B16-solut - Perusopas B16-melanoomasoluista onkologisessa tutkimuksessa

B16 on hiiriperäinen ihosyöpäsolulinja (melanooma). Tämä solulinja on tehokas in vitro -malli ihmisen ihosyöpien tutkimiseen. Sitä käytetään usein syöpäsolujen kiinteiden kasvainten muodostumisen ja etäpesäkkeiden tutkimiseen.

Tämä artikkeli auttaa sinua ymmärtämään B16-melanoomasolulinjan perusteita. Erityisesti siinä käydään läpi seuraavat asiat:

1.b16-solulinjan yleiset ominaisuudet ja alkuperä

Tässä artikkelin osassa käsitellään B16-melanoomasolulinjan ominaispiirteitä. Saat vastaukset seuraaviin usein kysyttyihin kysymyksiin. Kuten Mikä on B16-syöpäsolulinja? Mistä B16-solut ovat peräisin? Mikä on B16-solujen koko?

B16-solulinja perustettiin vuonna 1954. Nämä solut johdettiin C57BL/6J-hiiristä, jotka saivat spontaanisti kasvaimen ihoon Jackson Laboratoriesissa Mainessa.
Nämä ovat melaniinia tuottavia epiteelisoluja, joilla on kyky muodostaa etäpesäkkeitä pernaan, maksaan ja keuhkoihin.
Melanooma B16-solut kasvavat monokerroksina, ja niillä on epiteelin kaltainen ja karanmuotoinen solumorfologia.
B16-solulinjan koko on noin 15,4 μm.
B16-soluista on olemassa erillisiä alakloonia, kuten B16GMCSF, B164A5, B16FLT3 ja B16F10. Nämä alalinjat eroavat B16-alkuperäsoluista ja säilyttävät joitakin erityispiirteitä. Niillä on esimerkiksi eroja morfologiassa, solujen koossa ja muissa ominaisuuksissa. B16F10:llä on suuri metastaattinen kyky keuhkoihin, ja B164A5 on aggressiivisin ihosyöpäsolulinja verrattuna B16F10:een, B16-GMCSF:ään ja B16FLT3:een [1].

3D-animaatio lähikuvasta kasvavasta ihosyövästä, kuten pahanlaatuisesta melanoomasta, joka tulehduttaa ympäröivää kudosta.

2.b16-solulinjan viljelytiedot

Ennen solulinjan ylläpitoa tai viljelyä saatat etsiä keskeisiä tietoja kaksinkertaistumisajasta, solutyypistä, kasvualustasta, viljelyolosuhteista jne. Tässä osiossa on kaikki tarvittavat tiedot B16-solujen viljelyä varten.

B16-solujen viljelyä koskevat keskeiset seikat

Populaation kaksinkertaistumisaika:	B16-solujen keskimääräinen populaation kaksinkertaistumisaika on arviolta 24 tuntia.
Adheesiossa tai suspensiossa:	B16-solut ovat tarttuvia ja kasvavat monokerroksina.
Kylvötiheys:	B16-soluja suositellaan kylvettäväksi 1-2 x¹⁰⁴ ^solua/cm2 solutiheydellä. Kiinnittyneet B16-solut huuhdellaan 1 x PBS:llä ja dissosioituvat pinnasta Accutase-liuoksella. Solut sentrifugoidaan ja solupelletti suspendoidaan uudelleen kasvualustaan. Myöhemmin nämä solut annostellaan uuteen kolviin kasvua varten.
Kasvualusta:	B16-soluja viljellään EMEM-mediassa (Eagle's Minimum Essential Medium), joka sisältää 10 % naudan sikiöseerumia (FBS). Kasvualusta on uusittava 2-3 kertaa viikossa.
Kasvuolosuhteet:	B16-solulinjan kasvattamiseen käytetään kostutettua inkubaattoria, jossa on 5 %_CO2-syöttö ja 37 °C:n lämpötila.
Varastointi:	Solut säilytetään alle -150 °C:n lämpötilassa tai nestemäisen typen höyryfaasissa solujen elinkelpoisuuden turvaamiseksi.
Pakastusprosessi ja väliaine:	B16-solujen jäädyttämiseen käytetään CM-1- tai CM-ACF-pakastusmediumia, jossa käytetään hidasta jäädytysprosessia.
Sulatusprosessi:	Pakastetut B16-solut sulatetaan 37 °C:ssa vesihauteessa, joka sisältää mikrobilääkettä. Sulatetut solut voidaan viljellä suoraan annostelemalla ne kasvualustaa sisältäviin pulloihin. Solut voidaan myös sentrifugoida pakastusmedian komponenttien poistamiseksi ja viljellä sitten uudessa mediassa.
Bioturvallisuustaso:	B16-solulinjaa olisi käsiteltävä tai ylläpidettävä bioturvallisuustason 1 laboratoriossa.

B16-melanoomasolujen puoliksi juokseva kerros 10x- ja 20x-suurennoksessa.

3. b16-solulinja: B1616: Edut ja haitat

Kuten muillakin solulinjoilla, myös B16-solulinjalla on ainutlaatuinen yhdistelmä etuja ja haittoja. Tässä jaksossa luetellaan joitakin tämän melanoomasolulinjan merkittäviä etuja ja haittoja.

Edut

B16 on ensimmäinen tehokas hiirisolulinja, jota käytetään laajalti metastaasitutkimuksessa sen tarjoamien etujen vuoksi. Joitakin tämän ihosyöpäsolulinjan etuja ovat:

Helppo kasvattaa	B16-solulinja on helppo viljellä tutkimuslaboratorioissa. Sitä käytetään laajalti muun muassa syöpäsolujen biologian ja signaalireittien tutkimiseen.
Nopeasti kasvava	B16-melanoomasolulinjalla on korkea lisääntymisnopeus, joten se soveltuu solujen jakautumisen ja kasvuprosessien tutkimiseen.
Kasvainvaikuttavuus	B16 on tumorigeeninen solulinja, jolla on kasvaimen kaltaisia ominaisuuksia, kuten invaasio, migraatio ja proliferaatio. Se on arvokas kasvainten muodostumisen, etenemisen ja etäpesäkkeiden tutkimiseen.

Haitat

B16-solulinjaan liittyviä haittoja ovat:

Merkityksen puute ihmisen kannalta	Koska B16 on hiiren melanoomasolulinja, se ei välttämättä edusta tarkasti ihmisen ihosyöpäbiologiaa, mikä rajoittaa tutkimustulosten siirrettävyyttä.
Heterogeenisuus	B16-solut ovat heterogeenisiä, ja niillä on erilaisia geneettisiä ja fenotyyppisiä ominaisuuksia samassa viljelyssä. Tämä voi vaikuttaa tulosten luotettavuuteen ja toistettavuuteen.

4. b16-solujen sovellukset

B16-solulinjaa käytetään laajalti tutkimuksissa. Muutamia tämän solulinjan lupaavia sovelluksia ovat:

Kasvainten biologia: Tämä hiiren ihosyöpäsolulinja on tumorigeeninen ja sitä käytetään laajalti kasvainten biologian ymmärtämiseen. B16-solujen avulla on tehty useita tutkimuksia, joissa on selvitetty kasvainsolujen kasvun, proliferaation ja metastaasin taustalla olevia solumekanismeja. Vuonna 2020 tehdyssä tutkimuksessa käytettiin B16-soluja pitkän ei-koodaavan RNA:n, LncRNA MEG3:n, roolin tutkimiseen melanooman muodostumisessa, kasvussa ja metastaasissa. Tässä tutkimuksessa havaittiin, että ei-koodaava RNA moduloi miRNA-21/E-kadheriiniakselia stimuloidakseen näitä solutapahtumia [2]. Samoin tutkittiin Notch1-signaloinnin mahdollista roolia kasvaimen aiheuttamassa immunosuppressiossa B16-soluja käyttäen [3].
Lääkkeiden löytäminen: B16-soluja käytetään lääkeaihioiden mahdollisten terapeuttisten vaikutusten validointiin ja testaamiseen. Eräässä tutkimuksessa arvioitiin neogambogihapon, luonnollisen yhdisteen, kasvainvastaista vaikutusta B16-solulinjalla. Tutkimustulokset osoittivat, että tämä yhdiste moduloi PI3K/Akt/mTOR-signalointireittiä aiheuttaen syöpäsolujen kuoleman [4]. Toisessa tutkimuksessa tutkittiin saponiinin Ginsenoside Rg3:n melanoomaa ehkäisevää vaikutusta B16-solulinjalla. Tutkimuksessa ehdotettiin, että tämä luonnollinen yhdiste aiheutti kasvainten vastaista vaikutusta alentamalla ERK- ja Akt-reittien toimintaa [5].

430,00 €*

Sisältö: 1.5 milliliter

Hinnat ilman veroja ja toimituskuluja

cryovial

Tuotenumero: 305154

5.tutkimusjulkaisut, joissa on B16-soluja

Tässä on joitakin merkittäviä tutkimusjulkaisuja, joissa käytetään B16-melanoomasolulinjaa.

LncRNA MEG3 edistää melanooman kasvua, etäpesäkkeitä ja muodostumista moduloimalla miR-21/E-kadheriiniakselia

Tässä Cancer Cell International -lehdessä (2020) julkaistussa julkaisussa ehdotettiin, että pitkä ei-koodaamaton RNA MEG3 edistää B16-melanoomasolujen muodostumista, kasvua ja metastaasiaa moduloimalla miRNA-21/E-kadheriiniakselia.

Uusi psoraleenijohdannainen-MPFC tehostaa melanogeneesiä p38 MAPK- ja PKA-signalointireittien aktivoinnin kautta B16-soluissa

Tämä artikkeli julkaistiin International Journal of Molecular Medicine -lehdessä vuonna 2018. Tässä tutkimuksessa tutkittiin psoraleenijohdannaisen 4-metyyli-6-fenyyli-2H-furo[3,2-g] kromen-2-onin (MPFC) melanogeenista vaikutusta ja mekanismeja B16-soluissa. Tutkimuksessa ehdotettiin, että tämä johdannainen edistää melanogeneesiä stimuloimalla PKA- ja p38 MAPK-solujen signalointia.

Notch1-signalointi melanoomasoluissa edisti kasvaimen aiheuttamaa immunosuppressiota TGF-β1:n ylössäätelyn kautta

Tämä tutkimus julkaistiin vuonna 2018 Journal of Experimental & Clinical Cancer Research -lehdessä. Tutkimustulokset viittaavat siihen, että Notch1-signaloinnin aktivoituminen B16-soluissa voi estää kasvaimen vastaista immuniteettia TGF-β1-geenin ilmentymisen kohoamisen kautta.

Neogambogiinihappo indusoi melanooma B16-solujen apoptoosia PI3K/Akt/mTOR-signalointireitin kautta

Tämän tutkimuksen tekivät Chunlan Wu ja hänen kollegansa vuonna 2020, ja se julkaistiin Acta Biochimica Polonica -lehdessä. Tutkimuksessa todetaan, että neogambogihappo, luonnollinen yhdiste, voi aiheuttaa B16-melanoomasolujen kuoleman moduloimalla PI3K/Akt/mTOR-signalointikaskadia.

Iridium(III)-kompleksi voimakkaana syöpälääkkeenä indusoi apoptoosia ja autofagiaa B16-soluissa AKT/mTOR-reitin estämisen kautta

Tämä tutkimusartikkeli julkaistiin European Journal of Medicinal Chemistry -lehdessä vuonna 2018. Tässä tutkimuksessa tutkijat tutkivat yhdisteen, iridium(III)-kompleksin, syövänvastaista aktiivisuutta B16-melanoomasoluilla.

Ailantoni indusoi solusyklin pysähtymisen ja apoptoosin melanoomien B16- ja A375-soluissa

Tässä tutkimuksessa ehdotettiin, että kasvien bioaktiivisella aineella, ailantonilla, on syöpää ehkäisevää potentiaalia, koska se voi indusoida apoptoosia ja solusyklin pysähtymistä B16- ja A375-melanoomasoluissa. Tämä artikkeli julkaistiin Biomolecules-lehdessä vuonna 2019.

6. b16-solulinjan resurssit: B1616: Protokollien, videoiden ja muun muassa

B16-solulinjasta on rajallisesti resursseja, joissa selitetään sen viljely- ja transfektioprotokollia.

Melanoomasolujen viljely: Tämä video antaa arvokkaita vinkkejä melanoomasolulinjojen viljelyyn.
Solulinjan subkultivointi: Tässä videossa selitetään solulinjan yleinen subkulturointiprotokolla.
B16F10-solulinjan transfektio: Tässä videossa selitetään B16-melanoomasolujen alalinjan transfektioprotokolla. Se voi auttaa sinua optimoimaan B16-solujen transfektioprotokollan.

Seuraavassa on joitakin soluviljelyprotokollia B16-soluille.

B16-solujen viljely: Tämä verkkosivusto sisältää kaikki tarvittavat tiedot B16-solujen viljelystä, mukaan lukien kasvualustat, subkulturointi, solujen sulattaminen ja jäädyttäminen.

Viitteet

Danciu, C., et al., Behaviour of four different B 16 murine melanoma cell sublines: C57 BL/6J-iho. International journal of experimental pathology, 2015. 96(2): p. 73-80.
Wu, L., et al., LncRNA MEG3 edistää melanooman kasvua, etäpesäkkeitä ja muodostumista moduloimalla miR-21/E-kadheriiniakselia. Cancer cell international, 2020. 20: p. 1-14.
Yang, Z., et al., Notch1-signalointi melanoomasoluissa edisti kasvaimen aiheuttamaa immunosuppressiota TGF-β1:n ylössäätelyn kautta. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research, 2018. 37(1): p. 1-13.
Wu, C., et al., Neogambogiinihappo indusoi melanooma B16-solujen apoptoosia PI3K/Akt/mTOR-signalointireitin kautta. Acta Biochimica Polonica, 2020. 67(2): p. 197-202.
Meng, L., et al., Ginsenosidi Rg3:n kasvainvastainen aktiivisuus melanoomassa ERK- ja Akt-reittien alasäätelyn kautta. International Journal of Oncology, 2019. 54(6): p. 2069-2079.