P19-solut – Alkionkarsinooman tutkimus P19-solujen avulla
P19 on hiiren alkionkarsinoomasolulinja. Sitä käytetään laajalti biolääketieteellisessä tutkimuksessa, pääasiassa kehitysbiologian, kantasolubiologian, solujen erilaistumisen ja lääkeaineiden seulonnan tutkimuksessa. Koska P19-soluilla on erilaistumiskyky, niitä voidaan hyödyntää monimutkaisten biologisten prosessien, kuten kudosten muodostumisen ja varhaisen alkionkehityksen, tutkimuksessa. Tässä artikkelissa käsitellään hiirestä peräisin olevien P19-solujen perusasioita.
- Kasvatusväliaine
- DMEM/Ham's F12 -kasvatusliuos, joka sisältää 5 % naudan sikiöseerumia, 3,1 g/l glukoosia, 1,6 mM L-glutamiinia, 1,0 mM natriumpyruvaattia, 15 mM HEPES:ää ja 1,2 g/l NaHCO₃:ta.
- Kaksinkertaistumisaika
- P19-solulinjan raportoitu kaksinkertaistumisaika on noin 2–3 päivää.
- Kasvutyyppi
- P19-alkionkarsinoomasolulinja on adheesiivinen.
- Bioturvallisuustaso
- BSL-1
- Saatavana
- Cytion — Tilaa P19
- P19-solujen yleiset ominaisuudet ja alkuperä
- P19-solujen viljelyohjeet
- P19-solulinja: edut ja haitat
- P19-solujen tutkimuskäyttö
- Hanki P19-solulinjasi jo tänään
- P19-solut: Tutkimusjulkaisut
- P19-solulinjan resurssit: protokollat, videot ja muuta
- P19-solulinjan tutkiminen: Usein kysyttyjä kysymyksiä
- Viitteet
- Usein kysyttyjä kysymyksiä
P19-solujen yleiset ominaisuudet ja alkuperä
Solulinjan yleisten ominaisuuksien ja alkuperän tunteminen on välttämätöntä ennen sen käytön aloittamista. Tässä osiossa käsitellään seuraavia aiheita: Mikä on P19-solulinja? Mikä on P19-solun koko? Mikä on P19-solujen alkuperä?
- P19 on monipotenttien alkionkarsinoomasolujen tyyppi, joka on alun perin peräisin C3H/He-hiiressä kehittyneestä teratokarsinoomasta. Solulinjan perustivat ensimmäisenä vuonna 1982 McBurney ja Rogers.
- P19-solut voivat kasvaa jatkuvasti seerumilla täydennetyssä viljelyalustassa. Ne voidaan erilaistua muiksi solutyypeiksi, kun niitä altistetaan myrkyttömille lääkeaineille, kuten retinoiinihapolle ja dimetyylisulfoksidille (DMSO) [1].
- Näillä hiiren karsinoomasoluilla on epiteelin kaltainen morfologia.
- P19-solulinjalla on euploidinen uroskaryotyyppi (n=40; XY).
P19-solujen viljelyohjeet
P19-solulinjaa viljellään laajalti tutkimuslaboratorioissa sen ainutlaatuisten ominaisuuksien vuoksi. Sen viljely on helppoa ja hallittavaa. Tässä osiossa on mainittu kaikki keskeiset tiedot, joita tarvitset P19-soluviljelmän ylläpitoon ja kasvattamiseen. Selvitämme seuraavat asiat: Mikä on P19-solujen kaksinkertaistumisaika? Miten P19-solulinjaa viljellään? Onko P19 adheesiivinen solulinja?
P19-solujen viljelyn avainkohdat
Kaksinkertaistumisaika:
P19-solulinjan kaksinkertaistumisaika on noin 2–3 päivää.
Adheesiivinen vai suspensiossa:
P19-alkionkarsinoomisolulinja on kiinnittyvä.
Aliviljelysuhde:
P19-solut tulisi subkultivoida 48 tunnin välein, ja näiden solujen osalta tulisi ylläpitää 1:10-jakosuhdetta. Adheesiiviset solut pestään 1 X fosfaattipuskurisuolaliuoksella ja inkuboidaan Accutase-entsyymillä, kunnes solut irtoavat toisistaan. Soluille lisätään viljelyväliainetta ja ne kerätään sentrifugoimalla. Kerätyt solut suspendoidaan huolellisesti uudelleen ja jaetaan uusiin pulloihin.
Kasvatusväliaine:
DMEM/Ham's F12 -kasvatusliuos, joka sisältää 5 % naudan sikiöseerumia, 3,1 g/l glukoosia, 1,6 mM L-glutamiinia, 1,0 mM natriumpyruvaattia, 15 mM HEPES:ää ja 1,2 g/l NaHCO₃:ta sisältävää DMEM/Ham's F12 -kasvatusliuosta käytetään P19-solujen viljelyyn.
Kasvatusolosuhteet:
P19-alkionkarsinoomasolulinjan kasvattamiseen ja viljelyyn tarvitaan kostutettu inkubaattori, jonka lämpötila on asetettu 37 °C:een ja johon syötetään 5 % CO₂.
Säilytys:
Jäädytetyt P19-solupullot tulee säilyttää alle -150 °C:n lämpötilassa pakastimessa tai nestemäisen typen höyryvaiheessa solujen elinkelpoisuuden säilyttämiseksi pitkällä aikavälillä.
Jäädytysprosessi ja elatusaine:
P19-solujen pakastamiseen voidaan käyttää CM-1- tai CM-ACF-kasvatusväliaineita hitaalla pakastusmenetelmällä, joka suojaa soluja pakkassokilta ja säilyttää niiden elinkelpoisuuden.
Sulatusprosessi:
Jäädytetyt P19-solut voidaan sulattaa 37 °C:n vesihauteessa ravistelemalla pulloa nopeasti 40–60 sekunnin ajan. Soluihin lisätään tuoretta elatusainetta ja ne sentrifugoidaan jäädytysaineen poistamiseksi. Solupalaatti suspendoidaan uudelleen, ja solut kaadetaan uuteen pulloon kasvattamista varten.
Bioturvallisuustaso:
P19-solulinjalle vaaditaan bioturvallisuustason 1 laboratorio-olosuhteet.
P19-solulinja: edut ja haitat
Tässä osiossa käsitellään P19-solulinjan etuja ja haittoja.
Edut
- Eriyttymispotentiaali: P19-solut voivat eriytyä erilaisiksi solutyypeiksi, kuten sydänlihassoluiksi, hermosoluiksi ja mikroglia-soluiksi. Niiden eriytyminen edellyttää myrkyttömiä aineita, kuten retinoiinihappoa ja dimetyylisulfoksidia (DMSO). Retinoiinihappo indusoi neuronien, mikroglia- ja astroglia-solujen kehittymistä, kun taas DMSO käynnistää sykkivien sydänlihassolujen ja sileiden lihassolujen kehittymisen. Siten P19-solut ovat hyödyllisiä solujen erilaistumisen ja kehitysprosessien tutkimuksessa.
- Mallijärjestelmä: Monipotentti alkionkarsinoomasolulinja P19 on arvokas malli varhaisen alkionkehityksen tutkimiseen. Tutkijat käyttävät P19-soluja selvittääkseen solujen signalointireittejä sekä näihin prosesseihin liittyviä solu- ja molekyylimekanismeja.
Haitat
- Hiirperäisyys: P19 on hiiren alkionkarsinoomasolulinja. Tästä syystä näitä soluja käyttävistä tutkimuksista saadut tulokset eivät välttämättä ole täysin yleistettävissä ihmisen biologiaan ja prosesseihin.
P19-solujen tutkimussovellukset
P19-soluilla on useita tutkimussovelluksia niiden erilaistumiskyvyn sekä merkityksen vuoksi kehitysbiologiassa ja kantasolututkimuksessa. Joitakin tärkeitä P19-alkionkarsinoomasolujen tutkimussovelluksia ovat:
- Solujen erilaistumistutkimukset: Kuten tiedetään, P19-solut voivat erilaistua hermosoluiksi, mikroglia-soluiksi, sileälihassoluiksi ja sydänlihassoluiksi; siksi niitä käytetään laajalti solujen erilaistumisprosessien tutkimiseen. Lisäksi ne auttavat tutkimaan hermoston ja sydämen kehitystä sekä niiden taustalla olevia mekanismeja. Vuonna 2018 tehdyssä tutkimuksessa havaittiin, että reaktiiviset happiyhdisteet (ROS) ohjaavat P19-solujen erilaistumista tiettyihin solutyyppeihin ja estävät muiden solutyyppien induktiota [3]. Toisessa tutkimuksessa selvitettiin retinoiinihapon välittämää hermoston erilaistumisprosessia ja havaittiin PI3K/Akt/GSK3β-signaalireitin osallistuminen siihen [4].
- Kehitysbiologia: P19-solut ovat korvaamaton malli varhaisen alkionkehityksen tutkimuksessa. Ne auttavat tutkijoita ymmärtämään monimutkaisia biologisia prosesseja, kuten kudosten muodostumista alkionkehityksen aikana. Tutkimuksessa käytettiin P19-soluja ja selvitettiin kammion väliseinän aukon (VSD) muodostumiseen vaikuttavia molekyylitekijöitä. Tulokset paljastivat, että pitkä ei-koodaava RNA SNHG6 edistää VSD:tä säätelemällä miRNA-101:tä negatiivisesti ja aktivoimalla Wnt/β-kateniini-signaalireitin [5].
- Lääketutkimus: P19-hiiren alkionkarsinoomasolulinjaa käytetään myös potentiaalisten lääkeaineiden seulontaan. Eräässä tutkimuksessa käytettiin erilaistuneita P19-soluneuroneja ja tutkittiin synteettisen L-Dopan ja Mucuna pruriens -siementen vesiuutteen hermosoluja suojaavia asetyylikoliiniesteraasin estäviä vaikutuksia. Tulokset osoittivat, että kasviuute tuotti lupaavia tuloksia verrattuna L-Dopaan [6].
Hanki P19-solulinja jo tänään
P19-solut: Tutkimusjulkaisut
Tässä artikkelin osiossa käsitellään muutamia mielenkiintoisia tutkimusjulkaisuja, joissa käsitellään P19-soluja.
Tämä artikkeli julkaistiin Oncology Reports -lehdessä vuonna 2017. Tutkimuksessa esitettiin, että aivolisäkkeen sukupuolihormonit ohjaavat teratokarsinoomasolulinjojen, mukaan lukien P19-solujen, adheesiota, proliferaatiota ja migraatiota.
Pitkä ei-koodaava RNA uc.4 vaikuttaa solujen erilaistumiseen TGF-beeta-signalointireitin kautta
Tässä Experimental & Molecular Medicine -lehdessä (2018) julkaistussa artikkelissa käytettiin P19-soluja ja tutkittiin pitkän koodaamattoman RNA:n uc.4:n toimintaa. Tulokset osoittivat, että uc.4 vaikuttaa solujen erilaistumiseen moduloimalla TGF-beeta-signalointireittiä.
Tämä tutkimusartikkeli julkaistiin vuonna 2018 Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine -lehdessä. Tutkimuksessa havaittiin, että luonnollinen aivokudosuute ja kolmiulotteinen soluviljely voivat nopeuttaa P19-alkionkarsinoomasolujen erilaistumista hermosoluiksi.
Tämä tutkimus julkaistiin vuonna 2020 Journal of Ethnopharmacology -lehdessä. Tutkimuksessa esitettiin, että Cichorium intybus L. -lehtiuute voi indusoida P19-alkionkarsinoomasolujen erilaistumisen insuliinia tuottaviksi haiman β-soluiksi.
Tämä tutkimus julkaistiin Molecules-lehdessä (2022). Tutkimuksessa selvitettiin Mucuna pruriens -siemenuutteiden hermosoluja suojaavia ja asetyylikoliiniesteraasia estäviä vaikutuksia P19-solulinjan hermosoluihin.
P19-solulinjan resurssit: protokollat, videot ja muuta
Seuraavassa on muutamia P19-soluja koskevia resursseja.
- P19-solujen hermosolujen erilaistumisprotokolla: Tämä artikkeli sisältää P19-solujen hermosolujen erilaistumisprotokollan ja muuta hyödyllistä tietoa P19-solujen erilaistumisesta.
- P19-solujen transfektio: Tämän linkin avulla voit tutustua P19-solujen transfektioprotokollaan.
Seuraava linkki sisältää P19-soluviljelyprotokollan.
- P19-solut: Tällä verkkosivustolla on kaikki hyödyllinen tieto P19-solulinjasta, mukaan lukien sen viljelyolosuhteet, P19-soluviljelyalustat, solujen jakaminen ja paljon muuta.
P19-solulinjan tutkiminen: P19: Usein kysytyt kysymykset
Lähteet
- McBurney, M.W., P19-alkionkarsinoomasolut. Int J Dev Biol, 1993. 37(1): s. 135–40.
- Bressler, J. ym., P19-alkionkarsinoomasolulinja: malli geeni-ympäristö-vuorovaikutusten tutkimiseen. Cell Culture Techniques, 2011: s. 223–240.
- Pashkovskaia, N., U. Gey ja G. Rödel, Mitokondriaaliset ROS-yhdisteet ohjaavat hiiren pluripotenttien P19-solujen erilaistumista. Stem Cell Research, 2018. 30: s. 180–191.
- Fu, F. ym., All-trans-retinoiinihappo indusoi P19-solujen erilaistumisen PI3K/Akt/GSK3β-signalointireitissä mukana oleviksi neuroneiksi. Journal of Cellular Biochemistry, 2020. 121(11): s. 4386–4396.
- Jiang, Y. ym., Pitkä ei-koodaava RNA SNHG6 edistää kammion väliseinän aukon muodostumista miR-101:n negatiivisen säätelyn ja Wnt/β-kateniini-signaalireitin aktivoinnin kautta. Die Pharmazie – An International Journal of Pharmaceutical Sciences, 2019. 74(1): s. 23–28.
- Kamkaen, N. ym., Mucuna pruriens -siementen vesiuute paransi neuroprotektiivisia ja asetyylikoliiniesteraasia estäviä vaikutuksia verrattuna synteettiseen L-dopaan. Molecules, 2022. 27(10): s. 3131.