RAW 264.7 -solulinja makrofagi- ja immunologiatutkimuksessa
RAW 264.7 -solulinja toimii luotettavana in vitro -mallina hiiren makrofageille, mikä on olennaista immunologisen tutkimuksen alalla. Nämä solut ovat peräisin uros-BALB/c-hiirestä, ja ne on transformoitu Abelsonin hiiren leukemiaviruksella, minkä seurauksena on syntynyt makrofagien kaltainen solulinja. Toiminnallisen vakauden ja luontaisen kyvyn suorittaa sekä fagosytoosia että pinosytoosia ansiosta RAW 264.7 -solut ovat välttämättömiä isäntä-patogeenivuorovaikutusten tutkimuksessa, mikä tekee niistä immunologisen tutkimuksen kulmakiven [1,2].
- Kasvatusväliaine
- Katso tuotesivu
- Kaksinkertaistumisaika
- Katso tuotesivu
- Kasvutyyppi
- Adherentti
- Bioturvallisuustaso
- BSL-1
- Saatavana
- Cytion — Tilaa RAW 264.7
Morfologiset ominaisuudet ja kasvukäyttäytyminen
Tutkimusten mukaan RAW 264.7 -solut kasvavat puolikiinnittyneinä ja niillä on taipumus muodostaa sekä sukkulamaisia kiinnittyneitä soluja että pallomaisia, kelluvia eläviä soluja, joiden halkaisija on 10–20 µm. Tämä monimuotoisuus ja sopeutumiskyky viljelyolosuhteisiin tekevät RAW 264.7 -soluista monipuolisen työkalun kokeelliseen manipulointiin ja havainnointiin.
Immunologinen toiminta ja antigeenien esittely
Antigeenejä esittelevinä soluina RAW 264.7 -solut ovat keskeisessä roolissa immuunijärjestelmässä. Niiden tehtävä ulottuu pelkän patogeenien tunnistamisen ulkopuolelle antigeenien prosessointiin ja esittelyyn T-soluille, mikä koordinoi kattavaa immuunivastetta. Tämä dynamiikka auttaa ymmärtämään syvällisemmin, miten immuunijärjestelmä tunnistaa ja neutraloi vieraita aineita.
Makrofagien polarisaatio: M0-, M1- ja M2-paradigma
RAW 264.7 -solut, jotka ovat perustilassaan M0-makrofageja, omaavat merkittävän kyvyn polarisoitua joko tulehdusta edistävään M1-fenotyyppiin tai tulehdusta estävään M2-fenotyyppiin. Tämä polarisaatiokyky tarjoaa tutkijoille mallin, jonka avulla voidaan tutkia erilaisten sytokiinien ja ympäristötekijöiden vaikutuksia makrofagien toimintaan ja immuunivasteisiin [3,4].
Osteoklastogeneesi ja luun uudistuminen
Vaikka RAW 264.7 -solut eivät itse ole osteoklasteja, ne ovat olleet keskeisessä asemassa osteoklastogeneesin – eli osteoklastien muodostumisprosessin – tutkimuksessa. Nämä solut helpottavat osteoklastisten geenien ilmentymisen ja niiden reagoivuuden reseptorien aktivoitumiseen tutkimista. Tällä tutkimuksella on merkittäviä vaikutuksia sellaisten sairauksien patofysiologian ymmärtämiseen kuin osteoporoosi, jolle luun uudistumisen säätelyn häiriöt ovat tyypillisiä.
RAW 264.7 -soluviljelyä koskevat tiedot
Ennen kuin aloitat kokeesi, sinun on ymmärrettävä joitakin perustietoja tästä tehokkaasta solulinjasta. Tiedätkö RAW 264.7 -solujen kaksinkertaistumisaikansa? Mikä on näiden solujen kylvötiheys, ja ovatko ne adheesiivisia? Entä mitkä ovat RAW 264.7:n optimaaliset kasvuolosuhteet? Jatka lukemista, niin saat selville kaikki vastaukset, joita tarvitset työskennellessäsi tämän uskomattoman solulinjan kanssa!
Soluviljelytiedot
RAW 264.7 -solulinja
Populaation kaksinkertaistumisaika
11–30 tuntia
Adheesiivinen tai suspensiossa
Pääasiassa kiinnittynyt, mutta sisältää myös suspensio-solupopulaatioita
Istutustiheys
4 × 10⁴ solua/cm²
Suositeltu kasvualusta
RPMI 1640, johon on lisätty 10 % naudan sikiöseerumia ja L-glutamiinia (2,5 mM)
Optimaaliset kasvatusolosuhteet
Kostutettu inkubaattori, jossa on 5 % CO₂ ja lämpötila 37 °C
Kasvatusliuoksen vaihto
2–3 kertaa viikossa
Säilytys
Nestemäisen typen höyryvaihe
CM-1 tai CM-ACF
Jäähdytysprosessi
Hidas jäädytys
Sulatusprosessi
Nopea sekoittaminen 37 °C:n vesihauteessa
Bioturvallisuustaso
Suositellaan BSL-2-laboratoriota
Hiiren RAW 264.7 -makrofagit eri solutiheyksillä.
RAW 264.7 -kennojen edut ja haitat
Edut
- Helppo viljely: RAW 264.7 -solulinjaa on helppo kasvattaa ja ylläpitää laboratoriossa ilman monimutkaisia vaatimuksia.
- Hyvin karakterisoitu: RAW 264.7 on hyvin karakterisoitu solulinja, mikä tarkoittaa, että sillä on vakaat fenotyyppiset ja toiminnalliset ominaisuudet.
- Makrofagien in vitro -malli: Koska RAW 264.7-solut ovat makrofageja, ne osoittavat olennaisia makrofagien kaltaisia toimintoja, kuten fagosytoosia ja pinosytoosia. Siksi niitä käytetään usein makrofagien in vitro -mallina.
- Eriytyminen osteoklasteiksi: RAW 264.7 -solut voidaan eriyttää osteoklasteiksi käyttämällä tiettyjä molekyylitekijöitä. Nämä eriytyneet solut kykenevät suorittamaan luun uudistumista, samoin kuin osteoklastit.
Haitat
- Ensisijaisten makrofagien heikko edustavuus: Transformoituna solulinjana RAW 264.7 ei välttämättä edusta tarkasti ensisijaisten makrofagien ominaisuuksia, ja niissä voi olla eroja geenien ilmentymisessä, fenotyypissä ja toiminnassa.
- Rajoitukset lääkeaineiden seulonnassa: RAW 264.7 -solut eivät välttämättä sovellu kaikkiin lääkeaineiden seulontakokeisiin, ja niiden vasteet joihinkin lääkeaineisiin voivat poiketa primaaristen makrofagien vasteista.
- Voimakas solujen tarttuvuus: RAW 264.7 -solut tarttuvat voimakkaasti viljelypullon pintaan, ja niiden irrottaminen voi toisinaan olla hankalaa.
RAW 264.7 -solujen sovellukset makrofagien jäljittelyssä ja immunologisissa tutkimuksissa
Solujen immunologisten vasteiden mallintaminen
RAW 264.7 -solulinja, joka heijastaa aitojen makrofagien toiminnallisuutta, on keskeinen malli solujen reaktioiden tutkimisessa patogeeneihin ja immunologisiin ärsykkeisiin. Tätä näkökohtaa korostavassa tutkimuksessa arvioitiin lämpökuolleiden maitohappobakteerien immunomoduloivia ja antioksidanttisia vaikutuksia näihin soluihin, mikä tuotti merkittäviä havaintoja immuunijärjestelmän säätelystä [5 ].
Tätä täydentävässä, vuonna 2019 tehdyssä tutkimuksessa selvitettiin RAW 264.7 -solujen altistumisen immunologisia vaikutuksia Polygonatum sibiricum -kasvin polysakkarideille. Tutkimuksessa todettiin, että nämä yhdisteet laukaisevat immuunivasteen aktivoimalla NF-κB/MAPK-signalointireittejä, mikä tarjoaa syvällistä molekyylitason ymmärrystä [6].
Osteoklastogeneesin tutkiminen
RAW 264.7 -solut toimivat osteoklastien erilaistumistutkimusten mallina ja auttavat selventämään osteoklastien käyttäytymistä ja erilaistumisreittejä. Tällainen tutkimus laajentaa tietämystämme luun resorptiomekanismeista ja osteoporoosin patogeneesistä. Kehittyneitä kuvantamistekniikoita käytetään usein solunsisäisten muutosten seurantaan ja hemometabolian analysointiin näissä soluissa.
Molekyylitason ymmärryksen syventäminen osteoklastogeneesistä
Vaikka RAW 264.7 -solut toimivat ensisijaisesti makrofagimallina, niitä käytetään myös in vitro -osteoklastogeneesitutkimuksissa. Indusoimalla näihin soluihin osteoklastien kaltaisia ominaisuuksia tutkijat saavat tietoa erilaistumisprosessista ja pre-osteoklastien käyttäytymisestä, vaikka näissä tutkimuksissa onkin ratkaisevan tärkeää ottaa huomioon solulinjan luontaiset ominaisuudet ja alkuperä.
Luonnontuotteiden bioaktiivisuuden seulonta
Luonnontuotteiden bioaktiivisuuden seulonta on toinen sovellusalue, jossa RAW 264.7 -solut loistavat. Esimerkiksi niiden käyttö korealaisessa tutkimuksessa, jossa selvitettiin yrttiseoksen immunostimuloivia ominaisuuksia, osoitti solulinjan tehokkuuden bioaktiivisten yhdisteiden tunnistamisessa luonnollisista aineista [7 ].
Kehitä tutkimustasi edistyksellisesti RAW 264.7 -solujemme avulla
RAW 264.7 -soluja hyödyntävät tutkimusjulkaisut
Hiiren makrofagisolulinjasta RAW 264.7 on julkaistu lukuisia tutkimuksia:
- Polygonatum sibiricum Delar. ex Redoute -kasvista peräisin olevat polysakkaridit indusoivat immuunivasteen RAW 264.7-solulinjassa NF-κB/MAPK-signaalireitin kautta: Tässä tutkimuksessa esitettiin, että Polygonatum sibiricum -kasvista saadut polysakkaridit voivat laukaista immuunivasteen hiiren makrofagisolulinjassa RAW 264.7 säätelemällä NF-κB/MAPK-signaalikaskadia.
- Tinospora crispa -uutteen ja sen pääasiallisten yhdisteiden immunomoduloivat vaikutukset RAW 264.7 -makrofaagien immuunitoimintoihin: Tämä International Immunopharmacology -lehdessä julkaistu artikkeli kuvaa, että Tinospora crispa -kasvin uutteella ja sen pääasiallisilla ainesosilla on immunomoduloiva ja immuunijärjestelmää stimuloiva vaikutus RAW 264.7-makrofagisolulinjaan.
- Lämpökäsitellyt maitohappobakteerit estävät typpioksidin tuotantoa indusoituvan typpioksidisyntaasin ja syklo-oksigenaasi-2:n välityksellä RAW 264.7 -soluissa: Tässä tutkimuksessa ehdotettiin, että lämpökäsiteltyjä maitohappobakteereja voitaisiin mahdollisesti käyttää probioottituotteiden valmistuksessa, koska niillä on immuunimoduloivia ja antioksidanttisia ominaisuuksia. Tutkijat käyttivät RAW 264.7 -soluja näiden biologisten vaikutusten tutkimiseen.
- Yrttivalmisteen vaikutus immuunivasteen tehostumiseen RAW 264.7 -makrofageissa: Tässä tutkimuksessa käytettiin RAW 264.7 -soluja KM1608-nimisen yrttivalmisteen immuunistimuloivan vaikutuksen tutkimiseen. Tutkimus viittasi siihen, että KM1608 voisi olla potentiaalinen immuunivasteen tehostaja.
- Kolumbian perinteisessä lääketieteessä käytettyjen kasvien seulonta paljasti Physalis angulata -kasvin verhiöiden tulehdusta estävän potentiaalin: Tässä Saudi Journal of Biological Sciences -lehdessä julkaistussa artikkelissa tutkittiin 10 yleisesti käytetyn kolumbialaisen perinteisen kasvin tulehdusta estävää potentiaalia käyttäen LPS:llä stimuloituja RAW 264.7 -soluja.
RAW 264.7 -solut: lähteet, protokollat, videot ja muuta
RAW 264.7 -soluja käytetään usein transfektiotutkimuksissa. Seuraavissa lähteissä selitetään erilaisia RAW 264.7 -solulinjalle käytettäviä transfektiomenetelmiä.
- RAW 264.7 -solujen transfektio: Tällä verkkosivustolla on protokolla RAW 264.7 -makrofaagien transfektiolle lipofektiinireagenssin avulla.
- Transfektiomenetelmä: Tässä julkaistussa artikkelissa kuvataan yksityiskohtainen menetelmä RAW 264.7 -solujen transfektiota varten.
- Tehokas transfektiomenetelmä RAW 264.7 -soluille: Tässä asiakirjassa kuvataan toinen käytännöllinen transfektiomenetelmä, jossa käytetään RAW 264.7 -soluja.
RAW 264.7 -solulinjaan liittyvät videot
- RAW 264.7-solujen viljely: Tässä videossa selitetään RAW 264.7-solujen siirto-ohjeet.
- Transfektiomenetelmä: Tässä videossa käsitellään RAW 264.7 -solujen transfektiota raportointigeenillä.
Tärkeimmät usein kysytyt kysymykset RAW 264.7 -solulinjasta: näkemyksiä makrofagien jäljittelyä ja osteoklastogeneesin tutkimusta koskevista tutkimuksista
Lähteet
- Taciak, B. ym., RAW 264.7 -solulinjan fenotyyppisen ja toiminnallisen vakauden arviointi sarjapassageilla. PloS one, 2018. 13(6): s. e0198943.
- Wang, S. ym., Tulehdusmakrofagit keskeyttävät osteosyyttien kypsymisen ja mineralisoitumisen säätelemällä Notch-signalointireittiä. Molecular Medicine, 2022. 28(1): s. 102.
- Orekhov, A.N. ym., Monosyyttien erilaistuminen ja makrofagien polarisoituminen. Vessel Plus, 2019. 3: s. 10.
- Khabipov, A. ym., Haimasyöpäsolujen aiheuttama RAW 264.7-makrofagien polarisaatio – malli kasvaimia edistävien makrofagien tutkimiseen. Anticancer Research, 2019. 39(6): s. 2871–2882.
- Kang, C.-H. ym., Lämpökuolleet maitohappobakteerit estävät typpioksidin tuotantoa indusoituvan typpioksidisyntaasin ja syklo-oksigenaasi-2:n välityksellä RAW 264.7 -soluissa. Probiotics and Antimicrobial Proteins, 2021. 13(6): s. 1530–1538.
- Zhang, J. ym., Polygonatum sibiricum Delar. ex Redoute -kasvista peräisin olevat polysakkaridit indusoivat immuunivasteen RAW264.7-solulinjassa NF-κB/MAPK-reitin kautta. RSC Advances, 2019. 9(31): s. 17988–17994.
- Trinh, T.A. ym., yrttivalmisteen vaikutus immuunivasteen tehostumiseen RAW 264.7 -makrofageissa. Biomolecules, 2020. 10(3): s. 424.