AGS-solut – mahalaukun adenokarsinooman AGS-solujen hyödyntäminen syöpätutkimuksessa
AGS-solut muodostavat ihmisen mahalaukun adenokarsinooman solulinjan, jota käytetään laajalti biolääketieteellisessä tutkimuksessa. Niitä käytetään erityisesti mahasyövän biologian tutkimiseen, mukaan lukien kasvaimen kasvu, kehitys, eteneminen ja terapeuttiset toimenpiteet. Lisäksi niitä käytetään isäntä-patogeenivuorovaikutusten tutkimiseen.
- Kasvatusväliaine
- AGS-solujen viljelyyn käytetään DMEM-kasvatusainetta, joka sisältää 10 % FBS:ää, 4 mM L-glutamiinia, 4,5 g/l glukoosia, 1,5 g/l NaHCO3:a ja 1,0 mM natriumpyruvaattia. Kasvatusaine on vaihdettava 2–3 kertaa viikossa.
- Kaksinkertaistumisaika
- AGS-solujen kaksinkertaistumisaika on 24–48 tuntia.
- Kasvutyyppi
- AGS-solut ovat adheesiivisia. Ne kasvavat monokerroksiksi.
- Bioturvallisuustaso
- BSL-2
- Saatavana
- Cytion — Tilaa AGS
AGS-solujen yleiset ominaisuudet ja alkuperä
Ennen kuin aloitat työskentelyn solulinjan kanssa, sinun on tunnettava sen alkuperä ja yleiset ominaisuudet. Tässä osiossa käsitellään seuraavia asioita: Mitä ovat AGS-solut? Mikä on AGS-solun alkuperä? Mikä on AGS-syöpäsolulinjan morfologia?
- AGS-solulinja on peräisin 54-vuotiaan valkoihoisen naisen mahalaukun kudoksesta, jolla oli mahalaukun adenokarsinooma. Se eristettiin vuonna 1979 [1].
- AGS-soluilla on epiteelin kaltainen morfologia.
- Mahalaukun epiteeliset AGS-solut ovat hyperdiploideja. AGS-solujen modaalinen kromosomiluku on 49, jota esiintyy lähes 60 %:ssa soluista. Polyploidiaa esiintyy myös noin 3,6 %:ssa soluista.
AGS-solulinjan viljelyohjeet
Solulinjan asianmukainen käsittely ja hallinta edellyttävät sen viljelyn peruskäsitteiden tuntemista. Erityisesti on syytä oppia seuraavat asiat: Mikä on AGS-solujen jakautumisaika? Mikä on AGS-solujen viljelyalusta? Miten AGS-soluja siirrostetaan? Mitä pakastusaineita käytetään mahalaukun epiteelisoluille?
AGS-solujen viljelyn avainkohdat
Kaksinkertaistumisaika:
AGS-solujen kaksinkertaistumisaika on 24–48 tuntia.
Adherentti vai suspensiossa:
AGS-solut ovat adheesiivisia. Ne kasvavat monokerroksiksi.
Kylvötiheys:
AGS-solut kylvetään solutiheydellä 1 x 104 solua/cm2. Solut muodostavat tällä tiheydellä yhtenäisen monokerroksen 3–5 päivässä. Vanhan elatusaineen poistamisen jälkeen solut huuhdellaan 1 x PBS:llä ja inkuboidaan Accutase-dissosiaatioliuoksessa. Irronneet solut suspendoidaan uudelleen viljelyalustaan ja sentrifugoidaan. Solupelletti suspendoidaan uudelleen, ja AGS-solujen laskennan jälkeen ne siirretään uuteen pulloon kasvattamista varten.
Kasvatusväliaine:
AGS-solujen viljelyyn käytetään DMEM-kasvatusainetta, joka sisältää 10 % FBS:ää, 4 mM L-glutamiinia, 4,5 g/l glukoosia, 1,5 g/l NaHCO3:ta ja 1,0 mM natriumpyruvaattia. Kasvatusaine on vaihdettava 2–3 kertaa viikossa.
Kasvatusolosuhteet:
AGS-soluja pidetään kostutetussa inkubaattorissa (37 °C:n lämpötilassa) 5 %:n CO2-pitoisuudella.
Säilytys:
Jäädytetyt AGS-solut säilytetään sähköpakastimissa alle -150 °C:n lämpötilassa tai nestemäisen typen höyryvaiheessa pidempään.
Jäädytysprosessi ja elatusaine:
AGS-solujen pakastamiseen käytetään CM-1- tai CM-ACF-kasvatusainetta. Solujen pakastaminen tapahtuu hitaalla pakastusprosessilla, jossa lämpötila laskee vain 1 °C minuutissa, mikä suojaa solujen elinkelpoisuutta.
Sulatusprosessi:
Jäädytetyt mahalaukun epiteelisolut sekoitetaan nopeasti 37 °C:n vesihauteessa 40–60 sekunnin ajan. Sulatetut solut suspendoidaan uudelleen tuoreeseen viljelyalustaan ja kaadetaan uusiin pulloihin kasvattamista varten. 24 tunnin inkuboinnin jälkeen elatusaine uusitaan jäädytysaineen komponenttien poistamiseksi. Sen sijaan sulatetut solut sentrifugoidaan ja jäädytysaineen komponentit poistetaan. Sitten kerätyt solut suspendoidaan uudelleen ja annostellaan viljelyelatusainetta sisältävään pulloon.
Bioturvallisuustaso:
AGS-solujen viljelyyn tarvitaan bioturvallisuustason 2 laboratorio-olosuhteet.
AGS-solulinja: Edut ja rajoitukset
Tässä artikkelin osiossa käsitellään joitakin AGS-soluihin liittyviä keskeisiä etuja ja rajoituksia.
Edut
Mahalaukun epiteelisoluista peräisin olevien AGS-solujen tärkeimmät edut ovat:
Helppo viljellä
AGS-mahasyöpäsolulinjaa on helppo ylläpitää soluviljelylaboratorioissa. Sillä ei ole monimutkaisia tai vaativia soluviljelyvaatimuksia. Lisäksi sillä on hyvät kasvuominaisuudet, mikä tekee siitä ihanteellisen valinnan mahasyövän biologian tutkimiseen.
Merkitys mahasyövän tutkimuksessa
AGS-solut on peräisin ihmisen mahalaukun adenokarsinoomasta, minkä vuoksi niitä käytetään laajalti mahalaukun karsinooman biologian ja terapeuttisten toimenpiteiden tutkimuksessa.
Rajoitukset
AGS-solulinjaan liittyvä rajoitus on:
In vitro -solumalli
AGS-soluja viljellään biolääketieteen tutkimuslaboratorioissa keinotekoisissa olosuhteissa. Siksi ne eivät välttämättä täysin vastaa in vivo -olosuhteissa esiintyvää mahasyövän mikroympäristöä ja muita solu- ja molekyylitason vuorovaikutuksia.
AGS-solujen sovellukset
AGS-soluja käytetään erityisesti mahasyövän biologian tutkimiseen. Niillä on monia muita lupaavia sovelluksia biolääketieteen alalla. Joitakin mielenkiintoisia AGS-solujen tutkimussovelluksia ovat:
- Mahasyövän tutkimus: AGS-solut ovat erinomainen tutkimusväline mahasyövän kasvun, etäpesäkkeiden ja leviämisen taustalla olevien solu- ja molekyylimekanismien tutkimiseen. Tutkijat käyttävät myös mahalaukun epiteelisoluja (AGS-soluja) tutkiakseen erilaisia soluprosesseja, geneettisiä mutaatioita ja signalointireittejä mahasyövän kehittymisessä. Oncology Reports -lehdessä (2019) julkaistussa tutkimuksessa havaittiin, että mikroRNA-183-5p.1 edistää kasvainsolujen proliferaatiota, migraatiota ja invaasiota estämällä Bcl 2/P53-signaalikaskadia. Lisäksi se myös alentaa TPM1-geenin ilmentymistä näiden vaikutusten aikaansaamiseksi. Siten sekä mikroRNA:ta että TPM1:tä ehdotetaan tehokkaiksi molekyylikohteiksi kohdennettujen mahasyövän hoitojen kehittämisessä [2].
- Lääkeseulonta: AGS-soluja on yleisesti käytetty uusien ja tehokkaiden mahasyöpälääkkeiden seulontaan. Tutkijat arvioivat potentiaalisten lääkkeiden sytotoksisuutta ja tehoa AGS-solulinjan avulla. On myös tehty tutkimuksia uusien molekyylikohteiden tunnistamiseksi ja uusien kohdennettujen hoitojen kehittämiseksi mahasyövän torjumiseksi. Vuonna 2021 tehdyssä tutkimuksessa käytettiin AGS-mahasyöpäsoluja ja tutkittiin paklitakselilääkkeen terapeuttista vaikutusta. Tulokset paljastivat, että paklitakseli indusoi mitotisen katastrofin, joka on olennainen mekanismi apoptoosissa eli solukuolemassa AGS-soluissa. Lisäksi se edisti autofagiaa mahasyöpäsoluissa [3].
- Isäntä-patogeenivuorovaikutukset: AGS-syöpäsolulinjalla tutkitaan myös isäntä-patogeenivuorovaikutuksia. Tämä auttaa tutkijoita ymmärtämään infektioon liittyviä solumekanismeja ja reaktioita. Esimerkiksi vuonna 2020 tehdyssä tutkimuksessa havaittiin, että Helicobacter pylori -bakteerin ulkokalvovesikkeleissä esiintyvät pienet ei-koodaavat RNA:t vähentävät interleukiini 8:n eritystä ihmisen AGS-soluissa [4].
5. AGS-solulinjaa käsittelevät tutkimusjulkaisut
Tässä artikkelin osiossa käsitellään muutamia mielenkiintoisia ja eniten siteerattuja tutkimusjulkaisuja, joissa käsitellään AGS-soluja.
Tässä Biomedicine & Pharmacotherapy -lehdessä (2020) julkaistussa tutkimuksessa esitettiin, että salidrosidi, luonnollinen yhdiste, indusoi suojaavaa autofagiaa ja solukuolemaa mahalaukun epiteelisissä AGS-soluissa moduloimalla PI3K/AKT/mTOR-signaalireittiä.
Tämä tutkimus julkaistiin Biomedicine & Pharmacotherapy -lehdessä (2018). Siinä tutkittiin astragalus-polysakkaridin ja apatinib-lääkkeen synergistisiä syöpälääkinnällisiä vaikutuksia AGS-soluissa. Tutkimustulokset osoittivat, että astragalus tehostaa apatinibin syöpälääkkeen vaikutuksia estämällä AKT-signalointia.
Journal of Ethnopharmacology -lehdessä (2018) julkaistussa tutkimuksessa ehdotettiin, että curcuzedoalidi, Curcuma zedoaria Roscoe -kasvista peräisin oleva luonnollinen yhdiste, edistää sen sytotoksisuutta AGS-soluja vastaan.
FOXA1:n yli-ilmentyminen estää ihmisen mahasyövän AGS-solujen solujen lisääntymistä ja EMT:tä
Tässä Gene-lehdessä (2018) julkaistussa artikkelissa esitettiin, että FOXA1-geenin ilmentymisen lisääntyminen estää AGS-mahasyöpäsolujen proliferaatiota, epiteelistä mesenkymaaliseksi siirtymistä (EMT) ja invaasiota.
Tämä tutkimusartikkeli julkaistiin International Journal of Medical Microbiology -lehdessä vuonna 2020. Tässä tutkimuksessa käytettiin AGS-soluja isäntä-patogeenivuorovaikutusten tutkimiseen. Tulokset paljastivat, että Helicobacter pylori sisältää ulkokalvovesikkeleissään joitakin ei-koodaavia RNA-molekyylejä, jotka vaikuttavat IL-8-tasoihin AGS-soluissa.
AGS-solulinjan resurssit: protokollat, videot ja muuta
Seuraavassa on muutamia AGS-soluja käsitteleviä resursseja.
- AGS-solujen transfektioprotokolla: Tämä video on vaiheittainen opas mahalaukun epiteelisoluista koostuvien AGS-solujen transfektioprotokollan oppimiseen.
Seuraava linkki sisältää AGS-soluviljelyprotokollan.
- AGS-soluviljelyprotokolla: Tämä verkkosivusto sisältää hyödyllistä tietoa AGS-soluviljelyalustoista ja soluviljelyprotokollista. Lyhyesti sanottuna se tarjoaa protokollan mahalaukun epiteelisolujen AGS-solujen aliviljelyyn sekä lisääntyvien ja kryokonservoitujen AGS-viljelmien käsittelyyn.
- AGS-solujen subkultivointi: Tällä sivustolla selitetään yksityiskohtaisesti AGS-solujen subkultivointimenettely.
Viitteet
- Phuc, B.H., et al., Kahden vietnamilaisen Helicobacter pylori -kannan, CHC155 (peräisin potilaalta, jolla oli mahalaukun syöpä, joka ei sijainnut kardiassa) ja VN1291 (peräisin potilaalta, jolla oli pohjukaissuolihaava), vertaileva genomiikka. Scientific Reports, 2023. 13(1): s. 8869.
- Lin, J., et al., miRNA‑183‑5p. 1 edistää mahasyövän AGS-solujen siirtymistä ja invaasiota kohdentamalla TPM1:n. Oikaisu in/10.3892/or. 2020.7902. Oncology reports, 2019. 42(6): s. 2371–2381.
- Khing, T.M., et al., Paklitakselin vaikutus apoptoosiin, autofagiaan ja mitotiseen katastrofiin AGS-soluissa. Scientific Reports, 2021. 11(1): s. 23490.
- Zhang, H., et al., Helicobacter pylori -ulkomembraanivesikkelien pakkaamat sncRNA:t heikentävät IL-8:n eritystä ihmisen soluissa. International Journal of Medical Microbiology, 2020. 310(1): s. 151356.