Jurkat E6.1 -solulinja

Jurkat E6.1 on klooni Jurkat-solulinjasta, joka on perifeerisestä verestä peräisin oleva kuolematon ihmisen T-lymfosyyttisolulinja. Niitä käytetään tutkimuksessa, joka liittyy T-solureseptorin signalointiin, T-solujen ja muiden lymfosyyttien adoptiohoitoihin syöpää vastaan, veriin liittyvien proto-onkogeenien tutkimukseen, solujen eloonjäämiseen ja solujen erilaistumiseen.

Tässä artikkelissa kerromme kaikki tiedot ja ennakkoedellytykset, jotka sinun on ymmärrettävä, ennen kuin aloitat työskentelyn Jurkat E6.1 -kloonatuilla solulinjoilla, joihin kuuluvat:

1. Alkuperä, historia ja yleiset tiedot
2. Soluviljelyn ominaisuudet
3. Jurkat E6.1 -solulinjojen sovellukset
4. Tutkimusjulkaisut
5. Edut ja rajoitukset
6. Resurssit: Materiaalit: Protokollia, videoita ja muuta

1. Alkuperä, historia ja yleistä tietoa

Tässä on kaikki tarvittavat tiedot, jotka liittyvät Jurkat E6.1 -solulinjan historiaan, alkuperään ja yleisiin ominaisuuksiin sekä niiden käsittelyyn soluviljelyssä.

• Jurkat E6.1 on kuolematon ihmisen T-lymfosyyttisolulinja. Tämä kloonattu solulinja on johdannainen Jurkat-solulinjasta, joka saatiin vuonna 1976 akuuttia lymfoblastileukemiaa sairastaneen 14-vuotiaan pojan perifeerisestä verestä. Verestä eristämisen jälkeen tämä solulinja nimettiin aluksi JM:ksi, koska JM ja Jurkat osoittavat, että nämä solulinjat on eristetty samasta potilaasta. Jurkat E6.1 -solulinja kloonattiin solujohdannaisista, jotka tunnetaan nimellä Jurkat-FHCRC.
• E6.1-solulinjat ovat peräisin leukemiasta; näitä solulinjoja käytetään IL-2:n ilmentymisen lisäämiseen simuloimalla monoklonaalisten vasta-aineiden tai lektiinin kanssa. Ne ilmentävät T-soluantigeenireseptoreita, joten näitä solulinjoja voidaan käyttää immuunijärjestelmän häiriöiden tutkimiseen ja immuno-onkologiseen tutkimukseen.
• Jurkat E6.1 -solujen solumorfologia: Jurkat E6.1 -solut eristettiin leukemiapotilaasta, ja niiden morfologia on muuttunut T-lymfosyytteihin verrattuna, mikä tekee niistä kuolemattomia solulinjoja. Lymfoblastisolu muodostuu, kun naiivit lymfosyytit aktivoituvat antigeeniä esittelevien solujen antigeeniesittelyn seurauksena. Tämä johtaa tuman, sytoplasman, mRNA:n ja proteiinien lisääntyneeseen kasvuun.
• Solun koko: Jurkat E6.1 -solulinjat on kloonattu kuolemattomiksi, ja niiden läpimitta on tavallisimmin 10-16 μm (läpimitta voi vaihdella suspensiotyypin mukaan). Näillä solulinjoilla on hyvin pallomainen solumuoto.
• Genomi ja kromosomimäärä: Nämä solulinjat ovat ihmisen T-lymfosyyttien pseudodiploidisia solulinjoja, joiden mallikromosomi on kromosomi 46. Nämä solulinjat ovat pseudodiploidisia. Nämä osoittavat myös, että mallikromosomia on noin 74 prosentissa ja että polyploidisuusaste on noin 5,3 prosenttia. Karyotyyppitutkimukset osoittivat karyotyypin 46, X, Y, -2, -18, del (2) (p21p23), del (18) (p11.2). X- ja Y-kromosomeilla on tyypillisesti säännöllinen kopio useimmissa solulinjoissa.
• Jurkat-solulinjat vs. E6.1 Jurkat-solulinjat: Jurkat-solulinjat ovat primaarisia kantasolulinjoja, jotka eristettiin ensimmäisen kerran akuuttia lymfoblastileukemiaa sairastavasta potilaasta. E6.1 Jurkat-solulinjat ovat kuitenkin kloonattuja Jurkat-FHCRC-solulinjojen johdannaisia.

3. jurkat E6.1 -solulinjojen sovellukset

Jurkat E6.1 -solulinjaa käytetään eniten immuunijärjestelmään liittyvien sairauksien ja niihin liittyvien syöpien tutkimiseen ja tutkimiseen. Lisäksi se on soveltunut joidenkin HIV-infektioon liittyvien monimutkaisuuksien tutkimiseen, koska CD4-T-solureseptori on välttämätön retroviruksen pääsyn kannalta.

Seuraavassa käsitellään joitakin keskeisiä aloja, joilla näitä solulinjoja käytetään:

Mallijärjestelmä T-solujen signalointi- ja apoptoosireittejä varten: Tätä T-soluleukemiasta peräisin olevaa solulinjaa käytetään laajalti TCR-signalointikaskadin tutkimuksessa. Jurkat E6.1 vapauttaa enemmän IL-2:ta ja IL-8:a, jotka auttavat T-solujen aktivoitumisessa ja käynnistävät tulehdusreittejä. Tämä solulinja tunnetaan myös hyperfosforyloituneesta Pyk2:sta ja lisääntyneestä Vav1:n tuotannosta, joka vaikuttaa ratkaisevasti aktiinisytoskeletonin uudelleenjärjestäytymiseen T-soluissa. TCR-segregaatiota Jurkat-solulinjassa E6-1 voidaan parantaa myös voimakkaalla LFA-1:n ilmentämisellä, mikä lisää TCR-signalointia ja IL-2:n ilmentymistä . Solujen proliferaatiota ja solusykliä tutkitaan myös Jurkat E6.1 -solulinjoilla. Niitä on suosittu tutkittaessa apoptoottisia reittejä ja DNA-vaurioiden indusoimista merestä ja kasveista peräisin olevilla yhdisteillä. Vuonna 2013 tehdyssä tutkimuksessa arvioitiin hain epigonaalisen ehdollistetun väliaineen vaikutusta ihmissoluihinkäyttämällä näitä solulinjoja. Samoin tutkittiin kasviperäisen hirsutiinin solujen lisääntymistä hillitsevää vaikutusta Jurkat E6.1 -solulinjoilla. Usein myös syöpälääketutkimuksissa käytetään Jurkat E6.1 -soluja valittujen kohteiden arvioimiseksi. Merellisten neurotoksiinien, kuten brevetoksiinien (PbTx ), vaikutusta on myös tutkittu näissä solulinjoissa.

HIV-tutkimukset: Yksi Jurkat E6.1 -solulinjojen merkittävimmistä sovelluksista on niiden kyky toimia sopivana mallina HIV-tutkimuksiin, koska ne pystyvät valitsemaan erilaisia TCA:ta indusoivia signaalitapahtumia. Jurkat E6.1 -solulinjoja on käytetty paitsi HIV:n aktivoitumisen ymmärtämiseen myös HIV:n latenssimekanismien selvittämiseen. HIV:n replikaatiota ja infektiota on tutkittu laajalti näissä solulinjoissa, joissa voidaan tehdä geenieditointia ja geenien tyrmäämistä, kuten vuonna 2021 tehdyssä tutkimuksessatehtiin . Lääkeaineen annostelun vaikutus HIV-infektioon, kuten pitkävaikutteisen efavirentsin (Efa)-enfuvirtidin (Enf) Co-ladattujen polymeeri-lipidihybridin nanohiukkasten (PLN) vaikutus viruksen pääsemiseen hyödynsi Jurkat E6.1 -solulinjoja. CRISPR/Cas9-muunneltua Jurkat E6.1 -solulinjaa on käytetty useita kertoja HIV:n sisäänpääsyyn, replikaatioon ja infektioon liittyvien mekanismien tutkimiseen.

4. tutkimusjulkaisut

Seuraavassa on muutamia merkittäviä esimerkkejä laajasta tutkimuskokoelmasta, johon sisältyy Jurkat E6.1 -solulinjoja.

Seleenimetaboliitti metyyliselenoli säätelee sellaisten ligandien ilmentymistä, jotka laukaisevat immuunijärjestelmän aktivoitumisen lymfosyyttireseptorin NKG2D:n kautta

Käyttämällä Jurkat E6.1:tä, jota inkuboitiin eri seleeniyhdisteissä, tutkittiin ligandien ilmentymistä ja MICA/B:n pintaekspressiota.

Karasiinihappo, ent-3,4-seco-kaneeni, edistää apoptoosia ja solujen erilaistumista NFkB-signaalireitin eston kautta leukemiasoluissa.

Karasiinihapon aiheuttaman sytotoksisuuden ymmärtäminen ihmisen T-solulinjoissa, kuten Jurkat E6.1 ja HL-60.

Todisteet in vitro -resistenssin kehittymisestä atsidotymidiinille T-lymfosyyttisissä leukemiasolulinjoissa (Jurkat E6-1/AZT-100) ja pediatrisilla potilailla, joilla on HIV-1-infektio

Jurkat E6.1 -solusolujen pitkäaikainen inkubointi AZT-lääkkeen kanssa atsidotymidiiniresistenssin (AZT) tutkimiseksi HIV-1-infektoituneilla potilailla.

Jurkat E6.1 -solulinjan tutkimukset joidenkin bioindolien vaikutuksista membraanin virtaavuuteen

Tässä tutkimuksessa käytettiin polarisoitua fluoresenssianalyysijärjestelmää ymmärtämään bioindolien, kuten serotoniinin, tryptofaanin ja melatoniinin, vaikutusta solukalvon juoksevuuteen Jurkat E6.1 -solulinjoissa.

Tribulus terrestris -alkaloidiuutteen aiheuttaman apoptoosin induktion molekyylimekanismi Jurkat E6-1 -soluissa

Tribulus terristris-alkaloidiuute indusoi apoptoosia Jurkat E6.1 -soluissa, jotta voitaisiin ymmärtää taustalla oleva vaikutusmekanismi.

LFA-1-ekspression lisääminen parantaa immuunisynapsien arkkitehtuuria ja T-solureseptorisignaalia Jurkat E6.1 -soluissa

T-solureseptorin signalointia Jurkat E6.1 -soluissa tehostettiin lisäämällä voimakkaasti LFA-1:n ilmentymistä.

5. edut ja rajoitukset

Kuten muillakin solulinjoilla, myös Jurkat E6.1 -soluilla on etunsa ja rajoituksensa.

Edut

On monia syitä, miksi sitä suositaan näissä sovelluksissa:

• Kasvutapa

  Jurkat E6.1 on suspensiosolulinja ja ei-adherentti solulinja, mikä tarkoittaa, että se kasvaa suspensiossa eikä tartu viljelypintaan.

• Geenien ilmentyminen

  Jurkat E6.1 -solulinja ilmentää interleukiini-2:ta (IL-2) ja CD3:a koodaavia geenejä. Kun näitä soluja stimuloidaan monoklonaalisilla vasta-aineilla, lektiineillä tai T3-antigeenikompleksin vastaisilla forboliestereillä, niiden on osoitettu tuottavan moninkertaista IL-2:ta.

• Antigeenien ilmentyminen

  Jurkat E6.1 -solulinja ilmentää CD3-antigeenia, joka liittyy T-solujen aktivoitumiseen ja signalointiin.

• Ekspressiomarkkerit

  Solulinja ilmentää T-soluantigeenireseptorin (TCR) merkkiaineita, jotka ovat ratkaisevia T-solujen tunnistamisessa ja immuunivasteessa.

• Soveltuvuus transfektioon

  Jurkat-kloonin E6.1-solulinja soveltuu isäntäsolujen transfektiokokeisiin, jolloin soluihin voidaan tuoda eksogeenista geneettistä materiaalia eri tutkimustarkoituksiin.

Rajoitukset

Etujen jälkeen käydään läpi Jurkat E6.1 -solulinjojen käyttöön liittyvät rajoitukset:

• Solutransfektio virusvektorilla

  Jurkat E6.1 -solujen transfektointi on haastavaa niiden T-soluperäisyyden vuoksi. Geenimuunteluun tarvitaan yleensä kalliita ja aikaa vieviä virusvektoreita. Muiden kuin virusvektoreiden transfektiotehokkuus on osoittautunut alhaiseksi ja niiden toksisuus Jurkat-soluissa on huomattava.

• Bakteerikontaminaatio

  Jurkat E6.1 -soluviljelmiä on seurattava mahdollisen bakteerikontaminaation varalta, jotta voidaan varmistaa kokeellisten tulosten eheys.

• Viruskontaminaatiot

  Jurkat E6.1 -solulinjat ilmentävät erilaisia kemokiinireseptoreita ja alhaisia CD4-pitoisuuksia, mikä helpottaa viruksen pääsyä. Tämä tekee niistä alttiita T-soluja infektoiville viruksille, kuten HTLV:lle ja HIV:lle.

6.resurssit: Protokollia, videoita ja muuta

Tässä osiossa käsitellään soluviljelyn ja transfektion menetelmiä ja protokollia sekä tähän solulinjaan liittyviä opetusvideoita:

Soluviljelyprotokollat

Seuraavassa on joitakin perusviljelymenetelmiä, joita on noudatettava tätä solulinjaa varten:

• Jurkat-soluviljelyn kasvattaminen: Kalifornian yliopisto on myös toimittanut USCS Genome Browser -palvelussaan menetelmän Jurkat-kloonin E6-1 viljelyä varten.
• Jurkat, klooni E6-1 Viljely ja käsittely: Elabscience sisällytti viljelyä ja käsittelyä koskevan protokollan tuotekuvaussivustolleen.

Transfektioprotokollat

Tässä on luettelo erilaisista saatavilla olevista transfektioprotokollista:

• Jurkat-solujen transfektioprotokolla Lipofectamine LTX -reagenssi: Jurkat-solujen transfektioprotokolla, jossa käytetään ThermoFisherin Lipofectamine LTX -reagenssia.
• Amaxa™ 4D-Nucleofector™-protokolla Jurkat-kloonille E6.1 [ATCC®]: Lonza Group AG toimitti ATCC:n Jurkat-kloonin E6.1 transfektioprotokollan käyttäen 4D-Nucleofector® X -yksikköä.

Videot aiheesta Jurkat E6.1

On olemassa useita erinomaisia videoita, joissa käsitellään soluviljelyn käsitteitä, menettelyjä, proliferaatiota, levittämistä ja muita aiheita.

• Solujen kuljettaminen:Soluviljelyn perusteet: Tämä on loistava video ThermoFisherin antamasta perusoppaasta ihmisen solulinjojen passage.
• Solujen sulattaminen: Cell Culture Basics: Tämä video sisältää perusohjeet ThermoFisherin solujen viljelyyn ja sulatukseen.
• Plasmidi-DNA:n transfektioprotokolla: Tämä video keskittyy ThermoFisherin protokollaan, joka koskee plasmidi-DNA:n transfektiota Lipofectamine® LTX- ja Plus™-reagenssilla.
• Apoptoosin mittaaminen 3 mikromolaarisella staurosporiinilla käsiteltyjen Jurkat-solujen suspensiolla: Tässä videossa näytetään, miten apoptoosimääritys tehdään Celigo-kuvasytometrillä käyttäen Nexcelom Biosciencen Hoechst- ja kaspaasi 3/7 -reagensseja.