Nestemäisen typen turvallisuusvihjeitä turvalliseen solun varastointiin

Soluviljelylaboratorioissa nestemäinen typpi on välttämätöntä arvokkaiden solulinjojen pitkäaikaisessa varastoinnissa ja säilyttämisessä. Cytionilla asetamme etusijalle sekä solulinjoidemme laadun että kryogeenisiä materiaaleja käsittelevän laboratoriohenkilökunnan turvallisuuden. Tässä kattavassa oppaassa esitellään keskeiset turvatoimet ja parhaat käytännöt nestemäisen typen kanssa työskentelyyn solujen varastointisovelluksissa.

Nestemäisen typen käsittelyssä tarvittavat henkilökohtaiset suojavarusteet (PPE)

Kun työskentelet nestemäisen typen kanssa solulinjojen, kuten HeLa-solujen tai MCF-7-solujen, säilyttämiseksi, asianmukainen henkilökohtainen suojavarustus on ehdoton edellytys. Täysikasvoinen visiiri on pakollinen suojaamaan roiskeilta ja höyryiltä, jotka voivat aiheuttaa vakavia vaurioita silmille ja kasvokudokselle. Lämpöeristettyjen kryogeenisten käsineiden on ulotuttava pitkälle kyynärvarteen, sillä tavalliset laboratoriokäsineet eivät suojaa riittävästi äärimmäistä kylmyyttä vastaan. Ulompana suojakerroksena on käytettävä laboratoriotakkia, jota on ihanteellisesti täydennettävä roiskevedenpitävällä muoviesiliinalla, joka antaa lisäsuojaa vahingossa tapahtuvia roiskeita vastaan. Kun siirrät soluja Freeze Medium CM-1:stä nestemäiseen typpeen, varmista, että henkilönsuojaimet ovat hyvässä kunnossa eikä niissä ole merkkejä kulumisesta tai vaurioista. Muista, että pienetkin altistukset nestemäiselle typelle voivat aiheuttaa välittömiä kudosvaurioita, joten kattava henkilökohtainen suojavarustus on välttämätön jokaisessa vuorovaikutuksessa LN2-varastointijärjestelmien kanssa.

Ilmanvaihtovaatimukset ja hapen seuranta

Asianmukainen ilmanvaihto on ratkaisevan tärkeää, kun arvokkaita tutkimusmateriaaleja, kuten U937-soluja ja RAJI-soluja, säilytetään nestemäisessä typessä. Kun LN2 haihtuu, se laajenee nopeasti - yksi litra nestemäistä typpeä tuottaa noin 700 litraa typpikaasua, joka voi nopeasti syrjäyttää hapen suljetuissa tiloissa. Nestemäisen typen varastointialueesi on varustettava mekaanisilla ilmanvaihtojärjestelmillä ja hapenvalvontalaitteilla. Tiloihin, joissa säilytetään useita solulinjoja ja suuria määriä Freeze Medium CM-1 - 500 ml:aa, suosittelemme asentamaan pysyviä happimonitoreita, joissa on äänihälytys, joka käynnistyy 18 %:n happipitoisuuden kohdalla. Varastotilassa on oltava korkeatasoiset ilmanvaihtopisteet, koska typpikaasu on lämmitettynä hieman ilmaa kevyempää. Älä koskaan luota pelkkään luonnolliseen ilmanvaihtoon - mekaaniset ilmanvaihtojärjestelmät on tarkastettava säännöllisesti ja huollettava valmistajan ohjeiden mukaisesti, jotta varmistetaan tasainen ilmanvaihto.

Kahden henkilön turvallisuusprotokolla

Kun käsittelet nestemäistä typpeä herkkien solulinjojen, kuten HUVEC-solujen tai ihmisen mesenkymaalisten kantasolujen (luuydin) kryosäilytystä varten, työskentele aina pareittain. Tämä kaverijärjestelmä on erityisen kriittinen tärkeissä toiminnoissa, kuten näytteiden siirtämisessä säilytykseen, kryoastioiden täyttämisessä tai suurten määrien Freeze Medium CM-1 -mediumin käsittelyssä. Toinen henkilö toimii turvallisuustarkkailijana ja voi reagoida välittömästi hätätilanteissa, kuten vuodon, hapen loppumisen tai henkilövahingon sattuessa. Hänet on sijoitettava laboratorion uloskäynnin läheisyyteen, ja hänen on pidettävä näköyhteys ja pysyttävä poissa välittömästä työskentelyalueesta. Molempien ryhmän jäsenten on oltava täysin koulutettuja hätätilannemenetelmiin ja tiedettävä turvavarusteiden sijainti. Suunnittele nestemäisen typen käsittelytoiminnot säännöllisinä työaikoina, jolloin tukihenkilöstö on paikalla, äläkä koskaan yritä kryogeenisiä toimintoja työajan ulkopuolella tai viikonloppuisin.

LN2:n käsittelyä koskevat pakolliset koulutusvaatimukset

Ennen arvokkaita näytteitä, kuten HeLa-soluja, sisältävien nestemäisen typen varastointijärjestelmien käsittelyä tai käyttöä CM-ACF-pakastusmediumilla, jossa ei ole seerumia, kattava koulutus on pakollinen. Koulutuksen on katettava asianmukaiset käsittelytekniikat, kryogeenisten vaarojen ymmärtäminen ja hätätilanteissa toimiminen. Solulinjojiemme kanssa työskentelevän henkilökunnan jäsenten on osoitettava osaavansa turvalliset täyttömenetelmät, henkilönsuojainten asianmukainen käyttö ja hapenpuutteeseen liittyvien riskien ymmärtäminen. Koulutukseen olisi sisällyttävä käytännön harjoittelua pienemmillä määrillä valvonnan alaisena ennen suurempien määrien käsittelyä. Koulutuksen suorittamisesta on pidettävä yllä dokumentaatiota, ja säännölliset kertaustilaisuudet on suunniteltava. Uusien työntekijöiden olisi seurattava kokenutta henkilöstöä vähintään kolmen täydellisen LN2:n käsittelyprosessin ajan ennen kuin he työskentelevät itsenäisesti osana tiimiä. Muista, että myös kokenut henkilökunta tarvitsee säännöllisesti uudelleenkoulutusta, jotta turvallisuuskäytännöt pysyvät tuoreina ja ajan tasalla.

Hapen valvonta- ja hälytysjärjestelmät

Kun kriittisiä tutkimusmateriaaleja, kuten ihmisen mesenkymaalisia kantasoluja - rasvakudosta ja ihmisen mesenkymaalisia kantasoluja - Whartonsin hyytelöä, säilytetään nestemäisessä typessä, luotettavat hapenvalvontajärjestelmät ovat ehdottoman tärkeitä. Kiinteät happimonitorit on asennettava siten, että hälytykset käynnistyvät 18 prosentin happipitoisuudessa (v/v). Nämä järjestelmät on sijoitettava strategisesti: lähelle lattiatasoa, jonne ilmaa raskaammat kaasut aluksi kerääntyvät, työskentelykorkeudelle ja lähelle LN2-varastointiastioita. Säilytettäessä näytteitä CM-ACF-pakastusmediassa - seerumivapaa - 500 ml, on varmistettava, että säilytystilat on varustettu sekä ääni- että visuaalisilla hälytyslaitteilla, jotka voidaan tunnistaa laboratorion taustamelun yli. Toteutetaan kaikkien hapenvalvontajärjestelmien kuukausittainen testausaikataulu, ylläpidetään kalibrointitietoja ja laaditaan selkeät evakuointimenettelyt hälytysten lauetessa. Henkilöstö ei saa koskaan yrittää ohittaa tai poistaa käytöstä näitä turvajärjestelmiä riippumatta siitä, kuinka kauan he aikovat työskennellä nestemäisen typen kanssa.