HT22-solulinja
HT22 on hiiren hermosolulinja, jota käytetään yleisesti neurotieteiden tutkimuksessa. Se on arvokas apuväline neurodegeneratiivisten sairauksien tutkimuksessa sekä potentiaalisten hermosoluja suojaavien hoitojen tai terapioiden testaamisessa. Lisäksi HT22-solut ovat glutamaattiherkkiä, joten niitä käytetään glutamaatin aiheuttaman toksisuuden tai hermosolujen vaurioiden tutkimiseen.
- Kasvatusväliaine
- HT22-solujen viljelyyn käytetään DMEM-kasvatusainetta. Sitä täydennetään 10 % FBS:llä, 4,5 g/l glukoosilla, 4 mM L-glutamiinilla, 1,5 g/l NaHCO3:lla ja 1,0 mM natriumpyruvaatilla optimaalisen solujen kasvun varmistamiseksi.
- Kaksinkertaistumisaika
- HT22-solujen kaksinkertaistumisaika on noin 15 tuntia.
- Kasvutyyppi
- HT22-solut ovat adheesiivisia.
- Bioturvallisuustaso
- BSL-1
- Saatavana
- Cytion — Tilaa HT22
Tässä artikkelissa käsitellään HT22-solujen tärkeimpiä ominaisuuksia, jotka voivat auttaa sinua tutkimustyössäsi. Artikkelissa käsitellään pääasiassa seuraavia aiheita:
- HT22-solujen yleiset ominaisuudet ja alkuperä
- HT22-solulinjan viljelytiedot
- HT22-solulinjan edut ja haitat
- HT22-solulinjan tutkimussovellukset
- HT22-soluja käsittelevät tutkimusjulkaisut
- HT22-soluja koskevat resurssit: protokollat, videot ja muuta
HT22-solujen yleiset ominaisuudet ja alkuperä
Tässä artikkelin osiossa valotetaan HT22-solujen alkuperää ja yleisiä ominaisuuksia. Solulinjasta on tarpeen tietää nämä tiedot ennen sen parissa työskentelyn aloittamista. Täältä saat selville: Mitä ovat HT22-solut? Millainen on HT22-hippokampussolujen morfologia? Mikä on HT22-solujen koko?
HT22 on jatkuva solulinja, joka on peräisin hiiren aivojen hippokampusalueelta. Se on emosolulinjan HT-4 aliklooni, joka on kehitetty hiiren hermosolukudosten ikuistamisen avulla lämpötilaherkän polyomaviruksen simian virus 40 (SV40) T-antigeenin avulla.
Nämä solut eroavat kypsistä hippokampussoluista, koska niiltä puuttuvat glutamaatti- ja kolinergiset reseptorit, joita löytyy hippokampuksesta peräisin olevista kypsistä hermosoluista. Siksi ne eivät sovellu muistia koskeviin tutkimuksiin [1].
HT22-solut näyttävät epiteelisoluilta.
HT22-solulinjan viljelyohjeet
HT22-soluja käytetään neurotieteiden tutkimuslaboratorioissa. Ennen näiden solujen viljelyä tutkijat etsivät olennaista soluviljelytietoa, joka helpottaa ja tehostaa heidän työtään. Tässä osiossa käsitellään kaikki HT22-solujen viljelyn avainkohdat. Tulet oppimaan: Mikä on HT22-solujen kaksinkertaistumisaika? Miten HT22-soluja viljellään? Mikä on HT22-soluviljelyprotokolla? Mikä on HT22-soluviljelyalusta?
HT22-solujen viljelyn avainkohdat
Kaksinkertaistumisaika:
HT22-solujen kaksinkertaistumisaika on noin 15 tuntia.
Adherentti vai suspensiossa:
HT22-solut ovat kiinnittyviä.
Aliviljelysuhde:
HT22-hippokampussolujen aliviljelysuhde on 1:3–1:6. Lyhyesti sanottuna viljelyliuos poistetaan ja kiinnittyneet solut huuhdellaan 1 x PBS:llä. Accutase-irrotusliuosta lisätään pulloon, ja soluja inkuboidaan 8–10 minuuttia huoneenlämmössä. Sen jälkeen lisätään tuoretta viljelyväliainetta, ja solut kerätään sentrifugointipulloon. Saatu solupelletti suspendoidaan varovasti uudelleen, ja solut siirretään viljelypulloon kasvattamista varten.
Kasvatusväliaine:
HT22-solujen viljelyyn käytetään DMEM-kasvatusainetta. Siihen lisätään 10 % FBS:ää, 4,5 g/l glukoosia, 4 mM L-glutamiinia, 1,5 g/l NaHCO3:ta ja 1,0 mM natriumpyruvaattia optimaalisen solujen kasvun varmistamiseksi.
Kasvuolosuhteet:
HT22-soluviljelmiä pidetään kostutetussa inkubaattorissa (lämpötila 37 °C) 5 %:n CO2-pitoisuudella.
Säilytys:
Jäädytetyt HT22-solut voidaan säilyttää pitkään alle -150 °C:n lämpötilassa joko nestemäisen typen höyryvaiheessa tai erittäin matalan lämpötilan sähköpakastimessa.
Jäädytysprosessi ja väliaine:
HT22-solut voidaan pakastaa CM-1- tai CM-ACF-kasvatusliuoksessa hitaalla pakastusmenetelmällä. Tämä menetelmä sallii näytteen lämpötilan laskun vain 1 °C minuutissa, suojaa soluja lämpöshokilta ja auttaa säilyttämään niiden elinkelpoisuuden.
Sulatusprosessi:
Solut sulatetaan 37 °C:n vesihauteessa 40–60 sekuntia, kunnes jäljellä on pieni jääpalas. Sen jälkeen soluihin lisätään viljelyväliainetta ja ne sentrifugoidaan jäädytysväliaineen komponenttien poistamiseksi. Solupelletti suspendoidaan uudelleen ja solut kaadetaan uuteen pulloon, joka sisältää viljelyväliainetta. Tämän jälkeen soluja inkuboidaan 37 °C:ssa inkubaattorissa vähintään 24 tuntia.
Bioturvallisuustaso:
HT22-solujen viljelyyn vaaditaan bioturvallisuustason 1 laboratorio-olosuhteet.
HT22-solulinjan edut ja haitat
HT22-hippokampussoluihin liittyy joitakin etuja ja haittoja, jotka erottavat ne muista hermosolulinjoista. Tässä mainitaan joitakin solulinjan merkittävimpiä etuja ja haittoja.
Edut
HT22-hiiren hermosolulinjan edut ovat:
-
Nopea kasvuvauhti
HT22-solujen kaksinkertaistumisaika on 15 tuntia, mikä mahdollistaa nopean ja tehokkaan kokeilun ja auttaa saamaan tutkimustuloksia nopeasti.
-
Ikuistaminen
HT22 on ikuistettu solulinja, joka takaa jatkuvan kasvun pitkään. Tämä takaa solujen jatkuvan saatavuuden, vähentää aikaa ja kustannuksia sekä helpottaa pitkäaikaisia kokeita, joissa tulokset ovat yhdenmukaiset.
Haitat
HT22-solujen haitat ovat:
-
Hiirperäinen
HT22-solulinja on peräisin hiiren aivojen hippokampuskudoksesta, joka ei välttämättä edusta täysin ihmisen hermosolujen fysiologian ja käyttäytymisen monimutkaisuutta, mikä rajoittaa niiden translaationaalista merkitystä.
4. HT22-solulinjan tutkimussovellukset
HT22-soluja käytetään laajasti neurobiologian tutkimuksessa. Tässä artikkelin osiossa käsitellään muutamia tämän solulinjan lupaavia sovelluksia:
- Neurotieteellinen tutkimus: HT22-soluja käytetään laajasti neurodegeneratiivisten sairauksien, kuten Alzheimerin ja Parkinsonin taudin, tutkimuksessa. Niitä pidetään arvokkaana tutkimusvälineenä näihin sairauksiin liittyvien neurotoksisuuden ja oksidatiivisen stressin mekanismien tutkimuksessa. Vuonna 2020 tehdyssä tutkimuksessa havaittiin, että PI3K/AKT/CREB-reitti on mukana HT22-solujen hyperglykemian aiheuttamassa hermosolujen toksisuudessa [2]. Vastaavasti tuoreessa tutkimuksessa esitettiin, että Nrf2/HO-1-reitti ja NF-κB-signaalinvälitysakseli ovat merkittävässä roolissa HT22-solujen amyloidi-beeta-toksisuudessa [3].
- Lääkeaineiden seulonta: HT22-soluja käytetään laajalti lääkeaineiden testaamiseen ja seulontaan. Ne auttavat tutkijoita tunnistamaan potentiaalisia terapeuttisia aineita, joilla on hermosoluja suojaavia vaikutuksia neurodegeneratiivisten sairauksien torjumiseksi. Vuonna 2019 tehdyssä tutkimuksessa selvitettiin tetrahydrokurkumiiniyhdisteen hermosoluja suojaavaa potentiaalia glutamaatilla käsitellyissä HT22-hippokampussoluissa. Tässä glutamaatti aiheuttaa oksidatiivista stressiä HT22-soluissa ja aiheuttaa solukuoleman aktivoimalla mitogeenin aktivoimia proteiinikinaaseja [4].
5. HT22-soluja käsittelevät tutkimusjulkaisut
Seuraavassa on muutamia mielenkiintoisia tutkimusartikkeleita, joissa käsitellään HT22-solulinjaa:
Tässä International Journal of Molecular Medicine -lehdessä (2019) julkaistussa tutkimuksessa esitettiin krokiinin, Crocus sativus L. -kasvista eristetyn yhdisteen, neuroprotektiivinen potentiaali L-glutamiinilla vaurioituneissa HT22-soluissa.
Neuropharmacology-lehdessä (2018) julkaistussa artikkelissa raportoitiin, että oksindolijohdannaiset suojaavat hapettumisstressin aiheuttamalta HT22-solukuolemalta.
Tämä tutkimusartikkeli julkaistiin Journal of Ginseng Research -lehdessä vuonna 2019. Tutkimuksessa selvitettiin luonnontuotteen, ginsenosidi Rb2:n, hermosoluja suojaavia vaikutuksia käyttäen HT22-solulinjaa. Tutkimuksessa havaittiin, että ginsenosidi Rb2 vähensi tehokkaasti glutamaatin aiheuttamaa oksidatiivista stressiä ja solukuolemaa hiiren hippokampuksen HT22-soluissa.
Tässä Ecotoxicology and Environmental Safety -lehdessä (2021) julkaistussa tutkimuksessa arvioitiin hopeananohiukkasten sytotoksista potentiaalia HT22-solulinjassa.
Ferrostatiini-1 suojaa HT-22-soluja oksidatiiviselta toksisuudelta
Tämä tutkimusartikkeli julkaistiin vuonna 2020 Neural regeneration research -lehdessä. Siinä ehdotettiin, että ferrostatiini-1, ferroptosis-inhibiittori, estää oksidatiivista toksisuutta HT22-hippokampussoluissa.
HT22-soluja koskevat resurssit: protokollat, videot ja muuta
Jotkut HT22-soluja koskevat verkkolähteet selittävät niiden transfektiota, erilaistumista ja soluviljelyprotokollia:
- HT22-transfektio: Tämä asiakirja sisältää optimoidun protokollan HT22-transfektioon 24- ja 96-kuoppaisissa soluviljelylevyissä.
- HT22-solujen erilaistuminen: Tämä artikkeli opastaa kattavasti HT22-solujen erilaistumisprotokollan käytössä.
Seuraava linkki sisältää HT22-soluviljelyprotokollan:
- HT22-solujen aliviljely: Tämän linkin avulla voit oppia HT22-solulinjan aliviljelyprotokollan. Lisäksi se auttaa sinua oppimaan protokollan solujen neurotoksisuuden indusoimiseksi.
- HT22-hippokampussolut: Tämä verkkosivusto sisältää paljon hyödyllistä tietoa HT22-solujen kaksinkertaistumisajasta, elatusaineista ja soluviljelyprotokollista.
Viitteet
- He, M., et al., Differentiation renders susceptibility to excitotoxicity in HT22 neurons. Neural Regen Res, 2013. 8(14): s. 1297-306.
- Zhang, S., et al., Fisetin estää HT22-soluja korkean glukoosipitoisuuden aiheuttamalta neurotoksisuudelta PI3K/Akt/CREB-signalointireitin kautta. Frontiers in Neuroscience, 2020. 14: s. 241.
- Zhang, R.-l., et al., Berberiinin suojaavat vaikutukset β-amyloidin aiheuttamaa neurotoksisuutta vastaan HT22-soluissa Nrf2/HO-1-reitin kautta. Bioorganic Chemistry, 2023. 133: s. 106–210.
- Park, C.-H., et al., Tetrahydrokurkumiinin neuroprotektiiviset vaikutukset glutamaatin aiheuttamaa oksidatiivista stressiä vastaan hippokampuksen HT22-soluissa. Molecules, 2019. 25(1): s. 144.