Térfogat: 100 ml
Tárolás: ≤ –15 °C
Sterilitás: Steril szűrt
A stabil glutaminoldat (L-alanil-L-glutamin, 200 mM) egy rendkívül stabil dipeptid formájú L-glutamin, amelyet a sejtkultúra-táptalajokban a hagyományos L-glutamin közvetlen helyettesítésére fejlesztettek ki. Az L-glutamin egy esszenciális aminosav és a tenyésztett sejtek fő energiaforrása, amely kritikus szerepet játszik a sejtek növekedésében, anyagcseréjében és fehérjeszintézisében.
Alkalmazás és előnyök
A standard folyékony táptalajokban az L-glutamin 37 °C-on viszonylag gyorsan lebomlik, ami toxikus melléktermékek, például ammóniumionok képződéséhez vezet, amelyek negatívan befolyásolhatják a sejtek életképességét és a kísérleti eredményeket. A stabil glutamin leküzdíti ezt a korlátozást azzal, hogy nem bomló dipeptid formát biztosít, amely tenyésztési körülmények között is sértetlen marad.
A sejtek enzimatikusan hasítják a dipeptidkötést, hogy szükség szerint felszabadítsák az L-glutamint, biztosítva ezzel a folyamatos friss utánpótlást, miközben megakadályozzák a káros hulladéktermékek felhalmozódását. Ez különösen előnyös a hosszú távú sejtkultúrák és a nagy sűrűségű növekedési rendszerek esetében.
Összetétel és felhasználás
Az L-alanil-L-glutamin oldatot sejtkultúra-minőségű vízben készítik elő 200 mM koncentrációban, és szennyeződésre érzékeny alkalmazásokhoz steril szűrővel szűrik. A kísérleti követelményeknek megfelelően közvetlenül teljes táptalajba hígítható. A termék stabilitásának megőrzése érdekében ≤ –15 °C-on tárolandó, és kerülni kell az ismételt fagyasztás-olvasztás ciklusokat.
Kizárólag kutatási célra. Diagnosztikai vagy terápiás eljárásokhoz nem használható. Emberben vagy állatokban nem alkalmazható.
Térfogat: 100 ml
Tárolás: +2 °C és +8 °C között
Sterilitás: Steril szűrt
A HEPES pufferoldat (1 M), más néven N-2-hidroxi-etil-piperazin-N-2-etán-szulfonsav, egy zwitterionos szerves pufferközeg, amelyet széles körben használnak sejtkultúra-táptalajokban. Úgy tervezték, hogy stabil pH-értéket biztosítson a 6,7 és 8,6 közötti fiziológiai tartományban, támogatva az optimális sejtfunkciót in vitro alkalmazások során.
Alkalmazás és előnyök
A HEPES megbízható pufferkapacitást biztosít a sejtkultúra-rendszerekben, különösen akkor, ha a sejteket CO₂-inkubátoron kívül kezelik. 10–25 mM HEPES hozzáadása a tenyésztőközeghez fokozott pH-stabilitást biztosít hosszabb manipulációs időszakok alatt, segítve az állandó kísérleti feltételek fenntartását.
Ez a puffer membránáteresztő, minimálisan zavarja a biokémiai reakciókat, és erős kémiai és enzimatikus stabilitást mutat. Ezek a tulajdonságok alkalmassá teszik széles körű sejtkultúra
- és biokémiai alkalmazásokra.
Összetétel és felhasználás
A megoldás 1 M koncentrátum formájában kerül forgalomba, sejtkultúra-minőségű vízben elkészítve, és steril szűrésen esik át, hogy szennyeződésre érzékeny környezetben is használható legyen. Az alkalmazás követelményeinek megfelelően a kívánt munkakoncentrációra hígítható. +2 °C és +8 °C között tárolandó, és a termék integritásának megőrzése érdekében aszeptikus körülmények között kell kezelni.
Kizárólag kutatási célra. Diagnosztikai vagy terápiás eljárásokban nem használható. Emberben vagy állatokban nem alkalmazható.
Térfogat: 50 ml
Tárolás: +2 °C és +8 °C között
Sterilitás: Steril szűrt
A D-(+)-glükóz oldat (dextróz oldat) egy steril, használatra kész kiegészítő, amely a sejtek anyagcseréjének központi eleme, a természetesen előforduló D-(+)-glükóz cukrot tartalmazza. A glükóz olyan alapvető biológiai folyamatokban vesz részt, mint az energia termelés, a glikoziláció és a sejtek szerkezetéhez és működéséhez hozzájáruló glikánok képződése.
Alkalmazás és előnyök
Ez a glükózoldat széles körben használatos kiegészítőként sejtkultúra-táptalajokban és számos sejt
- és molekuláris biológiai alkalmazásban. Elsődleges szén
- és energiaforrásként a glükóz támogatja a sejtek növekedését, szaporodását és anyagcsere-aktivitását. A bioszintézis útjaiban betöltött szerepe miatt kritikus fontosságú a normális sejtfiziológia és a kísérleti konzisztencia fenntartásában.
Összetétel és felhasználás
Az oldat 250 g/l glükóz magas koncentrációban kerül forgalomba, ami lehetővé teszi a tenyésztőközegbe való rugalmas hígítást a kísérleti követelményeknek megfelelően. Steril szűrésen esik át, hogy szennyeződésre érzékeny alkalmazásokhoz is alkalmas legyen. +2 °C és +8 °C között tárolandó, és a termék minőségének és stabilitásának megőrzése érdekében aszeptikusan kell kezelni.
Kizárólag kutatási célra. Diagnosztikai vagy terápiás eljárásokhoz nem használható. Emberben vagy állatokban nem alkalmazható.
Térfogat: 10 ml
Tárolás: +2 °C és +8 °C között
Sterilitás: Szteril szűrt
Az inzulin-transferrin-szelén (ITS) oldat (100x) egy kémiailag meghatározott kiegészítő, amelyet széles körű sejtkultúra-alkalmazásokhoz fejlesztettek ki. Leggyakrabban alapsejtkultúra-táptalajok adalékaként használják, hogy támogassa a sejtek növekedését csökkentett szérumtartalmú vagy szérummentes körülmények között.
Alkalmazás és előnyök
ITS kiegészítőnk biztosítja a szérummentes táptalajok optimális működéséhez szükséges alapvető összetevőket. A hagyományos tápközeg ITS-szel történő kiegészítésével jelentősen csökkenthető a számos sejtvonal rutin fenntartásához szükséges borjúszérum (FBS) mennyisége. Ez segít minimalizálni a szérumhasználattal járó variabilitást, miközben biztosítja a sejtek egyenletes növekedését és életképességét.
Az inzulin támogatja a kulcsfontosságú tápanyagok sejtbejutását és anyagcseréjét, a transzferrin elősegíti a vas szállítását, a szelén pedig hozzájárul az antioxidáns védelemhez és az enzimaktivitáshoz. Ezek a komponensek együttesen elősegítik a kiegyensúlyozott sejtanyagcserét és javítják a reprodukálhatóságot meghatározott tenyésztési rendszerekben.
Összetétel és felhasználás
Az inzulin-transferrin-szelén (ITS) 100-szoros koncentrátumként, fenolvörös nélküli Earle's Balanced Salt Solution (EBSS) oldatban kerül forgalomba. Szabványos alkalmazásokhoz 1:100 arányban hígítsa a megfelelő alapközegbe az ajánlott munkakoncentráció elérése érdekében. A termék stabilitásának és sterilitásának megőrzése érdekében +2 °C és +8 °C között tárolja, és aszeptikus körülmények között kezelje.
Kizárólag kutatási célra. Diagnosztikai vagy terápiás eljárásokhoz nem alkalmazható. Emberre vagy állatra nem alkalmazható.
Térfogat: 5 ml
Tárolás: +2 °C és +8 °C között
Sterilitás: Szteril szűrt
A humán rekombináns inzulinoldat egy kémiailag meghatározott kiegészítő, amelyet általában emlős sejtvonalak, többek között kínai hörcsög petefészek (CHO) sejtek tenyésztéséhez használnak. Ez a sejtkultúra-minőségű oldat Saccharomyces cerevisiae-ben expresszált rekombináns humán inzulint tartalmaz, ami biztosítja a magas tisztaságot és az állandó teljesítményt a kutatási alkalmazásokban.
Alkalmazás és előnyök
Az inzulint rutinszerűen adják hozzá a szérummentes és kémiailag definiált táptalajokhoz a sejtek növekedésének és termelékenységének elősegítése érdekében. Kulcsfontosságú szabályozó hormonként az inzulin támogatja a glükóz, az aminosavak és a zsírsavak sejtek általi felvételét, hasznosítását és tárolását. Gátolja továbbá a glikogén, a fehérjék és a lipidek lebontását, hozzájárulva ezzel a sejtek életképességének javulásához és az anyagcsere stabilitásához a tenyésztési rendszerekben. A kémiailag definiált készítmény elősegíti a reprodukálhatóságot és minimalizálja a variabilitást az érzékeny sejtkultúra-munkafolyamatokban.
Biológiai tulajdonságok és felhasználás
Az inzulin egy kétláncú polipeptid hormon, amelyet a hasnyálmirigy szigeteinek β-sejtjei termelnek természetes úton. Molekulatömege körülbelül 5800 Da. Az α
- és β-láncokat két láncok közötti diszulfidkötés köti össze, az α-lánc pedig egy láncon belüli diszulfidkötést tartalmaz. Sejtkultúra-alkalmazások esetén az oldatot aszeptikus körülmények között kell kezelni, és +2 °C és +8 °C között kell tárolni a stabilitás és a teljesítmény fenntartása érdekében.
Kizárólag kutatási célra. Diagnosztikai vagy terápiás eljárásokhoz nem használható. Emberben vagy állatokban nem használható.
Térfogat: 100 ml
Tárolás: +2 °C és +8 °C között
Sterilitás: Steril szűrt
A nátrium-piruvát oldat (100 mM) egy steril, használatra kész kiegészítő, amelynek célja, hogy további, könnyen hozzáférhető energiaforrást biztosítson a sejtkultúra táptalajához. A nátrium-piruvát kulcsszerepet játszik a sejtek energia-anyagcseréjében, és támogatja a metabolikusan aktív és gyorsan szaporodó sejtek, például a tumorsejtek növekedését. A kiegészítés javíthatja a sejtek életképességét és segíthet fenntartani az anyagcsere stabilitását a tenyésztési rendszerekben.
Alkalmazás és előnyök
Ezt az oldatot széles körben használják a rutin sejtkultúrában a táptalaj piruváttal való dúsítására és az optimális növekedési feltételek elősegítésére. Támogatja az ATP-termelést, segíthet az oxidatív stressz csökkentésében, és hozzájárul a tenyésztett sejtek anyagcsere-teljesítményének javításához. A sejtkultúra-minőségű vízben gyártott és steril szűrt termék biztosítja a kutatási munkafolyamatok állandó minőségét és reprodukálhatóságát.
Használat és kompatibilitás
A legtöbb sejtkultúra-alkalmazáshoz ajánlott végső koncentráció 1 mM nátrium-piruvát, amelyet a 100 mM-es törzsoldat 1:100 arányú hígításával lehet elérni a teljes tenyésztőközegben. Az oldat számos alapközeggel és emlős sejtvonalakkal kompatibilis. A termék stabilitásának megőrzése érdekében +2 °C és +8 °C között tárolandó, és szennyeződéstől védve.
Kizárólag kutatási célra. Diagnosztikai vagy terápiás eljárásokhoz nem használható. Emberben vagy állatokban nem alkalmazható.
Térfogat: 100 ml Tárolás: ≤-15°C Sterilitás: Steril szűrt
Az Antibiotikum/Antimikotikum oldat (100x) egy steril, felhasználásra kész koncentrátum, amelyet úgy terveztek, hogy csökkentse a mikrobiális szennyeződés kockázatát a sejtkultúrában és a kapcsolódó laboratóriumi alkalmazásokban. Ez a 100x oldat a penicillin, a streptomicin és az amfotericin B jól bevált kombinációját tartalmazza, amely széles spektrumú antimikrobiális aktivitást biztosít Gram-pozitív és Gram-negatív baktériumok, élesztők és fonalas gombák ellen. A készítmény alkalmas eukarióta sejttenyészetekben, bakteriális táptalajokon és más, szennyeződésre érzékeny rendszerekben történő felhasználásra, támogatva a tiszta és következetes laboratóriumi műveleteket.
Alkalmazás és előnyök A rutin kutatási protokollokhoz optimalizált oldatot széles körben használják a sejtkultúra munkafolyamatok aszeptikus körülményeinek fenntartására. Megbízható teljesítményt nyújt a szennyeződésre érzékeny környezetekben, segítve a kutatókat a mikrobák elszaporodásának kockázatának csökkentésében anélkül, hogy veszélyeztetné a sejtek egészségét vagy a kísérleti reprodukálhatóságot. A sterilszűrt formuláció kiküszöböli a további szolubilizációs lépések szükségességét, támogatva a racionalizált médiumkészítést és csökkentve a napi laboratóriumi eljárások variabilitását.
Használat és kompatibilitás A standard munkakoncentrációk eléréséhez hígítsa az oldatot 1:100 arányban a teljes táptalajhoz. A termék kompatibilis az emlős sejtvonalak és alapközegek széles skálájával. A folyamatos készletelérhetőségnek köszönhetően a kutatók számára előnyös a megbízható ellátás folyamatossága és az egyszerűsített logisztikai tervezés. Az oldatot ≤ -15 °C-on kell tárolni, és a stabilitás megőrzése érdekében védeni kell az ismételt fagyasztási-olvasztási ciklusoktól. Kizárólag kutatási célú felhasználásra. Nem használható diagnosztikai vagy terápiás eljárásokban. Nem használható embereken vagy állatokon.
Térfogat: 100 ml Tárolás: sterilitás: +2°C és +8°C között: Steril szűrt
AMEM nem esszenciális aminosavak (100x) egy steril kiegészítés, amelyet a sejtnövekedés és életképesség fokozására terveztek emlős sejttenyésztő rendszerekben. A készítmény a standard Minimum Essential Mediumban (MEM) található nem esszenciális aminosavak 100x-os koncentrátumának felel meg, lehetővé téve az alapközegek közvetlen kiegészítését minimális előkészítéssel.
Alkalmazás és előnyök Ez a kiegészítés kiegészítő aminosavkészletet biztosít a gyorsan proliferáló sejtek vagy olyan sejtvonalak számára, amelyek elvesztették a nem esszenciális aminosavak de novo szintézisének képességét. A bioszintézis metabolikus terhének enyhítésével támogatja a jobb növekedési kinetikát, a hosszabb életképességet és a nagyobb kísérleti konzisztenciát
- különösen a tápanyagérzékeny vagy nagy sűrűségű kultúrákban.
Összetétel és felhasználás Az oldat glicint, L-alanint, L-aszparagint, L-aszparaginsavat, L-glutaminsavat, L-prolint és L-szerint tartalmaz. Kompatibilis a MEM-mel és a legtöbb más standard táptalajjal. Használathoz hígítsa 1:100 arányban a végleges táptalajba. Ez a termék sterilszűrt és további kezelési lépések nélkül felhasználásra kész. Kizárólag kutatási célú felhasználásra. Nem használható diagnosztikai vagy terápiás eljárásokban. Nem használható embereken vagy állatokon.
- A Trypsin kíméletes alternatívája
Az Accutase egy sejtleválasztó megoldás, amely forradalmasítja a sejtkultúra-ipart. Proteolitikus és kollagenolitikus enzimek keveréke, amely a tripszin és a kollagenáz hatását utánozza. A tripszinnel ellentétben az Accutase nem tartalmaz emlős vagy bakteriális összetevőket, és sokkal kíméletesebb a sejtekhez, így ideális megoldás a sejtek rutinszerű leválasztására a standard szövettenyésztő műanyag edényekről és az adhéziós bevonatú műanyag edényekről. Ebben a blogbejegyzésben az Accutase előnyeit és felhasználási lehetőségeit vizsgáljuk meg, valamint azt, hogy hogyan változtatja meg a sejtkultúra játékát.
Az Accutase előnyei
Az Accutase számos előnnyel rendelkezik a hagyományos tripszinoldatokkal szemben. Először is, minden olyan esetben használható, amikor bármilyen tapadó sejtvonal kíméletes és hatékony leválasztására van szükség, így a tripszin közvetlen helyettesítője. Másodszor, az Accutase rendkívül jól működik embrionális és neuronális őssejteken, és bizonyítottan megőrzi e sejtek életképességét a passzázs után. Harmadszor, az Accutase megőrzi a legtöbb epitópot a későbbi áramlási citometriás elemzéshez, így ideális a sejtfelszíni markerek elemzéséhez.
Ezenkívül az Accutase-t nem kell semlegesíteni, amikor a tapadó sejteket passziválják. A sejtek szétválasztása után további médium hozzáadása felhígítja az Accutázt, így az már nem képes a sejtek leválasztására. Ez kiküszöböli az inaktiválási lépés szükségességét, és időt takarít meg a sejtkultúra-technikusok számára. Végül, az Accutase-t nem kell aliquotálni, és egy palack 2 hónapig stabil a hűtőszekrényben.
Az Accutase alkalmazásai
Az Accutase a tripszinoldat közvetlen helyettesítője, és használható a sejtvonalak passziválására. Ezenkívül az Accutase jól teljesít a sejtek leválasztásakor számos sejtfelszíni marker áramlási citometriás elemzéséhez és sejtválogatáshoz. Az Accutase kezelés további downstream alkalmazásai közé tartozik a sejtfelszíni markerek elemzése, vírusnövekedési vizsgálat, sejtproliferáció, tumorsejt-migrációs vizsgálatok, rutin sejtpassázs, termelés skálázása (bioreaktor) és áramlási citometria.
Az Accutase összetétele
Az Accutase nem tartalmaz emlős vagy bakteriális összetevőket, és egy természetes enzimkeverék proteolitikus és kollagénbontó enzimaktivitással. Sokkal alacsonyabb koncentrációban van megfogalmazva, mint a tripszin és a kollagenáz, így kevésbé mérgező és kíméletesebb, de ugyanolyan hatékony.
Az Accutase hatékonysága
Az Accutase bizonyítottan hatékony az elsődleges és őssejtek leválasztásában és a sejtek magas életképességének fenntartásában az állati eredetű enzimekkel, például a tripszinnel összehasonlítva. a sejtek 100%-a 10 perc után visszanyerhető, és az Accutase automatikus emésztésének köszönhetően a sejteket akár 45 percig is az Accutase-ban hagyhatjuk.
Összefoglalva
Összefoglalva, az Accutase egy hatékony megoldás, amely megváltoztatja a sejtkultúra játékát. Kíméletes természetével, hatékonyságával és sokoldalúságával az Accutase a tripszin ideális alternatívája. Ha megbízható és hatékony megoldást keres a sejtleválasztáshoz, az Accutase az Ön számára a megfelelő megoldás.
Mi van az EMEM-ben?
Az EMEM az Eagle-féle minimálisan esszenciális táptalaj módosított változata, amely Earle's Balanced Salt Solution-t, nem esszenciális aminosavakat, L-glutamint, nátrium-piruvátot és nátrium-bikarbonátot tartalmaz. Fontos megjegyezni, hogy ez a nátrium-bikarbonát szint 5%-os CO2 levegőben történő használatra készült. Hatékonyságának megőrzése érdekében a táptalajt 2°C és 8°C között, sötétben ajánlott tárolni, amikor nem használják.
Mire használják az EMEM-et?
Az Eagle's minimal essential medium (EMEM) egy sejttenyésztő táptalaj, amely a sejteket szövettenyészetben képes fenntartani. A táptalaj magasabb koncentrációban tartalmaz aminosavakat, ami lehetővé teszi a tenyésztett emlőssejtek fehérjeösszetételének pontosabb megközelítését. Az EMEM különböző sejtek, többek között fibroblasztok, humán májrákos sejtvonal (HepG2) sejtjei és humán magzati agyi progenitor-eredetű asztrocita sejtek (PDA) tenyésztésére használható. Általában magzati szarvasmarha szérum (FBS), borjú
- vagy lószérum jelenlétében használják.
Miben különbözik az EMEM más sejttenyésztő közegektől?
Bár az EMEM és a Dulbecco módosított Eagle's medium (DMEM) között van néhány hasonlóság, de különböznek is. Mindkét táptalajból hiányzik a fehérje, és tartalmazza azokat az aminosavakat, sókat, glükózt és vitaminokat, amelyek a sejtek energiaellátásához és a szövetkultúrában való fenntartásához szükségesek. A DMEM készítményt azonban úgy módosították, hogy akár négyszer több vitamint és aminosavat, valamint két-négyszer több glükózt tartalmazzon, mint az EMEM. Érdemes megjegyezni, hogy az EMEM is különbözik az eredeti MEM formulációtól.
Minőségellenőrzés
Steril szűrt
Tárolás és eltarthatóság
Tárolja +2°C és +8°C között, fénytől védve.
Felbontás után 4°C-on tárolja, és 6-8 héten belül használja fel.
Szállítási feltételek
Környezeti hőmérséklet
Karbantartás
Hűtve, +2°C és +8°C között, sötétben tárolja. Kerülje a fagyasztást és a gyakori melegítést +37°C-ra, mivel ez csökkenti a termék minőségét.
Ne melegítse a közeget 37°C fölé, és ne használjon ellenőrizetlen hőforrásokat, például mikrohullámú készülékeket.
Ha a táptalajnak csak egy részét kívánja felhasználni, vegye ki a szükséges mennyiséget, és felhasználás előtt melegítse fel szobahőmérsékletűre.
Összetétel
Kategória
Összetevők
Koncentráció (mg/l)
Aminosavak
L-arginin HCl
126.00
L-cisztin 2 HCl
31.30
L-Glutamin
292.00
L-Hisztidin HClH2O
42.00
L-izoleucin
52.00
L-Leucin
52.00
L-lizin HCl
72.50
L-metionin
15.00
L-fenilalanin
32.00
L-treonin
48.00
L-triptofán
10.00
L-tirozin 2 Na 2H2O
51.90
L-Valin
46.00
Vitaminok
Kolinklorid
1.00
Vitaminok
D-kalcium-pantotenát
1.00
Folsav
1.00
myo-Inozitol
2.00
Nikotinamid
1.00
Piridoxál HCl
1.00
Riboflavin
0.10
Tiamin HCl
1.00
Szervetlen sók
CaCl2 2H2O
265.00
Szervetlen sók
KCl
400.00
MgSO4
97.67
NaCl
6800.00
NaHCO3
2200.00
NaH2PO4
122.00
Egyéb összetevők
D-Glükóz
1000.00
Egyéb összetevők
Fenolvörös nátriumsó
11.00
A Freeze Medium CM-1 fő jellemzői a következők:
Széles körű kompatibilitás: Hatékony a sejttípusok széles skálájához, beleértve a primer sejteket, őssejteket és a létrehozott sejtvonalakat.
Magas életképesség: Optimalizált a felolvasztás utáni sejtregeneráció és életképesség maximalizálására, biztosítva a megbízható kísérleti eredményeket.
Felhasználásra kész: Kényelmesen előkészítve és sterilizálva az azonnali alkalmazáshoz, csökkentve az előkészítési időt és a szennyeződés kockázatát.
Fokozott stabilitás: Fenntartja a konzisztens teljesítményt standard kriokonzerválási körülmények között, biztosítva a reprodukálható eredményeket.
Hosszú eltarthatósági idő: A CM-1 egy szérumtartalmú, azonnal felhasználható kriokonzerváló közeg, amely hűtőszekrényben akár egy évig is tárolható.
A CM-1 használata sejtek fagyasztásához
A CM-1 adherens és szuszpenziós sejtek fagyasztására való használatához kövesse az alábbi lépéseket
Adhéziós sejtek esetében mossa meg és válassza le őket a tenyésztési szubsztrátról. Szuszpenziós sejtek esetében közvetlenül a következő lépéssel folytassa.
Számolja meg a sejteket, hogy biztosítsa a megfelelő koncentrációt.
Centrifugáljuk a sejteket a pelletáláshoz, majd szuszpendáljuk újra CM-1 fagyasztási tápfolyadékban.
A reszuszpendált sejteket helyezze át a kriovialis üvegekbe.
Használjon lassú fagyasztási módszert, mielőtt a sejteket hosszú távú tárolásra szállítja
Módszer
Leírás
Lépések
❄️
Kézi fagyasztás
Lépésről lépésre történő módszer, amely a sejtek életképességének biztosítása érdekében a hőmérséklet fokozatos csökkentésével jár
1️⃣ A sejteket fagyasztóközegben 40 percre 4 °C-os fagyasztóba helyezzük.
2️⃣ Tegyük át -80°C-os fagyasztóba 24 órára.
3️⃣ A sejteket folyékony nitrogénben tároljuk a hosszú távú megőrzés érdekében
❄️
Mr. Frosty használata
Kényelmes eszköz, amely lehetővé teszi a szabályozott fagyasztási sebességet elektromos áram nélkül
1️⃣ Készítse elő a sejteket fagyasztóközeggel ellátott kriovialokban.
2️⃣ Helyezze a krioüvegeket a Mr. Frosty tartályba.
3️⃣ Tárolja -80°C-on 24 órán keresztül, mielőtt átrakja folyékony nitrogénbe
❄️
Szabályozott sebességű fagyasztó
A Thermo Fisher vagy más gyártók nagy pontosságú fagyasztója, amelyet szabályozott hőmérsékletcsökkentésre terveztek
1️⃣ Programozza a készüléket a hőmérséklet fokozatos csökkentésére.
2️⃣ Helyezze az előkészített sejteket a fagyasztóba.
3️⃣ A fagyasztási ciklus után helyezze át a sejteket folyékony nitrogénbe
Tárolja a kriovialisokat -130°C alatti hőmérsékleten vagy folyékony nitrogénben a hosszú távú megőrzés érdekében.
Összetevők
FBS-t, DMSO-t, glükózt, sókat tartalmaz
Pufferkapacitás: pH = 7,2 és 7,6 között
A Cytion's Freeze Medium CM-1 megbízható megoldást kínál a kriokonzerváláshoz, biztosítva a sejtek magas életképességét és funkcionalitását a kiolvasztás után a kutatási alkalmazások széles skálájához.
- és csirkemájsejtek tenyésztését, különösen csökkentett szérumtartalmú körülmények között.
A Ham's F-12K (Kaighn's) médiumot gondosan összeállítottuk a sejttenyésztési feltételek optimalizálása érdekében. Dúsított összetétellel rendelkezik, amely megemelt szintet biztosít az olyan esszenciális összetevőkből, mint az aminosavak és a nátrium-piruvát, valamint további elemekből, köztük putreszcinből, timidinből, hipoxantinból és cinkből. Ezek a kiegészítések lehetővé teszik a kutatók számára, hogy a közeget minimális szérummal vagy meghatározott komponensekkel egészítsék ki a specifikus sejttípusok számára, megkönnyítve a pontos kísérleti feltételeket.
Figyelemre méltó, hogy a Ham's F-12K (Kaighn's) Medium nem tartalmaz fehérjéket vagy növekedési faktorokat. Következésképpen gyakran szükséges a növekedési faktorokkal és magzati szarvasmarha szérummal (FBS) való kiegészítés, ami lehetővé teszi a kutatók számára, hogy a médiumot az adott sejtvonalak követelményeihez igazítsák. Az optimális teljesítmény érdekében az FBS koncentrációját gondosan optimalizálni kell az egyes sejtvonalakhoz, biztosítva az optimális növekedést és funkcionalitást.
A fiziológiás pH fenntartása érdekében a Ham's F-12K (Kaighn's) médium nátrium-bikarbonát pufferrendszert alkalmaz (2,5 g/l), ami a tenyésztés során 5-10%-os, ellenőrzött CO2-környezetet tesz szükségessé. Ez biztosítja, hogy a táptalaj pH-ja a sejtek növekedése és életképessége szempontjából ideális tartományban maradjon
Minőségellenőrzés
pH = 7,2 +/
- 0,02 20-25°C-on.
Minden egyes tétel sterilitást, valamint mikoplazma
- és baktériummentességet vizsgáltak.
Karbantartás
Hűtve, +2°C és +8°C között, sötétben tárolva. A fagyasztás, valamint a +37°C-ig történő felmelegítés minimálisra csökkenti a termék minőségét.
Ne melegítse a táptalajt 37°C fölé, és ne használjon ellenőrizhetetlen hőforrásokat (pl. mikrohullámú készülékeket).
Ha a táptalajnak csak egy részét kívánja felhasználni, vegye ki ezt a mennyiséget az üvegből, és melegítse fel szobahőmérsékleten.
Az eltarthatósági idő a gyártási időponttól számított 8 hét bármelyik táptalaj esetében, kivéve az alap táptalajt.
Összetétel
Összetevők
mg/l
Szervetlen sók
Kalcium-klorid x 2H2O
135,24
Réz(II)szulfát x 5H2O
0,00
Vas(II)szulfát x 7H2O
0,83
Magnézium-klorid x 6H2O
105,72
Magnézium-szulfát x 7H2O
394,49
Kálium-klorid
283,29
Kálium-dihidrogén-foszfát
58,52
Nátrium-klorid
7597,20
di-nátrium-hidrogén-foszfátvízmentes
115,02
Cink-szulfát x 7H2O
0,14
Egyéb összetevők
D(+)-Glükóz vízmentes
1260,00
Hipoxantin
4,08
DL-α-Liponsav
0,21
Fenolvörös
3,00
Putreszcin x 2HCl
0,32
Nátrium-piruvát
220,00
NaHCO3
2500,00
Timidin
0,73
Aminosavak
L-Alanin
17,82
L-arginin x HCl
421,40
L-aszparagin x H2O
30,02
L-aszparaginsav
26,62
L-cisztein x HCl x H2O
70,24
L-Glutamin
292,20
L-Glutaminsav
29,42
Glicin
15,01
L-Hisztidin x HCl x H2O
41,92
L-izoleucin
7,87
L-Leucin
26,24
L-lizin x HCl
73,04
L-metionin
8,95
L-fenilalanin
9,91
L-prolin
69,06
L-szerin
21,02
L-treonin
23,82
L-triptofán
4,08
L-tirozin
10,87
L-Valin
23,42
Vitaminok
D(+)-Biotin
0,07
D-kalcium-pantotenát
0,48
Kolin-klorid
13,96
Folsav
1,32
myo-Inozitol
18,02
Nikotinamid
0,04
Piridoxin x HCl
0,06
Riboflavin
0,04
Tiamin x HCl
0,34
B12-vitamin
1,36
A foszfátpufferelt sóoldat (PBS) a biológiai és kémiai kutatásokban széles körben használt pufferoldat. Fontos szerepet játszik a pH-egyensúly és az ozmolaritás fenntartásában a különböző kísérleti eljárások során, beleértve a szövetfeldolgozást és a sejttenyésztést. PBS-oldatunkat nagy gondossággal, nagy tisztaságú összetevőkkel állítjuk össze, hogy minden kísérletben biztosítsuk a stabilitást és a megbízhatóságot. PBS-ünk ozmolaritása és ionkoncentrációja szorosan utánozza az emberi szervezetben uralkodó értékeket, így izotóniás és a legtöbb sejtre nem mérgező.
PBS-oldatunk összetétele
A PBS oldatunk ultratisztaságú foszfátpufferek és sóoldatok pH-értékre beállított keveréke. Az 1X munkakoncentrációban a következőket tartalmazza:
8000 mg/l nátrium-klorid (NaCl)
200 mg/l kálium-klorid (KCl)
1150 mg/L nátrium-foszfát kétbázisú vízmentes (Na2HPO4)
200 mg/L Kálium-foszfát monobázikus vízmentes (KH2PO4)
Ez az összetétel optimális pH
- és ionegyensúlyt biztosít, amely a biológiai alkalmazások széles köréhez alkalmas.
A PBS-oldatunk alkalmazásai
PBS-oldatunk ideális a biológiai kutatások különböző alkalmazásaihoz. Izotóniás és nem toxikus tulajdonságai alkalmassá teszik az anyagok hígítására és a sejttartályok öblítésére. Az EDTA-t tartalmazó PBS-oldatok hatékonyan oldják a megtapadt és csomósodott sejteket. Kétértékű fémeket, például cinket azonban nem szabad a PBS-hez adni, mivel ez csapadékképződést okozhat. Ilyen esetekben a Good pufferek használata ajánlott. Ezenkívül a PBS-oldatunk elfogadható alternatívája a vírusszállító közegnek az RNS-vírusok, köztük a SARS-CoV-2 szállítására és tárolására.
Minőségellenőrzés
Steril szűrt
Tárolás és eltarthatósági idő
Tárolja +2°C és +25°C között, fénytől védve.
Felbontás után 2°C és 25°C között tárolja, és 24 hónapon belül használja fel.
Szállítási feltételek
Környezeti hőmérséklet
Karbantartás
Hűtve, +2°C és +8°C között, sötétben tárolja. Kerülje a fagyasztást és a gyakori melegítést +37°C-ra, mivel ez csökkenti a termék minőségét.
Ne melegítse a közeget 37°C fölé, és ne használjon ellenőrizetlen hőforrásokat, például mikrohullámú készülékeket.
Ha a táptalajnak csak egy részét kívánja felhasználni, vegye ki a szükséges mennyiséget, és felhasználás előtt melegítse fel szobahőmérsékletűre.
Összetétel
Kategória
Összetevők
Koncentráció (mg/l)
Sók
Kálium-klorid
200
Kálium-foszfát monobázikus vízmentes
200
Nátrium-klorid
8000
Nátrium-foszfát kétbázisú, vízmentes
1150
Az RPMI 1640 médiumot eredetileg humán leukémiás sejtek szuszpenziós és monolayer kultúrákban történő növekedésének támogatására tervezték, de a kutatók és a kereskedelmi beszállítók módosításai révén azóta az emlőssejtek sokféle fajtájához alkalmassá vált. Kivételesen kompatibilis az olyan sejtvonalakkal, mint a HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, asztrociták és karcinómák.
Az RPMI 1640 médium egyedi összetétele miatt különbözik más sejttenyésztő médiumoktól. Jelentős mennyiségű foszfátot, aminosavakat és vitaminokat tartalmaz. Különösen biotint, B12-vitamint és PABA-t tartalmaz, amelyek hiányoznak az Eagle's Minimal Essential Mediumból vagy a Dulbecco's Modified Eagle Mediumból. Továbbá az RPMI 1640 Medium jelentősen megemelkedett koncentrációban tartalmaz inozitol és kolin vitaminokat. Nem tartalmaz azonban fehérjéket, lipideket vagy növekedési faktorokat. Következésképpen a sejtnövekedés optimális feltételeinek biztosításához általában 10%-os magzati szarvasmarha-szérummal (FBS) való kiegészítésre van szükség.
Az RPMI 1640 médium pufferrendszere nátrium-bikarbonátra támaszkodik, és 5-10%-os CO2-környezetet igényel a fiziológiailag megfelelő pH fenntartásához. A glutation redukálószer beépítése tovább különbözteti meg ezt a táptalajt a többitől.
Minőségellenőrzés
Steril szűrt
Tárolás és eltarthatóság
+2°C és +8°C között, fénytől védve tárolja.
Felbontás után 4°C-on tárolja, és 6-8 héten belül használja fel.
Szállítási feltételek
Környezeti hőmérséklet
Karbantartás
Hűtve, +2°C és +8°C között, sötétben tárolja. Kerülje a fagyasztást és a gyakori melegítést +37°C-ra, mivel ez csökkenti a termék minőségét.
Ne melegítse a közeget 37°C fölé, és ne használjon ellenőrizetlen hőforrásokat, például mikrohullámú készülékeket.
Ha a táptalajnak csak egy részét kívánja felhasználni, vegye ki a szükséges mennyiséget, és felhasználás előtt melegítse fel szobahőmérsékletűre.
Összetétel
Kategória
Összetevők
Koncentráció (mg/l)
Aminosavak
Glicin
10.00
L-Alanil-L-Glutamin
434.40
L-arginin
200.00
L-aszparaginH2O
56.82
L-aszparaginsav
20.00
L-cisztin 2HCl
65.20
L-Glutaminsav
20.00
L-Hisztidin HClH2O
20.27
L-hidroxi-L-prolin
20.00
L-izoleucin
50.00
L-Leucin
50.00
L-lizin HCl
40.00
L-metionin
15.00
L-fenilalanin
15.00
L-Prolin
20.00
L-szerin
30.00
L-treonin
20.00
L-triptofán
5.00
L-Tirozin 2Na 2H2O
28.83
L-Valin
20.00
Vitaminok
p-Amino benzoesav
1.00
D-Biotin
0.20
Kolinklorid
3.00
D-kalcium-pantotenát
0.25
Folsav
1.00
myo-Inozitol
35.00
Nikotinamid
1.00
Piridoxin HCl
1.00
Riboflavin
0.20
Tiamin HCl
1.00
B12-vitamin
0.005
Szervetlen sók
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Egyéb összetevők
D-Glükóz
2000.00
L-Glutation redukált
1.00
Fenolvörös nátriumsó
5.30
Ez az egyedülálló készítmény a Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) és a Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) tápanyagot pontosan 1:1 arányban kombinálja. Az L-glutamin hozzáadása tovább javítja az összetételét.
Az EMEM-ből (Eagle's Minimal Essential Medium) származó DMEM az elődjéhez képest megnövelt aminosav
- és vitaminkoncentrációt kínál. Ezzel szemben a Ham's F-12 a Ham's F-10 táptalajon alapul, és az esszenciális komponensek kiegészítő készletét biztosítja.
Az optimális sejtnövekedés támogatása érdekében a DMEM:Ham's F12-t szokás FBS-szel kiegészíteni, jellemzően 5-10%-os koncentrációban. Erre a kiegészítésre azért van szükség, mert a táptalajból hiányoznak a növekedési hormonok, lipidek és a sejtek fejlődéséhez elengedhetetlen fehérjék.
A DMEM:Ham's F12 tartalmaz egy pH-pufferrendszert, és gyakran kiegészítik fenolvörössel, egy pH-indikátorral. A DMEM:Ham's F12-ben vagy bármely, a bikarbonát pufferrendszert használó táptalajban tenyésztett sejteknek 5-10%-os ellenőrzött CO2-környezetre van szükségük a megfelelő pH-szint fenntartásához.
Minőségellenőrzés
Steril szűrt
Tárolás és eltarthatóság
+2°C és +8°C között, fénytől védve tárolja.
Felbontás után 4°C-on tárolja, és 6-8 héten belül használja fel.
Szállítási feltételek
Környezeti hőmérséklet
Karbantartás
Hűtve, +2°C és +8°C között, sötétben tárolja. Kerülje a fagyasztást és a gyakori melegítést +37°C-ra, mivel ez csökkenti a termék minőségét.
Ne melegítse a közeget 37°C fölé, és ne használjon ellenőrizetlen hőforrásokat, például mikrohullámú készülékeket.
Ha a táptalajnak csak egy részét kívánja felhasználni, vegye ki a szükséges mennyiséget, és felhasználás előtt melegítse fel szobahőmérsékletűre.
Összetétel
Kategória
Összetevők
Koncentráció (mg/l)
Aminosavak
Glicin
18.75
L-alanin
4.45
L-arginin HCl
147.50
L-aszparagin H₂O
7.50
L-aszparaginsav
6.65
L-cisztein HCl H₂O
17.56
L-cisztin 2 HCl
31.29
L-Glutaminsav
7.35
L-Glutamin
365.00
L-Hisztidin HCl H₂O
31.48
L-izoleucin
54.47
L-Leucin
59.05
L-lizin HCl
91.25
L-metionin
17.24
L-fenilalanin
35.48
L-prolin
17.25
L-szerin
26.25
L-treonin
53.45
L-triptofán
9.02
L-tirozin dinátrium só
48.10
L-Valin
52.85
Vitaminok
D-Biotin
0.0035
Kolinklorid
8.98
D-kalcium-pantotenát
2.24
Folsav
2.66
myo-Inozitol
12.60
Nikotinamid
2.02
Piridoxin HCl
0.031
Piridoxál HCl
2.00
Riboflavin
0.219
Tiamin HCl
2.17
B12-vitamin
0.68
Szervetlen sók
CaCl₂ 2 H₂O
154.50
CuSO₄ 5 H₂O
0.0013
Fe(NO₃)₃ 9 H₂O
0.05
FeSO₄ 7 H₂O
0.417
KCl
311.80
MgCl₂ 6 H₂O
61.20
MgSO₄
48.84
NaCl
6996.00
NaHCO₃
1200.00
Na₂HPO₄
71.02
NaH₂PO₄
54.30
ZnSO₄ 7 H₂O
0.432
Egyéb komponensek
D-Glükóz
3151.00
Hipoxantin
2.40
HEPES
3574.50
Linolsav
0.042
Liponsav
0.105
Fenolvörös nátriumsó
8.63
Putreszcin 2 HCl
0.081
Nátrium-piruvát
55.00
Timidin
0.365
- 0,02 20-25 °C-on. Minden tétel sterilitását, valamint mikoplazma és baktériumok hiányát tesztelték. Tárolás Hűvös helyen, +2 °C és +8 °C között tárolandó. A fagyasztás és a +37 °C-ra történő felmelegítés rontja a termék minőségét. Ne melegítse a táptalajt 37 °C fölé, és ne használjon ellenőrizhetetlen hőforrásokat (pl. mikrohullámú sütőt). Ha csak a táptalaj egy részét kívánja felhasználni, vegye ki azt a palackból, és melegítse szobahőmérsékletre. Az alapközeg kivételével minden közeg szavatossági ideje a felnyitástól számított 6–8 hét. Összetétel Összetevők mg/L Szervetlen sókKalcium-klorid x 2H2O132,00 Magnézium-szulfát97,67 Kálium-klorid400 Nátrium-klorid6460 Dinátrium-hidrogén-foszfát (vízmentes)504,00 Egyéb összetevőkD(+)-glükóz (vízmentes)3 000,00 Glutation (redukált)0,5 Húspepton600,00 Fenol-vörös nátriumsó11 AminosavakL-alanin13,36 L-arginin x HCl42,14 L-aszparagin x H2O45,03 L-aszparaginsav19,97 L-cisztein x HCl x H2O31,75 L-glutamin (stabil)219,15 L-glutaminsav22,07 Glicin7,51 L-hisztidin x HCl x H2O20,96 L-hidroxiprolin19,67 L-izoleucin39,36 L-leucin39,36 L-lizin x HCl36,54 L-metionin14,92 L-fenilalanin16,52 L-prolin17,27 L-szerine26,28 L-treonin17,87 L-triptofán3,06 L-tirozin-dinátrium-só26,10 L-valin17,57 Vitaminokp-Aminobenzoesav1,0 Aszkorbinsav0,56 D(+)-biotin0,20 D-kalcium-pantotenát0,20 Kolin-klorid5,0 Folsav10 mio-inozitol36 Nikotinamid0,5 Nikotinsav0,5 Piridoxál-HCl0,50 Piridoxin-HCl0,50 Riboflavin0,2 Tiamin-HCl0,2 B12-vitamin2,00
A 199-es médium számos alkalmazási lehetőséget kínál a területen. Hatékonyan képes fenntartani a kumulus-oocita komplexet (COC) és támogatni az oociták in vitro érését. Ezenkívül a német holstein tehenekből történő petesejtgyűjtés során az aspirációs vonalak öblítésénél is alkalmazzák. A Medium 199 továbbá kiváló táptalajként szolgál a patkányokból származó szív endotélsejtek tenyésztéséhez. Ezek az alkalmazások bizonyítják a Medium 199 sokoldalúságát és alkalmazkodóképességét a különböző kísérleti igényekhez.
Történet
A Medium 199 kifejlesztése az 1950-es években jelentős előrelépést jelentett a szövettenyésztő közegek terén. Bevezetése előtt számos tenyésztőközeg állati eredetű termékekre és szövetkivonatokra támaszkodott. Morgan és munkatársai azonban forradalmasították a területet azzal, hogy egy teljesen meghatározott tápanyagforrást fogalmaztak meg a sejtkultúrák számára. A vitaminok, aminosavak és egyéb tényezők különböző kombinációival végzett kísérleteik során felfedezték a Medium 199 kivételes növekedésserkentő tulajdonságait.
Minőségellenőrzés
pH = 7,2 +/
- 0,02 20-25°C-on.
Minden egyes tétel sterilitását, valamint mikoplazma
- és baktériummentességét vizsgálták.
Karbantartás
Hűtve, +2°C és +8°C között, sötétben tárolva. A fagyasztás és a melegítés +37°C-ig minimalizálja a termék minőségét.
Ne melegítse a táptalajt 37° C-nál magasabbra, és ne használjon ellenőrizhetetlen hőforrásokat (pl. mikrohullámú készülékeket).
Ha a táptalajnak csak egy részét kívánja felhasználni, vegye ki ezt a mennyiséget az üvegből, és melegítse fel szobahőmérsékleten.
Az eltarthatósági idő az alapközeg kivételével bármelyik táptalaj esetében a gyártás dátumától számított 8 hét.
Összetétel
Összetevők
mg/l
Szervetlen sók
Kalcium-klorid x 2H2O
264,92
Vas(III)nitrát x 9H2O
0,72
Magnézium-szulfát
97,67
Kálium-klorid
400,00
Nátrium-acetát x 3H2O
82,95
Nátrium-klorid
6,800.00
Nátrium-dihidrogén-foszfát x H2O
140,00
Egyéb összetevők
Adenin-szulfát
10,00
AMP
0,20
ATP
1,00
Koleszterin
0,20
2'-Deoxiribóz
0,50
D(+)-Glükóz vízmentes
1,000.00
Glutation (vörös)
0,05
Guanin x HCl
0,30
Hipoxantin
0,30
Fenolvörös
10,00
D-Ribóz
0,50
Thymin
0,30
Tween 80
4,90
Uracil
0,30
Xantin
0,30
NaHCO3
2,200.00
Aminosavak
L-Alanin
25,00
L-arginin x HCl
70,00
L-aszparaginsav
30,00
L-cisztein x HCl x H2O
0,10
L-cisztin
20,00
L-Glutamin stabil
149,00
L-Glutaminsav
67,00
Glicin
50,00
L-Hisztidin x HCl x H2O
21,88
L-hidroxiprolin
10,00
L-izoleucin
20,00
L-Leucin
60,00
L-lizin x HCl
70,00
L-metionin
15,00
L-fenilalanin
25,00
L-prolin
40,00
L-szerin
25,00
L-treonin
30,00
L-triptofán
10,00
L-tirozin
40,00
L-Valin
25,00
Vitaminok
4-Amino benzoesav
0,05
Aszkorbinsav
0,05
D(+)-Biotin
0,01
Kalciferol
0,10
D-kalcium-pantotenát
0,01
Kolin-klorid
0,50
Folsav
0,01
myo-Inozitol
0,05
Menadion
0,01
Nikotinsav
0.025
Nikotinamid
0.025
Piridoxal x HCl
0.025
Piridoxol x HCl
0.025
Riboflavin
0,01
DL-α-tokoferol-foszfát-dinátrium só
0,01
Tiamin x HCl
0,01
A-vitamin-acetát
0,14
Az IMDM jól alkalmazható gyorsan proliferáló, nagy sűrűségű sejtkultúrákhoz, beleértve a Jurkat, COS-7 és makrofág sejteket. Az IMDM különböző sejttenyésztési alkalmazásokhoz rendelkezésre álló különböző módosításai megtalálhatók a médiaválasztó eszköz segítségével. A folyékony médiumok alapvető tápanyagokat biztosítanak minden sejttenyésztési alkalmazáshoz. Minden egyes kiváló minőségű sejttenyésztő táptalajunkat az eredetileg közzétett receptúra vagy a táptalaj konzisztens teljesítményéhez és stabilitásához szükséges módosítások szerint állítjuk elő.
IMDM vs. DMEM
Az IMDM vas-nitrát helyett kálium-nitrátot, valamint HEPES-t és nátrium-piruvátot tartalmaz. Az IMDM-ben lévő további összetevők miatt az IMDM alkalmasabb speciális sejttípusok és speciális alkalmazások számára, mint a DMEM.
IMDM vs. RPMI
Az IMDM és az RPMI eltérő összetételű, ami a PMA/ionomicin stimuláció szempontjából fontos lehet. Az egyik jelentős különbség a Ca2+ koncentrációja. Míg az RPMI 0,42 mM Ca2+-t tartalmaz, addig az IMDM 1,49 mM-ot.
Minőségellenőrzés
pH = 7,2 +/
- 0,02 20-25°C-on.
Minden egyes tétel sterilitási, valamint mikoplazma
- és baktériummentességi vizsgálaton esett át.
Karbantartás
Hűtve, +2°C és +8°C között, sötétben tárolva. A fagyasztás és a melegítés +37°C-ig minimalizálja a termék minőségét.
Ne melegítse a táptalajt 37° C-nál magasabbra, és ne használjon ellenőrizhetetlen hőforrásokat (pl. mikrohullámú készülékeket).
Ha a táptalajnak csak egy részét kívánja felhasználni, vegye ki ezt a mennyiséget az üvegből, és melegítse fel szobahőmérsékleten.
Az alapközeg kivételével bármelyik táptalaj eltarthatósági ideje a gyártás dátumától számított 8 hét.
Összetétel
Összetevők
mg/l
Szervetlen sók
Kalcium-klorid x 2 H2O
219,00
Kálium-klorid
330,00
Kálium-nitrát
0.076
Magnézium-szulfát vízmentes
97,73
Nátrium-klorid
4,505.00
Nátrium-dihidrogén-foszfát vízmentes
109,00
Nátrium-szelenit
0,02
Egyéb összetevők
D(+)-Glükóz vízmentes
4,500.00
HEPES
5,958.00
Nátrium-piruvát
110,00
Fenolvörös
15,00
Aminosavak
L-alanin
25,00
L-arginin x HCl
84,00
L-aszparagin x H2O
25,00
L-aszparaginsav
30,00
L-cisztin x 2HCl
91,24
L-Glutamin
584,00
L-Glutaminsav
75,00
Glicin
30,00
L-Hisztidin x HCl x H2O
42,00
L-izoleucin
104,80
L-Leucin
104,80
L-lizin x HCl
146,20
L-metionin
30,00
L-fenilalanin
66,00
L-prolin
40,00
L-szerin
42,00
L-treonin
95,20
L-triptofán
16,00
L-tirozin x 2Na
104,20
L-Valin
93,60
Vitaminok
D(+)-Biotin
0.013
D-kalcium-pantotenát
4,00
Kolin-klorid
4,00
Folsav
4,00
myo-Inozitol
7,20
Sejttenyésztő közegek: Áttekintés
Az élettudományok területén az egyik legfontosabb módszer a sejttenyésztés. A sejtek, szövetek vagy szervek eltávolítása egy állatból vagy növényből, majd a sejtek, szövetek vagy szervek beültetése olyan mesterséges környezetbe, amely kedvező a túlélésük és/vagy növekedésük szempontjából, ezt jelenti a "sejtkultúra" kifejezés Az optimális sejtfejlődéshez szükséges alapvető környezeti követelmények a szabályozott hőmérséklet, a sejtek rögzítéséhez szükséges szubsztrátum, a megfelelő növekedési táptalaj és az optimális pH-értéket és ozmolalitást fenntartó inkubátor. A sejteknek ezekkel a feltételekkel kell rendelkezniük ahhoz, hogy teljes potenciáljukat kiaknázva növekedhessenek.
Az in vitro tenyésztéshez szükséges megfelelő táptalaj kiválasztása a sejttenyésztés legkritikusabb és leglényegesebb szakasza. A növekedési közeg, más néven táptalaj, olyan folyadék vagy gél, amelyet úgy alakítottak ki, hogy elősegítse az organizmusok fejlődését mikroszkopikus, sejtes vagy növényszerű léptékben. A sejtek tenyésztéséhez használt táptalaj gyakran tartalmaz megfelelő mennyiségű energiát és a sejtciklust szabályozó anyagokat. A táptalaj fő összetevői közé tartoznak az aminosavak, vitaminok, szervetlen sók, glükóz és szérum. A szérumot azért adják a táptalajhoz, mert az a növekedési faktorok, hormonok és kötődési faktorok forrásaként szolgál. A tápanyagok biztosítása mellett a táptalaj hozzájárul a pH- és az ozmolalitás szintjének fenntartásához is.
A sejttenyésztésben használt táptalajok típusai
Mind az emberi, mind az állati sejtek tenyésztése történhet mesterséges vagy szintetikus táptalajban, illetve teljesen természetes, természetes elemekkel kiegészített táptalajban. A következőkben áttekintést adunk a jelenleg elérhető különböző táptalajtípusokról.
Természetes közegek
Természetes táptalajban csak olyan biológiai folyadékok találhatók, amelyek természetes állapotukban léteznek. A természetes közegek nagyon hasznosak és egyszerűek az állati sejttípusok széles körének tenyésztéséhez. A természetes táptalajokat alkotó pontos összetevők ismeretének hiánya az elsődleges tényező, amely hozzájárul a természetes táptalajok használatával kapott eredmények alacsony megismételhetőségéhez.
Mesterséges táptalajok
A mesterséges vagy szintetikus táptalajok előállítása tápanyagok (szerves és szervetlen), szérumfehérjék, szénhidrátok, kofaktorok, vitaminok és sók, valamint O2 és CO2 gázfázisok hozzáadásával történik [1].
Különböző típusú mesterséges közegeket fejlesztettek ki az alábbi funkciók közül egy vagy több betöltésére: 1) Azonnali túlélés (kiegyensúlyozott sóoldat pontos pH-val és ozmotikus nyomással). 2) Hosszan tartó túlélés (kiegyensúlyozott sóoldat, amelyet szerves vegyi anyagok és/vagy szérum különböző formuláival egészítenek ki). 3) Határozatlan ideig tartó fejlődés. 4) Speciális funkciók.
A mesterséges táptalajok négy különböző osztályozása létezik:
Szérumtartalmú táptalajok
Az állati sejtek tenyésztésére használt táptalajokban leggyakrabban előforduló kiegészítés a magzati szarvasmarha-szérum. Ezt olcsó kiegészítésként adják a táptalajhoz a lehető legjobb növekedési feltételek elérése érdekében. Amellett, hogy a szérum az instabil vagy vízben nem oldódó tápanyagok, hormonok és növekedési faktorok, proteázgátlók és egyéb anyagok transzportereként vagy kelátorként működik, a szérum a káros molekulákat is megköti és semlegesíti.
Szérummentes közeg
A szérum jelenléte a táptalajban számos hátrányt jelent, és az immunológiai kutatások során jelentős értelmezési hibákat okozhat [2, 3]. Számos különböző szérummentes közeget hoztak létre [4, 5]. Ezek a táptalajok általában kifejezetten egy-egy sejttípus tenyésztésének támogatására vannak kifejlesztve, mint például a Thermo Fisher Scientific cég Knockout Serum Replacement és Knockout DMEM tápközege, valamint a Stem Cell Technologies [6] mTESR tápközege őssejtek számára [7].
Ezenkívül ezek a táptalajok meghatározott mennyiségű tisztított növekedési faktorokat, lipoproteineket és egyéb fehérjéket tartalmaznak, amelyeket egyébként jellemzően a szérum biztosít [8]. Ezeket a táptalajokat gyakran "definiált kulturális táptalajoknak" nevezik, mivel az ezeket a táptalajokat alkotó összetevők jól ismertek.
Kémiailag meghatározott táptalajok
Ezek a táptalajok olyan ultra-tiszta szervetlen és szerves komponenseket tartalmaznak, amelyeket semmilyen szennyeződés nem szennyezett. Tartalmazhatnak tiszta fehérjeadalékokat is, például növekedési faktorokat.
a baktériumok vagy élesztők genetikai módosítása, valamint bizonyos zsírsavak, vitaminok, koleszterin és aminosavak hozzáadása az alkotóelemeik előállítását eredményezi [9].
Fehérje nélküli közegek
A fehérjeszegény táptalajok azok, amelyek egyáltalán nem tartalmaznak fehérjét, és helyette csak nem fehérjeelemeket tartalmaznak. A hozzáadott szérumot tartalmazó médiumokkal összehasonlítva a hozzáadott fehérjét nem tartalmazó médiumok használata elősegíti a nagyobb sejtproliferációt és fehérjeexpressziót, és megkönnyíti a későbbi folyamat során keletkező bármely termék tisztítását [10-12]. Az olyan készítmények, mint a MEM és az RPMI-1640, nem tartalmaznak fehérjét. Szükség esetén azonban fehérjekiegészítés adható.
A táptalaj és alapvető összetevői
A kereskedelmi táptalajok megvásárolhatók por vagy folyadék formájában, és gyakran tartalmaznak különféle tápanyagokat, például aminosavakat, glükózt, sókat, vitaminokat és egyéb táplálékkiegészítőket.
Ezeknek az összetevőknek az igénye minden sejtvonal esetében más és más, és ezek a variációk felelősek a tápközegek nagyszámú különböző összetételéért. Minden összetevő egy bizonyos funkcióért felelős, amelyet a következő bekezdésekben ismertetünk:
Pufferrendszerek
Az optimális tenyésztési feltételek fenntartásához a pH-t szabályozni kell, amit gyakran két pufferrendszer valamelyikével tesznek:
Természetes pufferrendszer
A légkörben lévő CO2/H2CO3 arány megegyezik a közegben lévővel, ami egy természetes puffermechanizmust hoz létre. A természetes puffermechanizmus megőrzése érdekében a kultúrákat 5-10% CO2-t tartalmazó légkörben kell tartani, amit gyakran CO2 inkubátorral érnek el. Az egyik legjobb dolog a természetes puffer használatában az, hogy mennyire olcsó és biztonságos.
HEPES
A HEPES nevű zwitteriont használó kémiai pufferelés nagyobb pufferelési képességgel rendelkezik a 7,2-7,4 pH-tartományban, és nincs szüksége szabályozott gázos környezetre. Bizonyos sejttípusok esetében a HEPES nagyobb dózisa káros lehet. A HEPES-t tartalmazó közegek szintén sokkal érzékenyebbek a fluoreszcens fény fototoxikus hatásaira [13].
Fenolvörös
A pH-indikátor fenolvörös gyakran szerepel a kereskedelemben kapható táptalajban, lehetővé téve a pH folyamatos nyomon követését. A sejtek terjeszkedésével a sejtek által termelt metabolitok a pH eltolódását és ezáltal a közeg színének változását okozzák. A fenolvörös kettős hatást gyakorol a táptalaj színére: savas pH-nál sárgává, lúgos pH-nál lilává változtatja azt. 7,4-es pH, a sejttenyésztés optimális értéke miatt a táptalaj fluoreszkáló vörös színűvé válik.
A fenolvörösnek azonban van néhány hátránya: Először is, a fenolvörös képes szimulálni számos szteroid hormon, elsősorban az ösztrogén működését [14]. Ezért az ösztrogénre érzékeny sejtek, például az emlőszövet tanulmányozásakor fenolvörös-mentes táptalaj ajánlott. A nátrium-kálium egyensúlyt a fenolvörös jelenléte számos szérummentes készítményben megbontja. Szérum vagy szarvasmarha hipofízis hormon hozzáadása a táptalajhoz ellensúlyozhatja ezt a hatást [15]. Harmadszor, az áramlási citometriai kísérletekben a fenolvörös jelenléte akadályozza a detektálást.
Szervetlen sók
A szervetlen sókat, például nátrium-, kálium- és kalciumionokat tartalmazó közegek segítik az ozmotikus egyensúly fenntartását és a membránpotenciál szabályozását.
Aminosavak
Mivel az aminosavak a fehérjék alapvető alkotóelemei, minden egyes sejtnövesztő közegnek, amelyet valaha is kitaláltak, nélkülözhetetlen összetevői. Mivel a sejtek bizonyos aminosavakat nem képesek saját maguk előállítani, fontos, hogy a táptalaj esszenciális aminosavakat tartalmazzon. Ezek szükségesek a sejtek szaporodásához, és a koncentráció, amelyben jelen vannak, meghatározza az elérhető maximális sejtsűrűséget. Különösen az L-glutamin, egy esszenciális aminosav különösen fontos.
Az L-glutamin az anyagcsere másodlagos energiaforrásaként működik, és hozzájárul a nitrogénnel a NAD, a NADPH és a nukleotidok előállításához. Mivel az L-glutamin instabil aminosav, amely idővel olyan formába változik, amelyet a sejtek nem tudnak hasznosítani, ezért a közegbe kell juttatni.
Ezenkívül nem esszenciális aminosavakat is be lehet juttatni a közegbe, hogy feltöltsék azokat, amelyek a növekedési folyamat során elhasználódtak. A sejtek növekedése felgyorsul és életképességük megnő, ha a táptalajt nem esszenciális aminosavakkal egészítik ki.
Szénhidrátok
A szénhidrátok cukor formájában a fő energiaforrás. Sok táptalaj tartalmaz maltózt és fruktózt is az elterjedtebb cukrok, a glükóz és a galaktóz mellett.
Fehérjék és peptidek
Az albumin, a transzferrin és a fibronectin a leggyakrabban használt fehérjék és peptidek. Különösen jelentősek azokban a közegekben, amelyek nem tartalmaznak szérumot. Az albumin, a transzferrin, az aprotinin, a fetuin és a fibronectin néhány olyan fehérje, amely a fehérjékben gazdag szérumban megtalálható.
Az albumin a vérben található elsődleges fehérje, és feladata a különböző anyagok, köztük a víz, a sók, a szabad zsírsavak, a hormonok és a vitaminok megkötése és szállítása a különböző szervek és sejtek között. Az albumin vegyi anyagokhoz való kötődési képessége miatt hatékony jelölt a káros vegyületek eltávolítására abból a közegből, amelyben a sejteket tenyésztik.
Az aprotinin védőanyag a sejttenyésztési rendszerekben, mivel semleges és savas pH-n stabil, valamint ellenáll a magas hőmérsékletnek és a proteolitikus enzimek által okozott pusztításnak. Számos szerinproteáz, többek között a tripszin gátlására képes.
A fetuin egy glikoprotein, amely a magzati és újszülött állatok szérumában nagyobb mennyiségben mutatható ki, mint a felnőtt állatok szérumában. Ezen kívül szerinproteáz-inhibitorként is működik. A fibronectin fehérje a sejtadhézió folyamatának lényeges összetevője. A transzferrin egy vasat szállító fehérje, amely a vasnak a sejtmembránokhoz való eljuttatásáért felelős.
Zsírsavak és lipidek
A szérummentes közegben szérum hiányában döntő szerepet játszanak.
Vitaminok
Számos vitamin szükséges a sejtek fejlődéséhez és szaporodásához. A vitaminokat a sejtek nem tudják megfelelő mennyiségben előállítani, ezért a szövettenyészetben táplálékkiegészítőként nélkülözhetetlenek.
A sejtkultúrában a szérum az elsődleges vitaminforrás; a táptalajokat azonban különböző vitaminokkal is kezelik, hogy egy adott sejttípus számára alkalmassá tegyék őket. Legjellemzőbben a B-csoportba tartozó vitaminokat használják a növekedés serkentésére.
Nyomelemek
Az olyan kémiai elemeket, mint a réz, a cink, a szelén és a trikarbonsav intermedierek nyomelemekként ismertek. A nyomelemeket gyakran adják a szérumot nem tartalmazó közegekhez, hogy helyettesítsék a szérumban jellemzően jelenlévő elemeket. Ezek az elemek fontos kémiai összetevők, amelyek szükségesek az egészséges sejtfejlődéshez. Számos biokémiai reakció függ bizonyos mikrotápanyagoktól, például az enzimaktivitás.
Közegkiegészítők
Az egyes sejtvonalakhoz javasolt teljes növekedési táptalajnak olyan extra összetevőkre van szüksége, amelyek hiányoznak az alap táptalajból és a szérumból. Ezek az étrend-kiegészítők támogatják a sejtnövekedést és a megfelelő anyagcsere-funkciókat.
Bár a hormonok, növekedési faktorok és jelátviteli molekulák elengedhetetlenek az egyes sejtvonalak megfelelő szaporodásához, a következő óvintézkedéseket mindig meg kell tenni: Mivel a kiegészítők hozzáadása megváltoztathatja a teljes táptalaj ozmolalitását, ami gátolhatja a sejtek fejlődését, a kiegészítők hozzáadása után mindig célszerű ellenőrizni az ozmolalitást. A legtöbb sejtvonal esetében az optimális ozmolalitás 260 és 320 mOSM/kg között van.
Antibiotikumok
Az antibiotikumokat gyakran alkalmazzák a bakteriális és gombás szennyeződések fejlődésének gátlására [16], bár a sejtnövekedéshez nem nélkülözhetetlenek. Mivel az antibiotikumok a mikoplazma és rezisztens baktériumok általi szennyeződést rejthetnek magukban, rutinszerű alkalmazásuk nem javasolt a sejttenyésztésben [17, 18].
Ezenkívül az antibiotikumok megzavarhatják a túlérzékeny sejtek anyagcseréjét. A MilliporeSigma és a Life Technologies által gyártott penicillin-streptomicin kombinációkat gyakran használják. A plazmocint a TS603, TS516 és BT260 glióma-sejtvonalak tenyésztésében használták [19], és hatásosnak bizonyult a mikoplazma-szennyeződés eltávolításában [20].
Szérum
A szérumban albuminok, növekedési faktorok és növekedési inhibitorok vannak jelen. A szérum a sejttenyésztő táptalaj egyik legjelentősebb összetevője, mivel aminosavakat, fehérjéket, vitaminokat (különösen a zsírban oldódó vitaminokat, mint az A, D, E és K), szénhidrátokat, lipideket, hormonokat, növekedési faktorokat, ásványi anyagokat és nyomelemeket tartalmaz.
A tenyésztett sejtek fejlődésének elősegítésére gyakran használnak magzati és borjúszarvasmarha-forrásból származó szérumot. A magzati szérum bőségesen tartalmaz növekedési faktorokat, és alkalmas sejtklónozásra és érzékeny sejtek fejlesztésére. Csökkentett növekedésserkentő képességei miatt a borjúszérumot a kontaktgátlási kísérletekben alkalmazzák. A normál növekedési táptalajok gyakran tartalmaznak 2-10% szérumot. A szérum hozzáadása a táptalajhoz a következő célokat szolgálja [21]:
-
A szérum biztosítja a sejtek számára az alapvető tápanyagokat (mind oldatban, mind fehérjékhez kötve).
-
A szérumban számos, a növekedés elősegítésében és a speciális sejtaktivitásban szerepet játszó növekedési faktor és hormon található.
-
Számos kötőfehérjét kínál, mint például az albumin és a transzferrin, amelyek más vegyi anyagokat szállítanak a sejtbe. Az albumin például zsírokat, vitaminokat, hormonokat stb. szállít a sejtekbe.
-
Olyan fehérjéket is biztosít, mint például a fibronectin, amelyek növelik a sejtek tapadását a hordozóhoz. Ezenkívül olyan terjedési elemeket termel, amelyek segítik a sejtek osztódás előtti terjeszkedését.
-
Olyan proteázgátlókat szállít, amelyek megakadályozzák a sejtek proteolízisét.
-
Olyan ásványi anyagokat is tartalmaz, mint a Na+, K+, Zn2+ és Fe2+.
-
Növeli a közeg viszkozitását, így védi a sejteket a mechanikai sérüléstől a szuszpenziós kultúra keverése során.
-
Ez egyben puffer is.
Hivatkozások
[1] Morgan J, Morton H, Parker R. Nutrition of animal cells in tissue culture; initial studies on a synthetic medium. Proc Soc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1-8
[2] Kerbel R, Blakeslee D. Egy magzati borjúszérum komponens gyors adszorpciója emlőssejtek által tenyésztésben. A sejtspecifikus antigénekkel szembeni antisérák vizsgálatának lehetséges műtermékforrása. Immunology. 1976;31:881-91
[3] Sula K, Draber P, Nouza K. A szérum hozzáadása a sejtszuszpenziók előállításához használt táptalajhoz, mint a sejtközvetített reakciók lehetséges műtermékforrása a popliteális nyirokcsomó teszt segítségével vizsgált sejtközvetített reakciókban. J Immunogenet. 1980;7:483-9
[4] Mariani E, Mariani A, Monaco M, Lalli E, Vitale M, Facchini A. Kereskedelmi szérummentes táptalajok: hibridóma növekedés és monoklonális antitest termelés. J Immunol Methods. 1991;145:175-83
[5] Barnes D, Sato G. A tenyésztett sejtek szérummentes táptalajban történő növekedésének módszerei. Anal Biochem. 1980;102:255-70
[6] Yu H, Lu S, Gasior K, Singh D, Vazquez Sanchez S, Tapia O,et al. HSP70 chaperones RNS-mentes TDP-43 anizotróp intranukleáris folyékony gömbhéjakba. Science. 2021;371:
[7] Meharena H, Marco A, Dileep V, Lockshin E, Akatsu G, Mullahoo J,et al. Down-szindróma által kiváltott szeneszcencia megzavarja a neurális progenitorok nukleáris architektúráját. Cell Stem Cell. 2022;29:116-130.e7
[8] Iscove N, Melchers F. A szérum teljes helyettesítése albumin, transzferrin és szója lipiddel lipopoliszacharid-reaktív B-limfociták tenyészetében. J Exp Med. 1978;147:923-33
[9] Stoll T, Muhlethaler K, von Stockar U, Marison I. Egy kémiailag definiált fehérjeszegény közeg szisztematikus fejlesztése hibridómák növekedéséhez és monoklonális antitestek előállításához. J Biotechnol. 1996;45:111-23
[10] Darfler F. Fehérje-mentes közeg a hibridómák és az immunrendszer más sejtjeinek növekedéséhez. In Vitro Cell Dev Biol. 1990;26:769-78
[11] Barnes D, Sato G. Szérummentes sejtkultúra: egységesítő megközelítés. Cell. 1980;22:649-55
[12] Hamilton W, Ham R. Kínai hörcsög sejtvonalak klónális növekedése fehérje-mentes közegben. In Vitro. 1977;13:537-47
[13] Zigler J, Lepe Zuniga J, Vistica B, Gery I. Fénynek kitett HEPES-tartalmú táptalaj citotoxikus hatásainak elemzése. In Vitro Cell Dev Biol. 1985;21:282-7
[14] Berthois Y, Katzenellenbogen J, Katzenellenbogen B. A fenolvörös a szövettenyésztő közegben gyenge ösztrogén: következmények az ösztrogénre reagáló sejtek tenyészetben történő vizsgálatára vonatkozóan. Proc Natl Acad Sci U S A. 1986;83:2496-500
[15] Karmiol S. A szérummentes táptalajok fejlesztése. In: Master JRW, editor. Animal Cell culture, 3rd ed. Oxford: Oxford University Press; 2000.
[16] Perlman D. Antibiotikumok használata a sejttenyésztési közegekben. Methods Enzymol. 1979;58:110-6
[17] McGarrity G. A sejtkultúrák mikoplazmás fertőzésének terjedése és ellenőrzése. In Vitro. 1976;12:643-8
[18] Masters J, Stacey G. Közegváltoztatás és sejtvonalak passzázsának módosítása. Nat Protoc. 2007;2:2276-84
[19] Chakraborty A, Laukka T, Myllykoski M, Ringel A, Booker M, Tolstorukov M,et al. Histone demethylase KDM6A directly senses oxygen to control chromatin and cell fate. Science. 2019;363:1217-1222
[20] Molla Kazemiha V, Azari S, Amanzadeh A, Bonakdar S, Shojaei Moghadam M, Habibi Anbouhi M,et al. A Plasmocin™ hatékonysága különböző mollicutákkal fertőzött emlőssejtvonalakon az általánosan használt antibiotikumokkal összehasonlítva a sejttenyésztésben: helyi tapasztalatok. Cytotechnology. 2011;63:609-20
[21] Kragh Hansen U. A ligandok szérumalbuminhoz való kötődésének molekuláris aspektusai. Pharmacol Rev. 1981;33:17-53