B16-F10-solut – B16-F10-melanoomasolulinjan tutkiminen etäpesäkkeiden tutkimuksessa
B16-F10-solut muodostavat C57BL/6J-hiirestä peräisin olevan melanoomasolulinjan. Niitä käytetään laajalti ihosyövän tutkimuksessa. Tutkijat käyttävät näitä soluja tutkiakseen kasvaimen kehittymistä ja etenemistä sekä hoitotoimenpiteitä. Tässä artikkelissa käsitellään B16-F10-melanoomasolujen perusominaisuuksia. Artikkeli sisältää erityisesti seuraavat tiedot:
- Kasvatusväliaine
- B16-F10-soluja viljellään DMEM-alustalla. Alustaan lisätään 10 % FBS:ää, 4 mM L-glutamiinia, 1,5 g/l NaHCO3:ta, 4,5 g/l glukoosia ja 1,0 mM natriumpyruvaattia ihanteellisen solujen kasvun varmistamiseksi. Elatusaine tulisi vaihtaa 2–3 kertaa viikossa.
- Kaksinkertaistumisaika
- B16-F10-solujen kaksinkertaistumisaika on noin 20,1 tuntia. Se voi vaihdella 17–21 tunnin välillä viljelyolosuhteista riippuen.
- Kasvutyyppi
- B16-F10 on adheesiivinen solulinja. Solut kasvavat nopeasti ja muodostavat monokerroksia.
- Bioturvallisuustaso
- BSL-1
- Saatavana
- Cytion — Tilaa B16-F10
- B16-F10-solulinjan alkuperä ja yleiset ominaisuudet
- B16-F10-solujen viljelyohjeet
- B16-F10-solut: edut ja haitat
- B16-F10-solujen tutkimuskäyttö
- Julkaisut, joissa mainitaan B16-F10-solulinja
- B16-F10-solulinjan resurssit: protokollat, videot ja muuta
B16-F10-solulinjan alkuperä ja yleiset ominaisuudet
Tässä osiossa kerrotaan B16F10-melanoomasyöpäsolujen alkuperästä ja erityispiirteistä. Se auttaa sinua käyttämään solulinjaa tehokkaasti tutkimustyössäsi. Tärkeimmät oppimasi asiat: Mitä ovat B16-F10-solut? Mistä B16F10 on peräisin? Mikä on B16F12-solulinjan morfologia? Mikä on B16F10-solun koko?
- B16-F10 on C57BL/6J-hiirten ihokudoksesta peräisin olevan B16-kasvainsolulinjan alaklooni. Tässä yhteydessä B16F10-melanoomasolut kehitettiin injektoimalla B16-linja laskimoon immuunipuutteisille tai syngeenisille hiirille. Nämä solut valittiin niiden kyvyn perusteella muodostaa metastaattisia keuhkokolonioita in vivo, ja ne vakiinnutettiin kymmenen in vitro -keuhkokolonioiden muodostusjakson jälkeen [1]. Sen kehittivät Fidler ja kollegat vuonna 1976.
- B16-F10-solulinjat ovat epiteelin kaltaisia ja sukkulamaisia.
- B16-F10-solujen arvioitu koko on 15,4 ± 1,4 μm [2].
B16-F1- ja B16-F10-solut
B16-F1- ja B16-F10-solut on johdettu B16-emokantasolulinjasta. Molemmat ovat peräisin samasta lähteestä ja niillä on lähes samanlaiset ominaisuudet. Suurin ero on kuitenkin niiden metastaattisessa kyvyssä. B16-F10-soluilla on korkea, kun taas B16-F1-soluilla on alhainen metastaattinen potentiaali [3].
B16-F10-solujen viljelyohjeet
Ennen solulinjan käsittelyä ja viljelyä on tunnettava sen kaksinkertaistumisaika, kasvualustat, olosuhteet ja soluviljelyprotokollat. Tässä osiossa käsitellään seuraavia aiheita: Mikä on B16-F10-solujen kaksinkertaistumisaika? Miten B16-F10-soluja viljellään? Mikä on B16-F10-solujen kasvualusta? Mitä viljelyolosuhteita suositellaan B16-F10-soluille?
B16-F10-solujen viljelyn avainkohdat
Kaksinkertaistumisaika:
B16-F10-solujen kaksinkertaistumisaika on noin 20,1 tuntia. Se voi vaihdella 17–21 tunnin välillä viljelyolosuhteista riippuen.
Adheesio- vai suspensio:
B16-F10 on kiinnittyvä solulinja. Solut kasvavat nopeasti ja muodostavat monokerroksia.
Jakosuhde:
B16-F10-solut viljellään uudelleen jakosuhteella 1:2–1:4. Solut pestään fosfaattipuskuriliuoksella (1x) ja inkuboidaan sitten Accutase-siirto-liuoksessa 8–10 minuuttia huoneenlämmössä. Soluihin lisätään tuoretta elatusainetta ja ne sentrifugoidaan. Kerätty solupelletti suspendoidaan uudelleen, ja solut jaetaan uuteen pulloon, joka sisältää tuoretta viljelyväliainetta jakosuhteen mukaisesti.
Kasvatusväliaine:
B16-F10-soluja viljellään DMEM-alustalla. Alustaan lisätään 10 % FBS:ää, 4 mM L-glutamiinia, 1,5 g/l NaHCO3:a, 4,5 g/l glukoosia ja 1,0 mM natriumpyruvaattia ihanteellisen solujen kasvun varmistamiseksi. Alusta tulee vaihtaa 2–3 kertaa viikossa.
Kasvuolosuhteet:
B16-F10-soluja kasvatetaan kostutetussa inkubaattorissa 37 °C:ssa ja 5 %:n CO2-pitoisuudessa.
Säilytys:
Jäädytetyt solut säilytetään alle -150 °C:ssa sähköisessä ultra-matalalämpötilapakastimessa tai nestemäisen typen höyryvaiheessa solujen elinkelpoisuuden säilyttämiseksi.
Jäädytysprosessi ja elatusaine:
B16-F10-solut jäädytetään CM-1- tai CM-ACF-kasvatusliuoksessa säilytystä varten. Tätä varten suositellaan hidasta jäädytysprosessia, jossa lämpötila laskee vain 1 °C minuutissa, jotta solut eivät kärsi lämpöshokista.
Sulatusprosessi:
Jäädytetyt B16-F10-solut sulatetaan ennalta asetetussa 37 °C:n vesihauteessa 40–60 sekunnin ajan. Seuraavaksi solut lisätään tuoreeseen elatusaineeseen ja sentrifugoidaan jäädytysaineen komponenttien poistamiseksi. Kerätyt solut suspendoidaan uudelleen kasvualustaan ja kaadetaan pulloihin viljelyä varten.
Bioturvallisuustaso:
B16-F10-solulinjan käsittelyyn ja ylläpitoon vaaditaan bioturvallisuustason 1 laboratorio.
B16-F10-solut: Edut ja haitat
Muiden solulinjojen tavoin myös B16-F10-solulinjalla on joitakin etuja ja haittoja. Tässä osiossa käsitellään tämän ihomelanoomasolulinjan merkittävimpiä etuja ja haittoja.
Edut
B16-F10-solulinjaa käytetään laajalti syöpätutkimuksessa. B16-F10-solujen etuja ovat:
Metastaattinen potentiaali
Ihometelanooman B16F10-soluilla on suuri metastaattinen potentiaali, mikä tekee niistä arvokkaita syövän metastaasien ja niiden taustalla olevien mekanismien tutkimuksessa.
In vitro -kasvainmalli
B16-F10-solut toimivat in vitro -mallina syövän etenemisen ja kasvun tutkimuksessa, auttaen tutkijoita ymmärtämään syöpää aiheuttavia solu- ja molekyylimekanismeja.
Haitat
B16-F10-solulinjaan liittyvät haitat ovat:
Hiirestä peräisin oleva solulinja
B16-F10 on hiirestä peräisin oleva solulinja, mikä rajoittaa sen sovellettavuutta ihmiskohtaisiin tutkimuksiin. Näistä soluista saadut tutkimustulokset eivät välttämättä aina ole täysin sovellettavissa ihmisen biologiaan.
B16-F10-solujen tutkimuskäyttö
B16-F10-solulinjaa käytetään laajasti syöpätutkimuksessa. Tässä käsitellään muutamia tämän solulinjan lupaavia sovelluksia.
- Syöpätutkimus: B16-F10-solulinja on arvokas malli syöpäsolujen prosessien, kuten proliferaation, invaasion, migraation ja solukuoleman tai apoptoosin, tutkimiseen. Lisäksi se auttaa tutkijoita saamaan tietoa näitä soluprosesseja ohjaavista molekyylimekanismeista ja reiteistä. Vuonna 2018 tehdyssä tutkimuksessa selvitettiin CCR5:n (C-C-kemokiinireseptori tyyppi 5) roolia melanoomasolujen epiteelisolujen mesenkymaalisolujen siirtymässä ja etäpesäkkeiden muodostumisessa. Tulokset osoittivat, että CCR5:n puute rajoittaa kasvaimen kasvua ja etäpesäkkeiden muodostumista, kun taas sen korkea ilmentyminen johtaa B16-F10-solujen kasvun ja etäpesäkkeiden muodostumisen lisääntymiseen. Lisätutkimuksissa raportoitiin, että CCR5 säätelee TGFβ1-ilmentymistä, joka puolestaan säätelee PI3K/AKT/GSK3β-signalointia edistääkseen epiteelisolujen mesenkymaaliseksi siirtymistä ja solujen migraatiota [4].
- Lääketutkimus ja -kehitys: B16F10-melanoomakasvainsolut ovat erittäin aggressiivisia ja siten sopivia potentiaalisten kasvainlääkkeiden ja hoitojen testaamiseen. Tutkijat käyttävät näitä soluja ja arvioivat eri yhdisteiden vaikutusta solujen kasvuun, proliferaatioon ja etäpesäkkeiden muodostumiseen, mikä auttaa lääkekehityksessä. Valentina Nanni ja hänen kollegansa tekivät vuonna 2018 tutkimuksen, jossa selvitettiin Spartium junceum-kukkien hydroalkoholiuutteen terapeuttisia vaikutuksia. Tutkimuksessa ehdotettiin, että kukkauute oli tehokas indusoimaan B16-F10-solujen ikääntymistä, mikä johtaa solujen kasvun ja melaniinituotannon estymiseen, joten sillä voi olla potentiaalisia syöpälääkinnällisiä vaikutuksia [5].
5. Julkaisut, joissa käsitellään B16-F10-solulinjaa
Seuraavassa on joitakin merkittäviä tutkimusjulkaisuja, joissa käsitellään B16-F10-melanoomasolulinjaa:
Tämä tutkimus julkaistiin Nutrients-lehdessä (2020). Siinä esitettiin, että Sorghum bicolor -etanoliuutteella on anti-melanogeeninen vaikutus ihon melanooma-B16F10-soluissa.
Kalsitrioli estää proliferaatiota ja saattaa indusoida apoptoosia B16–F10-soluissa
Medical Science Monitor Basic Research -lehdessä (2022) julkaistussa tutkimuksessa esitettiin, että kalsitrioli-lääke vaikuttaa kasvaimia estävästi B16-F10-melanoomasoluissa estämällä solujen lisääntymistä ja indusoimalla apoptoosia.
Tämä artikkeli on julkaistu Biochemical and Biophysical Research Communications -lehdessä (2022). Tulokset paljastivat, että kardolit, resorsinolilipidit, aiheuttavat voimakasta sytotoksisuutta B16-F10-solulinjalle.
Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine -lehdessä (2018) julkaistussa tutkimuksessa tutkittiin Ginkgo biloba -kuoriuutteen metastaasien estämispotentiaalia B16-F10-soluilla.
World Neurosurgery -lehdessä (2018) julkaistussa tutkimuksessa ehdotettiin, että tymokinoni voi olla tehokas hoito aivojen sisäisille metastaattisille leesioille, koska se estää B16-F10-solujen kasvua ja indusoi apoptoosia.
B16-F10-solulinjan resurssit: protokollat, videot ja muuta
B16F10-endoteelisoluja käytetään laajalti ihosyövän tutkimuksessa. Tässä on joitakin verkkoresursseja, joissa selitetään niiden viljely- ja transfektioprotokollat:
- B16F10-melanoomasolujen transfektio: Tämä video-opas auttaa sinua oppimaan B16-F10-solujen transfektioprotokollan.
- B16-F10-transfektio: Tässä asiakirjassa selitetään ihomelanooman B16F10-solujen in vitro -DNA-transfektio-ohjeet.
Seuraava linkki sisältää B16-F10-solujen viljelyprotokollan:
- B16-F10-solujen aliviljely: Tämä verkkosivusto sisältää hyödyllistä tietoa B16F10-melanoomakasvainsoluista. Se sisältää kasvualustoja, kaksinkertaistumisaikaa, viljelyolosuhteita ja protokollaa solujen aliviljelyyn sekä kryokonservoiduista ja proliferaatiivisista viljelmistä huolehtimiseen.
Viitteet
- Poste, G., et al., Vertailu viljellyistä solulinjoista, ihonalaisista kasvaimista ja yksittäisistä keuhkometastaaseista eristettyjen B16-melanoomakloonien metastaattisista ominaisuuksista. Cancer Research, 1982. 42(7): s. 2770–2778.
- Nakamura, M., D. Ono ja S. Sugita, B16-melanoomasoluvarianttien mekaaninen fenotyyppaus (-)-epigallokatekiinigallaattihoidon tehokkuuden arvioimiseksi kartiomaisen mikrofluidilaitteen avulla. Micromachines, 2019. 10(3): s. 207.
- Danciu, C. ym., Neljän eri B16-hiirien melanoomasolulinjan käyttäytyminen: C57BL/6J-iho. Int J Exp Pathol, 2015. 96(2): s. 73–80.
- Liu, J., et al., CCR5:n korkea ilmentyminen melanoomassa tehostaa epiteeli-mesenkymaalisia siirtymiä ja etäpesäkkeitä TGFβ1:n välityksellä. The Journal of Pathology, 2019. 247(4): s. 481–493.
- Nanni, V., et al., Spartium junceum L. -kukkien vesi-alkoholiuute estää kasvua ja melaniinituotantoa B16-F10-soluissa indusoimalla solujen ikääntymistä. Phytomedicine, 2018. 46: s. 1–10.