Volume: 100 ml
Conservazione: ≤ –15 °C
Sterilità: filtrato sterile
La soluzione stabile di glutammina (L-alanil-L-glutammina, 200 mM) è una forma di dipeptide altamente stabile di L-glutammina progettata come sostituto diretto della L-glutammina convenzionale nei terreni di coltura cellulare. La L-glutammina è un amminoacido essenziale e una delle principali fonti di energia per le cellule in coltura, che svolge un ruolo fondamentale nella crescita cellulare, nel metabolismo e nella sintesi proteica.
Applicazione e vantaggi
Nei terreni di coltura liquidi standard, la L-glutammina si degrada relativamente rapidamente a 37 °C, portando alla formazione di sottoprodotti tossici come gli ioni ammonio che possono influire negativamente sulla vitalità delle cellule e sui risultati sperimentali. La glutammina stabile supera questa limitazione fornendo una forma di dipeptide non degradabile che rimane intatta in condizioni di coltura.
Le cellule scindono enzimaticamente il legame dipeptidico per rilasciare L-glutammina secondo necessità, garantendo un apporto continuo e fresco e prevenendo l'accumulo di prodotti di scarto nocivi. Ciò rende la soluzione particolarmente vantaggiosa per colture cellulari a lungo termine e sistemi di crescita ad alta densità.
Formulazione e utilizzo
La soluzione di L-alanil-L-glutammina è preparata in acqua per colture cellulari ad una concentrazione di 200 mM ed è filtrata in modo sterile per applicazioni sensibili alla contaminazione. Può essere diluita direttamente in terreni di coltura completi in base alle esigenze sperimentali. Conservare a ≤ –15 °C ed evitare ripetuti cicli di congelamento-scongelamento per mantenere la stabilità del prodotto.
Solo per uso di ricerca. Non utilizzare in procedure diagnostiche o terapeutiche. Non utilizzare su esseri umani o animali.
Volume: 100 ml
Conservazione: da +2 °C a +8 °C
Sterilità: filtrato sterile
La soluzione tampone HEPES (1 M), nota anche come acido N-2-idrossietilpiperazina-N-2-etansolfonico, è un agente tampone organico zwitterionico ampiamente utilizzato nei terreni di coltura cellulare. È progettato per mantenere condizioni di pH stabili nell'intervallo fisiologico compreso tra 6,7 e 8,6, supportando la funzione cellulare ottimale durante le applicazioni in vitro.
Applicazione e vantaggi
L'HEPES fornisce una capacità tampone affidabile nei sistemi di coltura cellulare, in particolare quando le cellule vengono manipolate al di fuori di un incubatore a CO₂. L'aggiunta di 10-25 mM di HEPES ai terreni di coltura offre una maggiore stabilità del pH durante i periodi di manipolazione prolungati, contribuendo a mantenere condizioni sperimentali costanti.
Questo tampone è impermeabile alle membrane, ha un'interferenza minima con le reazioni biochimiche e dimostra una forte stabilità chimica ed enzimatica. Queste proprietà lo rendono adatto a un'ampia gamma di applicazioni di coltura cellulare e biochimiche.
Formulazione e utilizzo
La soluzione è fornita come concentrato 1 M preparato in acqua per colture cellulari ed è filtrata in modo sterile per l'uso in ambienti sensibili alla contaminazione. Può essere diluita alla concentrazione di lavoro desiderata a seconda dei requisiti dell'applicazione. Conservare a una temperatura compresa tra +2 °C e +8 °C e maneggiare in condizioni asettiche per preservare l'integrità del prodotto.
Solo per uso di ricerca. Non utilizzare in procedure diagnostiche o terapeutiche. Non utilizzare su esseri umani o animali.
Volume: 50 ml
Conservazione: da +2 °C a +8 °C
Sterilità: filtrato sterile
La soluzione di D-(+)-glucosio (soluzione di destrosio) è un integratore sterile e pronto all'uso contenente lo zucchero naturale D-(+)-glucosio, un componente fondamentale del metabolismo cellulare. Il glucosio è coinvolto in processi biologici essenziali quali la produzione di energia, la glicosilazione e la formazione di glicani che contribuiscono alla struttura e alla funzione cellulare.
Applicazione e vantaggi
Questa soluzione di glucosio è ampiamente utilizzata come integratore nei terreni di coltura cellulare e in numerose applicazioni di biologia cellulare e molecolare. Come fonte primaria di carbonio ed energia, il glucosio supporta la crescita cellulare, la proliferazione e l'attività metabolica. Il suo coinvolgimento nei percorsi biosintetici lo rende fondamentale anche per il mantenimento della normale fisiologia cellulare e della coerenza sperimentale.
Formulazione e utilizzo
La soluzione è fornita ad un'alta concentrazione di 250 g/L di glucosio, consentendo una diluizione flessibile nei terreni di coltura in base alle esigenze sperimentali. È filtrata in modo sterile per garantire l'idoneità ad applicazioni sensibili alla contaminazione. Conservare a una temperatura compresa tra +2 °C e +8 °C e maneggiare in modo asettico per mantenere la qualità e la stabilità del prodotto.
Solo per uso di ricerca. Non utilizzare in procedure diagnostiche o terapeutiche. Non utilizzare su esseri umani o animali.
Volume: 10 ml
Conservazione: da +2 °C a +8 °C
Sterilità: filtrato sterile
La soluzione di insulina-transferrina-selenio (ITS) (100x) è un integratore chimicamente definito progettato per un'ampia gamma di applicazioni di coltura cellulare. È comunemente utilizzata come additivo nei terreni di coltura cellulari basali per favorire la crescita cellulare in condizioni di siero ridotto o in assenza di siero.
Applicazione e vantaggi
Il nostro integratore ITS fornisce i componenti essenziali necessari per le prestazioni ottimali dei terreni di coltura privi di siero. Integrando i terreni di coltura nutrienti convenzionali con ITS, è possibile ridurre significativamente il fabbisogno di siero fetale bovino (FBS) per il mantenimento di routine di molte linee cellulari. Ciò contribuisce a minimizzare la variabilità associata all'uso del siero, mantenendo al contempo una crescita e una vitalità cellulare costanti.
L'insulina favorisce l'assorbimento cellulare e il metabolismo dei nutrienti chiave, la transferrina facilita il trasporto del ferro e il selenio contribuisce alla difesa antiossidante e all'attività enzimatica. Insieme, questi componenti promuovono un metabolismo cellulare equilibrato e una migliore riproducibilità in sistemi di coltura definiti.
Formulazione e utilizzo
L'insulina-transferrina-selenio (ITS) è fornita come soluzione concentrata 100x in soluzione salina bilanciata di Earle (EBSS) senza rosso fenolo. Per applicazioni standard, diluire 1:100 nel terreno di base appropriato per ottenere la concentrazione di lavoro raccomandata. Conservare a una temperatura compresa tra +2 °C e +8 °C e maneggiare in condizioni asettiche per mantenere la stabilità e la sterilità del prodotto.
Solo per uso di ricerca. Non utilizzare in procedure diagnostiche o terapeutiche. Non utilizzare su esseri umani o animali.
Volume: 5 ml
Conservazione: da +2 °C a +8 °C
Sterilità: filtrato sterile
La soluzione di insulina umana ricombinante è un integratore chimicamente definito comunemente utilizzato per la coltura di linee cellulari di mammiferi, comprese le cellule di ovaio di criceto cinese (CHO). Questa soluzione per colture cellulari contiene insulina umana ricombinante espressa in Saccharomyces cerevisiae, garantendo elevata purezza e prestazioni costanti nelle applicazioni di ricerca.
Applicazioni e vantaggi
L'insulina viene abitualmente aggiunta a terreni di coltura privi di siero e chimicamente definiti per favorire la crescita e la produttività cellulare. In quanto ormone regolatore chiave, l'insulina supporta l'assorbimento, l'utilizzo e l'immagazzinamento cellulare di glucosio, aminoacidi e acidi grassi. Inoltre inibisce la degradazione di glicogeno, proteine e lipidi, contribuendo così a migliorare la vitalità cellulare e la stabilità metabolica nei sistemi di coltura. La formulazione chimicamente definita favorisce la riproducibilità e riduce al minimo la variabilità nei flussi di lavoro sensibili della coltura cellulare.
Proprietà biologiche e utilizzo
L'insulina è un ormone polipeptidico a due catene prodotto naturalmente dalle cellule β delle isole pancreatiche. Ha un peso molecolare di circa 5.800 Da. Le catene α e β sono collegate da due legami disolfuro intercatena, mentre la catena α contiene un legame disolfuro intracatena. Per le applicazioni di coltura cellulare, la soluzione deve essere manipolata in condizioni asettiche e conservata a una temperatura compresa tra +2 °C e +8 °C per mantenerne la stabilità e le prestazioni.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a procedure diagnostiche o terapeutiche. Non destinato all'uso su esseri umani o animali.
Volume: 100 ml
Conservazione: da +2 °C a +8 °C
Sterilità: filtrato sterile
La soluzione di piruvato di sodio (100 mM) è un integratore sterile e pronto all'uso progettato per fornire una fonte di energia aggiuntiva e facilmente accessibile per i terreni di coltura cellulare. Il piruvato di sodio svolge un ruolo chiave nel metabolismo energetico cellulare e supporta la crescita di cellule metabolicamente attive e a rapida proliferazione, come le cellule tumorali. L'integrazione può migliorare la vitalità cellulare e aiutare a mantenere la stabilità metabolica nei sistemi di coltura.
Applicazione e vantaggi
Questa soluzione è ampiamente utilizzata nella coltura cellulare di routine per arricchire i terreni con piruvato e promuovere condizioni di crescita ottimali. Supporta la produzione di ATP, può aiutare a ridurre lo stress ossidativo e contribuisce a migliorare le prestazioni metaboliche delle cellule coltivate. Prodotto con acqua di grado cellulare e filtrato in modo sterile, il prodotto garantisce qualità costante e riproducibilità nei flussi di lavoro di ricerca.
Uso e compatibilità
La concentrazione finale raccomandata per la maggior parte delle applicazioni di coltura cellulare è di 1 mM di piruvato di sodio, ottenuta diluendo la soluzione madre da 100 mM in rapporto 1:100 in un terreno di coltura completo. La soluzione è compatibile con un'ampia gamma di terreni di base e linee cellulari di mammiferi. Conservare a una temperatura compresa tra +2 °C e +8 °C e proteggere dalla contaminazione per mantenere la stabilità del prodotto.
Solo per uso di ricerca. Non utilizzare in procedure diagnostiche o terapeutiche. Non utilizzare su esseri umani o animali.
Volume: 100 ml Conservazione: ≤-15°C Sterilità: Filtrato sterile
Lasoluzione antibiotica/antimicotica (100x) è un concentrato sterile pronto all'uso, progettato per ridurre i rischi di contaminazione microbica nelle colture cellulari e nelle relative applicazioni di laboratorio. Questa soluzione 100x contiene una combinazione consolidata di penicillina, streptomicina e amfotericina B, che fornisce un'attività antimicrobica ad ampio spettro contro batteri Gram-positivi e Gram-negativi, lieviti e funghi filamentosi. La formulazione è adatta all'uso in colture cellulari eucariotiche, terreni di coltura batterici e altri sistemi sensibili alla contaminazione, a sostegno di operazioni di laboratorio pulite e coerenti.
Applicazione e vantaggi Ottimizzata per i protocolli di ricerca di routine, questa soluzione è ampiamente utilizzata per mantenere condizioni asettiche nei flussi di lavoro delle colture cellulari. Offre prestazioni affidabili in ambienti sensibili alla contaminazione, aiutando i ricercatori a ridurre il rischio di crescita microbica senza compromettere la salute delle cellule o la riproducibilità degli esperimenti. La formulazione filtrata sterile elimina la necessità di ulteriori fasi di solubilizzazione, favorendo una preparazione semplificata dei terreni di coltura e riducendo la variabilità delle procedure quotidiane di laboratorio.
Uso e compatibilità Per ottenere concentrazioni standard di lavoro, diluire la soluzione 1:100 nel terreno di coltura completo. Il prodotto è compatibile con un'ampia gamma di linee cellulari di mammifero e di terreni di coltura basali. Grazie alla disponibilità costante delle scorte, i ricercatori possono beneficiare di una continuità di approvvigionamento affidabile e di una pianificazione logistica semplificata. La soluzione deve essere conservata a ≤ -15 °C e protetta da ripetuti cicli di congelamento e scongelamento per mantenerne la stabilità. Solo per uso di ricerca. Non per l'uso in procedure diagnostiche o terapeutiche. Non per uso umano o animale.
Volume: 100 ml Conservazione: da +2°C a +8°C Sterilità: Filtrato sterile
MEM Non-Essential Amino Acids (100x) è un integratore sterile progettato per migliorare la crescita e la vitalità delle cellule nei sistemi di coltura cellulare di mammifero. La formulazione corrisponde a un concentrato 100x degli aminoacidi non essenziali presenti nel terreno minimo essenziale (MEM) standard, consentendo l'integrazione diretta dei terreni di base con una preparazione minima.
Applicazione e vantaggi Questo integratore fornisce un pool supplementare di aminoacidi per le cellule in rapida proliferazione o per le linee cellulari che hanno perso la capacità di sintetizzare de novo gli aminoacidi non essenziali. Alleggerendo il carico metabolico della biosintesi, favorisce una migliore cinetica di crescita, una vitalità prolungata e una maggiore coerenza sperimentale, soprattutto nelle colture sensibili ai nutrienti o ad alta densità.
Composizione e uso La soluzione comprende glicina, L-alanina, L-asparagina, acido L-aspartico, acido L-glutammico, L-prolina e L-serina. È compatibile con il MEM e con la maggior parte degli altri terreni di coltura standard. Per l'uso, diluire 1:100 nel terreno di coltura finale. Questo prodotto è filtrato sterilmente e pronto all'uso senza ulteriori fasi di manipolazione. Solo per uso di ricerca. Non per l'uso in procedure diagnostiche o terapeutiche. Non per uso umano o animale.
- Un'alternativa delicata alla tripsina
Accutase è una soluzione per il distacco delle cellule che sta rivoluzionando il settore delle colture cellulari. Si tratta di una miscela di enzimi proteolitici e collagenolitici che imita l'azione della tripsina e della collagenasi. A differenza della tripsina, Accutase non contiene componenti di mammiferi o batteri ed è molto più delicato per le cellule, il che lo rende una soluzione ideale per il distacco di routine delle cellule dai contenitori di plastica standard per colture di tessuti e dai contenitori di plastica con rivestimento di adesione. In questo post esploreremo i vantaggi e gli usi di Accutase e come sta cambiando il gioco nella coltura cellulare.
Vantaggi di Accutase
Accutase presenta diversi vantaggi rispetto alle soluzioni di tripsina tradizionali. In primo luogo, può essere utilizzato ogni volta che è necessario un distacco delicato ed efficiente di qualsiasi linea cellulare aderente, il che lo rende un sostituto diretto della tripsina. In secondo luogo, Accutase funziona molto bene sulle cellule staminali embrionali e neuronali e ha dimostrato di mantenere la vitalità di queste cellule dopo il passaging. In terzo luogo, Accutase preserva la maggior parte degli epitopi per la successiva analisi in citometria a flusso, rendendola ideale per l'analisi dei marcatori della superficie cellulare.
Inoltre, non è necessario neutralizzare Accutase durante il passaggio di cellule aderenti. L'aggiunta di altro terreno dopo la divisione delle cellule diluisce Accutase in modo che non sia più in grado di staccare le cellule. Ciò elimina la necessità di una fase di inattivazione e fa risparmiare tempo ai tecnici delle colture cellulari. Infine, Accutase non deve essere aliquotato e un flacone è stabile in frigorifero per 2 mesi.
Applicazioni di Accutase
Accutase è un sostituto diretto della soluzione di tripsina e può essere utilizzato per il passaging delle linee cellulari. Inoltre, l'Accutasi è in grado di staccare le cellule per l'analisi di molti marcatori della superficie cellulare mediante citometria a flusso e per lo smistamento cellulare. Altre applicazioni a valle del trattamento con Accutase includono l'analisi dei marcatori della superficie cellulare, il saggio di crescita dei virus, la proliferazione cellulare, i saggi di migrazione delle cellule tumorali, il passaggio cellulare di routine, la scalabilità della produzione (bioreattore) e la citometria a flusso.
Composizione di Accutase
Accutase non contiene componenti di mammiferi o batteri ed è una miscela di enzimi naturali con attività enzimatica proteolitica e collagenolitica. È formulato a una concentrazione molto più bassa rispetto alla tripsina e alla collagenasi, il che lo rende meno tossico e più delicato, ma altrettanto efficace.
Efficacia di Accutase
È stato dimostrato che Accutase è efficiente nel distaccare le cellule primarie e staminali, mantenendo un'elevata vitalità cellulare rispetto agli enzimi di origine animale come la tripsina. il 100% delle cellule viene recuperato dopo 10 minuti e non vi è alcun danno nel lasciare le cellule in Accutase fino a 45 minuti, grazie all'autodigestione di Accutase.
In sintesi
In conclusione, Accutase è una soluzione potente che sta cambiando il gioco della coltura cellulare. Grazie alla sua natura delicata, all'efficienza e alla versatilità, Accutase è l'alternativa ideale alla tripsina. Se siete alla ricerca di una soluzione affidabile ed efficiente per il distacco delle cellule, Accutase è la soluzione che fa per voi.
Cosa contiene l'EMEM?
L'EMEM è una versione modificata del terreno minimo essenziale di Eagle, contenente soluzione salina bilanciata di Earle, aminoacidi non essenziali, L-glutammina, piruvato di sodio e bicarbonato di sodio. È importante notare che questo livello di bicarbonato di sodio è destinato all'uso in presenza di un 5% di CO2 nell'aria. Per mantenerne l'efficacia, si consiglia di conservare il terreno di coltura a una temperatura compresa tra 2°C e 8°C, al buio, quando non viene utilizzato.
A cosa serve l'EMEM?
Il terreno minimo essenziale di Eagle (EMEM) è un terreno di coltura cellulare in grado di mantenere le cellule in coltura tissutale. Il terreno contiene concentrazioni più elevate di aminoacidi, consentendo un'approssimazione più accurata della composizione proteica delle cellule di mammifero in coltura. L'EMEM può essere utilizzato per coltivare varie cellule, tra cui fibroblasti, cellule di cancro al fegato umano (HepG2) e cellule astrocitarie derivate da progenitori cerebrali fetali (PDA). In genere viene utilizzato in presenza di siero fetale bovino (FBS), siero di vitello o di cavallo.
In cosa si differenzia l'EMEM dagli altri terreni di coltura cellulare?
L'EMEM e il Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) presentano alcune somiglianze, ma anche differenze. Entrambi i terreni sono privi di proteine e contengono gli aminoacidi, i sali, il glucosio e le vitamine necessari per fornire energia alle cellule e mantenerle in coltura. Tuttavia, la formulazione del DMEM è modificata per contenere fino a quattro volte più vitamine e aminoacidi e da due a quattro volte più glucosio rispetto all'EMEM. Vale la pena notare che anche l'EMEM è diverso dalla formulazione originale del MEM.
Controllo di qualità
Filtrato sterile
Conservazione e durata di conservazione
Conservare a +2°C a +8°C, al riparo dalla luce.
Una volta aperto, conservare a 4°C e utilizzare entro 6-8 settimane.
Condizioni di spedizione
Temperatura ambiente
Manutenzione
Conservare in frigorifero a +2°C a +8°C al buio. Evitare il congelamento e il riscaldamento frequente a +37°C, in quanto riduce la qualità del prodotto.
Non riscaldare il terreno di coltura oltre i 37°C e non utilizzare fonti di calore non controllate come le microonde.
Se si deve utilizzare solo una parte del terreno di coltura, prelevare la quantità necessaria e riscaldarla a temperatura ambiente prima dell'uso.
Composizione
Categoria
Componenti
Concentrazione (mg/L)
Aminoacidi
L-Arginina HCl
126.00
L-cistina 2 HCl
31.30
L-Glutammina
292.00
L-istidina HClH2O
42.00
L-Isoleucina
52.00
L-Leucina
52.00
L-lisina HCl
72.50
L-metionina
15.00
L-fenilalanina
32.00
L-treonina
48.00
L-triptofano
10.00
L-Tirosina 2 Na 2H2O
51.90
L-Valina
46.00
Vitamine
Cloruro di colina
1.00
Vitamine
Pantotenato di D-Calcio
1.00
Acido folico
1.00
myo-Inositolo
2.00
Nicotinamide
1.00
Piridossale HCl
1.00
Riboflavina
0.10
Tiamina HCl
1.00
Sali inorganici
CaCl2 2H2O
265.00
Sali inorganici
KCl
400.00
MgSO4
97.67
NaCl
6800.00
NaHCO3
2200.00
NaH2PO4
122.00
Altri componenti
D-Glucosio
1000.00
Altri componenti
Sale sodico di rosso fenolo
11.00
Le caratteristiche principali del Freeze Medium CM-1 includono:
Ampia compatibilità: Efficace per un'ampia gamma di tipi di cellule, tra cui cellule primarie, cellule staminali e linee cellulari consolidate.
Alta vitalità: Ottimizzato per massimizzare il recupero e la vitalità delle cellule dopo lo scongelamento, garantendo risultati sperimentali affidabili.
Pronto all'uso: Comodamente preparato e sterilizzato per l'applicazione immediata, riducendo i tempi di preparazione e il rischio di contaminazione.
Maggiore stabilità: Mantiene prestazioni costanti in condizioni di crioconservazione standard, garantendo risultati riproducibili.
Lunga durata di conservazione: CM-1 è un terreno di crioconservazione contenente siero, pronto all'uso, che può essere conservato in frigorifero fino a un anno.
Uso del CM-1 per il congelamento delle cellule
Per utilizzare CM-1 per il congelamento di cellule aderenti e in sospensione, procedere come segue
Per le cellule aderenti, lavarle e dissociarle dal substrato di coltura. Per le cellule in sospensione, passare direttamente alla fase successiva.
Contare le cellule per assicurarsi che siano alla giusta concentrazione.
Centrifugare le cellule per pellettizzarle, quindi risospenderle nel terreno di coltura CM-1.
Trasferire le cellule risospese in crioviali.
Utilizzare un metodo di congelamento lento prima di trasferire le cellule alla conservazione a lungo termine
Metodo
Descrizione
Passi
❄️
Congelamento manuale
Un metodo graduale che prevede una riduzione graduale della temperatura per garantire la vitalità delle cellule
1️⃣ Mettere le cellule nel terreno di coltura in un congelatore a 4°C per 40 minuti.
2️⃣ Trasferire in un congelatore a -80°C per 24 ore.
3️⃣ Conservare le cellule in azoto liquido per la conservazione a lungo termine
❄️
Utilizzo di Mr. Frosty
Un comodo dispositivo che consente di controllare la velocità di congelamento senza l'uso di energia elettrica
1️⃣ Preparare le cellule in crioviali con terreno di congelamento.
2️⃣ Collocare le crioviali nel contenitore Mr. Frosty.
3️⃣ Conservare a -80°C per 24 ore prima di trasferire in azoto liquido
❄️
Congelatore a velocità controllata
Un congelatore di alta precisione di Thermo Fisher o di altri produttori progettato per la riduzione controllata della temperatura
1️⃣ Programmare il dispositivo per ridurre gradualmente la temperatura.
2️⃣ Collocare le cellule preparate nel congelatore.
3️⃣ Dopo il ciclo di congelamento, trasferire le cellule in azoto liquido
Conservare le crioviali a temperature inferiori a -130°C o in azoto liquido per la conservazione a lungo termine.
Ingredienti
Contiene FBS, DMSO, Glucosio, Sali
Capacità tampone: pH = 7,2
- 7,6
Il terreno di congelamento CM-1 di Cytion offre una soluzione affidabile per la crioconservazione, garantendo un'elevata vitalità cellulare e funzionalità dopo il disgelo per un'ampia gamma di applicazioni di ricerca.
Il terreno Ham's F-12K (Kaighn's) è stato accuratamente formulato per ottimizzare le condizioni di coltura cellulare. Presenta una composizione arricchita, che fornisce livelli elevati di componenti essenziali come aminoacidi e piruvato di sodio, oltre a elementi aggiuntivi come putrescina, timidina, ipoxantina e zinco. Queste aggiunte consentono ai ricercatori di integrare il terreno di coltura con una quantità minima di siero o di componenti definiti per specifici tipi di cellule, facilitando condizioni sperimentali precise.
In particolare, il terreno Ham's F-12K (Kaighn's) non contiene proteine o fattori di crescita. Di conseguenza, spesso è necessaria un'integrazione con fattori di crescita e siero bovino fetale (FBS), consentendo ai ricercatori di adattare il terreno di coltura ai requisiti delle loro specifiche linee cellulari. Per ottenere prestazioni ottimali, la concentrazione di FBS deve essere accuratamente ottimizzata per ogni linea cellulare, garantendo una crescita e una funzionalità ottimali.
Per mantenere il pH fisiologico, il terreno Ham's F-12K (Kaighn's) impiega un sistema tampone di bicarbonato di sodio (2,5 g/L), che richiede un ambiente controllato al 5-10% di CO2 durante la coltivazione. Ciò garantisce che il pH del terreno rimanga nell'intervallo ideale per la crescita e la vitalità delle cellule
Controllo di qualità
pH = 7,2 +/
- 0,02 a 20-25°C.
Ogni lotto è stato testato per verificare la sterilità e l'assenza di micoplasmi e batteri.
Manutenzione
Conservare in frigorifero a +2°C a +8°C al buio. Il congelamento e il riscaldamento fino a +37°C riducono la qualità del prodotto.
Non riscaldare il terreno di coltura a più di 37°C e non utilizzare fonti di calore incontrollabili (ad esempio, apparecchi a microonde).
Se si deve utilizzare solo una parte del terreno di coltura, prelevare questa quantità dal flacone e riscaldarla a temperatura ambiente.
La durata di conservazione di qualsiasi terreno di coltura, tranne quello di base, è di 8 settimane dalla data di produzione.
Composizione
Componenti
mg/L
Sali inorganici
Cloruro di calcio x 2H2O
135,24
Solfato di rame(II) x 5H2O
0,00
Solfato di ferro (II) x 7H2O
0,83
Cloruro di magnesio x 6H2O
105,72
Solfato di magnesio x 7H2O
394,49
Cloruro di potassio
283,29
Potassio diidrogeno fosfato
58,52
Cloruro di sodio
7597,20
idrogeno fosfato di sodioanidro
115,02
Solfato di zinco x 7H2O
0,14
Altri componenti
D(+)-Glucosio anidro
1260,00
Ipossantina
4,08
Acido DL-α-Lipoico
0,21
Rosso fenolo
3,00
Putrescina x 2HCl
0,32
Sodio piruvato
220,00
NaHCO3
2500,00
Timidina
0,73
Aminoacidi
L-alanina
17,82
L-Arginina x HCl
421,40
L-Asparagina x H2O
30,02
Acido L-aspartico
26,62
L-cisteina x HCl x H2O
70,24
L-Glutammina
292,20
Acido L-Glutammico
29,42
Glicina
15,01
L-istidina x HCl x H2O
41,92
L-Isoleucina
7,87
L-leucina
26,24
L-lisina x HCl
73,04
L-metionina
8,95
L-fenilalanina
9,91
L-Prolina
69,06
L-Serina
21,02
L-treonina
23,82
L-triptofano
4,08
L-tirosina
10,87
L-Valina
23,42
Vitamine
D(+)-Biotina
0,07
D-pantotenato di calcio
0,48
Cloruro di colina
13,96
Acido folico
1,32
mio-inositolo
18,02
Nicotinamide
0,04
Piridossina x HCl
0,06
Riboflavina
0,04
Tiamina x HCl
0,34
Vitamina B12
1,36
La soluzione salina fosfato-bufferata (PBS) è una soluzione tampone ampiamente utilizzata nella ricerca biologica e chimica. Svolge un ruolo cruciale nel mantenere l'equilibrio del pH e l'osmolarità durante varie procedure sperimentali, tra cui l'elaborazione dei tessuti e la coltura cellulare. La nostra soluzione PBS è formulata meticolosamente con ingredienti di elevata purezza per garantire stabilità e affidabilità in ogni esperimento. L'osmolarità e le concentrazioni di ioni del nostro PBS imitano fedelmente quelle del corpo umano, rendendolo isotonico e non tossico per la maggior parte delle cellule.
Composizione della nostra soluzione PBS
La nostra soluzione PBS è una miscela regolata in base al pH di tamponi fosfatici e soluzioni saline di grado ultrapuro. A una concentrazione di lavoro 1X, contiene:
8000 mg/L di cloruro di sodio (NaCl)
200 mg/L Cloruro di potassio (KCl)
1150 mg/L Fosfato di sodio bibasico anidro (Na2HPO4)
200 mg/L Fosfato di potassio monobasico anidro (KH2PO4)
Questa composizione garantisce un pH e un equilibrio ionico ottimali, adatti a un'ampia gamma di applicazioni biologiche.
Applicazioni della nostra soluzione PBS
La nostra soluzione PBS è ideale per diverse applicazioni nella ricerca biologica. Le sue proprietà isotoniche e non tossiche la rendono adatta alla diluizione delle sostanze e al risciacquo dei contenitori cellulari. Le soluzioni PBS contenenti EDTA sono efficaci per staccare le cellule attaccate e raggrumate. Tuttavia, i metalli divalenti come lo zinco non devono essere aggiunti al PBS, poiché possono causare precipitazioni. In questi casi, si consiglia di utilizzare i tamponi Good's. Inoltre, la nostra soluzione di PBS è un'alternativa accettabile al terreno di trasporto virale per il trasporto e la conservazione dei virus a RNA, compreso il SARS-CoV-2.
Controllo di qualità
Filtrato sterile
Conservazione e durata di conservazione
Conservare a +2°C a +25°C, al riparo dalla luce.
Una volta aperto, conservare a 2°C
- 25°C e utilizzare entro 24 mesi.
Condizioni di spedizione
Temperatura ambiente
Manutenzione
Conservare in frigorifero a +2°C a +8°C al buio. Evitare il congelamento e il riscaldamento frequente a +37°C, in quanto riduce la qualità del prodotto.
Non riscaldare il terreno di coltura oltre i 37°C e non utilizzare fonti di calore non controllate come le microonde.
Se si deve utilizzare solo una parte del terreno di coltura, prelevare la quantità necessaria e riscaldarla a temperatura ambiente prima dell'uso.
Composizione
Categoria
Componenti
Concentrazione (mg/L)
Sali
Cloruro di potassio
200
Potassio fosfato monobasico anidro
200
Cloruro di sodio
8000
Sodio fosfato bibasico anidro
1150
Inizialmente progettato per supportare la crescita di cellule leucemiche umane in colture in sospensione e monostrato, il terreno RPMI 1640 si è evoluto attraverso le modifiche apportate dai ricercatori e dai fornitori commerciali per diventare adatto a una vasta gamma di cellule di mammifero. È eccezionalmente compatibile con linee cellulari come HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrociti e carcinomi.
Il terreno RPMI 1640 si distingue dagli altri terreni di coltura cellulare per la sua composizione unica. Contiene una quantità sostanziale di fosfati, aminoacidi e vitamine. In particolare, contiene biotina, vitamina B12 e PABA, assenti in Eagle's Minimal Essential Medium o Dulbecco's Modified Eagle Medium. Inoltre, RPMI 1640 Medium presenta concentrazioni significativamente elevate di vitamine inositolo e colina. Tuttavia, non contiene proteine, lipidi o fattori di crescita. Di conseguenza, per garantire le condizioni ottimali per la crescita cellulare, è comunemente necessaria un'integrazione con il 10% di siero fetale bovino (FBS).
Il sistema tampone del terreno RPMI 1640 si basa sul bicarbonato di sodio e richiede un ambiente al 5-10% di CO2 per mantenere un pH fisiologicamente appropriato. L'inclusione dell'agente riducente glutatione distingue ulteriormente questo terreno da altri.
Controllo di qualità
Filtrato sterile
Conservazione e durata di conservazione
Conservare a +2°C a +8°C, al riparo dalla luce.
Una volta aperto, conservare a 4°C e utilizzare entro 6-8 settimane.
Condizioni di spedizione
Temperatura ambiente
Manutenzione
Conservare in frigorifero a +2°C a +8°C al buio. Evitare il congelamento e il riscaldamento frequente a +37°C, in quanto riduce la qualità del prodotto.
Non riscaldare il terreno di coltura oltre i 37°C e non utilizzare fonti di calore non controllate come le microonde.
Se si deve utilizzare solo una parte del terreno di coltura, prelevare la quantità necessaria e riscaldarla a temperatura ambiente prima dell'uso.
Composizione
Categoria
Componenti
Concentrazione (mg/L)
Aminoacidi
Glicina
10.00
L-alanil-L-glutammina
434.40
L-Arginina
200.00
L-AsparaginaH2O
56.82
Acido L-Aspartico
20.00
L-cistina 2HCl
65.20
Acido L-Glutammico
20.00
L-istidina HClH2O
20.27
L-idrossi-L-prolina
20.00
L-Isoleucina
50.00
L-Leucina
50.00
L-lisina HCl
40.00
L-metionina
15.00
L-fenilalanina
15.00
L-Prolina
20.00
L-Serina
30.00
L-treonina
20.00
L-triptofano
5.00
L-Tirosina 2Na 2H2O
28.83
L-Valina
20.00
Vitamine
acido p-amino-benzoico
1.00
D-Biotina
0.20
Cloruro di colina
3.00
D-pantotenato di calcio
0.25
Acido folico
1.00
myo-Inositolo
35.00
Nicotinamide
1.00
Piridossina HCl
1.00
Riboflavina
0.20
Tiamina HCl
1.00
Vitamina B12
0.005
Sali inorganici
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Altri componenti
D-Glucosio
2000.00
L-Glutatione ridotto
1.00
Sale sodico di rosso fenolo
5.30
Questa formulazione unica combina il Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) e l'Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) in un preciso rapporto di 1:1. L'aggiunta di L-glutammina ne migliora ulteriormente la composizione.
Il DMEM, derivato dall'Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), offre una maggiore concentrazione di aminoacidi e vitamine rispetto al suo predecessore. Ham's F-12, invece, è basato sul terreno Ham's F-10 e fornisce un insieme complementare di componenti essenziali.
Per favorire una crescita cellulare ottimale, è prassi comune integrare il DMEM:Ham's F12 con FBS a una concentrazione tipica del 5-10%. Questa aggiunta è necessaria in quanto il terreno di coltura manca di ormoni della crescita, lipidi e proteine fondamentali per lo sviluppo cellulare.
Il DMEM:Ham's F12 incorpora un sistema tampone di pH e viene spesso integrato con il rosso fenolo, un indicatore di pH. Le cellule coltivate in DMEM:Ham's F12, o in qualsiasi terreno che utilizzi il sistema tampone del bicarbonato, richiedono un ambiente controllato con CO2 del 5-10% per mantenere livelli di pH appropriati.
Controllo di qualità
Filtrato sterile
Conservazione e durata di conservazione
Conservare a +2°C a +8°C, al riparo dalla luce.
Una volta aperto, conservare a 4°C e utilizzare entro 6-8 settimane.
Condizioni di spedizione
Temperatura ambiente
Manutenzione
Conservare in frigorifero a +2°C a +8°C al buio. Evitare il congelamento e il riscaldamento frequente a +37°C, in quanto riduce la qualità del prodotto.
Non riscaldare il terreno di coltura oltre i 37°C e non utilizzare fonti di calore non controllate come le microonde.
Se si deve utilizzare solo una parte del terreno di coltura, prelevare la quantità necessaria e riscaldarla a temperatura ambiente prima dell'uso.
Composizione
Categoria
Componenti
Concentrazione (mg/L)
Aminoacidi
Glicina
18.75
L-alanina
4.45
L-Arginina HCl
147.50
L-Asparagina H₂O
7.50
Acido L-Aspartico
6.65
L-Cisteina HCl H₂O
17.56
L-cistina 2 HCl
31.29
Acido L-Glutammico
7.35
L-Glutammina
365.00
L-istidina HCl H₂O
31.48
L-Isoleucina
54.47
L-Leucina
59.05
L-lisina HCl
91.25
L-metionina
17.24
L-fenilalanina
35.48
L-Prolina
17.25
L-Serina
26.25
L-treonina
53.45
L-triptofano
9.02
L-tirosina sale disodico
48.10
L-Valina
52.85
Vitamine
D-Biotina
0.0035
Cloruro di colina
8.98
D-pantotenato di calcio
2.24
Acido folico
2.66
mio-inositolo
12.60
Nicotinamide
2.02
Piridossina HCl
0.031
Piridossale HCl
2.00
Riboflavina
0.219
Tiamina HCl
2.17
Vitamina B12
0.68
Sali inorganici
CaCl₂ 2 H₂O
154.50
CuSO₄ 5 H₂O
0.0013
Fe(NO₃)₃ 9 H₂O
0.05
FeSO₄ 7 H₂O
0.417
KCl
311.80
MgCl₂ 6 H₂O
61.20
MgSO₄
48.84
NaCl
6996.00
NaHCO₃
1200.00
Na₂HPO₄
71.02
NaH₂PO₄
54.30
ZnSO₄ 7 H₂O
0.432
Altri componenti
D-Glucosio
3151.00
Ipossantina
2.40
HEPES
3574.50
Acido linoleico
0.042
Acido lipoico
0.105
Sale sodico di rosso fenolo
8.63
Putrescina 2 HCl
0.081
Sodio piruvato
55.00
Timidina
0.365
- 0,02 a 20-25 °C. Ogni lotto è stato testato per verificarne la sterilità e l'assenza di micoplasmi e batteri. Conservazione Conservare in frigorifero a una temperatura compresa tra +2 °C e +8 °C al riparo dalla luce. Il congelamento e il riscaldamento fino a +37 °C compromettono la qualità del prodotto. Non riscaldare il terreno a temperature superiori a 37 °C né utilizzare fonti di calore incontrollabili (ad es. forni a microonde). Se si intende utilizzare solo una parte del terreno, prelevare la quantità necessaria dalla bottiglia e riscaldarla a temperatura ambiente. La durata di conservazione di qualsiasi terreno, ad eccezione del terreno di base, è di 6-8 settimane dalla data di apertura. Composizione Componenti mg/L Sali inorganiciCloruro di calcio x 2H2O132,00 Solfato di magnesio97,67 Cloruro di potassio400,00 Cloruro di sodio6.460,00 Idrogeno fosfato disodico (anidro)504,00 Altri componentiD(+)-Glucosio (anidro)3.000,00 Glutatione (ridotto)0,50 Peptone di carne600,00 Sale sodico del rosso fenolo11 AminoacidiL-alanina13,36 L-arginina x HCl42,14 L-asparagina x H2O45,03 Acido L-aspartico19,97 L-Cisteina x HCl x H2O31,75 L-glutammina (stabile)219,15 Acido L-glutammico22,07 Glicina7,51 L-istidina x HCl x H2O20,96 L-idrossiprolina19,67 L-isoleucina39,36 L-leucina39,36 L-lisina x HCl36,54 L-metionina14,92 L-fenilalanina16,52 L-Prolina17,27 L-Serina26,28 L-treonina17,87 L-triptofano3,06 Sale disodico della L-tirosina26,10 L-Valina17,57 VitamineAcido p-amminobenzoico1,00 Acido ascorbico0,56 D(+)-biotina0,20 D-calcio pantotenato0,20 Cloruro di colina5,00 Acido folico10,0 Mio-inositolo36,00 Nicotinamide0,50 Acido nicotinico0,5 Piridossal HCl0,50 Piridossina HCl0,50 Riboflavina0,20 Cloridrato di tiamina0,20 Vitamina B122,00
Il Medium 199 offre una serie di applicazioni in campo. Può mantenere efficacemente il complesso cumulo-ovocita (COC) e sostenere la maturazione in vitro degli ovociti. Inoltre, viene utilizzato per il risciacquo delle linee di aspirazione durante la raccolta di ovuli da vacche tedesche di razza Holstein. Inoltre, il Medium 199 è un terreno eccellente per la coltura di cellule endoteliali cardiache derivate da ratti. Queste applicazioni dimostrano la versatilità e l'adattabilità del Medium 199 alle varie esigenze sperimentali.
La storia
Lo sviluppo del Medium 199 negli anni '50 ha segnato un significativo progresso nei terreni di coltura dei tessuti. Prima della sua introduzione, molti terreni di coltura si basavano su prodotti di origine animale ed estratti di tessuto. Tuttavia, Morgan e colleghi rivoluzionarono il campo formulando una fonte nutrizionale completamente definita per le colture cellulari. Grazie agli esperimenti condotti con diverse combinazioni di vitamine, amminoacidi e altri fattori, hanno scoperto le eccezionali proprietà di promozione della crescita del Medium 199.
Controllo di qualità
pH = 7,2 +/
- 0,02 a 20-25°C.
Ogni lotto è stato testato per verificare la sterilità e l'assenza di micoplasmi e batteri.
Manutenzione
Conservare in frigorifero a +2°C a +8°C al buio. Il congelamento e il riscaldamento fino a +37°C riducono la qualità del prodotto.
Non riscaldare il terreno di coltura a più di 37° C e non utilizzare fonti di calore incontrollabili (ad es. apparecchi a microonde).
Se si deve utilizzare solo una parte del terreno di coltura, prelevare questa quantità dal flacone e riscaldarla a temperatura ambiente.
La durata di conservazione di qualsiasi terreno, ad eccezione del terreno di base, è di 8 settimane dalla data di produzione.
Composizione
Componenti
mg/L
Sali inorganici
Cloruro di calcio x 2H2O
264,92
Nitrato di ferro (III) x 9H2O
0,72
Solfato di magnesio
97,67
Cloruro di potassio
400,00
Sodio acetato x 3H2O
82,95
Cloruro di sodio
6,800.00
Sodio diidrogeno fosfato x H2O
140,00
Altri componenti
Adenina solfato
10,00
AMP
0,20
ATP
1,00
Colesterolo
0,20
2'-deossiribosio
0,50
D(+)-Glucosio anidro
1,000.00
Glutatione (rosso)
0,05
Guanina x HCl
0,30
Ipossantina
0,30
Rosso fenolo
10,00
D-Ribosio
0,50
Timina
0,30
Tween 80
4,90
Uracile
0,30
Xantina
0,30
NaHCO3
2,200.00
Aminoacidi
L-alanina
25,00
L-Arginina x HCl
70,00
Acido L-aspartico
30,00
L-cisteina x HCl x H2O
0,10
L-cistina
20,00
L-Glutammina stabile
149,00
Acido L-Glutammico
67,00
Glicina
50,00
L-istidina x HCl x H2O
21,88
L-idrossiprolina
10,00
L-Isoleucina
20,00
L-leucina
60,00
L-lisina x HCl
70,00
L-metionina
15,00
L-fenilalanina
25,00
L-Prolina
40,00
L-Serina
25,00
L-treonina
30,00
L-triptofano
10,00
L-Tirosina
40,00
L-Valina
25,00
Vitamine
acido 4-amino benzoico
0,05
Acido ascorbico
0,05
D(+)-Biotina
0,01
Calciferolo
0,10
D-pantotenato di calcio
0,01
Cloruro di colina
0,50
Acido folico
0,01
mio-inositolo
0,05
Menadione
0,01
Acido nicotinico
0.025
Nicotinamide
0.025
Piridossale x HCl
0.025
Piridossolo x HCl
0.025
Riboflavina
0,01
DL-α-Tocoferolo fosfato sale disodico
0,01
Tiamina x HCl
0,01
Vitamina A acetato
0,14
L'IMDM è adatto per colture cellulari ad alta densità e a rapida proliferazione, tra cui cellule Jurkat, COS-7 e macrofagi. Le varie modifiche di IMDM disponibili per una serie di applicazioni di coltura cellulare possono essere trovate utilizzando lo strumento di selezione dei terreni. I terreni liquidi forniscono nutrienti essenziali per tutte le applicazioni di coltura cellulare. Tutti i nostri terreni di coltura cellulare di alta qualità sono prodotti in base alla formula inizialmente pubblicata o alle modifiche necessarie per garantire prestazioni e stabilità costanti del terreno di coltura.
IMDM vs. DMEM
L'IMDM contiene nitrato di potassio anziché nitrato ferrico, HEPES e piruvato di sodio. I componenti aggiuntivi dell'IMDM lo rendono più adatto a tipi di cellule specializzate e ad applicazioni specifiche rispetto al DMEM.
IMDM vs. RPMI
IMDM e RPMI hanno formulazioni diverse che possono essere rilevanti per la stimolazione con PMA/ionomicina. Una differenza significativa è la concentrazione di Ca2+. Mentre RPMI contiene 0,42 mM di Ca2+, IMDM ne contiene 1,49 mM.
Controllo di qualità
pH = 7,2 +/
- 0,02 a 20-25°C.
Ogni lotto è stato testato per la sterilità e l'assenza di micoplasmi e batteri.
Manutenzione
Conservare in frigorifero a +2°C a +8°C al buio. Il congelamento e il riscaldamento fino a +37°C riducono la qualità del prodotto.
Non riscaldare il terreno di coltura a più di 37° C e non utilizzare fonti di calore incontrollabili (ad es. apparecchi a microonde).
Se si deve utilizzare solo una parte del terreno di coltura, prelevare questa quantità dal flacone e riscaldarla a temperatura ambiente.
La durata di conservazione di qualsiasi terreno, ad eccezione del terreno di base, è di 8 settimane dalla data di produzione.
Composizione
Componenti
mg/L
Sali inorganici
Cloruro di calcio x 2 H2O
219,00
Cloruro di potassio
330,00
Nitrato di potassio
0.076
Solfato di magnesio anidro
97,73
Cloruro di sodio
4,505.00
Sodio diidrogeno fosfato anidro
109,00
Selenito di sodio
0,02
Altri componenti
D(+)-Glucosio anidro
4,500.00
HEPES
5,958.00
Sodio piruvato
110,00
Rosso fenolo
15,00
Aminoacidi
L-alanina
25,00
L-Arginina x HCl
84,00
L-Asparagina x H2O
25,00
Acido L-Aspartico
30,00
L-cistina x 2HCl
91,24
L-Glutammina
584,00
Acido L-Glutammico
75,00
Glicina
30,00
L-istidina x HCl x H2O
42,00
L-Isoleucina
104,80
L-leucina
104,80
L-lisina x HCl
146,20
L-metionina
30,00
L-fenilalanina
66,00
L-Prolina
40,00
L-Serina
42,00
L-treonina
95,20
L-triptofano
16,00
L-Tirosina x 2Na
104,20
L-Valina
93,60
Vitamine
D(+)-Biotina
0.013
D-pantotenato di calcio
4,00
Cloruro di colina
4,00
Acido folico
4,00
mio-inositolo
7,20
Mezzi di coltura cellulare: Una panoramica
Nel campo delle scienze della vita, una delle metodologie più importanti è la coltura cellulare. Il prelievo di cellule, tessuti o organi da un animale o da una pianta e il successivo impianto di tali cellule, tessuti o organi in un ambiente artificiale favorevole alla loro sopravvivenza e/o crescita è ciò che si intende con l'espressione "coltura cellulare" Le esigenze ambientali fondamentali per uno sviluppo cellulare ottimale sono la temperatura controllata, un substrato per l'attaccamento delle cellule, un terreno di coltura adeguato e un incubatore che mantenga il pH e l'osmolalità ottimali. Le cellule devono disporre di queste condizioni per crescere al massimo delle loro potenzialità.
La selezione di un terreno di coltura adeguato per la coltivazione in vitro è la fase più critica e vitale della coltura cellulare. Un terreno di coltura, noto anche come terreno di coltura, è un liquido o un gel formulato per favorire lo sviluppo degli organismi su scala microscopica, cellulare o vegetale. Il terreno utilizzato per la coltivazione delle cellule contiene spesso un adeguato apporto di energia e di sostanze che controllano il ciclo cellulare. I principali componenti di un terreno di coltura includono aminoacidi, vitamine, sali inorganici, glucosio e siero. Il siero viene aggiunto al terreno di coltura perché funge da fonte di fattori di crescita, ormoni e fattori di attaccamento. Oltre a fornire nutrienti, il terreno di coltura contribuisce anche a mantenere i livelli di pH e osmolalità.
Tipi di terreno di coltura cellulare
Sia le cellule umane che quelle animali possono essere coltivate in un terreno artificiale o sintetico oppure in un terreno completamente naturale, integrato con elementi naturali. Di seguito vi forniremo una panoramica dei diversi tipi di terreno di coltura attualmente disponibili.
Terreni naturali
Nei terreni di coltura naturali si trovano solo fluidi biologici che esistono allo stato naturale. I terreni naturali sono molto utili e facili da coltivare per un'ampia varietà di tipi di cellule animali. La mancanza di comprensione dei componenti precisi che compongono i terreni naturali è il fattore principale che contribuisce alla scarsa ripetibilità dei risultati ottenuti con i terreni naturali.
Terreni artificiali
La preparazione di terreni artificiali o sintetici prevede l'aggiunta di nutrienti (sia organici che inorganici), proteine del siero, carboidrati, cofattori, vitamine e sali, nonché fasi gassose di O2 e CO2 [1].
Sono stati sviluppati vari tipi di terreni artificiali per soddisfare una o più delle seguenti funzioni: 1) sopravvivenza immediata (una soluzione salina bilanciata con un pH e una pressione osmotica precisi). 2) Sopravvivenza prolungata (una soluzione salina bilanciata integrata con diverse formulazioni di sostanze chimiche organiche e/o siero). 3) Sviluppo indefinito. 4) Funzioni specializzate.
Esistono quattro classificazioni distinte per i terreni artificiali:
Terreni contenenti siero
Il tipo di integratore più frequente nei terreni di coltura delle cellule animali è il siero fetale bovino. Viene aggiunto al terreno di coltura come supplemento a basso costo per ottenere le migliori condizioni di crescita possibili. Oltre a fungere da trasportatore o chelante per i nutrienti instabili o insolubili in acqua, gli ormoni e i fattori di crescita, gli inibitori delle proteasi e altre sostanze, il siero lega e neutralizza le molecole nocive.
Terreno senza siero
La presenza di siero nei terreni di coltura presenta una serie di svantaggi e può causare gravi errori di interpretazione nella ricerca immunologica [2, 3]. Sono stati creati diversi terreni di coltura privi di siero [4, 5]. Questi terreni sono generalmente formulati in modo specifico per supportare la coltura di un singolo tipo di cellula, come il Knockout Serum Replacement e il Knockout DMEM di Thermo Fisher Scientific e il terreno mTESR di Stem Cell Technologies [6], per le cellule staminali [7].
Inoltre, questi terreni incorporano quantità definite di fattori di crescita purificati, lipoproteine e altre proteine, che altrimenti sono tipicamente fornite dal siero [8]. Questi terreni sono spesso definiti "terreni culturali definiti", poiché i componenti che li compongono sono ben conosciuti.
Terreni chimicamente definiti
Questi terreni comprendono componenti inorganici e organici ultra-puri che non hanno subito alcun tipo di contaminazione. Possono anche includere aggiunte di proteine pure, come i fattori di crescita.
la modifica genetica di batteri o lieviti, insieme all'aggiunta di particolari acidi grassi, vitamine, colesterolo e aminoacidi, porta alla produzione dei loro componenti [9].
Terreni privi di proteine
I terreni di coltura privi di proteine sono quelli che non includono alcuna proteina, ma solo elementi non proteici. Rispetto ai terreni con aggiunta di siero, l'uso di terreni senza proteine aggiunte favorisce una maggiore proliferazione cellulare e l'espressione di proteine e rende più facile la purificazione di qualsiasi prodotto generato in un processo a valle [10-12]. Le proteine non sono incluse in formulazioni come MEM e RPMI-1640. Tuttavia, se necessario, si può somministrare un supplemento proteico.
Terreni di coltura e componenti di base
I terreni di coltura commerciali possono essere acquistati in polvere o liquidi e spesso includono una varietà di nutrienti come aminoacidi, glucosio, sali, vitamine e altri integratori alimentari.
Il fabbisogno di questi componenti è diverso per ogni linea cellulare e queste variazioni sono all'origine dell'ampio numero di formulazioni diverse di terreni di coltura. Ogni componente è responsabile di una determinata funzione, che verrà illustrata nei paragrafi seguenti:
Sistemi tampone
Per mantenere le condizioni ottimali di crescita, il pH deve essere controllato, il che viene spesso fatto con uno dei due sistemi di tamponamento:
Sistema tampone naturale
Il rapporto CO2/H2CO3 nell'atmosfera è uguale a quello del terreno di coltura, creando un meccanismo tampone naturale. Per preservare il meccanismo tampone naturale, le colture devono essere mantenute in un ambiente con il 5-10% di CO2, che spesso si ottiene utilizzando un incubatore a CO2. Uno degli aspetti migliori dell'uso di un tampone naturale è la sua economicità e sicurezza.
HEPES
Il tampone chimico che utilizza lo zwitterione HEPES ha una maggiore capacità tampone nell'intervallo di pH 7,2-7,4 e non necessita di un ambiente gassoso regolato. Per particolari tipi di cellule, una dose maggiore di HEPES può essere dannosa. I terreni contenenti HEPES sono anche molto più sensibili agli effetti fototossici della luce fluorescente [13].
Rosso fenolo
L'indicatore di pH rosso fenolo è spesso incluso nei terreni di coltura disponibili in commercio, consentendo un monitoraggio continuo del pH. Espandendo le cellule, i metaboliti da esse prodotti causano uno spostamento del pH e quindi un cambiamento di colore del terreno di coltura. Il rosso fenolo ha un duplice effetto sul colore del terreno di coltura, facendolo diventare giallo a pH acido e viola a pH alcalino. Il pH 7,4, il valore ottimale per la coltura cellulare, fa apparire il terreno di coltura rosso fluorescente.
Ma il rosso fenolo presenta alcuni inconvenienti: In primo luogo, il rosso fenolo è in grado di simulare le prestazioni di una serie di ormoni steroidei, in primo luogo gli estrogeni [14]. Pertanto, quando si studiano cellule sensibili agli estrogeni come il tessuto mammario, si raccomanda un terreno privo di rosso fenolo. L'equilibrio sodio-potassio è alterato dalla presenza di rosso fenolo in diverse formulazioni prive di siero. L'aggiunta di siero o di ormone pituitario bovino al terreno di coltura può contrastare questo effetto [15]. In terzo luogo, la presenza del rosso fenolo ostacola la rilevazione negli esperimenti di citometria a flusso.
Sali inorganici
I terreni contenenti sali inorganici, come ioni sodio, potassio e calcio, contribuiscono a mantenere l'equilibrio osmotico e a regolare il potenziale di membrana.
Aminoacidi
Poiché gli aminoacidi sono i componenti fondamentali delle proteine, sono una componente essenziale di ogni singolo terreno di coltura cellulare che sia mai stato concepito. Poiché le cellule non sono in grado di produrre autonomamente alcuni aminoacidi, è importante che il terreno di coltura includa gli aminoacidi essenziali. Sono necessari per la proliferazione delle cellule e la loro concentrazione determina la massima densità cellulare che può essere raggiunta. In particolare, la L-glutammina, un aminoacido essenziale, è particolarmente importante.
La L-glutammina funziona come fonte secondaria di energia per il metabolismo e contribuisce con l'azoto alla produzione di NAD, NADPH e nucleotidi. Poiché la L-glutammina è un aminoacido instabile che, con il tempo, si trasforma in una forma che le cellule non sono in grado di utilizzare, deve essere somministrata al terreno di coltura.
Inoltre, è possibile fornire al terreno di coltura aminoacidi non essenziali per rifornire quelli che sono stati consumati durante il processo di crescita. La crescita delle cellule viene potenziata e la loro vitalità aumenta quando il terreno di coltura viene integrato con aminoacidi non essenziali.
Carboidrati
I carboidrati sotto forma di zuccheri sono la principale fonte di energia. Molti terreni di coltura includono anche maltosio e fruttosio, oltre agli zuccheri più comuni di glucosio e galattosio.
Proteine e peptidi
L'albumina, la transferrina e la fibronectina sono le proteine e i peptidi più comunemente utilizzati e sono particolarmente importanti nei terreni di coltura che non includono il siero. L'albumina, la transferrina, l'aprotinina, la fetuina e la fibronectina sono alcune delle proteine che si possono trovare nel siero, che è una ricca riserva di proteine.
L'albumina è la principale proteina presente nel sangue e la sua funzione è quella di legare e trasportare varie sostanze, tra cui acqua, sali, acidi grassi liberi, ormoni e vitamine, tra diversi organi e cellule. La capacità dell'albumina di legarsi alle sostanze chimiche la rende un candidato efficace per la rimozione dei composti nocivi dal terreno di coltura delle cellule.
L'aprotinina è un agente protettivo nei sistemi di coltura cellulare, poiché è stabile a pH neutro e acido, oltre che resistente alle alte temperature e alla distruzione che può essere causata dagli enzimi proteolitici. È in grado di inibire diverse serina-proteasi, tra cui la tripsina.
La fetuina è una glicoproteina che può essere rilevata in quantità maggiori nel siero di animali fetali e neonati rispetto al siero degli adulti. Inoltre, agisce come inibitore della serina proteasi. La proteina fibronectina è un componente essenziale nel processo di adesione cellulare. La transferrina è una proteina che trasporta il ferro ed è responsabile del trasporto del ferro alle membrane delle cellule.
Acidi grassi e lipidi
Svolgono un ruolo cruciale nel terreno privo di siero quando il siero è assente.
Vitamine
Numerose vitamine sono necessarie per lo sviluppo e la proliferazione cellulare. Le vitamine non possono essere prodotte in quantità adeguate dalle cellule e sono quindi essenziali nelle colture tissutali come integratori alimentari.
Nella coltura cellulare, il siero è la fonte primaria di vitamine; tuttavia, i terreni di coltura vengono trattati con varie vitamine per renderli adatti a un tipo specifico di cellula. In genere, le vitamine del gruppo B sono utilizzate per stimolare la crescita.
Oligoelementi
Elementi chimici come il rame, lo zinco, il selenio e gli intermedi dell'acido tricarbossilico sono noti come oligoelementi. Gli oligoelementi vengono spesso aggiunti ai terreni di coltura che non includono il siero per sostituire quelli tipicamente presenti nel siero. Questi elementi sono importanti componenti chimici necessari per un sano sviluppo cellulare. Molte reazioni biochimiche dipendono da alcuni micronutrienti, come l'attività enzimatica.
Supplementi di terreno
Il terreno di coltura completo suggerito per alcune linee cellulari necessita di componenti aggiuntivi che sono assenti dal terreno di coltura di base e dal siero. Questi integratori alimentari supportano la crescita cellulare e l'appropriata funzione metabolica.
Sebbene gli ormoni, i fattori di crescita e le molecole di segnalazione siano essenziali per l'adeguata proliferazione di particolari linee cellulari, è necessario adottare sempre le seguenti precauzioni: Poiché l'aggiunta di integratori potrebbe alterare l'osmolalità del terreno di coltura completo, inibendo lo sviluppo cellulare, è sempre consigliabile verificare l'osmolalità dopo l'aggiunta di integratori. Per la maggior parte delle linee cellulari, l'osmolalità ottimale è compresa tra 260 e 320 mOSM/kg.
Antibiotici
Gli antibiotici sono spesso impiegati per inibire lo sviluppo di inquinanti batterici e fungini [16], sebbene non siano essenziali per la crescita cellulare. Poiché gli antibiotici potrebbero nascondere la contaminazione da parte di micoplasmi e batteri resistenti, il loro uso di routine non è consigliato per le colture cellulari [17, 18].
Inoltre, gli antibiotici possono alterare il metabolismo delle cellule ipersensibili. Spesso vengono utilizzate le combinazioni penicillina-streptomicina prodotte da MilliporeSigma e Life Technologies. La plasmocina è stata utilizzata nella coltura delle linee cellulari di glioma TS603, TS516 e BT260 [19] e si è dimostrata efficace nel rimuovere la contaminazione da micoplasma (20).
Siero
Nel siero sono presenti albumine, fattori di crescita e inibitori della crescita. Il siero è uno dei componenti più importanti del terreno di coltura cellulare perché fornisce aminoacidi, proteine, vitamine (soprattutto vitamine liposolubili come A, D, E e K), carboidrati, lipidi, ormoni, fattori di crescita, minerali e oligoelementi.
Il siero di origine fetale e di vitello bovino viene spesso utilizzato per promuovere lo sviluppo delle cellule coltivate. Il siero fetale è una fonte abbondante di fattori di crescita ed è adatto alla clonazione cellulare e allo sviluppo di cellule sensibili. A causa delle sue ridotte capacità di promuovere la crescita, il siero di vitello viene utilizzato negli esperimenti di inibizione da contatto. I normali terreni di coltura spesso includono dal 2% al 10% di siero. L'aggiunta di siero al terreno di coltura ha le seguenti funzioni [21]:
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Il siero fornisce i nutrienti essenziali per le cellule (sia in soluzione che attaccati alle proteine).
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Il siero contiene diversi fattori di crescita e ormoni coinvolti nella promozione della crescita e nell'attività specializzata delle cellule.
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Offre molte proteine leganti, come l'albumina e la transferrina, che trasportano altre sostanze chimiche nella cellula. Ad esempio, l'albumina trasporta nelle cellule grassi, vitamine, ormoni, ecc.
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Fornisce anche proteine, come la fibronectina, che aumentano l'adesione delle cellule al substrato. Inoltre, produce elementi di diffusione che favoriscono l'espansione delle cellule prima della divisione.
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Fornisce inibitori delle proteasi che impediscono la proteolisi nelle cellule.
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Contiene anche minerali come Na+, K+, Zn2+ e Fe2+.
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Aumenta la viscosità del terreno di coltura, proteggendo così le cellule da lesioni meccaniche durante l'agitazione della coltura in sospensione.
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È anche un tampone.
Riferimenti
[1] Morgan J, Morton H, Parker R. Nutrizione delle cellule animali in coltura tissutale; studi iniziali su un terreno sintetico. Proc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1-8
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[21] Kragh Hansen U. Molecular aspects of ligand binding to serum albumin. Pharmacol Rev. 1981;33:17-53