Wilms3-solut

800,00 €*

Tuotteet toimitetaan jäädytettyinä kuivajäässä kryoputkissa. Jokainen kryoputki sisältää tyypillisesti 3 × 10 ⁶ solua adheesiivisille soluille tai 5 × 10⁶ solua suspensiosoluille (katso lisätietoja erän CoA-todistuksesta).

Hinnat ilman veroja ja toimituskuluja

cryovial

Tuotenumero: 300414

Käyttöturvallisuustiedote

Tuoteseloste

Analyysitodistus (CoA)

Materiaalin siirtosopimus

Kuvaus	Wilms3-solulinja perustettiin pediatrisen potilaan primaarisesta Wilmsin kasvaimesta, jolle oli ominaista somaattinen WT1-mutaatio. Toisin kuin monissa muissa Wilmsin kasvainsolulinjoissa, Wilms3:ssa on heterotsygoottinen frameshift-mutaatio WT1-geenissä (c.1293-1294insA, p.V432SfsX87), joka johtaa typistetyn WT1-proteiinin tuotantoon. Tämä WT1:n osittainen toiminnan menetys liittyy sellaisten kasvainten kehittymiseen, joilla on stroomaalinen tai mesenkymaalinen fenotyyppi. Wilms3:n WT1-mutaatio ei kuitenkaan ole homotsygoottinen, mikä tekee sen tutkimisesta monimutkaisempaa, sillä siinä säilyy jonkin verran WT1:n toimintaa, joka voi vaikuttaa kasvaimen biologiaan eri tavalla verrattuna solulinjoihin, joissa WT1 menetetään kokonaan. Wilms3:ssa on myös mutaatio CTNNB1-geenissä, joka vaikuttaa erityisesti treoniini 41:ään (p.T41A), jolla on kriittinen rooli Wnt-signalointireitillä. Tämä mutaatio stabiloi β-kateniinia, estää sen hajoamisen ja johtaa Wnt-reitin konstitutiiviseen aktivoitumiseen. Wnt-signalisaation jatkuva aktivoituminen edistää solujen lisääntymistä ja kasvainten syntyä Wilms3-taudissa, mikä tekee siitä keskeisen mallin CTNNB1-mutaatioiden vaikutusten tutkimiseen osittain toimivan WT1-taustan yhteydessä. Fenotyyppisesti Wilms3-soluilla on mesenkymaalinen morfologia, joka ilmentää vimentiiniä ja josta puuttuu sytokeratiini, mikä vastaa alkuperäisessä kasvaimessa havaittuja stroomaattisia ominaisuuksia. Näillä soluilla on rajallinen erilaistumispotentiaali, ja ne pystyvät tietyissä olosuhteissa erilaistumaan jonkin verran mesenkymaalisesti. Wilms3:n proteomianalyysit ovat paljastaneet useiden reseptorityrosiinikinaasien (RTK), kuten PDGFRβ:n ja AXL:n, aktivoituneen, mikä tukee solujen selviytymistä ja lisääntymistä. Lisäksi MAPK:n ja PI3K/AKT:n kaltaiset signaalireitit aktivoituvat, mikä vahvistaa Wilms3-solujen pahanlaatuisia ominaisuuksia. Yksi Wilms3:n ainutlaatuinen piirre on sen osittainen WT1-toiminnallisuus, mikä tarjoaa erillisen näkökulman siihen, miten WT1-mutaatiot vaikuttavat Wilms-kasvaimen biologiaan, kun mutaatio ei ole täydellinen. WT1:n ja Wnt-signalisaation välinen vuorovaikutus Wilms3:ssa tarjoaa arvokkaan mahdollisuuden tutkia näiden reittien vivahteikkaita rooleja kasvainten kehityksessä. Kaiken kaikkiaan Wilms3 toimii tärkeänä mallina Wilmsin kasvaimen taustalla olevien molekyylimekanismien tutkimiseen osittaisen WT1-menetyksen ja konstitutiivisen Wnt-reitin aktivoitumisen yhteydessä.
Organismi	Ihminen
Kudos	Munuaiset
Tauti	Wilmsin kasvain
Sovellukset	In vitro -soluviljelymalli. Biokemialliset tutkimukset

Ikä	11-12 kuukautta
Sukupuoli	Mies
Etnisyys	Kaukasialainen
Morfologia	Karanmuotoinen
Solutyyppi	Wilmsin solut
Kasvuominaisuudet	Tarttuva

Viittaus	Wilms3 (Cytionin luettelonumero 300414)
Bioturvallisuustaso	1
NCBI_TaxID	9606
CellosaurusLiittyminen	CVCL_A5SF

Mutaatioprofiili	WT1-mutaation status: homotsygoottinen c.1293-1294insA, p.V432fsx87, LOH: 11p11-11pter, CTNNB1-mutaation status: villiintynyt

Viljelyalusta	MSCGM-pakkaus (Lonza)
Dissosiaatioreagenssi	Accutase
Alakulttuuri	Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreessa väliaineessa ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Jäädytä väliaine	Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Solujen sulattaminen ja viljely	Varmista, että injektiopullo pysyy syväjäädytettynä toimitettaessa, sillä solut kuljetetaan kuivajäässä, jotta optimaalinen lämpötila säilyy kuljetuksen aikana. Vastaanotettaessa kryopullo joko säilytetään välittömästi alle -150 °C:n lämpötilassa solujen eheyden säilyttämiseksi tai edetään vaiheeseen 3, jos tarvitaan välitöntä viljelyä. Välitöntä viljelyä varten sulata injektiopullo nopeasti upottamalla se 37 °C:n vesihauteeseen, jossa on puhdasta vettä ja antimikrobista ainetta, ja sekoittamalla sitä varovasti 40-60 sekunnin ajan, kunnes jäästä on jäljellä pieni jäämöhkäle. Suorita kaikki seuraavat vaiheet steriileissä olosuhteissa virtaushupussa ja desinfioi kryopullo 70-prosenttisella etanolilla ennen avaamista. Avaa desinfioitu injektiopullo varovasti ja siirrä solususpensio 15 ml:n sentrifugiputkeen, joka sisältää 8 ml huoneenlämpöistä elatusainetta, varovasti sekoittaen. Sentrifugoi seosta 300 x g:n voimakkuudella 3 minuutin ajan solujen erottamiseksi ja hävitä varovasti supernatantti, joka sisältää jäännöspakastusmediumia. Suspendoidaan solupelletti varovasti uudelleen 10 ml:aan tuoretta elatusainetta. Jos solut ovat tarttuvia, jaa suspensio kahden T25-kolvin kesken; jos kyseessä ovat suspensioviljelmät, siirrä kaikki väliaine yhteen T25-kolviin solujen tehokkaan vuorovaikutuksen ja kasvun edistämiseksi. Noudata vakiintuneita aliviljelyprotokollia solulinjan jatkuvan kasvun ja ylläpidon varmistamiseksi ja luotettavien kokeellisten tulosten varmistamiseksi.
Inkubaatioilmapiiri	37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.
Pullon pinnoite	Ei mitään
Jäädytysmenettely	Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.
Toimitusehdot	Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.
Varastointiolosuhteet	Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Steriliteetti	Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä. Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.
HLA-alleelit	A: '03:01:01 B: '35:01:01, '35:03:01 C: '04:01:01 DRB1: '04:03:01, '11:04:01 DQA1: '03:01:01, '05:05:01 DQB1: '03:01:01, '03:02:01 DPB1*: '01:01:01, '04:01:01 E: '01:03:02, '01:06:01

Erän numero	Todistuksen tyyppi	Päivämäärä	Luettelonumero
300414-221	Analyysitodistus	23. May. 2025	300414

Jos aiot käyttää Cytion-solulinjoja yksinomaan sisäiseen tutkimukseen yhdellä tutkimuspaikalla, täytä ja allekirjoita materiaalinsiirtosopimus (MTA) ja lähetä se tilauksesi mukana.

Kaikissa kaupallisissa sovelluksissa – mukaan lukien mutta ei rajoittuen maksullisiin palveluihin, laadunvalvontatestaukseen, tuotteiden julkaisemiseen, diagnostiseen käyttöön tai sääntelytutkimuksiin – täytä käyttötarkoituksen lomake, jotta voimme laatia projektiisi sopivan sopimuksen.

Huomaa: MTA koskee vain tiettyjä solulinjoja. Jos tämä ilmoitus ja MTA-asiakirja näkyvät tuotesivulla, sopimus on voimassa. Solulinjoille, joita MTA ei koske, sopimusta ei mainita. MTA ei ole voimassa asiakkaille Amerikassa, Kiinassa tai Taiwanissa. Ota yhteyttä Yhdysvaltain yksikköömme saadaksesi sopivan sopimuksen.

Wilms3-solut

Yleisiä tietoja

Ominaisuudet

Sääntelytiedot

Biomolekyylitiedot

Käsittely

Laadunvalvonta / Geneettinen profiili / HLA

Analyysitodistus (CoA)

Materiaalin siirtosopimus