DLD-1-solut: DLD-1-solujen käyttökohteet ja merkitys paksusuolisyövän tutkimuksessa
DLD-1 on ihmisen paksusuolisyövän solulinja, jota käytetään yleisesti syöpätutkimuksessa. Se on arvokas työkalu paksusuolisyövän eri näkökohtien tutkimiseen, mukaan lukien kasvaimen kehittyminen, eteneminen, taustalla olevat molekyylimekanismit ja vaste hoitokeinoihin. Siten DLD-1 on erinomainen apuväline taudin ymmärtämisessä ja potentiaalisten hoitostrategioiden kehittämisessä.
- Kasvatusväliaine
- DLD-1-solujen viljelyyn käytetään RPMI 1640 -kasvatusainetta, johon on lisätty 10 % naudan sikiöseerumia (FBS), 2,1 mM stabiilia glutamiinia ja 2,0 g/l NaHCO3. Kasvatusaine on vaihdettava 2–3 kertaa viikossa.
- Kaksinkertaistumisaika
- DLD-1-solujen kaksinkertaistumisaika on noin 15 tuntia.
- Kasvutyyppi
- DLD-1 on adheesiivinen ihmisen paksusuolisyöpäsolulinja. Solut kasvavat yksikerroksisiksi.
- Bioturvallisuustaso
- BSL-1
- Saatavana
- Cytion — Tilaa DLD-1
DLD-1-solujen yleiset ominaisuudet ja alkuperä
Ennen solulinjan tutkimista tutkijan on ensin otettava huomioon sen alkuperä ja yleiset ominaisuudet. Tässä artikkeliosassa esitellään DLD-1-solulinja yksityiskohtaisesti. Siinä käsitellään seuraavia usein kysyttyjä kysymyksiä: Mitä ovat DLD-1-solut? Mikä on DLD-1-syöpäsolulinja? Mitkä ovat DLD-1-solulinjan mutaatiot? Mikä on DLD-1-solun koko? Mikä on DLD-1-solujen morfologia?
- DLD-1 on paksusuolisyöpäsolulinja, joka on peräisin 67-vuotiaan, kolorektaalisen adenokarsinooman sairastaneen miespotilaan paksusuolesta. Sen eristivät D.L. Dexter ja kollegat vuosina 1977–1979. Tämä solulinja on peräisin samasta lähteestä kuin HCT-8-, HCT-15- ja HRT-18-solulinjat.
- Kuten kolorektaaliset syövät, DLD-1-soluilla on mikrosatelliittien epävakauden fenotyyppi [1].
- DLD-1-mutaatioihin kuuluvat KRAS, P53, BRAF, BRCA1 ja BRCA2. DLD-1:n P53-statuksen, DLD-1 BRCA-, DLD-1 BRCA2- ja DLD-1 KRAS-mutaatioiden vuoksi näitä soluja pidetään ihanteellisina syöpätutkimuksiin.
- Näillä soluilla on epiteelin kaltainen morfologia.
- DLD-1-solulinjan solujen koko on noin 15 µm.
- Ihmisen kolorektaalisyövän solulinjalla DLD-1 on pseudodiploidinen karyotyyppi. Noin 86 % soluista on kromosomiluku 46. Polyploidiaa voi kuitenkin esiintyä myös 17,1 %:ssa solupopulaatiosta.
DLD-1-solulinjan viljelyohjeet
Ennen solulinjan viljelyä on tunnettava sen perusvaatimukset. Tässä osiossa käsitellään tärkeitä seikkoja, jotka on syytä oppia ennen DLD-1-solulinjan käsittelyn aloittamista. Näitä ovat: Mikä on DLD-1-solulinjan kaksinkertaistumisaika? Mikä on DLD-1-viljelyalusta? Mikä on DLD-1-solujen kylvötiheys? Miten DLD-1-soluja viljellään?
DLD-1-solujen viljelyn avainkohdat
Kaksinkertaistumisaika:
DLD-1-solulinjan kaksinkertaistumisaika on noin 15 tuntia.
Adherenssi tai suspensio:
DLD-1 on kiinnittyvä ihmisen paksusuolisyöpäsolulinja. Solut kasvavat yksikerroksiksi.
Kylvötiheys:
DLD-1-solut kylvetään tiheydellä 1–2 x 104 solua/cm2. Adherentit solut pestään 1x fosfaattipuskuriliuoksella (PBS) ja inkuboidaan siirto-liuoksella (Accutase) huoneenlämmössä. 8–10 minuutin inkuboinnin jälkeen irronneet solut lisätään viljelyalustaan ja sentrifugoidaan. Solupelletti suspendoidaan sitten varovasti uudelleen, ja solut kaadetaan uusiin viljelyastioihin, jotka sisältävät kasvualustaa.
Kasvatusväliaine:
DLD-1-solujen viljelyyn käytetään RPMI 1640 -kasvatusliuosta, johon on lisätty 10 % sikiön naudan seerumia (FBS), 2,1 mM stabiilia glutamiinia ja 2,0 g/l NaHCO3. Kasvatusliuos on vaihdettava 2–3 kertaa viikossa.
Kasvatusolosuhteet:
DLD-1-viljelmiä pidetään 37 °C:n kostutetussa inkubaattorissa, jossa on 5 %:n CO2-pitoisuus.
Säilytys:
DLD-1-soluja säilytetään nestemäisen typen höyryvaiheessa tai sähköisessä erittäin matalan lämpötilan pakastimessa (alle -150 °C:n lämpötilassa).
Jäähdytysprosessi ja väliaine:
DLD-1-solujen pakastamiseen voidaan käyttää CM-1- tai CM-ACF-pakastusväliainetta. Suositellaan aina hidasta pakastusprosessia, jossa lämpötila laskee asteittain 1 °C kerrallaan, mikä estää solujen shokin ja suojaa niiden elinkelpoisuutta.
Sulatusprosessi:
Jäädytetyt solut sulatetaan 37 °C:seen esiasetetussa vesihauteessa 40–60 sekunnin ajan, kunnes jäljellä on pieni jääpalas. Sen jälkeen solut lisätään tuoreeseen väliaineeseen ja sentrifugoidaan. Tämä vaihe on tarpeen jäädytysväliaineen komponenttien poistamiseksi soluista. Kerätyt solut suspendoidaan uudelleen kasvualustaan ja annostellaan kasvatuskolviin kasvattamista varten.
Bioturvallisuustaso:
DLD-1-solulinjaa ylläpidetään bioturvallisuustason 1 laboratorioissa.
DLD-1-solulinja: Edut ja rajoitukset
Tässä artikkelin osiossa tarkastelemme DLD-1-paksusuolisyöpäsolulinjan etuja ja rajoituksia.
Edut
DLD-1-solulinjan tärkeimmät edut ovat:
Paksusuolisyövän malli
DLD-1-soluissa esiintyy paksusuolisyöpäpotilailla yleisesti esiintyviä mutaatioita, kuten DLD-1 KRAS-mutaatio, DLD-1 BRCA ja DLD-1 BRCA2. Tämän vuoksi ne ovat kliinisesti sopiva solumalli tämän taudin tutkimiseen.
Tuumorigeeninen solulinja
DLD-1-solut ovat tuumorigeenisiä. Ne voivat aiheuttaa kasvaimia, kun ne ruiskutetaan alastomille hiirille. Siksi tutkijat käyttävät näitä soluja kehittääkseen ksenotransplantaattituumorimalleja, jotka auttavat tutkimaan kasvaimen muodostumista, kehitystä ja etenemistä in vivo.
Rajoitukset
DLD-1-soluun liittyvät rajoitukset ovat:
Heterogeenisyys
DLD-1-paksusuolisyöpäsolupopulaatioissa esiintyy geneettistä ja fenotyyppistä heterogeenisyyttä. Tämä voi vaikuttaa tutkimustulosten yleistettävyyteen.
DLD-1-solulinjan tutkimussovellukset
DLD-1-solulinjalla on monia sovelluksia syöpätutkimuksessa. Tässä osiossa käsitellään joitakin merkittävimpiä sovelluksia.
- Syöpätutkimus: DLD-1-solut toimivat arvokkaana in vitro -mallina, jonka avulla voidaan ymmärtää paksusuolisyövän kasvun, kehittymisen ja etenemisen taustalla olevia molekyylimekanismeja. Lisäksi niitä käytetään geenien ilmentymisen, signalointireittien ja tiettyjen geneettisten mutaatioiden vaikutuksen tutkimiseen syöpäsolujen käyttäytymiseen. Vuonna 2022 tehdyssä tutkimuksessa havaittiin, että PI3K/Akt/YAP-signaalikaskadi säätelee DLD-1-paksusuolisyöpäsolulinjan migraatiota ja invaasiota [2].
- Lääkekehitys: Tutkijat käyttävät DLD-1-solulinjaa syöpälääkkeiden tehokkuuden testaamiseen ja niiden potentiaalin arvioimiseen paksusuolisyövän hoidossa. Tämä auttaa lääkekehityksessä ja taudin tehokkaassa torjumisessa. Vuonna 2022 tehdyssä tutkimuksessa käytettiin DLD-1-syöpäsolulinjaa ja tutkittiin kemiallisesti syntetisoitujen piifthalosyaniinien syöpälääkevaikutusta. Tutkimuksen tulokset viittasivat siihen, että nämä yhdisteet ovat tehokkaita syöpälääkkeitä [3]. Mielenkiintoista on, että toisessa tutkimuksessa havaittiin probioottista peräisin olevan P8-proteiinin syöpälääkkeiden potentiaali käyttämällä DLD-1-soluja [4].
5. DLD-1-soluja käsittelevät tutkimusjulkaisut
Tässä osiossa esitellään muutamia mielenkiintoisia ja usein siteerattuja julkaisuja, joissa käsitellään DLD-1-paksusuolisyöpäsolulinjaa.
Tämä julkaisu on ilmestynyt Journal of Biologically Active Products from Nature -lehdessä (2022). Tutkimuksessa havaittiin, että flavonoidi diosmiini indusoi solukuolemaa DLD-1-soluissa ja aiheutti myös solusyklin pysähtymisen; näin ollen se voi olla potentiaalinen syöpälääke.
Bromelaiini estää tehokkaasti Kras-mutanttia paksusuolisyöpää stimuloimalla ferroptosia
Tämä Animal Cells and Systems -lehdessä (2018) julkaistu tutkimus esitti, että bromelaiini, entsyymi, estää DLD-1 KRAS-mutaatiota ja sillä on voimakkaita sytotoksisia vaikutuksia.
Tämä tutkimusartikkeli julkaistiin vuonna 2019 Environmental Toxicology -lehdessä. Tutkimuksessa selvitettiin luonnollisen yhdisteen, bergapteenin, antituumorivaikutuksia käyttäen DLD-1-kolorektaalisolulinjaa.
Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials -lehdessä (2023) julkaistussa tutkimuksessa havaittiin, että kurkumiini/rautaoksidi-nanokomposiitit ovat erittäin tehokkaita DLD-1-paksusuolisyöpäsoluja vastaan.
Tämä tutkimusartikkeli julkaistiin vuonna 2020 Turkish Journal of Biology -lehdessä. Tutkimuksessa esitettiin, että luonnontuote, epibrassinolidi, aktivoi AKT:n DLD-1-soluissa ja stimuloi polyamiineihin liittyvää autofagiaa.
DLD-1-solulinjan resurssit: protokollat, videot ja muuta
Seuraavassa on muutamia DLD-1-soluja koskevia resursseja:
- DLD-1-transfektio: Tämä video-opas on kattava opas DLD-1-in vitro -transfektioprotokollasta.
- DLD-1-solut: Tässä tutkimusartikkelissa kuvataan lyhyesti DLD-1-soluviljelyn vaatimukset, mukaan lukien elatusaineet ja viljelyolosuhteet. Lisäksi se voi auttaa sinua oppimaan DLD-1-soluille käytettävän transfektioprotokollan.
Seuraavat linkit sisältävät protokollan DLD-1-solujen, ihmisperäisten paksusuolisyöpäsolujen, viljelyyn.
- DLD-1-solulinja: Tämä verkkosivusto tarjoaa perustietoa DLD-1-solulinjasta. Se auttaa sinua oppimaan erilaisia DLD-1-soluviljelyprotokollia, mukaan lukien aliviljely sekä kryokonservoiduista ja proliferoivista viljelmistä huolehtiminen.
Viitteet
- Gavrilas, L.I., et al., Pro-apoptoottiset geenit uusina kohteina resveratrolin ja kurkumiinin yksittäis- ja yhdistelmähoidoille paksusuolisyövässä. Food & function, 2019. 10(6): s. 3717–3726.
- Takeda, T., et al., PI3K/Akt/YAP-signalointi edistää DLD-1-kolorektaalisyöpäsolujen migraatiota ja invaasiota. Oncology Letters, 2022. 23(4): s. 1–9.
- Farajzadeh, N., et al., Uusien piiftaalosyaniinien syöpälääkevaikutus kolorektaalisen adenokarsinooman solulinjaan (DLD-1). New Journal of Chemistry, 2022. 46(41): s. 19863–19873.
- An, B.C., et al., Probioottisista aineista peräisin olevan P8-proteiinin syöpälääkinnälliset vaikutukset kolorektaalisyövän solulinjassa DLD-1. International Journal of Molecular Sciences, 2023. 24(12): s. 9857.