Hep3B-solut: maksasyövän tutkimus ja kehitys
HEP3B on ihmisestä peräisin oleva, ikuistettu hepatosellulaarisen karsinooman solulinja. Sitä käytetään laajalti maksatoksisuuden ja lääkeaineenvaihdunnan tutkimuksessa. HEP3B-solulinjan transfektiotehokkuus on huomattava, minkä vuoksi näitä soluja käytetään yleisesti maksasyövän kehittymisen, etenemisen ja hoitotoimenpiteiden tutkimuksessa. Tämä artikkeli kattaa kaikki tarvittavat tiedot HEP3B-solulinjasta, jotta voit työskennellä sen kanssa. Artikkeli sisältää pääasiassa seuraavat tiedot:
- Kasvatusväliaine
- HEP3B-solujen viljelyyn käytetään EMEM-kasvatusainetta, joka sisältää 10 % FBS:ää, 2,2 g/l NaHCO3:a, 2 mM L-glutamiinia ja Earle's Balanced Salt Solution (EBSS) -liuosta.
- Kaksinkertaistumisaika
- HEP3B-solujen kaksinkertaistumisaika on noin 36 tuntia.
- Kasvutyyppi
- Tämä hepatomasolulinja on adheesiivinen.
- Bioturvallisuustaso
- BSL-1
- Saatavana
- Cytion — Tilaa HEP3B
- HEP3B-solujen yleiset ominaisuudet ja alkuperä
- HEP3B-solulinjan viljelyohjeet
- HEP3B-solulinja: edut ja rajoitukset
- HEP3B-solujen käyttö tutkimuksessa
- HEP3B-solulinjasta julkaistut artikkelit
- HEP3B-solulinjan resurssit: protokollat, videot ja muuta
HEP3B-solujen yleiset ominaisuudet ja alkuperä
Tärkeimmät tiedot, joita tarvitset solulinjasta, ovat sen alkuperä ja yleiset ominaisuudet. Ne auttavat sinua päättämään solulinjan käytöstä tutkimuksessasi ja käsittelemään sitä. Tässä artikkeliosassa käsitellään kaikki olennaiset tiedot HEP3B-solulinjan alkuperästä ja ominaisuuksista. Täältä saat selville: Mikä on HEP3B-solulinja? Mikä on HEP3B-solujen alkuperä? Mikä on HEP3B-solujen morfologia?
- HEP3B on jatkuva ihmisen hepatomasolulinja, joka on peräisin 8-vuotiaan afrikkalaisen pojan maksakudoksesta, jolla oli maksasyöpä (HCC). Sen perustivat Aden ja kollegat vuonna 1979 Barbara B. Knowlesin laboratoriossa, Wistar Institute, Philadelphia, USA [1].
- HEP3B-solujen kromosomiin on integroitunut hepatiitti B -viruksen (HBV) genomi.
- Nämä hepatosyyttikarsinoomasolut ovat epiteelimorfologisia.
- HEP3B-solujen modaalinen kromosomiluku on 60. Toisin kuin HepG2-soluilla, niillä ei ole uudelleenjärjestynyttä kromosomia 1.
Mikä on ero HepG2:n ja Hep3B:n välillä?
HepG2 ja HEP3B eroavat toisistaan solukohtaisten kromosomien lukumäärän suhteen. HEP3B-soluissa on 60 kromosomia, kun taas HepG2-soluissa on keskimäärin 55 kromosomia. Lisäksi HepG2 ei ole tuumorigeeninen ja on hepatiitti B -negatiivinen, kun taas HEP3B on tuumorigeeninen ja HBV-positiivinen.
HEP3B-solulinjan viljelyohjeet
Solulinjan viljelytietojen tuntemus helpottaa sen käsittelyä. Tässä osiossa käsitellään kaikki HEP3B HBV-solulinjan viljelyn avainkohdat, mukaan lukien: Mikä on Hep3B-solujen kaksinkertaistumisaika? Mitkä ovat HEP3B-solujen viljelyolosuhteet? Miten HEP3B HCC-soluja viljellään?
HEP3B-solujen viljelyn avainkohdat
Kaksinkertaistumisaika:
HEP3B-solujen kaksinkertaistumisaika on noin 36 tuntia.
Adherentti vai suspensiossa:
Tämä hepatomasolulinja on adheesiivinen.
Jakosuhde:
HEP3B-soluja viljellään uudelleen suhteessa 1:2–1:4. Adherentit HEP3B-solut huuhdellaan 1 x PBS:llä ja inkuboidaan sitten Accutase-dissosiaatioliuoksessa. 8–10 minuutin kuluttua lisätään tuoretta elatusainetta ja solut sentrifugoidaan. Kerätyt solut suspendoidaan sitten varovasti ja kaadetaan pulloihin, jotka sisältävät elatusainetta suositellussa jakosuhteessa.
Kasvatusväliaine:
HEP3B-solujen viljelyyn käytetään EMEM-kasvatusainetta, joka sisältää 10 % FBS:ää, 2,2 g/l NaHCO3:a, 2 mM L-glutamiinia ja Earle's Balanced Salt Solution (EBSS) -liuosta.
Kasvuolosuhteet:
HEP3B-soluja viljellään 37 °C:n kostutetussa inkubaattorissa, johon syötetään jatkuvasti 5 % CO2:ta.
Säilytys:
Jäädytetyt HEP3B-solut säilytetään alle -150 °C:n lämpötilassa sähköpakastimessa tai nestemäisen typen höyryvaiheessa.
Pakastusprosessi ja väliaine:
HEP3B-soluille suositeltava pakastusväliaine on CM-1 tai CM-ACF. Solut pakastetaan hitaalla pakastusprosessilla, jossa lämpötila laskee vain 1 °C minuutissa solujen elinkelpoisuuden säilyttämiseksi.
Sulatusprosessi:
Pakastetut solut sulatetaan 37 °C:seen esiasetetussa vesihauteessa 40–60 sekunnin ajan. Sen jälkeen solut lisätään tuoreeseen kasvualustaan ja sentrifugoidaan pakastusaineen poistamiseksi. Kerätyt solut suspendoidaan uudelleen ja siirretään uusiin pulloihin kasvattamista varten.
Bioturvallisuustaso:
HEP3B-solujen viljelyyn tarvitaan bioturvallisuustason 1 laboratorio.
HEP3B-solulinja: Edut ja rajoitukset
HEP3B on laajalti käytetty maksasyövän solulinja. Tässä osiossa keskitytään näiden maksasyöpäsolujen tärkeimpiin etuihin ja rajoituksiin.
Edut
HEP3B-solujen tärkeimmät edut ovat:
Helppo viljellä
HEP3B-soluilla ei ole vaativia viljelyvaatimuksia, minkä vuoksi niitä on helppo käsitellä ja ylläpitää tutkimuslaboratoriossa. Tämä yksinkertaistaa kokeellisia menettelyjä.
Korkea transfektiotehokkuus
HEP3B-soluilla on huomattava transfektiotehokkuus, minkä vuoksi niitä käytetään laajalti geenimanipulaatiossa ja geeniekspressioon liittyvissä tutkimuksissa.
Tumorigeenisyys
HEP3B on tuumorigeeninen hepatosellulaarinen karsinoomasolulinja, joka kykenee muodostamaan kasvaimia, kun se injektoidaan immuunipuutteiseen hiireen. Tämä auttaa syövän etenemisen ja kehittymisen tutkimisessa HEP3B-ksenotransplantaattimallien avulla.
HEP3B:n P53-status
HEP3B-soluilla on P53-geenimutaatio, joka on samanlainen kuin hepatosellulaarisessa karsinoomassa (HCC) ja muissa syövissä, minkä vuoksi ne ovat merkityksellisiä P53-mutaatioiden vaikutusten tutkimisessa syövän kasvuun, kehittymiseen ja etenemiseen.
Rajoitukset
HEP3B-solulinjaan liittyvä rajoitus on:
In vitro -solumalli
HEP3B-solulinja toimii hepatosellulaarisen karsinooman (HCC) solujen in vitro -mallina. Se ei kuitenkaan välttämättä edusta täysin HCC:n monimutkaisuutta elävissä organismeissa. Näin ollen in vitro -kokeiden tulokset voivat poiketa in vivo -kokeissa havaituista tuloksista.
HEP3B-solujen sovellukset tutkimuksessa
HEP3B-solulinjalla on useita sovelluksia biolääketieteellisessä tutkimuksessa. HEP3B-solujen keskeisiä tutkimussovelluksia ovat muun muassa:
- Syöpäbiologia: HEP3B on ihmisen hepatosellulaarisen karsinooman solulinja. Se on korvaamaton solumalli HCC:n kehittymisen ja etenemisen taustalla olevien solu- ja molekyylimekanismien tutkimiseen. Tutkijat käyttävät näitä soluja maksan syöpään liittyvien geneettisten mutaatioiden, soluprosessien ja solujen signalointireittien tutkimiseen. Eräässä tutkimuksessa käytettiin HEP3B-soluja ja havaittiin, että mikroRNA-223-3p säätelee NLRP3-inflammasomin komponentteja, estää proliferaatiota ja tehostaa HEP3B-maksasyöpäsolujen apoptoosia [2].
- Lääkeaineiden seulonta ja kehittäminen: HEP3B-solulinjaa käytetään myös maksasyövän uusien hoitomuotojen testaamiseen, seulontaan ja kehittämiseen. Lisäksi sitä käytetään erilaisten syöpälääkkeiden ja hoitojen toksisuuden ja tehokkuuden arviointiin. Tutkijat käyttivät näitä hepatomasoluja myös lääkeaineen metabolian tutkimiseen. Tutkijat käyttivät HEP3B-soluja ja arvioivat Cotinus coggygria -kasviuutteen sytotoksista potentiaalia HEP3B-maksasyöpäsoluissa [3].
- Virusinfektiot: HEP3B on hepatiitti B -viruksen positiivinen solulinja; siksi sitä käytetään tutkimaan virusinfektioita, jotka voivat johtaa maksasyövän kehittymiseen, eli HBV:tä ja HCV:tä. Tämä voi auttaa ymmärtämään paremmin virusinfektioita ja kehittämään potentiaalisia antiviraalisia hoitoja. Esimerkiksi yhdessä tutkimuksessa käytettiin HEP3B-maksasyöpäsoluja ja tutkittiin ubikvitaation merkitystä hepatiitti C -viruksen leviämisessä. Tulokset viittasivat siihen, että ubikvitiinispesifinen proteaasi 15 (USP15) on mukana HCV:n leviämisessä säätelemällä hepatosyyttikohtaisia toimintoja, kuten lipidipisaroiden muodostumista ja HCV-RNA:n translaatiota [4].
5. HEP3B-solulinjaa koskevat julkaisut
Tässä artikkelin osiossa käsitellään muutamia mielenkiintoisia HEP3B-soluja koskevia tutkimusjulkaisuja.
Luteoliinin vaikutus apoptoosin ja autofagian säätelyyn ihmisen maksasyövän Hep3B-soluissa
Tässä Biochemical and Biophysical Research Communications -lehdessä (2019) julkaistussa artikkelissa esitettiin, että luteoliiniyhdisteen aiheuttama endoplasmakalvoston stressi saattaa vaikuttaa P53-negatiivisissa HEP3B-soluissa P53:sta riippumattomalla tavalla.
Avicennia marinasta eristetyn lupeolin potentiaalinen kohdentaminen Hep3B-maksasyöpäsoluihin
Tässä Archiv der Pharmazie -lehdessä (2021) julkaistussa tutkimuksessa ehdotettiin pentasyklistä triterpenoidia, lupeolia, potentiaaliseksi syöpälääkkeeksi HEP3B-soluja vastaan.
Tämä artikkeli on julkaistu Molecular Medicine Reports -lehdessä (2017). Tutkimustulosten mukaan Cnidium monnieri (L.) Cusson -kasvista peräisin oleva etanoliuute indusoi solukuolemaa (apoptoosia) ja solusyklin pysähtymistä HepG2- ja HEP3B-maksasyöpäsoluissa säätelemällä p53- ja Akt/GSK-3β-signalointireittiä.
Biomolecules and Therapeutics -lehdessä (2020) julkaistussa tutkimuksessa ehdotettiin, että auranofiinilla on synergististä vaikutusta ja että se edistää sulforafaanin välittämää HEP3B-solujen apoptoosia PI3K/AKT-signaalireitin aktivoinnin kautta.
Circular RNA-0072309:llä on antituumorivaikutuksia Hep3B-solulinjassa kohdentamalla mikroRNA-665:tä
Tässä BioFactors-lehdessä (2023) julkaistussa tutkimusartikkelissa ehdotettiin, että Circular RNA-0072309:llä on antituumorivaikutuksia HEP3B-maksasyöpäsoluissa kohdentamalla miRNA-665:een.
HEP3B-solulinjan resurssit: protokollat, videot ja muuta
Seuraavassa on muutamia HEP3B-soluja koskevia resursseja:
- HEP3B-transfektio: Tässä videossa selitetään HEP3B-solujen transfektioprotokolla.
- HEP3B-transfektion tehokkuus: Tämän linkin avulla voit oppia HEP3B-DMEM-kasvatusväliaineen koostumuksen, solujen siirron ja HEP3B-solujen transfektioprotokollan. Lisäksi se tarjoaa tietoa HEP3B-lipofectamine 3000 -reagenssin optimoimiseksi transfektioprotokollassasi.
Seuraava linkki sisältää HEP3B-soluviljelyprotokollan:
- HEP3B-viljelyolosuhteet: Tästä linkistä löydät ohjeet Huh7- ja HEP3B-viljelmien käsittelyyn ja ylläpitoon.
- HEP3B-solut: Tällä verkkosivustolla on runsaasti tietoa HEP3B-soluista, mukaan lukien HEP3B-kasvatusaineet, solujen jakamis-, sulatus- ja käsittelyohjeet sekä lisääntyvien ja kryokonservoiduiden viljelmien käsittelyohjeet.
Viitteet
- Puttahanumantharayappa, L.D., et al., Hepatosellulaarisen karsinooman solulinjojen alkuperä ja ominaisuudet. Japanese J Gastroenterol Res, 2021. 1(8): s. 1040.
- Wan, L., et al., miRNA-223-3p säätelee NLRP3:a edistääkseen apoptoosia ja estääkseen Hep3B-solujen proliferaatiota. Experimental and therapeutic medicine, 2018. 15(3): s. 2429-2435.
- Danjolli-Hashani, D. ja S. Selen-Isbilir, Cotinus coggygria -uutteen sytotoksinen vaikutus Hep3B-syöpäsolulinjaan. Natural Product Research, 2022: s. 1–4.
- Kusakabe, S. ym., USP15 osallistuu C-hepatiittiviruksen leviämiseen säätelemällä viruksen RNA:n translaatiota ja lipidipisaroiden muodostumista. Journal of Virology, 2019. 93(6): s. 10.1128/jvi. 01708-18.