NIH-3T3-solut: Fibroblastien tutkimuksen ja NIH-3T3-solujen sovellusten edistäminen
NIH-3T3-solulinja, jonka Howard Green ja George Todaro perustivat vuonna 1962 New Yorkin yliopiston lääketieteellisessä tiedekunnassa 17 päivää vanhan sveitsiläisen albiinohiiren alkion kudoksesta, on tullut keskeiseksi resurssiksi biolääketieteellisessä tutkimuksessa. NIH-3T3-solut tunnetaan suuresta alttiudestaan leukemiaviruksen ja sarkoomaviruksen pesäkkeiden muodostumiselle, ja ne toimivat keskeisenä työkaluna lukuisissa tieteellisissä tutkimuksissa, mukaan lukien virusonkologian tutkimukset, geeniekspressioanalyysit ja solujen kasvudynamiikan tutkiminen. Nimitys ”3T3” viittaa soluviljelymenetelmään, jossa viitataan ”3 päivän siirtoon” (3-day transfer) ja alkuperäiseen kylvötiheyteen 3 × 10^5 solua, mikä korostaa standardoituja olosuhteita, joissa näitä soluja alun perin viljeltiin ja monistettiin.
- Kasvatusväliaine
- Katso tuotesivu
- Kaksinkertaistumisaika
- Katso tuotesivu
- Kasvutyyppi
- Adherentti
- Bioturvallisuustaso
- BSL-1
- Saatavana
- Cytion — Tilaa NIH-3T3
NIH-3T3-solujen monipuoliset morfologiat ja käyttökohteet
Yksi NIH-3T3-solujen tunnusomaisista piirteistä on niiden morfologinen mukautuvuus, joka vaihtelee merkittävästi viljelmän tiheyden mukaan. Alhaisemmilla tiheyksillä nämä fibroblastit muodostavat sukkulamaisen, yksittäisen solurakenteen, joka kehittyy tiheiksi, pyörteisiksi kuvioiksi, kun solupopulaatio saavuttaa täyden tiheyden. NIH-3T3-solujen keskimääräinen halkaisija on noin 18 μm, ja ne tarjoavat monipuolisen mallin syvällisiin solubiologian tutkimuksiin, jotka ulottuvat kudosten korjausmekanismeista solusyklin säätelyn monimutkaisiin reitteihin.
Viljelyohjeet
Tärkeimmät viljelytiedot:
Populaation kaksinkertaistumisaika: Noin 20 tuntia.
Kasvutyyppi: Adheesiiviset viljelmät.
Kylvätiheys: Suositus: 3–4 × 10⁴ solua/cm².
Kasvatusväliaine: DMEM tai Ham's F12, johon on lisätty 5 % FBS:ää ja 2,5 mM L-glutamiinia.
Kasvatusolosuhteet: Säilytä 37 °C:ssa kostutetussa inkubaattorissa, jossa on 5 % CO₂.
Säilytys: Säilytä alle -195 °C:n lämpötilassa nestemäisen typen höyryvaiheessa.
Jäädytysmenetelmä: Käytä CM-1- tai CM-ACF-kasvatusliuosta; käytä hidasta jäädytysmenetelmää (lämpötilan lasku 1 °C kerrallaan).
Sulatusohje: Lämmitä nopeasti 37 °C:n vesihauteessa, sentrifugoi sen jälkeen jäädytysalustan poistamiseksi ja suspendoi sitten uudelleen kasvualustaan.
Bioturvallisuustaso: Viljely edellyttää bioturvallisuustason 1 olosuhteita.
Sveitsiläinen albiinohiiri laboratoriossa.
NIH 3T3 -solujen käytön edut ja haitat
Hyödyt
Transfektiotehokkuus: NIH-3T3-solut tunnetaan korkeasta transfektiotehokkuudestaan, ja ne sopivat erinomaisesti sekä väliaikaiseen että vakaaseen geeniekspressiotutkimukseen, sillä ne soveltuvat monenlaisiin transfektiotekniikoihin.
Feeder-kerroksen käyttökelpoisuus: Nämä solut toimivat usein tukevana feeder-kerroksena yhteisviljelyissä esimerkiksi keratinosyyttien ja kantasolujen kanssa, sillä ne vapauttavat kasvutekijöitä, jotka edistävät yhteisviljeltyjen solujen kasvua.
Kantasolututkimus: NIH-3T3-solut ovat ensisijainen valinta kantasolututkimuksessa, sillä ne indusoivat pluripotenssia ilman geneettistä muuntelua ja tarjoavat suotuisan ympäristön kantasolujen erilaistumiselle.
Viljelyn vakaus: NIH-3T3-solut tunnetaan vakaudestaan ja spontaanin transformaation harvinaisuudesta. Tietyissä olosuhteissa tai altistumisen jälkeen tietyille onkogeeneille tai mutageeneille NIH-3T3-solut voivat kuitenkin käydä läpi spontaanin transformaation. Tämä transformaatio voi johtaa syöpäominaisuuksien kehittymiseen, kuten hallitsemattomaan kasvuun, kontaktinestokyvyn menetykseen ja kykyyn muodostaa kasvaimia, kun solut ruiskutetaan alttiisiin isäntäorganismeihin.
Haitat
Epätasainen solukoko: NIH-3T3-solujen pitkänomainen, sukkulanmuotoinen morfologia voi vaihdella, mikä vaikeuttaa kuvianalyysejä määrityksissä.
Alttius infektioille: Nämä solut ovat alttiita bakteeri- ja mykoplasma-infektioille, ellei niitä pidetä tiukasti aseptisissa olosuhteissa, mikä voi vaikuttaa kokeiden luotettavuuteen.
NIH-3T3-solujen tutkimussovellukset
DNA-transfektiotutkimukset: NIH-3T3-solujen kestävyys tekee niistä ihanteellisia erilaisten geenien tuomiseen ja niiden toiminnan tutkimiseen, mikä on osoitettu tutkimuksissa, joissa on tarkasteltu proteiineja kuten NAB2-STAT6 ja niiden roolia soluprosesseissa.
Solupohjaiset määritykset: Niiden luotettavuus ulottuu erilaisiin määrityksiin, mukaan lukien elinkelpoisuus-, apoptoosi- ja fokusmuodostusmääritykset, jotka tarjoavat tietoa solujen reaktioista erilaisissa kokeellisissa olosuhteissa.
Solusyklin tutkimus: Solulinjan solusyklin helppo manipulointi seerumin pitoisuuksien avulla tekee siitä tehokkaan mallin solusyklin säätelyn ja sen poikkeamien tutkimiseen sairauksien yhteydessä.
Tee tutkimuksestasi entistä parempaa NIH-3T3-solujen avulla
Katsaus tärkeimpiin tutkimuksiin, joissa on käytetty NIH 3T3 -fibroblastisolulinjaa
NIH-3T3-solulinja on ollut keskeisessä asemassa lukuisissa tutkimushankkeissa, jotka kattavat solubiologian eri osa-alueita. Seuraavassa on esitetty joitakin merkittäviä tutkimuksia, joissa näitä soluja on hyödynnetty:
- NAB2-STAT6-fuusioproteiinin tutkiminen: Biochemical and Biophysical Research Communications -lehdessä julkaistu tutkimus syventyy siihen, miten NAB2-STAT6-fuusioproteiini vaikuttaa NIH-3T3-soluihin, erityisesti sen rooliin solujen kasvun ja migraation tehostamisessa EGR-1-säätelyn kautta.
- APOBEC3:n ja hiiren leukemiaviruksen tutkiminen: Virology-lehdessä julkaistussa tutkimuksessa tarkastellaan AKV-hiiren leukemiaviruksen hypermutaatiota NIH-3T3-soluissa, jotka ilmentävät hiiren APOBEC3-geeniä.
- Epigeneettisten lääkkeiden metastaasien estämispotentiaalin arviointi: Oncotargets and Therapy -lehdessä julkaistussa tutkimuksessa arvioidaan hydralatsiinin ja valproiinihapon metastaasien estäviä vaikutuksia RAS-transformoituneissa NIH-3T3-soluissa.
- Baicaleinin vaikutus NIH-3T3-solujen proliferaatioon ja kollageenisynteesiin: Tässä tutkimuksessa käytetään NIH-3T3-soluja selvittämään, miten baicaleini vaikuttaa solujen proliferaatioon ja kollageenituotantoon miR-9/insuliinin kaltaisen kasvutekijän 1 (IGF-1) -akselin modulaation kautta.
- Riboflaviinin puutoksen ja tuumorigenesin tutkiminen: Tässä tutkimuksessa esitetään havaintoja siitä, kuinka riboflaviinin puutos NIH-3T3-soluissa edistää tuumorigenesiä edistämällä solujen proliferaatiota ja häiritsemällä solusykligeenien säätelyä.
Tärkeät resurssit NIH-3T3-solujen tutkimukseen
NIH-3T3-solujen tutkimuksesta kiinnostuneille tutkijoille on tarjolla monenlaisia resursseja, jotka opastavat viljely- ja kokeellisissa menettelytavoissa:
- Sfäärien muodostuminen NIH-3T3-soluissa: Tämä video tarjoaa yksityiskohtaisen oppaan sfäärien muodostamisesta, joka on 3D-soluviljelytekniikka, jossa NIH-3T3-solut aggregoituvat klustereiksi, tarjoten tutkimuksille fysiologisesti merkityksellisemmän mallin.
- NIH-3T3-solujen kasvun seuranta: Tässä videossa tallennetaan JuLI Br -elävien solujen kuvantamisjärjestelmän avulla NIH-3T3-solujen kasvudynamiikkaa 65 tunnin ajan, jolloin solujen lisääntyminen näkyy reaaliajassa.
Näiden resurssien tarkoituksena on tukea NIH-3T3-soluilla tekemääsi tutkimustyötä ja tarjota perusta onnistuneille kokeille ja löydöksille.
Usein kysytyt kysymykset NIH-3T3-soluista
Lähteet
- Rahimi, A.M., M. Cai ja S. Hoyer-Fender, NIH3T3-fibroblastisolulinjan heterogeenisyys. Cells, 2022. 11(17): s. 2677.
- Leibiger, C. ym., NIH 3T3 -solulinjan ensimmäinen molekyylisytogeneettinen korkean resoluution karakterisointi hiiren monivärivärjäyksellä. Journal of Histochemistry & Cytochemistry, 2013. 61(4): s. 306–312.
- Wang, H.-X. ym., Vertaileva analyysi erilaisista syöttösolukerroksista 3T3-fibroblastien kanssa kanin limbaalisten kantasolujen viljelyssä. International Journal of Ophthalmology, 2017. 10(7): s. 1021.
- Wang, Z. ym., Neuronisolujen erilaistuminen NIH/3T3-fibroblasteista määritellyissä olosuhteissa. Development, growth & differentiation, 2011. 53(3): s. 357–365.
- Park, Y.-S. ym., NAB2-STAT6-fuusioproteiini välittää solujen proliferaatiota ja onkogeenistä etenemistä EGR-1:n säätelyn kautta. Biochemical and Biophysical Research Communications, 2020. 526(2): s. 287–292.
- Mattsson, M., Sloppymerase™:n ilmentyminen NIH/3T3-soluissa: virhealttiin fuusiopolymeraasin monipuolisuuden tutkiminen. 2021.
- Sahinturk, V. ym., Akryyliamidi aiheuttaa sytotoksisuutta NIH/3T3-fibroblastisoluissa apoptoosin kautta. Toxicology and Industrial Health, 2018. 34(7): s. 481–489.
- Lusi, E.A. ja F. Caicci, Ensimmäisen ihmisen retro-jättiviruksen löytäminen: kuvaus sen morfologiasta, retroviraalisesta kinaasista ja kyvystä aiheuttaa kasvaimia hiirissä. bioRxiv, 2019: s. 851063.
- Endo, M. ym., E2F1–Ror2-signalointi välittää koordinoitua transkriptioregulaatiota edistääkseen G1/S-vaiheen siirtymää bFGF:llä stimuloiduissa NIH/3T3-fibroblasteissa. The FASEB Journal, 2020. 34(2): s. 3413–3428.
- Long, L. ym., Riboflaviinin puute edistää tuumorigenesiä HEK293T- ja NIH3T3-soluissa ylläpitämällä solujen proliferaatiota ja säätelemällä solusykliin liittyvien geenien transkriptiota. The Journal of Nutrition, 2018. 148(6): s. 834–843.