NCI-H1299-solut: NCI-H1299-keuhkosyöpäsolujen tutkimus ja kliiniset merkitykset
NCI-H1299 on ikuistettu ihmisen ei-pienisoluinen keuhkosyöpäsolulinja, jota käytetään laajalti immuuni-onkologiassa, syöpätutkimuksessa ja lääkekehityksessä. Lisäksi tutkijat ovat käyttäneet näitä soluja tutkiakseen lääkeherkkyyttä, taustalla olevia signalointireittejä ja keuhkosyöpään liittyviä molekyylimekanismeja. Näitä soluja käytetään myös virustartuntojen, kuten SARS-CoV-2:n, tutkimiseen.
- Kasvatusväliaine
- RPM1 1640 on ihanteellinen NCI-H1299-soluviljelyalusta. Sitä täydennetään 10 %:lla naudan sikiöseerumia, 4500 mg/l glukoosia, 2,0 mM L-glutamiinia, 1 mM natriumpyruvaattia, 1500 mg/l NaHCO3:ta ja 10 mM HEPES:ää. Kasvatusliuos tulee vaihtaa 2–3 kertaa viikossa.
- Kaksinkertaistumisaika
- NCI-H1299-solujen kaksinkertaistumisaika on 22–30 tuntia.
- Kasvutyyppi
- NCI-H1299 on adheesiivinen solulinja.
- Bioturvallisuustaso
- BSL-1
- Saatavana
- Cytion — Tilaa NCI-H1299
- NCI-H1299-solujen yleiset ominaisuudet ja alkuperä
- Viljelyohjeet
- Osta NCI-H1299-solulinja: korkealaatuiset tutkimusvälineet keuhkosyövän biologian tutkimiseen
- NCI-H1299-solujen edut ja haitat
- NCI-H1299-solujen tutkimussovellukset
- NCI-H1299-soluja käsittelevät tutkimusjulkaisut
- NCI-H1299-solulinjan resurssit: protokollat, videot ja muuta
- Usein kysyttyjä kysymyksiä NCI-H1299-solulinjasta
- Viitteet
- Usein kysyttyjä kysymyksiä
NCI-H1299-solujen yleiset ominaisuudet ja alkuperä
Ensimmäiseksi solulinjasta on syytä tietää sen alkuperä ja yleiset ominaisuudet, sillä ne auttavat sinua suunnittelemaan sen käyttöä tutkimuksessasi. Tämän artikkelin osio auttaa sinua oppimaan tärkeitä tietoja NCI-H1299-solulinjan alkuperästä ja ominaisuuksista. Esimerkiksi: mitä ovat NCI-H1299-keuhkosyöpäsolut? Minkä tyyppinen solu NCI-H1299 on? Mikä on NCI-H1299-solujen koko? Mikä on ero A549:n ja NCI-H1299:n välillä?
- NCI-H1299-solulinja on peräisin 43-vuotiaan valkoihoisen miespotilaan keuhkojen imusolmukemetastaasista.
- Näissä soluissa on homotsygoottinen p53-geenin osittainen deleetio; näin ollen ne eivät ilmentä p53-proteiinia. NCI-H1299-solujen p53-proteiinin ilmentymisen puuttuminen edistää H1299-keuhkosyöpäsolujen proliferaatiota.
- P53:n lisäksi näillä ikuistetuilla soluilla on raportoitu olevan NCI-H1299-KRAS-mutaatio, joka on vastuussa niiden kasvusta, proliferaatiosta, migraatiosta ja invaasio-ominaisuuksista.
- NCI-H1299-karyotyyppi on lähes diploidi.
- NCI-H1299-soluilla on epiteelisolujen kaltainen morfologia.
- Nämä solut ovat litteitä ja niiden paksuus on alle 5 µm.
NCI-H1299 ja A549
NCI-H1299 ja A549 ovat ei-pienisoluista keuhkosyöpää edustavia solulinjoja. NCI-H1299-solut ovat aggressiivisempia ja herkempiä kuin A549-solut. Molemmilla on suhteellisen samankaltaisia mutaatioita, kuten KRAS. Toisin kuin NCI-H1299-solut, A549-solut ilmentävät kuitenkin P53-geeniä.
Viljelyohjeet
Solulinjan viljelyn ylläpitäminen ei ole helppoa, ennen kuin tiedät siitä kaikki keskeiset tiedot, kuten: Mikä on NCI-H1299-solulinjan kaksinkertaistumisaika? Mikä on NCI-H1299-solulinjan kylvötiheys? Mikä on NCI-H1299-soluviljelyväliaine? Miten NCI-H1299-solulinjoja viljellään? Tässä osiossa saat vastaukset kaikkiin näihin NCI-H1299-solujen viljelyä koskeviin kysymyksiin.
NCI-H1299-solujen viljelyn avainkohdat
Kaksinkertaistumisaika:
NCI-H1299-solulinjan kaksinkertaistumisaika on 22–30 tuntia.
Adherenssi- vai suspensio-solulinja:
NCI-H1299 on kiinnittyvä solulinja.
Aliviljelysuhde:
NCI-H1299-soluja subkultivoidaan suositellulla suhteella 1:3–1:6. Istutusta varten adheesiiviset solut pestään 1x PBS:llä ja inkuboidaan Accutase-siirtoliuoksessa 8–10 minuuttia huoneenlämmössä. Irronneet solut lisätään tuoreeseen viljelyalustaan ja sentrifugoidaan. Solupelletti suspendoidaan uudelleen, ja solut kaadetaan uusiin, kasvualustaa sisältäviin pulloihin.
Kasvatusväliaine:
RPM1 1640 on ihanteellinen NCI-H1299-soluviljelyalusta. Sitä täydennetään 10 %:lla naudan sikiöseerumia, 4500 mg/l glukoosia, 2,0 mM L-glutamiinia, 1 mM natriumpyruvaattia, 1500 mg/l NaHCO3:ta ja 10 mM HEPES:ää. Kasvatusliuos on uusittava 2–3 kertaa viikossa.
Kasvatusolosuhteet:
NCI-H1299-keuhkosyöpäsoluviljelmiä pidetään kostutetussa inkubaattorissa 37 °C:ssa ja 5 %:n CO₂-pitoisuudessa.
Säilytys:
NCI-H1299-solulinjaa voidaan säilyttää pitkäaikaisesti nestemäisen typen höyryvaiheessa tai erittäin matalan lämpötilan pakastimissa alle -150 °C:n lämpötilassa.
Jäädytysprosessi ja elatusaine:
CM-1 tai CM-ACF ovat NCI-H1299-solujen pakastusväliaineita. Solut pakastetaan hitaalla pakastusprosessilla, jossa lämpötila laskee vain 1 asteen minuutissa solujen elinkelpoisuuden säilyttämiseksi.
Sulatusprosessi:
Jäädytetyt NCI-H1299-solut sekoitetaan nopeasti esilämmitetyssä vesihauteessa 37 celsiusasteessa 40–60 sekuntia, kunnes jäljellä on vain pieni jääpala. Sulatetut solut lisätään tuoreeseen elatusaineeseen, ja niitä voidaan viljellä suoraan uusissa pulloissa tai sentrifugoida. Ensimmäisessä tapauksessa elatusaine on vaihdettava 24 tunnin inkuboinnin jälkeen. Sentrifugointi auttaa poistamaan pakastusaineen aineosia. Sen jälkeen kerätyt solut suspendoidaan uudelleen tuoreeseen elatusaineeseen ja annostellaan uuteen pulloon viljelyä varten.
Bioturvallisuustaso:
NCI-H1299-soluviljelmän käsittelyyn vaaditaan bioturvallisuustason 1 laboratorio.
Hanki NCI-H1299-solulinja: korkealaatuisia tutkimusvälineitä keuhkosyövän biologian tutkimiseen
NCI-H1299-solujen edut ja haitat
Muiden ihmisen syöpäsolulinjojen tavoin myös NCI-H1299-soluilla on joitakin erottuvia ominaisuuksia, joihin liittyy tiettyjä etuja ja haittoja. Tässä olemme koonneet yhteen muutamia merkittävimpiä niistä.
Edut
NCI-H1299-ei-pienisoluista keuhkosyöpäsolulinjan tärkeimmät edut ovat:
-
In vitro -keuhkosyöpämalli
NCI-H1299-solulinjat on kehitetty keuhkosyövän imusolmukemetastaaseista, ja niillä on siten suhteellisen samankaltaiset ominaisuudet. Siksi näitä soluja voidaan käyttää in vitro -mallina keuhkosyövän biologian, solu- ja molekyylimekanismien tutkimiseen sekä potentiaalisten hoitomuotojen seulontaan ja testaamiseen.
-
Helppo viljellä
NCI-H1299-soluja on helppo viljellä ja ylläpitää tutkimuslaboratoriossa. Soluviljelyyn ei liity vaativia vaatimuksia tai menettelyjä.
-
NCI-H1299 P53 ja NCI-H1299 KRAS-mutaatio
NCI-H1299-soluissa puuttuu p53-geenin ilmentyminen, minkä ansiosta solut lisääntyvät voimakkaasti. Lisäksi niissä on KRAS-mutaatio, joka edistää solujen kasvua, lisääntymistä, invaasiota ja migraatiota. Näiden seikkojen vuoksi tutkijat käyttävät H1299-soluja KRAS- ja P53-mutaatioihin liittyvien molekyylimekanismien tutkimiseen.
Haitat
NCI-H1299-solujen haittoja ovat:
-
Kudoskohtaisuus
NCI-H1299-solut ovat peräisin keuhkokudoksesta. Siksi niiden soveltuvuus rajoittuu pääasiassa keuhkosyövän tutkimukseen. Ne eivät välttämättä edusta täysin muiden syöpätyyppien heterogeenisyyttä ja yleisiä ominaisuuksia.
NCI-H1299-solujen tutkimuskäyttö
NCI-H1299-solulinjaa käytetään laajasti keuhkosyövän tutkimuksessa. Tässä mainitaan muutamia tämän solulinjan lupaavia sovelluksia.
- Syöpäbiologia: NCI-H1299-solut ovat erinomainen tutkimusväline syövän kehittymisen, etenemisen sekä siihen liittyvien solu- ja molekyylimekanismien tutkimiseen. Näissä soluissa esiintyy tiettyjä mutaatioita, joiden avulla tutkijat voivat selvittää syöpäsolujen käyttäytymistä, signalointireittejä ja geenien ilmentymisprofiileja. Useissa tutkimuksissa on käytetty NCI-H1299-epiteliaalisesta keuhkosyöpäsolulinjasta peräisin olevia soluja keuhkosyövän biologian tutkimiseen. Esimerkiksi vuonna 2018 tehdyssä tutkimuksessa selvitettiin keuhkosyöpäsolujen apoptoosiin liittyvää signalointireittiä NCI-H1299-solujen avulla. Tutkijat havaitsivat, että PI3K/AKT-reitti edistää solujen proliferaatiota ja että sen estäminen voi aiheuttaa syöpäsolujen kuoleman [1]. Samoin toisessa tutkimuksessa selvitettiin NCI-H1299-solulinjan epiteeli-mesenkymaalisessa siirtymässä (EMT) mukana olevia mekanismeja. Tässä tutkimuksessa esitettiin, että solunulkoinen SPARC-proteiini (secreted protein acidic and rich in cysteine) edistää NCI-H1299-solujen EMT:tä ja migraatiota ja siten edistää solujen tuumorigenesiä – SPARC-proteiini toimii TGF-β1-signaloinnin välittäjänä [2].
- Lääkekehitys ja seulonta: NCI-H1299-solulinjaa, joka on peräisin ihmisen keuhkosyövästä, käytetään laajasti potentiaalisten lääkkeiden toksisuuden ja tehokkuuden arviointiin. Lisäksi tutkijat käyttävät sitä syöpälääkkeiden vaikutusmekanismien selvittämiseen. Tutkimuksissa on käytetty näitä soluja myös mahdollisten lääkekohteiden ja resistenssimekanismien tunnistamiseen. Esimerkiksi Xiao-Yun Shenin ja hänen kollegoidensa tutkimuksessa selvitettiin luonnollisen yhdisteen bruceiini D:n (BD) syöpälääkkeiden potentiaalia. Tulokset osoittivat, että BD estää merkittävästi NCI-H1299-solujen proliferaatiota, invaasiota ja migraatiota. Siksi sitä voidaan pitää potentiaalisena lisähoitona ei-pienisoluista keuhkosyöpää hoidettaessa [3]. Vastaavasti eräässä tutkimuksessa arvioitiin ksantohumolin sytotoksisia vaikutuksia yksinään ja yhdessä sisplatiini-kemoterapialääkkeen kanssa NCI-H1299-keuhkosyöpäsoluihin [4].
NCI-H1299-soluja käsittelevät tutkimusjulkaisut
Tässä on joitakin merkittäviä ja eniten siteerattuja tutkimusjulkaisuja, jotka koskevat NCI-H1299-keuhkosyöpäsolulinjaa.
Tämä artikkeli on julkaistu Human and Experimental Toxicology -lehdessä (2021). Tutkimuksessa esitettiin, että indoli-3-karbinoli indusoi apoptoosia H1299-soluissa nostamalla reaktiivisten happiyhdisteiden (ROS) pitoisuuksia.
Tämä tutkimus julkaistiin vuonna 2018 Cellular Physiology and Biochemistry -lehdessä. Tutkimustulokset osoittivat, että kofeiinihapon ja paklitakselin yhdistelmällä on synergistinen syöpälääkevaikutus ei-pienisoluista keuhkosyöpää edustavassa NCI-H1299-solulinjassa.
Tämä tutkimusartikkeli julkaistiin Molecular Medicine Reports -lehdessä (2018). Tutkimuksessa arvioitiin triterpenoidisaponiinin, tubeimosidi-1:n, syöpää estävää vaikutusta ja sen taustalla olevia mekanismeja NCI-H1299-solulinjassa.
Pristimeriini indusoi apoptoosia ja estää H1299-keuhkosyöpäsolujen proliferaatiota ja migraatiota
Tässä Journal of Cancer -lehdessä (2020) julkaistussa artikkelissa esitettiin, että luonnollinen yhdiste pristimeriini estää NCI-H1299-solujen proliferaatiota ja migraatiota.
VIPR1-geenin säätelymekanismi ihmisen keuhkojen adenokarsinoomaa edustavissa H1299-soluissa
Tässä Medical Oncology -lehdessä (2019) julkaistussa tutkimuksessa selvitettiin VIPR1-geenin yli-ilmentymisen mahdollisia vaikutuksia NCI-H1299-adenokarsinoomasolulinjaan.
NCI-H1299-solulinjan resurssit: protokollat, videot ja muuta
Tässä on joitakin NCI-H1299-soluja käsitteleviä verkkolähteitä.
- NCI-H1299-transfektio: Tässä videossa selitetään NCI-H1299-solulinjojen väliaikaisen transfektion protokolla.
- Adheesiivisen solulinjan subkultivointi: Tässä videossa opit adheesiivisen solulinjan yleisen subkultivointimenettelyn.
Seuraava linkki sisältää soluviljelytietoja NCI-H1299-soluista.
- NCI-H1299-solulinja: Tämän linkin avulla voit tutustua NCI-H1299-solujen siirto- ja transfektiomenettelyihin.
Usein kysytyt kysymykset NCI-H1299-solulinjasta
Lähteet
- Gu, J. ym., Tutkimus EGCG:n aiheuttamasta apoptoosista keuhkosyöpäsoluissa PI3K/Akt-signalointireitin estämisen kautta. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci, 2018. 22(14): s. 4557–4563.
- Sun, W. ym., SPARC toimii TGF-β1:n välittäjänä edistämällä epiteeli-mesenkymaalisia siirtymiä A549- ja H1299-keuhkosyöpäsoluissa. Biofactors, 2018. 44(5): s. 453–464.
- Shen, X.-Y. ym., Tutkimus bruceiini D:n vaikutusmekanismista ei-pienisoluisten keuhkosyöpäsolujen (H1299) hoidossa. World Journal of Traditional Chinese Medicine, 2020. 6(4): s. 500.
- Long, B. ym., Xanthohumolin ja sen yhdistelmän sisplatiinin kanssa aiheuttamat sytotoksiset vaikutukset ihmisen metastaattisen keuhkosyövän H1299-soluissa. Journal of Advances in Medicine and Medical Research, 2019. 30(9): s. 1–15.