Julkaistu: 2023 | Viimeksi tarkistettu: toukokuu 2026

Soluviljelmien irrottamistekniikat

Soluviljelmän irrottaminen on soluviljelmän ylläpidon kriittinen vaihe. Siinä solut irrotetaan kasvualustaltaan, jotta ne voidaan siirtää uuteen viljelmään tai kerätä talteen. Tässä osiossa esitellään kaksi päämenetelmää: entsyymittömien irrottamispuskurien käyttö ja entsymaattisten reagenssien käyttö.

Entsyymittömien solujen irrottamispuskurien käyttö

Tämä menetelmä on hellävarainen ja säilyttää solujen eheyden ilman entsyymien käyttöä:

1. Valmistelu
   • Varmista, että kaikki reagenssit on lämmitetty 37 °C:seen ennen käyttöä, jotta solut eivät kärsi lämpöshokista.
2. Kasvatusväliaineen poistaminen:
   • Hävitä vanha kasvualusta viljelyastioista.
3. Huuhtelu
   • Huuhtele solumonokerrokset 5 ml:lla kalsium- ja magnesiumvapaata PBS:ää T75-pulloa tai 100 mm:n maljaa kohti.
   • Ravista astiaa varovasti 30–60 sekuntia huoneenlämmössä.
   • Ime huuhteluliuos pois ja hävitä se.
   • Toista tämä huuhteluvaihe vielä kerran.
4. Solujen irrottaminen
   • Lisää astiaan noin 5 ml entsyymitöntä solujen dissosiaatiopuskuria.
   • Käytä astiaa varovasti huoneenlämmössä 1–2 minuuttia ja tarkista dissosiaatio mikroskoopilla.
   • Naputtele pulloa tai maljaa kädelläsi irrottaaksesi solut tarvittaessa.
   • Jos solut ovat tarttuneet kiinni, anna niiden seistä huoneenlämmössä vielä 2–5 minuuttia ja naputtele tarvittaessa uudelleen käyttäen lisää dissosiaatiopuskuria.
   • Kun solut ovat irronneet, lisää vähintään 5 ml täydellistä kasvualustaa dissosiaatiopuskurin neutraloimiseksi ja solujen resuspendoimiseksi.
5. Elinkelpoisuuden tarkistus
   • Seuraa solujen elinkelpoisuutta viljelyn aikana ja varmista, että se pysyy yli 90 %:ssa.

Muiden reagenssien käyttö irrottamiseen

Tässä menetelmässä voidaan käyttää erilaisia irrotusreagensseja:

1. Käytetyn väliaineen poistaminen
   • Hävitä vanha elatusaine viljelyastioista.
2. Solujen pesu
   • Pese solut tasapainotetulla suolaliuoksella, joka ei sisällä kalsiumia tai magnesiumia, tai käytä EDTA:ta.
   • Lisää pesuliuos varovasti solujen vastakkaiselle puolelle ja ravista astiaa 1–2 minuuttia ennen pesuliuoksen hävittämistä.
3. Solujen irrottaminen
   • Lisää 2–3 ml valittua dissosiaatioliuosta 25 cm²:n kasvualuetta kohti varmistaen, että liuos peittää solukerroksen.
   • Inkuboi astiaa 37 °C:ssa ja ravista varovasti. Dissosiaatio tapahtuu tyypillisesti 5–15 minuutin kuluessa solulinjasta riippuen.
   • Vaikeasti irtoavien solujen kohdalla astian kevyt koputtelu voi nopeuttaa prosessia.
   • Tarkkaile soluja huolellisesti, jotta vältät liiallisen altistumisen ja mahdolliset vauriot.
4. Solujen kerääminen
   • Kun solut ovat irronneet kokonaan, anna niiden kerääntyä astian pohjalle asettamalla astia pystyyn.
   • Lisää täydellinen elatusaine, hajota solut ja kerää ne pipetoimalla solukerroksen päälle.
   • Laske solut ja jatka aliviljelyä.

Molemmissa menetelmissä on tärkeää määrittää kunkin solulinjan optimaaliset olosuhteet empiirisen havainnoinnin avulla. Prosessin tulisi säilyttää solujen elinkelpoisuus, joka tulisi tarkistaa säännöllisesti ja jonka tulisi olla yli 90 % soluviljelyn aikana. Nämä menettelytavat tarjoavat tutkijoille perustan, jota he voivat mukauttaa solulinjojensa erityisvaatimusten ja ominaisuuksien mukaan.

Yleiskatsaus adheesiivisten solujen subkultivointitekniikoista

Adheesiivisten solujen tehokas subkultivointi edellyttää niiden irrottamista viljelyastioista. Käytössä on erilaisia menetelmiä, joista kukin sopii eri solutyypeille ja olosuhteille. Irrotusmenetelmää valittaessa on tärkeää ottaa huomioon solulinjan erityistarpeet ja kokeen tavoitteet. Solujen elinkelpoisuuden säännöllinen seuranta, tavoitteena yli 90 % soluviljelyn uusintavaiheessa, on välttämätöntä viljelmän terveyden ja tuottavuuden ylläpitämiseksi. Tässä on yleiskatsaus näistä menettelyistä: