SH-SY5Y rakud - neuroblastoomi uuringud ja SH-SY5Y rakkude neuroteaduslik tähtsus
SH-SY5Y rakuliini, mis on saadud inimese neuroblastoomist, kasutatakse laialdaselt meditsiinilistes uuringutes neurodegeneratiivsete haiguste uurimiseks ja ravimite väljatöötamiseks. Teadlased kasutavad neid rakke algsel diferentseerimata kujul või diferentseerivad neid neuroneid meenutavateks rakkudeks.
SH-SY5Y rakuliini üldandmed ja päritolu
Selles jaotises käsitletakse põhiteavet SH-SY5Y rakuliini kohta, sealhulgas selle päritolu, määratlust ja rakustruktuuri. Käsitleme selliseid küsimusi nagu selle morfoloogia ja rakkude päritolu.
- SH-SY5Y on inimeselt pärinev rakuliin, mis pärineb 1970. aastal neuroblastoomi SK-N-SH rakuliini subkloonimisest.
- Emane rakuliin SK-N-SH arenes nelja-aastase neuroblastoomiaga naissoost patsiendi luuüdi biopsiast.
- SH-SY5Y rakud on fenotüübilt adrenergilised ja ekspresseerivad dopamiinergilisi markereid, mistõttu on nad kasulik in vitro mudel neurodegeneratiivsete haiguste, neurogeneesi ja ajurakkude omaduste uurimiseks [1].
- SH-SY5Y rakud kasvavad elujõuliste neuroblastiliste rakkude kogumikena koos neuriitidega ja on lõdvalt kleepuvad.
- SH-SY5Y rakkude suurus on 12 μm.
- SH-SY5Y rakkude modaalne kromosoomiarv on 47 ja neil on harvaesinev kromosoomi number 1, 1q trisoomia, mis on põhjustatud 1q segmendi lisakoopia sisestamisest kromosoomi 1 pikale harule.
SH-SY5Y rakkude kasvatamine
Neurobioloogiliste uuringute laborites on SH-SY5Y rakud kõige enam kultiveeritud neuroblastoomirakud. Nende rakkudega töötamiseks on oluline mõista, millist tüüpi kasvukeskkond sobib nende kasvatamiseks, nende kasvuomadusi, optimaalset külvi tihedust ja õiget meetodit nende külmutamiseks. Selles jaotises antakse olulist teavet SH-SY5Y rakkude kultiveerimise kohta, et aidata teil neid aspekte arvesse võtta.
SH-SY5Y rakkude kasvatamise põhipunktid
|
Populatsiooni kahekordistumise aeg: SH-SY5Y rakkude keskmine populatsiooni kahekordistumise aeg on ligikaudu 3-4 päeva. |
|
Adherentselt või suspensioonis: SH-SY5Y on lahtiselt kleepuvad rakud. Suure tihedusega külvamisel kasvavad nad klumpidena. |
|
Külvitihedus: SH-SY5Y optimaalne külvitihedus on 1 x 104 rakku/cm2 . SH-SY5Y kultuurid koosnevad nii kleepuvatest kui ka hõljuvatest rakkudest. |
|
Kasvukeskkond: SH-SY5Y rakuliini kasvatamiseks sobib ideaalselt DMEM:Ham's F12 keskkond, millele on lisatud 3,1 g/l glükoosi, 10% FBS ja 1,6 mM L-glutamiini. |
|
Kasvutingimused (temperatuur, CO2): SH-SY5Y rakke kasvatatakse 37 °C temperatuuril niisutatud inkubaatoris, kus on 5% CO2. |
|
Säilitamine: SH-SY5Y rakkude elujõulisuse säilitamiseks säilitatakse neid vedela lämmastiku aurufaasis temperatuuril alla -150°C. |
|
Külmutamisprotsess ja keskkond: SH-SY5Y rakkude külmutamiseks kasutatakse CM-1 või CM-ACF külmutuskeskkonda. Selle neuroblastoomi rakuliini külmutamiseks valitakse aeglane külmutamismeetod, mille puhul temperatuur langeb järk-järgult 1 °C võrra. |
|
Sulatamisprotsess: SH-SY5Y rakke sisaldavad külmutatud viaalid asetatakse 37 °C temperatuurile seatud vesivanni. Viaali segatakse kiiresti, kuni rakud sulavad ja alles jääb ainult väike jääklomp. |
|
Bioturvalisuse tase: SH-SY5Y rakke võib kasvatada bioloogilise ohutuse 1. taseme laboris. |
SH-SY5Y rakud: Eelised ja piirangud
Eelised
- Diferentseerumine neuroniteks: SH-SY5Y rakke saab diferentseerida funktsionaalseteks neuroniteks, kasutades spetsiifilisi ühendeid, pakkudes mugavamat alternatiivi primaarsetele neuronitele ja vältides nende kasutamisega seotud eetilisi probleeme [2].
- Neurodegeneratiivsete haiguste in vitro mudel: Molekulaarsete markerite, sealhulgas dopamiinergiliste neuronaalsete markerite ekspressioon muudab SH-SY5Y rakud sobivaks neurodegeneratiivsete haiguste, nagu Parkinsoni tõbi, uurimiseks.
Piirangud
- Mittesünkroniseeritud rakutsükkel: SH-SY5Y rakukultuuridel on mittesünkroniseeritud rakutsükkel diferentseerimata olekus [3].
- Määratlemata diferentseerumise seisund: SH-SY5Y rakkudel on määratlemata diferentseerumise seisund, mis ulatub tumorigeensest neuroblastoomi seisundist kuni postmitootiliste neuronite või neuraalsete progenitorrakkudeni. Nad ei ekspresseeri molekulaarseid markereid, mida küpsed neuronirakud teevad [4].
SH-SY5Y rakud in vitro neurofarmakoloogias ja ravimite avastamiseks
SH-SY5Y rakkude rakendused
Neurodegeneratiivsete haiguste uurimine: SH-SY5Y rakke kasutatakse neurodegeneratiivsete haiguste, näiteks Alzheimeri ja Parkinsoni tõve uurimiseks. Näiteks raviti SH-SY5Y rakke amüloid β-peptiidiga 1-42, et luua Alzheimeri tõve in vitro mudel. Seejärel transfekteeriti väljatöötatud rakuliin pcDNA-17A ja 17A shRNA-ga, et uurida pika mittekodeeriva RNA 17A mõju Alzheimeri tõve sarnastele rakkudele. Uuring näitas, et LncRNA-17A reguleerib SH-SY5Y rakkude apoptoosi ja autofaagiat, imiteerides Alzheimeri tõbe [5].
Ravimiarendus: SH-SY5Y rakke kasutatakse ravimite sõelumiseks ja valideerimiseks nende terapeutilise toime suhtes neurodegeneratiivsete haiguste vastu. Näiteks 2021. aastal läbi viidud uuringus tekitati SH-SY5Y rakkudes herbitsiidiga (parakvaat) parkinsonismi ja seejärel kasutati neid rakke flavonoidi Naringeniini terapeutilise potentsiaali uurimiseks. Ühend näitas rakumudelites Parkinsoni tõve poolt vahendatud neurodegeneratsiooni ja neurotoksilisuse eest kaitsvat toimet, mis viitab selle potentsiaalile Parkinsoni tõve ravimeetodite väljatöötamisel [6].
SH-SY5Y rakke sisaldavad teaduspublikatsioonid
SH-SY5Y rakkude kohta on palju teadusuuringuid. Selles jaotises käsitletakse mõningaid olulisi näiteid.
- LncRNA17A reguleerib SH-SY5Y rakuliini kui Alzheimeri tõve in vitro mudeli autofaagiat ja apoptoosi: Selles väljaandes tehti ettepanek, et LncRNA17A vahendab Alzheimeri tõve mudeliks eksperimentaalselt muundatud SH-SY5Y rakkude apoptoosi ja autofaagiat.
- Naringeniin leevendab parakvaadi poolt põhjustatud dopamiinergilist neuronikadu SH-SY5Y rakkudes ja Parkinsoni tõve roti mudelis: See uuring soovitas Naringeniini ühendid neuroprotektiivseks vahendiks Parkisoni tõve eksperimentaalselt väljatöötatud raku- ja loomamudeli vastu.
- Biokeemiline iseloomustus proliferatiivse ja diferentseeritud SH-SY5Y rakuliini kui Parkinsoni tõve mudeli jaoks: Diferentseeritud SH-SY5Y rakke kasutati mitmete Parkinsoni tõve puhul sageli uuritud biokeemiliste protsesside iseloomustamiseks ja hindamiseks.
- Atsitretiini in vitro mõju inimese neuronaalsetele SH-SY5Y rakkudele: Neuronite diferentseerumise uurimiseks kasutati SH-SY5Y rakke. Teadlased uurisid, et atsitretiin soodustab neuronite diferentseerumist ja ravib neurodegeneratiivseid ja neuroloogilisi häireid ning ajukasvajaid.
- SH-SY5Y rakuliini transformatsioon neuronilaadseks rakuks: Elektrofüsioloogiliste ja biomehaaniliste muutuste uurimine: Selles uuringus muudeti SH-SY5Y neuraalblastoomi rakud neuroniteks, ravides neid retinoiinhappe ja ajust tuleneva neurotroofilise faktori (BDNF) molekulidega, ning uuriti selle biokeemilisi ja elektrofüsioloogilisi muutusi.
SH-SY5Y rakkude ressursid: SYY5Y: Protokollid, videod ja muud vahendid: protokollid, videod ja muud
Selle kuulsa neuroblastoomi rakuliini kohta on saadaval mitu veebiressurssi. Need ressursid saavad teid harida SH-SY5Y kultuuride käitlemise ja hooldamise kohta.
Rakukultuuri protokollid
Järgmised veebisaitide artiklid aitavad teil õppida SH-SY5Y rakkude kultiveerimise, külmutamise ja sulatamise meetodeid.
- SH-SY5Y rakkude kultiveerimine: PõhiteaveSH-SY5Y rakkude kohta, sealhulgas rakkude sulatamine, külmutamine ja subkultuuride kasvatamine.
- SH-SY5Y subkultuurimine: Näitab teavet SH-SY5Y rakkude kasvatamiseks kasutatavate kasvukeskkondade ja subkultiveerimise etappide kohta.
- SH-SY5Y rakkude transfekteerimine: Selles dokumendis kirjeldatakse SH-SY5Y rakuliini transfektsiooniprotokolli.
- Diferentseerimisprotokoll: See video selgitab SH-SY5Y rakkude diferentseerimise protokolli.
Eeldame, et see artikkel annab kasulikku teavet SH-SY5Y rakkude käitlemise, kasvatamise ja uurimisuuringutes kasutamise kohta; kui soovite töötada selle neuroblastoomi rakuliiniga, kaaluge tellimist meilt.
SH-SY5Y rakuliin: SHYYY: Korduma kippuvad küsimused
Viited
- Carvajal-Oliveros, A., et al., BE (2)-M17 rakuliinil on parem dopamiinergiline fenotüüp kui traditsiooniliselt Parkinsoni uuringutes kasutataval SH-SY5Y, mis on enamasti serotonergiline. IBRO Neuroscience Reports, 2022. 13: p. 543-551.
- Kovalevich, J. ja D. Langford, Considerations for the use of SH-SY5Y neuroblastoma cells in neurobiology. Neuronite rakukultuur: meetodid ja protokollid, 2013: lk 9-21.
- Martin, E.-R., J. Gandawijaya ja A. Oguro-Ando, A novel method for generating glutamatergic SH-SY5Y neuron-like cells utilizing B-27 supplement. Frontiers in Pharmacology, 2022: lk 4042.
- Feles, S., et al., Neuroblastoomi rakuliini SH-SY5Y kultuuritingimuste täiustamine: funktsionaalsete uuringute eeldus. Methods and Protocols, 2022. 5(4): p. 58.
- Wang, X., M. Zhang ja H. Liu, LncRNA17A reguleerib SH-SY5Y rakuliini kui Alzheimeri tõve in vitro mudeli autofaagiat ja apoptoosi. Bioteadus, biotehnoloogia ja biokeemia, 2019. 83(4): p. 609-621.
- Ahmad, M.H., et al., Naringeniin leevendab parakvaadi poolt põhjustatud dopamiinergilist neuronikadu SH-SY5Y rakkudes ja Parkinsoni tõve roti mudelis. Neuropharmacology, 2021. 201: p. 108831.