere da trasportatore o chelante per nutrienti instabili o insolubili in acqua, ormoni e fattori di crescita, inibitori della proteasi e altre sostanze, il siero lega e neutralizza anche le molecole nocive.
Terreni privi di siero
La presenza di siero nei terreni di coltura presenta una serie di svantaggi e può causare gravi errori di interpretazione nella ricerca immunologica [2, 3]. Sono stati sviluppati diversi tipi di terreni di coltura privi di siero [4, 5]. Questi terreni sono generalmente formulati in modo specifico per supportare la coltura di un singolo tipo di cellula, come il Knockout Serum Replacement e il Knockout DMEM di Thermo Fisher Scientific, e il terreno mTESR di Stem Cell Technologies [6], destinati alle cellule staminali [7].
Inoltre, questi terreni incorporano quantità definite di fattori di crescita purificati, lipoproteine e altre proteine, che altrimenti sarebbero tipicamente fornite dal siero [8]. Questi terreni vengono spesso definiti «terreni di coltura definiti», poiché i componenti che li costituiscono sono ben noti.
Terreni chimicamente definiti
Questi terreni includono componenti inorganici e organici ultrapuri che non sono stati contaminati da alcun tipo di contaminante. Possono anche includere aggiunte di proteine pure, come i fattori di crescita.
La modificazione genetica di batteri o lieviti, insieme all’aggiunta di particolari acidi grassi, vitamine, colesterolo e aminoacidi, porta alla produzione dei loro componenti [9].
Terreni privi di proteine
I terreni privi di proteine sono quelli che non contengono alcuna proteina, ma solo elementi non proteici. Rispetto ai terreni con aggiunta di siero, l’uso di terreni privi di proteine aggiunte favorisce una maggiore proliferazione cellulare e l’espressione proteica e facilita la purificazione di qualsiasi prodotto generato in un processo a valle [10-12]. Le proteine non sono incluse in formulazioni quali MEM e RPMI-1640. Tuttavia, se necessario, è possibile somministrare un integratore proteico.
Terreni di coltura e loro componenti di base
I terreni di coltura commerciali possono essere acquistati in polvere o in forma liquida e spesso includono una varietà di nutrienti quali aminoacidi, glucosio, sali, vitamine e altri integratori alimentari.
Il fabbisogno di questi componenti varia a seconda della linea cellulare e tali variazioni sono all’origine dell’ampia varietà di formulazioni dei terreni di coltura. Ciascun componente svolge una determinata funzione, che verrà illustrata nei paragrafi seguenti:
Sistemi tampone
Per mantenere condizioni di crescita ottimali, è necessario controllare il pH, cosa che spesso avviene tramite uno dei due sistemi tampone:
Sistema tampone naturale
Il rapporto CO₂/H₂CO₃ nell’atmosfera è uguale a quello del terreno di coltura, creando un meccanismo tampone naturale. Per preservare il loro meccanismo tampone naturale, le colture devono essere mantenute in un ambiente con il 5-10% di CO₂, cosa che spesso si ottiene utilizzando un’incubatrice a CO₂. Uno dei principali vantaggi dell’utilizzo di un tampone naturale è il suo costo contenuto e la sua sicurezza.
HEPES
Il tamponamento chimico che utilizza lo zwitterione HEPES presenta una maggiore capacità tampone nell’intervallo di pH compreso tra 7,2 e 7,4 e non richiede un ambiente gassoso regolato. Per particolari tipi di cellule, una dose maggiore di HEPES può risultare dannosa. Allo stesso modo, i terreni contenenti HEPES sono molto più sensibili agli effetti fototossici della luce fluorescente [13].
Rosso fenolo
L’indicatore di pH rosso fenolo è spesso incluso nei terreni di coltura disponibili in commercio, consentendo il monitoraggio continuo del pH. Man mano che le cellule si moltiplicano, i metaboliti da esse prodotti causano una variazione del pH e, di conseguenza, un cambiamento di colore del terreno di coltura. Il rosso fenolo ha un duplice effetto sul colore del terreno di coltura, che diventa giallo a pH acido e viola a pH alcalino. Un pH di 7,4, il valore ottimale per la coltura cellulare, fa apparire il terreno di coltura di colore rosso fluorescente.
Tuttavia, il rosso fenolo presenta alcuni svantaggi: in primo luogo, è in grado di simulare l’azione di numerosi ormoni steroidei, in particolare degli estrogeni [14]. Pertanto, quando si studiano cellule sensibili agli estrogeni, come il tessuto mammario, si raccomanda l’uso di un terreno privo di rosso fenolo. L’equilibrio sodio-potassio viene alterato dalla presenza del rosso fenolo in diverse formulazioni prive di siero. L’aggiunta di siero o di ormone ipofisario bovino ai terreni di coltura può contrastare questo effetto [15]. In terzo luogo, la presenza del rosso fenolo ostacola il rilevamento negli esperimenti di citometria a flusso.
Sali inorganici
I terreni di coltura contenenti sali inorganici, quali ioni sodio, potassio e calcio, contribuiscono a mantenere l’equilibrio osmotico e a regolare il potenziale di membrana.
Aminoacidi
Poiché gli aminoacidi sono i componenti fondamentali delle proteine, costituiscono una componente essenziale di ogni singolo terreno di coltura cellulare mai concepito. Poiché le cellule non sono in grado di produrre autonomamente determinati aminoacidi, è importante che il terreno di coltura includa aminoacidi essenziali. Essi sono necessari per la proliferazione cellulare e la loro concentrazione determina la densità cellulare massima raggiungibile. In particolare, la L-glutammina, un amminoacido essenziale, riveste un’importanza cruciale.
La L-glutammina funge da fonte secondaria di energia per il metabolismo e apporta azoto alla produzione di NAD, NADPH e nucleotidi. Poiché la L-glutammina è un amminoacido instabile che, con il tempo, si trasforma in una forma che le cellule non sono in grado di utilizzare, deve essere aggiunta al terreno di coltura.
Inoltre, è possibile aggiungere al terreno di coltura aminoacidi non essenziali per reintegrare quelli consumati durante il processo di crescita. L’integrazione del terreno di coltura con aminoacidi non essenziali stimola la crescita delle cellule e ne aumenta la vitalità.
Carboidrati
I carboidrati sotto forma di zuccheri costituiscono la principale fonte di energia. Molti terreni di coltura contengono, oltre agli zuccheri più comuni quali il glucosio e il galattosio, anche maltosio e fruttosio.
Proteine e peptidi
L'albumina, la transferrina e la fibronectina sono le proteine e i peptidi più comunemente utilizzati. Sono particolarmente importanti nei terreni di coltura che non contengono siero. L'albumina, la transferrina, l'aprotinina, la fetuina e la fibronectina sono alcune delle proteine che si possono trovare nel siero, che costituisce una ricca fonte proteica.
L’albumina è la principale proteina presente nel sangue e la sua funzione è quella di legare e trasportare varie sostanze, tra cui acqua, sali, acidi grassi liberi, ormoni e vitamine, tra i diversi organi e le cellule. La capacità dell’albumina di legarsi alle sostanze chimiche la rende un candidato efficace per la rimozione dei composti nocivi dal terreno in cui vengono coltivate le cellule.
L’aprotinina è un agente protettivo nei sistemi di coltura cellulare, poiché è stabile a pH neutro e acido, oltre che resistente alle alte temperature e alla distruzione che può essere causata dagli enzimi proteolitici. È in grado di inibire numerose proteasi seriniche, tra cui la tripsina, per citarne alcune.
La fetuina è una glicoproteina che può essere rilevata in quantità maggiori nel siero di animali fetali e neonati rispetto al siero degli adulti. Inoltre, agisce come inibitore delle proteasi seriniche. La proteina fibronectina è un componente essenziale nel processo di adesione cellulare. La transferrina è una proteina che trasporta il ferro ed è responsabile del suo apporto alle membrane cellulari.
Acidi grassi e lipidi
Svolgono un ruolo cruciale nel terreno di coltura privo di siero, in assenza di siero.
Vitamine
Numerose vitamine sono necessarie per lo sviluppo e la proliferazione cellulare. Le cellule non sono in grado di produrre vitamine in quantità adeguate; pertanto, nella coltura tissutale sono indispensabili come integratori alimentari.
Nella coltura cellulare, il siero è la fonte primaria di vitamine; tuttavia, i terreni di coltura vengono anche arricchiti con varie vitamine per renderli adatti a un tipo specifico di cellula. In genere, le vitamine del gruppo B vengono utilizzate per stimolare la crescita.
Oligoelementi
Elementi chimici quali rame, zinco, selenio e intermedi dell’acido tricarbossilico sono noti come oligoelementi. Gli oligoelementi vengono spesso aggiunti ai terreni di coltura privi di siero al fine di sostituire quelli tipicamente presenti nel siero. Questi elementi sono importanti componenti chimici necessari per uno sviluppo cellulare sano. Molte reazioni biochimiche dipendono da determinati micronutrienti, come l’attività enzimatica.
Integratori per terreni di coltura
Il terreno di coltura completo raccomandato per determinate linee cellulari necessita di componenti aggiuntivi che non sono presenti nei terreni di base e nel siero. Questi integratori favoriscono la crescita cellulare e il corretto funzionamento metabolico.
Sebbene gli ormoni, i fattori di crescita e le molecole di segnalazione siano essenziali per la corretta proliferazione di particolari linee cellulari, è necessario adottare sempre le seguenti precauzioni: poiché l’aggiunta di integratori potrebbe alterare l’osmolalità del terreno di coltura completo, inibendo lo sviluppo cellulare, è sempre consigliabile verificare l’osmolalità dopo l’aggiunta degli integratori. Per la maggior parte delle linee cellulari, l’osmolalità ottimale varia tra 260 e 320 mOSM/kg.
Antibiotici
Gli antibiotici vengono spesso impiegati per inibire lo sviluppo di contaminanti batterici e fungini [16], sebbene non siano essenziali per la crescita cellulare. Poiché gli antibiotici potrebbero mascherare la contaminazione da micoplasmi e batteri resistenti, il loro uso di routine non è raccomandato per la coltura cellulare [17, 18].
Inoltre, gli antibiotici possono alterare il metabolismo delle cellule ipersensibili. Vengono spesso utilizzate le combinazioni di penicillina e streptomicina prodotte da MilliporeSigma e Life Technologies. Il Plasmocin è stato utilizzato nella coltura delle linee cellulari di glioma TS603, TS516 e BT260 [19] e si è dimostrato efficace nell’eliminare la contaminazione da micoplasmi (20).
Siero
Nel siero sono presenti albumine, fattori di crescita e inibitori della crescita. Il siero è uno dei componenti più significativi del terreno di coltura cellulare poiché fornisce aminoacidi, proteine, vitamine (in particolare quelle liposolubili come A, D, E e K), carboidrati, lipidi, ormoni, fattori di crescita, minerali e oligoelementi.
Il siero di origine fetale e da vitello viene spesso utilizzato per favorire lo sviluppo delle cellule in coltura. Il siero fetale è una fonte abbondante di fattori di crescita ed è adatto alla clonazione cellulare e allo sviluppo di cellule sensibili. A causa delle sue ridotte capacità di stimolare la crescita, il siero di vitello viene impiegato negli esperimenti di inibizione da contatto. I terreni di coltura standard contengono spesso dal 2% al 10% di siero. L’aggiunta di siero al terreno di coltura ha i seguenti scopi [21]:
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Il siero fornisce i nutrienti essenziali per le cellule (sia in soluzione che legati alle proteine).
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Il siero contiene diversi fattori di crescita e ormoni coinvolti nella promozione della crescita e nell’attività cellulare specializzata.
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Fornisce numerose proteine leganti, come l’albumina e la transferrina, che trasportano altre sostanze chimiche all’interno della cellula. Ad esempio, l’albumina trasporta grassi, vitamine, ormoni, ecc. nelle cellule.
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Fornisce inoltre proteine, come la fibronectina, che aumentano l’adesione cellulare al substrato. Inoltre, produce elementi di espansione che favoriscono l’espansione cellulare prima della divisione.
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Fornisce inibitori delle proteasi che impediscono la proteolisi nelle cellule.
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Contiene inoltre minerali quali Na+, K+, Zn2+ e Fe2+.
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Aumenta la viscosità del mezzo, proteggendo così le cellule da lesioni meccaniche durante l’agitazione della coltura in sospensione.
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Funge anche da tampone.
Riferimenti
[1] Morgan J, Morton H, Parker R. Nutrizione delle cellule animali nella coltura tissutale; studi iniziali su un terreno di coltura sintetico. Proc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1-8
[2] Kerbel R, Blakeslee D. Rapido assorbimento di un componente del siero fetale bovino da parte delle cellule di mammiferi in coltura. Una potenziale fonte di artefatti negli studi sugli antisieri contro antigeni specifici delle cellule. Immunology. 1976;31:881-91
[3] Sula K, Draber P, Nouza K. L’aggiunta di siero al terreno utilizzato per la preparazione di sospensioni cellulari come possibile fonte di artefatti nelle reazioni cellulo-mediate studiate mediante il test del linfonodo popliteo. J Immunogenet. 1980;7:483-9
[4] Mariani E, Mariani A, Monaco M, Lalli E, Vitale M, Facchini A. Terreni commerciali privi di siero: crescita degli ibridomi e produzione di anticorpi monoclonali. J Immunol Methods. 1991;145:175-83
[5] Barnes D, Sato G. Metodi per la crescita di cellule in coltura in terreno privo di siero. Anal Biochem. 1980;102:255-70
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[7] Meharena H, Marco A, Dileep V, Lockshin E, Akatsu G, Mullahoo J, et al. La senescenza indotta dalla sindrome di Down altera l’architettura nucleare dei progenitori neurali. Cell Stem Cell. 2022;29:116-130.e7
[8] Iscove N, Melchers F. Sostituzione completa del siero con albumina, transferrina e lipidi di soia in colture di linfociti B reattivi ai lipopolisaccaridi. J Exp Med. 1978;147:923-33
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[11] Barnes D, Sato G. Coltura cellulare senza siero: un approccio unificante. Cell. 1980;22:649-55
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[14] Berthois Y, Katzenellenbogen J, Katzenellenbogen B. Il rosso fenolo nei terreni di coltura tissutale è un estrogeno debole: implicazioni per lo studio delle cellule sensibili agli estrogeni in coltura. Proc Natl Acad Sci U S A. 1986;83:2496-500
[15] Karmiol S. Sviluppo di terreni di coltura privi di siero. In: Master JRW, a cura di. Animal Cell culture, 3a ed. Oxford: Oxford University Press; 2000.
[16] Perlman D. Uso degli antibiotici nei terreni di coltura cellulare. Methods Enzymol. 1979;58:110-6
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[18] Masters J, Stacey G. Sostituzione del terreno di coltura e passaggi delle linee cellulari. Nat Protoc. 2007;2:2276-84
[19] Chakraborty A, Laukka T, Myllykoski M, Ringel A, Booker M, Tolstorukov M, et al. La demetilasi istonica KDM6A rileva direttamente l’ossigeno per controllare la cromatina e il destino cellulare. Science. 2019;363:1217-1222
[20] Molla Kazemiha V, Azari S, Amanzadeh A, Bonakdar S, Shojaei Moghadam M, Habibi Anbouhi M, et al. Efficacia di Plasmocin™ su varie linee cellulari di mammiferi infettate da mollicuti rispetto agli antibiotici comunemente utilizzati nelle colture cellulari: un’esperienza locale. Cytotechnology. 2011;63:609-20
[21] Kragh Hansen U. Aspetti molecolari del legame dei ligandi con l’albumina sierica. Pharmacol Rev. 1981;33:17-53