A375-solulinja – opas melanoomatutkimukseen

A375 on ihmisen melanoomasolulinja, jota käytetään laajalti toksikologian ja immuno-onkologian tutkimuksessa. Tutkijat käyttävät tätä solulinjaa syövän biologian ja signalointireittien tutkimiseen, potentiaalisten syöpälääkkeiden testaamiseen tai seulontaan sekä uusien ja tehokkaiden hoitomuotojen kehittämiseen.

A375-solujen alkuperä ja yleiset ominaisuudet

Solulinjan alkuperän ja yleisten ominaisuuksien tunteminen voi auttaa sinua suunnittelemaan sen käyttöä tutkimuksessa. Tässä artikkelin osiossa käsitellään A375-solulinjan alkuperää ja ominaisuuksia. Esimerkiksi, mikä on A375-solulinja? Mitkä ovat A375-solulinjan ominaisuudet? Mistä A375-solut ovat peräisin? Mikä on A375-melanoomasolujen morfologia? Mikä on A375-solujen koko?

• Ihosyöpäsolulinja A375 on peräisin 54-vuotiaan naisen, jolla oli pahanlaatuinen melanooma, kiinteän kasvaimen eksplanttikulttuurista [1].
• A375-soluilla on epiteelin kaltainen morfologia.
• A375-solujen koko on suhteellisen pieni verrattuna muihin solulinjoihin. Niiden halkaisija on noin 12 µm.
• A375-melanoomasolut ovat hypotriploideja. Tämän solulinjan modaalinen kromosomiluku on 62. Yleensä jokaisessa solussa on yhdeksän merkkikromosomia ja yksi kopio normaaleista N2-, N6- ja N22-kromosomeista.

A375-solut: Soluviljelytiedot

A375-soluviljelmiä on helppo ylläpitää. Niillä ei ole vaativia soluviljelyvaatimuksia. Tässä osiossa kerrotaan tarvittavat soluviljelytiedot. Esimerkiksi mikä on A375-solujen kaksinkertaistumisaika? Mikä on A375-solulinjan elatusaine? Mikä on A375-solujen kylvötiheys? Ovatko A375-melanoomasolut adheesiivisia?

A375-solujen viljelyn avainkohdat

Populaation kaksinkertaistumisaika:

A375-solujen kaksinkertaistumisaika on 20 tuntia.

Adheesiivinen vai suspensiossa:

A375 on adheesiivinen ihmisen melanoomasolulinja.

Kylvötiheys:

1 x 10⁴ solua/cm² on ihanteellinen solutiheys A375-soluviljelmille. Adherentit solut huuhdellaan 1 x fosfaattipuskuriliuoksella (PBS) ja inkuboidaan siirto-liuoksella (Accutase). Sen jälkeen soluihin lisätään viljelyväliainetta ja ne sentrifugoidaan. Kerätyt solut suspendoidaan uudelleen viljelyväliaineeseen ja siirretään uusiin pulloihin kasvattamista varten.

Kasvatusväliaine:

DMEM-kasvatusliuosta suositellaan ihanteelliseksi A375-kasvatusliuokseksi, kun siihen lisätään 10 % sikiön naudan seerumia (FBS), 4,5 g/l glukoosia, 1,5 g/l NaHCO3:ta, 4 mM L-glutamiinia ja 1,0 mM natriumpyruvaattia. A375-kasvatusliuos tulee vaihtaa 2–3 kertaa viikossa.

Kasvatusolosuhteet:

A375-melanoomasoluja kasvatetaan kostutetussa inkubaattorissa (37 °C) 5 %:n CO2-pitoisuudella.

Säilytys:

Jäädytetyt A375-solut tulee säilyttää alle -150 °C:ssa nestemäisen typen höyryvaiheessa tai sähköpakastimessa.

Jäädytysprosessi ja elatusaine:

A375-solulinjan pakastamiseen käytetään CM-1- tai CM-ACF-kasvatusainetta. Solujen elinkelpoisuuden säilyttämiseksi on valittu hidas pakastusprosessi, jossa lämpötila laskee asteittain 1 °C kerrallaan.

Sulatusprosessi:

Jäädytettyä A375-melanoomasolupulloa ravistellaan nopeasti vesihauteessa 40–60 sekuntia, kunnes jäljellä on vain pieni jääpalanen. Soluihin lisätään tuoretta elatusainetta ja ne sentrifugoidaan jäädytysaineen poistamiseksi. Saatu solupelletti suspendoidaan uudelleen ja kaadetaan uusiin pulloihin.

Bioturvallisuustaso:

A375-viljelmiä käsitellään ja ylläpidetään bioturvallisuustason 1 laboratorio-olosuhteissa.

A375-solulinjan tutkimuskäyttö

A375-solulinjalla on laaja-alaisia tutkimussovelluksia syöpätutkimuksessa. Tässä on joitakin yleisiä alueita, joilla A375-soluja hyödynnetään.

• Syöpätutkimus: A375-soluilla on laaja-alaisia sovelluksia melanoomatutkimuksessa. Tutkijat käyttivät näitä soluja tutkiakseen ihosyövän biologiaa, prosesseja ja taustalla olevia solujen signalointimekanismeja, mukaan lukien solujen proliferaatio, migraatio ja invaasio. Tämä voi myös auttaa tutkijoita tunnistamaan uusia molekyyliterapeuttisia kohteita. Lin Zhu ja hänen kollegansa tekivät vuonna 2019 tutkimuksen, jossa käytettiin erittäin aggressiivisia A375-melanoomasoluja ja selvitettiin mikroRNA-3662:n roolia A375-melanoomasolujen kasvussa ja invaasiossa. Tutkimustulosten mukaan mikroRNA-3662 kohdistuu ZEB1-geeniin ja säätelee melanoomasolujen kasvua in vitro ja in vivo A375-kasvainmallissa [2]. Vastaavasti vuonna 2018 tehdyssä tutkimuksessa havaittiin, että PI3K/AKT- ja MAPK/ERK-signalointireitit ovat mukana A375-solulinjan proliferaatiossa ja metastaasissa [3].
• Lääkekehitys ja testaus: A375-solulinja on hyödyllinen in vitro -kasvainmalli potentiaalisten syöpälääkkeiden testaamiseen ja seulontaan. Tutkijat arvioivat uusien kemoterapeuttisten lääkkeiden, yhdisteiden ja muiden hoitojen toksisuutta ja tehoa käyttämällä näitä A375-melanoomasoluja. Esimerkiksi yhdessä tutkimuksessa selvitettiin greipistä peräisin olevien mikro- ja nanovesikkelien syöpälääkeominaisuuksia A375-ihmisen melanoomasoluilla. Tulokset osoittivat, että mikro- ja nanovesikkelit indusoivat solusyklin pysähtymistä ja apoptoosia sekä estävät geenien ilmentymistä solujen proliferaatiossa, migraatiossa ja invaasiossa [4].

A375-solut: Julkaisut

Tässä mainitaan joitakin merkittäviä A375-soluja käsitteleviä tutkimusjulkaisuja.

D-vitamiini ja sen matalan kalsiumin pitoisuuden analogit moduloivat sisplatiinin ja dakarbatsiinin syöpälääkinnällisiä ominaisuuksia ihmisen melanooma-A375-solulinjassa

Tämä tutkimus julkaistiin Journal of Oncology -lehdessä vuonna 2019. Tutkimuksessa esitettiin, että D-vitamiinin ja sen analogien yhteiskäyttö parantaa sisplatiinin ja dakarbatsiinin syöpälääkinnällistä vaikutusta A375-melanoomasoluissa.

Valittujen aloe-lajien geeli- ja kokonaisen lehden uutteiden antimelanoomavaikutusten (A375-solulinja) in vitro -arviointi

Tämä tutkimus julkaistiin Journal of Herbal Medicine -lehdessä vuonna 2022. Tutkimuksessa selvitettiin aloe vera -geelin melanoomaa estäviä vaikutuksia A375-melanoomasoluissa.

Fermitiiniperheen jäsen 2 edistää melanooman etenemistä vahvistamalla p-α-Pixin sitoutumista Rac1:een MAPK-reitin aktivoimiseksi

Tämä Oncogene-lehdessä (2021) julkaistu tutkimus esitti, että fermitiiniperheen jäsen 2 (FERMT2 tai kindlin-2) edistää melanooman etenemistä aktivoimalla MAPK:n sitoutumalla p-α-Pix:iin ja Rac1:een.

FARP1 edistää solujen proliferaatiota moduloimalla MAPK-signalointireittiä ihomelanoomassa

Tämä The American Journal of Dermatopathology -lehdessä (2019) julkaistu tutkimus esitti, että FARP1 saattaa edistää ihomelanooman kehittymistä ja etenemistä. Siten se voi olla hyödyllinen terapeuttinen kohde.

Phyllodium elegans -uutteiden sytotoksinen ja apoptoottinen potentiaali ihmisen syöpäsolulinjoissa

Tämä tutkimusartikkeli julkaistiin Bioengineered-lehdessä (2019). Tutkimuksessa selvitettiin Phyllodium elegans -kasviuutteen sytotoksista ja apoptoottista vaikutusta ihmisen karsinoomasolulinjoihin, mukaan lukien A375.

A375-solulinjan resurssit: protokollat, videot ja muuta

Seuraavassa on muutamia A375-soluja käsitteleviä verkkoresursseja.

• A375-solujen transfektio: Tämä video-opas auttaa sinua oppimaan A375-solujen transfektion vaihe vaiheelta.
• Soluviljely: Tämä video sisältää erittäin hyödyllistä tietoa solulinjojen viljelystä.

A375-solujen soluviljelyprotokollat on lueteltu tässä.

• A375-solulinja: Tämä linkki sisältää hyödyllistä tietoa A375-solulinjan viljelystä ja ylläpidosta, mukaan lukien A375-viljelyalustat sekä pakastettujen ja lisääntyvien A375-viljelmien käsittely.

Lähteet

1. Avram, S., et al., Standardization of A375 human melanoma models on chicken embryo chorioallantoic membrane and Balb/c nude mice. Oncol Rep, 2017. 38(1): s. 89–99.
2. Zhu, L., et al., MicroRNA-3662 kohdistuu ZEB1:een ja heikentää erittäin aggressiivisen melanoomasolulinjan A375 invaasiota. Cancer Manag Res, 2019. 11: s. 5845–5856.
3. Peng, X., et al., Oxyfadichalcone C estää melanooma-A375-solujen proliferaatiota ja etäpesäkkeiden muodostumista estämällä PI3K/Akt- ja MAPK/ERK-reittejä. Life sciences, 2018. 206: s. 35–44.
4. Stanly, C., et al., Greipistä peräisin olevilla mikro- ja nanovesikkeleillä on erilliset metabolomiprofiilit ja syöpälääkkeiden vaikutukset A375-ihmisen melanoomasolulinjassa. Cells, 2020. 9(12): s. 2722.