Volumen: 100 ml
Almacenamiento: ≤ –15 °C
Esterilidad: filtrado estéril
La solución estable de glutamina (L-alanil-L-glutamina, 200 mM) es una forma dipéptida altamente estable de L-glutamina diseñada como sustituto directo de la L-glutamina convencional en medios de cultivo celular. La L-glutamina es un aminoácido esencial y una importante fuente de energía para las células cultivadas, que desempeña un papel fundamental en el crecimiento celular, el metabolismo y la síntesis de proteínas.
Aplicación y ventajas
En los medios líquidos estándar, la L-glutamina se degrada con relativa rapidez a 37 °C, lo que da lugar a la formación de subproductos tóxicos, como ionenes de amonio, que pueden afectar negativamente a la viabilidad celular y a los resultados experimentales. La glutamina estable supera esta limitación al proporcionar una forma dipéptida no degradable que permanece intacta en condiciones de cultivo.
Las células rompen enzimáticamente el enlace dipéptido para liberar L-glutamina según sea necesario, lo que garantiza un suministro continuo y fresco, al tiempo que evita la acumulación de productos de desecho nocivos. Esto hace que la solución sea especialmente ventajosa para cultivos celulares a largo plazo y sistemas de crecimiento de alta densidad.
Formulación y uso
La solución de L-alanil-L-glutamina se prepara en agua apta para cultivos celulares a una concentración de 200 mM y se filtra de forma estéril para aplicaciones sensibles a la contaminación. Se puede diluir directamente en medios completos según los requisitos experimentales. Almacenar a ≤ –15 °C y evitar ciclos repetidos de congelación-descongelación para mantener la estabilidad del producto.
Solo para uso en investigación. No apto para procedimientos diagnósticos o terapéuticos. No apto para uso en humanos o animales.
Volumen: 100 ml
Almacenamiento: +2 °C a +8 °C
Esterilidad: filtrado estéril
La solución tampón HEPES (1 M), también conocida como ácido N-2-hidroxietilpiperazina-N-2-etanosulfónico, es un agente tampón orgánico zwitteriónico ampliamente utilizado en medios de cultivo celular. Está diseñado para mantener condiciones de pH estables en el rango fisiológico de 6,7 a 8,6, lo que favorece el funcionamiento celular óptimo durante las aplicaciones in vitro.
Aplicación y ventajas
HEPES proporciona una capacidad tampón fiable en los sistemas de cultivo celular, especialmente cuando las células se manipulan fuera de una incubadora de CO₂. La adición de 10-25 mM de HEPES a los medios de cultivo ofrece una mayor estabilidad del pH durante períodos de manipulación prolongados, lo que ayuda a mantener condiciones experimentales constantes.
Este tampón es impermeable a las membranas, tiene una interferencia mínima con las reacciones bioquímicas y demuestra una gran estabilidad química y enzimática. Estas propiedades lo hacen adecuado para una amplia gama de aplicaciones de cultivo celular y bioquímicas.
Formulación y uso
La solución se suministra como un concentrado de 1 M preparado en agua apta para cultivos celulares y se filtra de forma estéril para su uso en entornos sensibles a la contaminación. Se puede diluir hasta la concentración de trabajo deseada en función de los requisitos de la aplicación. Almacenar a una temperatura de entre +2 °C y +8 °C y manipular en condiciones asépticas para preservar la integridad del producto.
Solo para uso en investigación. No apto para procedimientos diagnósticos o terapéuticos. No apto para uso en seres humanos o animales.
Volumen: 50 ml
Almacenamiento: entre +2 °C y +8 °C
Esterilidad: filtrado estéril
La solución de D-(+)-glucosa (solución de dextrosa) es un suplemento estéril y listo para usar que contiene D-(+)-glucosa, un azúcar natural que es un componente fundamental del metabolismo celular. La glucosa interviene en procesos biológicos esenciales, como la producción de energía, la glicosilación y la formación de glicanos, que contribuyen a la estructura y la función celular.
Aplicación y beneficios
Esta solución de glucosa se utiliza ampliamente como suplemento en medios de cultivo celular y en numerosas aplicaciones de biología celular y molecular. Como fuente primaria de carbono y energía, la glucosa favorece el crecimiento, la proliferación y la actividad metabólica de las células. Su participación en las vías biosintéticas también la hace fundamental para mantener la fisiología celular normal y la consistencia experimental.
Formulación y uso
La solución se suministra en una concentración elevada de 250 g/l de glucosa, lo que permite una dilución flexible en medios de cultivo según los requisitos experimentales. Se filtra de forma estéril para garantizar su idoneidad para aplicaciones sensibles a la contaminación. Almacenar a una temperatura de entre +2 °C y +8 °C y manipular de forma aséptica para mantener la calidad y la estabilidad del producto.
Solo para uso en investigación. No apto para procedimientos diagnósticos o terapéuticos. No apto para uso en seres humanos o animales.
Volumen: 10 ml
Almacenamiento: de +2 °C a +8 °C
Esterilidad: filtrado estéril
La solución de insulina-transferrina-selenio (ITS) (100x) es un suplemento químicamente definido diseñado para una amplia gama de aplicaciones de cultivo celular. Se utiliza más comúnmente como aditivo en medios de cultivo celular basales para favorecer el crecimiento celular en condiciones de suero reducido o sin suero.
Aplicación y ventajas
Nuestro suplemento ITS proporciona los componentes esenciales necesarios para el rendimiento óptimo de los medios sin suero. Al complementar los medios nutritivos convencionales con ITS, se puede reducir significativamente la necesidad de suero fetal bovino (FBS) para el mantenimiento rutinario de muchas líneas celulares. Esto ayuda a minimizar la variabilidad asociada al uso de suero, al tiempo que se mantiene un crecimiento y una viabilidad celular consistentes.
La insulina favorece la absorción celular y el metabolismo de nutrientes clave, la transferrina facilita el transporte de hierro y el selenio contribuye a la defensa antioxidante y a la actividad enzimática. En conjunto, estos componentes promueven un metabolismo celular equilibrado y una mayor reproducibilidad en sistemas de cultivo definidos.
Formulación y uso
La insulina-transferrina-selenio (ITS) se suministra como una solución concentrada 100 veces en solución salina equilibrada de Earle (EBSS) sin rojo de fenol. Para aplicaciones estándar, diluir 1:100 en el medio basal adecuado para alcanzar la concentración de trabajo recomendada. Conservar a una temperatura de +2 °C a +8 °C y manipular en condiciones asépticas para mantener la estabilidad y la esterilidad del producto.
Solo para uso en investigación. No debe utilizarse en procedimientos diagnósticos o terapéuticos. No debe utilizarse en seres humanos ni en animales.
Volumen: 5 ml
Almacenamiento: de +2 °C a +8 °C
Esterilidad: filtrado estéril
La solución de insulina humana recombinante es un suplemento químicamente definido que se utiliza habitualmente para el cultivo de líneas celulares de mamíferos, incluidas las células de ovario de hámster chino (CHO). Esta solución de grado de cultivo celular contiene insulina humana recombinante expresada en Saccharomyces cerevisiae, lo que garantiza una alta pureza y un rendimiento constante en aplicaciones de investigación.
Aplicaciones y ventajas
La insulina se añade habitualmente a medios sin suero y químicamente definidos para promover el crecimiento celular y la productividad. Como hormona reguladora clave, la insulina favorece la captación, la utilización y el almacenamiento celular de glucosa, aminoácidos y ácidos grasos. También inhibe la degradación del glucógeno, las proteínas y los lípidos, contribuyendo así a mejorar la viabilidad celular y la estabilidad metabólica en los sistemas de cultivo. La formulación químicamente definida favorece la reproducibilidad y minimiza la variabilidad en los flujos de trabajo de cultivo celular sensibles.
Propiedades biológicas y uso
La insulina es una hormona polipeptídica de dos cadenas producida de forma natural por las células β de los islotes pancreáticos. Tiene un peso molecular de aproximadamente 5800 Da. Las cadenas α y β están unidas por dos enlaces disulfuro intercadena, y la cadena α contiene un enlace disulfuro intracadena. Para aplicaciones de cultivo celular, la solución debe manipularse en condiciones asépticas y almacenarse a una temperatura de entre +2 °C y +8 °C para mantener su estabilidad y rendimiento.
Solo para uso en investigación. No debe utilizarse en procedimientos diagnósticos o terapéuticos. No debe utilizarse en seres humanos ni en animales.
Volumen: 100 ml
Almacenamiento: +2 °C a +8 °C
Esterilidad: filtrado estéril
La solución de piruvato sódico (100 mM) es un suplemento estéril y listo para usar diseñado para proporcionar una fuente de energía adicional y fácilmente accesible para los medios de cultivo celular. El piruvato sódico desempeña un papel clave en el metabolismo energético celular y favorece el crecimiento de células metabólicamente activas y de rápida proliferación, como las células tumorales. La suplementación puede mejorar la viabilidad celular y ayudar a mantener la estabilidad metabólica en los sistemas de cultivo.
Aplicación y beneficios
Esta solución se utiliza ampliamente en el cultivo celular rutinario para enriquecer los medios con piruvato y promover condiciones óptimas de crecimiento. Favorece la producción de ATP, puede ayudar a reducir el estrés oxidativo y contribuye a mejorar el rendimiento metabólico de las células cultivadas. Fabricado con agua apta para el cultivo celular y filtrado estérilmente, el producto garantiza una calidad y reproducibilidad constantes en los flujos de trabajo de investigación.
Uso y compatibilidad
La concentración final recomendada para la mayoría de las aplicaciones de cultivo celular es de 1 mM de piruvato sódico, que se consigue diluyendo la solución madre de 100 mM en una proporción de 1:100 en medio de cultivo completo. La solución es compatible con una amplia gama de medios basales y líneas celulares de mamíferos. Almacenar a una temperatura de entre +2 °C y +8 °C y proteger de la contaminación para mantener la estabilidad del producto.
Solo para uso en investigación. No apto para procedimientos diagnósticos o terapéuticos. No apto para uso en seres humanos o animales.
Volumen: 100 ml Almacenamiento: ≤-15°C Esterilidad: Filtrado estéril
La Solución Antibiótica/Antimicótica (100x ) es un concentrado estéril, listo para usar, diseñado para reducir los riesgos de contaminación microbiana en cultivos celulares y aplicaciones de laboratorio relacionadas. Esta solución 100x contiene una combinación bien establecida de penicilina, estreptomicina y anfotericina B, que proporciona una actividad antimicrobiana de amplio espectro contra bacterias Gram-positivas y Gram-negativas, levaduras y hongos filamentosos. La formulación es adecuada para su uso en cultivos de células eucariotas, medios bacterianos y otros sistemas sensibles a la contaminación, lo que favorece unas operaciones de laboratorio limpias y consistentes.
Aplicación y ventajas Optimizada para protocolos de investigación rutinarios, esta solución se utiliza ampliamente para mantener condiciones asépticas en flujos de trabajo de cultivos celulares. Ofrece un rendimiento fiable en entornos sensibles a la contaminación, ayudando a los investigadores a reducir el riesgo de sobrecrecimiento microbiano sin comprometer la salud celular o la reproducibilidad experimental. La formulación filtrada estéril elimina la necesidad de pasos adicionales de solubilización, lo que permite una preparación racionalizada de los medios y reduce la variabilidad en los procedimientos diarios de laboratorio.
Uso y compatibilidad Para alcanzar concentraciones de trabajo estándar, diluya la solución 1:100 en su medio de cultivo completo. El producto es compatible con una amplia gama de líneas celulares de mamíferos y medios basales. Con una disponibilidad de stock constante, los investigadores se benefician de una continuidad de suministro fiable y una planificación logística simplificada. La solución debe almacenarse a ≤ -15 °C y protegerse de ciclos repetidos de congelación-descongelación para mantener la estabilidad. Sólo para uso en investigación. No para uso en procedimientos diagnósticos o terapéuticos. No para uso en humanos o animales.
Volumen: 100 ml Almacenamiento: +2°C a +8°C Esterilidad: Filtrado estéril
MEM Aminoácidos No Esenciales (100x ) es un suplemento estéril diseñado para mejorar el crecimiento celular y la viabilidad en sistemas de cultivo celular de mamíferos. La formulación corresponde a un concentrado 100x de los aminoácidos no esenciales que se encuentran en el Medio Esencial Mínimo (MEM) estándar, lo que permite la suplementación directa de los medios basales con una preparación mínima.
Aplicación y ventajas Este suplemento proporciona una reserva adicional de aminoácidos para células de proliferación rápida o para líneas celulares que han perdido la capacidad de sintetizar aminoácidos no esenciales de novo. Al aliviar la carga metabólica de la biosíntesis, favorece una cinética de crecimiento mejorada, una viabilidad prolongada y una mayor consistencia experimental, especialmente en cultivos sensibles a los nutrientes o de alta densidad.
Composición y uso La solución incluye glicina, L-alanina, L-asparagina, ácido L-aspártico, ácido L-glutámico, L-prolina y L-serina. Es compatible con MEM y la mayoría de los demás medios estándar. Para su uso, diluir 1:100 en el medio de cultivo final. Este producto está filtrado estérilmente y listo para su uso sin pasos adicionales de manipulación. Sólo para uso en investigación. No debe utilizarse en procedimientos diagnósticos o terapéuticos. No debe utilizarse en seres humanos ni en animales.
- Una alternativa suave a la tripsina
Accutase es una solución de disociación celular que está revolucionando la industria del cultivo celular. Es una mezcla de enzimas proteolíticas y colagenolíticas que imita la acción de la tripsina y la colagenasa. A diferencia de la tripsina, Accutase no contiene ningún componente mamífero o bacteriano y es mucho más suave con las células, por lo que es una solución ideal para el desprendimiento rutinario de células del material plástico estándar de cultivo de tejidos y del material plástico recubierto de adherencia. En esta entrada del blog, exploraremos los beneficios y usos de Accutase y cómo está cambiando las reglas del juego en el cultivo celular.
Ventajas de Accutase
Accutase tiene varias ventajas sobre las soluciones tradicionales de tripsina. En primer lugar, puede utilizarse siempre que se necesite un desprendimiento suave y eficaz de cualquier línea celular adherente, lo que la convierte en un sustituto directo de la tripsina. En segundo lugar, Accutase funciona extremadamente bien en células madre embrionarias y neuronales, y se ha demostrado que mantiene la viabilidad de estas células después del pasaje. En tercer lugar, Accutase conserva la mayoría de los epítopos para su posterior análisis por citometría de flujo, por lo que es ideal para el análisis de marcadores de superficie celular.
Además, no es necesario neutralizar Accutase al pasar células adherentes. La adición de más medio después de dividir las células diluye Accutase de modo que ya no es capaz de desprender células. Esto elimina la necesidad de un paso de inactivación y ahorra tiempo a los técnicos de cultivo celular. Por último, Accutase no necesita alícuotas y una botella es estable en el frigorífico durante 2 meses.
Aplicaciones de Accutase
Accutase es un sustituto directo de la solución de tripsina y puede utilizarse para el pasaje de líneas celulares. Además, Accutase funciona bien al separar células para el análisis de muchos marcadores de superficie celular mediante citometría de flujo y para la clasificación celular. Otras aplicaciones posteriores del tratamiento con Accutase incluyen el análisis de marcadores de la superficie celular, el ensayo de crecimiento de virus, la proliferación celular, los ensayos de migración de células tumorales, el pasaje celular rutinario, el escalado de la producción (biorreactor) y la citometría de flujo.
Composición de Accutase
Accutase no contiene componentes mamíferos ni bacterianos y es una mezcla enzimática natural con actividad enzimática proteolítica y colagenolítica. Está formulada a una concentración mucho menor que la tripsina y la colagenasa, lo que la hace menos tóxica y más suave, pero igual de eficaz.
Eficacia de Accutase
Accutase ha demostrado ser eficaz en el desprendimiento de células primarias y madre y en el mantenimiento de una alta viabilidad celular en comparación con enzimas de origen animal como la tripsina. el 100% de las células se recuperan al cabo de 10 minutos, y no hay ningún inconveniente en dejar las células en Accutase hasta 45 minutos, gracias a la autodigestión de Accutase.
En resumen
En conclusión, Accutase es una potente solución que está cambiando las reglas del juego en el cultivo celular. Por su naturaleza suave, eficacia y versatilidad, Accutase es la alternativa ideal a la tripsina. Si está buscando una solución fiable y eficaz para el desprendimiento celular, Accutase es la solución para usted.
¿Qué contiene el EMEM?
El EMEM es una versión modificada del medio esencial mínimo de Eagle, que contiene solución salina equilibrada de Earle, aminoácidos no esenciales, L-glutamina, piruvato sódico y bicarbonato sódico. Es importante tener en cuenta que este nivel de bicarbonato sódico está pensado para su uso con un 5% de CO2 en el aire. Para mantener su eficacia, se recomienda almacenar el medio entre 2 °C y 8 °C en la oscuridad cuando no se utilice.
¿Para qué se utiliza el EMEM?
El medio esencial mínimo de Eagle (EMEM) es un medio de cultivo celular que puede mantener células en cultivo de tejidos. El medio contiene mayores concentraciones de aminoácidos, lo que permite una aproximación más exacta a la composición proteica de las células de mamífero cultivadas. El EMEM puede utilizarse para cultivar diversas células, como fibroblastos, células de la línea celular de cáncer de hígado humano (HepG2) y células astrocitarias derivadas de progenitores cerebrales fetales humanos (PDA). Suele utilizarse en presencia de suero fetal bovino (FBS), suero de ternera o suero de caballo.
¿En qué se diferencia el EMEM de otros medios de cultivo celular?
Aunque el EMEM y el medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) comparten algunas similitudes, también difieren. Ambos medios carecen de proteínas y contienen los aminoácidos, sales, glucosa y vitaminas necesarios para proporcionar energía a una célula y mantenerla en cultivo tisular. Sin embargo, la formulación del DMEM está modificada para contener hasta cuatro veces más vitaminas y aminoácidos y de dos a cuatro veces más glucosa que el EMEM. Cabe señalar que el EMEM también es diferente de la formulación original del MEM.
Control de calidad
Filtrado estéril
Almacenamiento y vida útil
Almacenar entre +2°C y +8°C, protegido de la luz.
Una vez abierto, conservar a 4°C y utilizar en un plazo de 6-8 semanas.
Condiciones de envío
Temperatura ambiente
Conservación
Mantener refrigerado a +2°C a +8°C en la oscuridad. Evitar la congelación y el calentamiento frecuente a +37°C, ya que reduce la calidad del producto.
No calentar el medio a más de 37°C ni utilizar fuentes de calor no controladas, como aparatos de microondas.
Si sólo se va a utilizar una parte del medio, retirar la cantidad necesaria y calentarla a temperatura ambiente antes de su uso.
Composición
Categoría
Componentes
Concentración (mg/L)
Aminoácidos
L-Arginina HCl
126.00
L-Cistina 2 HCl
31.30
L-Glutamina
292.00
L-Histidina HCl H2O
42.00
L-Isoleucina
52.00
L-Leucina
52.00
L-Lisina HCl
72.50
L-Metionina
15.00
L-Fenilalanina
32.00
L-Treonina
48.00
L-Triptófano
10.00
L-Tirosina 2 Na 2 H2O
51.90
L-Valina
46.00
Vitaminas
Cloruro de colina
1.00
Vitaminas
D-pantotenato cálcico
1.00
Ácido fólico
1.00
mio-Inositol
2.00
Nicotinamida
1.00
Piridoxal HCl
1.00
Riboflavina
0.10
Tiamina HCl
1.00
Sales inorgánicas
CaCl2 2 H2O
265.00
Sales inorgánicas
KCl
400.00
MgSO4
97.67
NaCl
6800.00
NaHCO3
2200.00
NaH2PO4
122.00
Otros componentes
D-Glucosa
1000.00
Otros componentes
Sal sódica de rojo de fenol
11.00
Las principales características de Freeze Medium CM-1 incluyen:
Amplia compatibilidad: Eficaz para una amplia gama de tipos celulares, incluyendo células primarias, células madre y líneas celulares establecidas.
Alta Viabilidad: Optimizado para maximizar la recuperación y viabilidad celular tras la descongelación, garantizando resultados experimentales fiables.
Listo para usar: Cómodamente preparadas y esterilizadas para su aplicación inmediata, reduciendo el tiempo de preparación y el riesgo de contaminación.
Estabilidad mejorada: Mantiene un rendimiento constante en condiciones de criopreservación estándar, garantizando resultados reproducibles.
Larga vida útil: CM-1 es un medio de criopreservación que contiene suero, listo para usar y que puede almacenarse en el frigorífico hasta un año.
Uso de CM-1 para congelar células
Para utilizar CM-1 para congelar células tanto adherentes como en suspensión, siga estos pasos
Para células adherentes, lavarlas y disociarlas del sustrato de cultivo. Para células en suspensión, proceder directamente al paso siguiente.
Contar las células para asegurarse de que tienen la concentración adecuada.
Centrifugar las células para granularlas y, a continuación, resuspenderlas en medio de congelación CM-1.
Transfiera las células resuspendidas a crioviales.
Utilizar un método de congelación lenta antes de transferir las células al almacenamiento a largo plazo
Método
Descripción
Pasos
❄️
Congelación manual
Un método paso a paso que implica la reducción gradual de la temperatura para garantizar la viabilidad celular
1️⃣ Colocar las células en medio de congelación en un congelador a 4°C durante 40 minutos.
2️⃣ Transferir a un congelador a -80°C durante 24 horas.
3️⃣ Almacenar las células en nitrógeno líquido para su conservación a largo plazo
❄️
Utilización de Mr. Frosty
Un práctico dispositivo que permite velocidades de congelación controladas sin energía eléctrica
1️⃣ Preparar las células en crioviales con medio de congelación.
2️⃣ Colocar los crioviales en el contenedor Mr. Frosty.
3️⃣ Almacenar a -80°C durante 24 horas antes de transferir al nitrógeno líquido
❄️
Congelador de velocidad controlada
Congelador de alta precisión de Thermo Fisher u otros fabricantes diseñado para la reducción controlada de la temperatura
1️⃣ Programar el aparato para que disminuya gradualmente la temperatura.
2️⃣ Colocar las células preparadas en el congelador.
3️⃣ Tras el ciclo de congelación, transfiera las células a nitrógeno líquido
Almacenar los crioviales a temperaturas inferiores a -130°C o en nitrógeno líquido para su conservación a largo plazo.
Ingredientes
Contiene FBS, DMSO, glucosa, sales
Capacidad tampón: pH = 7,2 a 7,6
El Medio de Congelación CM-1 de Cytion ofrece una solución fiable para la criopreservación, asegurando una alta viabilidad celular y funcionalidad post-descongelación para una amplia gama de aplicaciones de investigación.
El medio Ham's F-12K (Kaighn's) está cuidadosamente formulado para optimizar las condiciones de cultivo celular. Presenta una composición enriquecida, que proporciona niveles elevados de componentes esenciales como aminoácidos y piruvato sódico, así como elementos adicionales como putrescina, timidina, hipoxantina y zinc. Estas adiciones permiten a los investigadores complementar el medio con un mínimo de suero o componentes definidos para tipos celulares específicos, facilitando unas condiciones experimentales precisas.
En particular, el medio Ham's F-12K (Kaighn's) no contiene proteínas ni factores de crecimiento. En consecuencia, a menudo es necesaria la suplementación con factores de crecimiento y Suero Fetal Bovino (FBS), lo que permite a los investigadores adaptar el medio a los requisitos de sus líneas celulares específicas. Para un rendimiento óptimo, la concentración de FBS debe optimizarse cuidadosamente para cada línea celular, garantizando un crecimiento y una funcionalidad óptimos.
Para mantener el pH fisiológico, el medio Ham's F-12K (Kaighn's) emplea un sistema tampón de bicarbonato sódico (2,5 g/L), que requiere un entorno controlado de 5-10% de CO2 durante el cultivo. Esto garantiza que el pH del medio se mantenga dentro del rango ideal para el crecimiento y la viabilidad de las células
Control de calidad
pH = 7,2 +/
- 0,02 a 20-25°C.
Cada lote ha sido sometido a pruebas de esterilidad y ausencia de micoplasma y bacterias.
Mantenimiento
Mantener refrigerado entre +2°C y +8°C en la oscuridad. La congelación así como el calentamiento hasta +37°C minimizan la calidad del producto.
No calentar el medio a más de 37°C ni utilizar fuentes de calor incontrolables (por ejemplo, aparatos de microondas).
Si sólo se va a utilizar una parte del medio, retire esta cantidad del frasco y caliéntelo a temperatura ambiente.
La caducidad de cualquier medio excepto el medio básico es de 8 semanas a partir de la fecha de fabricación.
Composición
Componentes
mg/L
Sales inorgánicas
Cloruro de calcio x 2H2O
135,24
Sulfato de cobre(II) x 5H2O
0,00
Sulfato de hierro (II) x 7H2O
0,83
Cloruro de magnesio x 6H2O
105,72
Sulfato de magnesio x 7H2O
394,49
Cloruro de potasio
283,29
Dihidrógeno fosfato de potasio
58,52
Cloruro sódico
7597,20
dihidrógeno fosfato sódicoanhidro
115,02
Sulfato de cinc x 7H2O
0,14
Otros componentes
D(+)-Glucosa anhidra
1260,00
Hipoxantina
4,08
Ácido DL-α-lipoico
0,21
Rojo de fenol
3,00
Putrescina x 2HCl
0,32
Piruvato sódico
220,00
NaHCO3
2500,00
Timidina
0,73
Aminoácidos
L-Alanina
17,82
L-Arginina x HCl
421,40
L-Asparagina x H2O
30,02
Ácido L-aspártico
26,62
L-cisteína x HCl x H2O
70,24
L-Glutamina
292,20
L-ácido glutámico
29,42
Glicina
15,01
L-Histidina x HCl x H2O
41,92
L-Isoleucina
7,87
L-Leucina
26,24
L-Lisina x HCl
73,04
L-Metionina
8,95
L-Fenilalanina
9,91
L-Prolina
69,06
L-Serina
21,02
L-Treonina
23,82
L-Triptófano
4,08
L-Tirosina
10,87
L-Valina
23,42
Vitaminas
D(+)-Biotina
0,07
D-Pantotenato cálcico
0,48
Cloruro de colina
13,96
Ácido fólico
1,32
mio-inositol
18,02
Nicotinamida
0,04
Piridoxina x HCl
0,06
Riboflavina
0,04
Tiamina x HCl
0,34
Vitamina B12
1,36
La solución salina tamponada con fosfato (PBS) es una solución tampón muy utilizada en la investigación biológica y química. Desempeña un papel crucial en el mantenimiento del equilibrio del pH y la osmolaridad durante diversos procedimientos experimentales, como el procesamiento de tejidos y el cultivo celular. Nuestra solución PBS está meticulosamente formulada con ingredientes de gran pureza para garantizar la estabilidad y fiabilidad en cada experimento. La osmolaridad y las concentraciones de iones de nuestra PBS imitan fielmente las del cuerpo humano, por lo que es isotónica y no tóxica para la mayoría de las células.
Composición de nuestra solución PBS
Nuestra solución PBS es una mezcla de soluciones salinas y tampones de fosfato de grado ultrapuro con pH ajustado. A una concentración de trabajo de 1X, contiene:
8000 mg/L de cloruro sódico (NaCl)
200 mg/L Cloruro potásico (KCl)
1150 mg/L Fosfato sódico dibásico anhidro (Na2HPO4)
200 mg/L Fosfato potásico monobásico anhidro (KH2PO4)
Esta composición garantiza un pH y un equilibrio iónico óptimos, adecuados para una amplia gama de aplicaciones biológicas.
Aplicaciones de nuestra solución PBS
Nuestra solución PBS es ideal para diversas aplicaciones en investigación biológica. Sus propiedades isotónicas y no tóxicas la hacen adecuada para la dilución de sustancias y el enjuague de contenedores celulares. Las soluciones de PBS que contienen EDTA son eficaces para desprender células adheridas y aglomeradas. Sin embargo, los metales divalentes como el zinc no deben añadirse al PBS, ya que pueden provocar precipitación. En tales casos, se recomiendan los tampones de Good. Además, nuestra solución de PBS es una alternativa aceptable al medio de transporte viral para el transporte y almacenamiento de virus de ARN, incluido el SARS-CoV-2.
Control de calidad
Filtrado estéril
Almacenamiento y vida útil
Almacenar a +2°C a +25°C, protegido de la luz.
Una vez abierto, conservar entre 2°C y 25°C y utilizar antes de 24 meses.
Condiciones de envío
Temperatura ambiente
Conservación
Conservar refrigerado a +2°C a +8°C en la oscuridad. Evitar la congelación y el calentamiento frecuente a +37°C, ya que reduce la calidad del producto.
No calentar el medio a más de 37°C ni utilizar fuentes de calor no controladas, como aparatos de microondas.
Si sólo se va a utilizar una parte del medio, retirar la cantidad necesaria y calentarla a temperatura ambiente antes de su uso.
Composición
Categoría
Componentes
Concentración (mg/L)
Sales
Cloruro de potasio
200
Fosfato potásico monobásico anhidro
200
Cloruro sódico
8000
Fosfato sódico dibásico anhidro
1150
Inicialmente diseñado para favorecer el crecimiento de células leucémicas humanas tanto en cultivos en suspensión como en monocapa, el medio RPMI 1640 ha evolucionado a través de modificaciones por parte de investigadores y proveedores comerciales hasta convertirse en adecuado para una diversa gama de células de mamíferos. Es excepcionalmente compatible con líneas celulares como HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocitos y carcinomas.
El medio RPMI 1640 se distingue de otros medios de cultivo celular por su composición única. Contiene una cantidad sustancial de fosfato, aminoácidos y vitaminas. En particular, contiene biotina, vitamina B12 y PABA, ausentes en el Medio Esencial Mínimo de Eagle o en el Medio Eagle Modificado de Dulbecco. Además, el medio RPMI 1640 presenta concentraciones significativamente elevadas de vitaminas inositol y colina. Sin embargo, no contiene proteínas, lípidos ni factores de crecimiento. En consecuencia, suele ser necesario complementarlo con un 10% de Suero Fetal Bovino (FBS) para proporcionar unas condiciones óptimas para el crecimiento celular.
El sistema tampón del medio RPMI 1640 se basa en el bicarbonato sódico y necesita un entorno con un 5-10% de CO2 para mantener un pH fisiológicamente adecuado. La inclusión del agente reductor glutatión distingue aún más este medio de otros.
Control de calidad
Filtrado estéril
Almacenamiento y vida útil
Almacenar entre +2°C y +8°C, protegido de la luz.
Una vez abierto, conservar a 4°C y utilizar en un plazo de 6-8 semanas.
Condiciones de envío
Temperatura ambiente
Conservación
Mantener refrigerado a +2°C a +8°C en la oscuridad. Evitar la congelación y el calentamiento frecuente a +37°C, ya que reduce la calidad del producto.
No calentar el medio a más de 37°C ni utilizar fuentes de calor no controladas, como aparatos de microondas.
Si sólo se va a utilizar una parte del medio, retirar la cantidad necesaria y calentarla a temperatura ambiente antes de su uso.
Composición
Categoría
Componentes
Concentración (mg/L)
Aminoácidos
Glicina
10.00
L-Alanil-L-Glutamina
434.40
L-Arginina
200.00
L-Asparagina H2O
56.82
Ácido L-aspártico
20.00
L-Cistina 2HCl
65.20
Ácido L-glutámico
20.00
L-Histidina HCl H2O
20.27
L-Hidroxi-L-Prolina
20.00
L-Isoleucina
50.00
L-Leucina
50.00
L-Lisina HCl
40.00
L-metionina
15.00
L-Fenilalanina
15.00
L-Prolina
20.00
L-Serina
30.00
L-Treonina
20.00
L-Triptófano
5.00
L-Tirosina 2Na 2H2O
28.83
L-Valina
20.00
Vitaminas
ácido p-amino benzoico
1.00
D-Biotina
0.20
Cloruro de colina
3.00
D-pantotenato cálcico
0.25
Ácido fólico
1.00
mio-Inositol
35.00
Nicotinamida
1.00
HCl de piridoxina
1.00
Riboflavina
0.20
Tiamina HCl
1.00
Vitamina B12
0.005
Sales inorgánicas
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Otros componentes
D-Glucosa
2000.00
L-Glutatión reducido
1.00
Sal sódica roja de fenol
5.30
Esta formulación única combina Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) y Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) en una proporción precisa de 1:1. La adición de L-glutamina mejora aún más su composición.
DMEM, derivado de Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), ofrece una mayor concentración de aminoácidos y vitaminas en comparación con su predecesor. En cambio, Ham's F-12 se basa en el medio Ham's F-10, proporcionando un conjunto complementario de componentes esenciales.
Para favorecer un crecimiento celular óptimo, es práctica común complementar DMEM:Ham's F12 con FBS a una concentración típica del 5-10%. Esta adición es necesaria ya que el medio carece de hormonas de crecimiento, lípidos y proteínas cruciales para el desarrollo celular.
DMEM:Ham's F12 incorpora un sistema tampón de pH y a menudo se complementa con rojo de fenol, un indicador de pH. Las células cultivadas en DMEM:Ham's F12, o en cualquier medio que utilice el sistema tampón bicarbonato, requieren un entorno controlado de CO2 del 5-10% para mantener los niveles de pH adecuados.
Control de calidad
Filtrado estéril
Almacenamiento y vida útil
Almacenar entre +2°C y +8°C, protegido de la luz.
Una vez abierto, conservar a 4°C y utilizar en un plazo de 6-8 semanas.
Condiciones de envío
Temperatura ambiente
Conservación
Mantener refrigerado a +2°C a +8°C en la oscuridad. Evitar la congelación y el calentamiento frecuente a +37°C, ya que reduce la calidad del producto.
No calentar el medio a más de 37°C ni utilizar fuentes de calor no controladas, como aparatos de microondas.
Si sólo se va a utilizar una parte del medio, retirar la cantidad necesaria y calentarla a temperatura ambiente antes de su uso.
Composición
Categoría
Componentes
Concentración (mg/L)
Aminoácidos
Glicina
18.75
L-Alanina
4.45
L-Arginina HCl
147.50
L-Asparagina H₂O
7.50
Ácido L-aspártico
6.65
L-cisteína HCl H₂O
17.56
L-Cistina 2 HCl
31.29
Ácido L-glutámico
7.35
L-Glutamina
365.00
L-Histidina HCl H₂O
31.48
L-Isoleucina
54.47
L-Leucina
59.05
L-Lisina HCl
91.25
L-metionina
17.24
L-Fenilalanina
35.48
L-Prolina
17.25
L-Serina
26.25
L-Treonina
53.45
L-triptófano
9.02
Sal disódica de L-tirosina
48.10
L-Valina
52.85
Vitaminas
D-Biotina
0.0035
Cloruro de colina
8.98
D-pantotenato cálcico
2.24
Ácido fólico
2.66
myo-Inositol
12.60
Nicotinamida
2.02
HCl de piridoxina
0.031
Piridoxal HCl
2.00
Riboflavina
0.219
Tiamina HCl
2.17
Vitamina B12
0.68
Sales inorgánicas
CaCl₂ 2 H₂O
154.50
CuSO₄ 5 H₂O
0.0013
Fe(NO₃)₃ 9 H₂O
0.05
FeSO₄ 7 H₂O
0.417
KCl
311.80
MgCl₂ 6 H₂O
61.20
MgSO₄
48.84
NaCl
6996.00
NaHCO₃
1200.00
Na₂HPO₄
71.02
NaH₂PO₄
54.30
ZnSO₄ 7 H₂O
0.432
Otros componentes
D-Glucosa
3151.00
Hipoxantina
2.40
HEPES
3574.50
Ácido linoleico
0.042
Ácido lipoico
0.105
Sal sódica roja de fenol
8.63
Putrescina 2 HCl
0.081
Piruvato sódico
55.00
Timidina
0.365
- 0,02 a 20-25 °C. Cada lote ha sido sometido a pruebas de esterilidad y ausencia de micoplasmas y bacterias. Mantenimiento Conservar refrigerado a una temperatura de entre +2 °C y +8 °C en un lugar oscuro. La congelación y el calentamiento a +37 °C minimizan la calidad del producto. No caliente el medio a más de 37 °C ni utilice fuentes de calor incontrolables (por ejemplo, microondas). Si solo se va a utilizar una parte del medio, retire esa cantidad del frasco y caliéntela a temperatura ambiente. La vida útil de cualquier medio, excepto el medio básico, es de 6 a 8 semanas a partir de la fecha de apertura. Composición Componentes mg/L Sales inorgánicasCloruro de calcio x 2H2O132,00 Sulfato de magnesio97,67 Cloruro de potasio400,00 Cloruro de sodio6460,00 Hidrogenofosfato disódico (anhidro)504,00 Otros componentesD(+)-glucosa (anhidra)3000 Glutatión (reducido)0,50 Peptona cárnica600,00 Sal sódica del rojo fenol11 AminoácidosL-alanina13,36 L-arginina x HCl42,14 L-asparagina x H2O45,03 Ácido L-aspártico19,97 L-cisteína x HCl x H2O31,75 L-glutamina (estable)219,15 Ácido L-glutámico22,07 Glicina7,51 L-histidina x HCl x H2O20,96 L-hidroxiprolina19,67 L-isoleucina39,36 L-leucina39,36 L-lisina x HCl36,54 L-metionina14,92 L-fenilalanina16,52 L-prolina17,27 L-serina26,28 L-treonina17,87 L-triptófano3,06 Sal disódica de L-tirosina26,10 L-valina17,57 VitaminasÁcido p-aminobenzoico1,00 Ácido ascórbico0,56 D(+)-biotina0,20 D-Pantotenato cálcico0,20 Cloruro de colina5,00 Ácido fólico10,0 Mioinositol36,00 Nicotinamida0,50 Ácido nicotínico0,50 Piridoxal HCl0,50 Clorhidrato de piridoxina0,50 Riboflavina0,20 Clorhidrato de tiamina0,20 Vitamina B122,00
El medio 199 ofrece una amplia gama de aplicaciones en este campo. Puede mantener eficazmente el complejo cumulus-oocyte (COC) y apoyar la maduración in vitro de ovocitos. Además, se emplea en el lavado de líneas de aspiración durante la recogida de óvulos de vacas Holstein alemanas. Por otra parte, el Medio 199 sirve como un excelente medio para el cultivo de células endoteliales cardíacas derivadas de ratas. Estas aplicaciones demuestran la versatilidad y adaptabilidad del Medio 199 a diversas necesidades experimentales.
Historia
El desarrollo del Medio 199 en la década de 1950 marcó un avance significativo en los medios de cultivo de tejidos. Antes de su introducción, muchos medios de cultivo se basaban en productos derivados de animales y extractos de tejidos. Sin embargo, Morgan y sus colegas revolucionaron el campo al formular una fuente nutricional completamente definida para los cultivos celulares. Gracias a sus experimentos con diferentes combinaciones de vitaminas, aminoácidos y otros factores, descubrieron las excepcionales propiedades del Medio 199 para promover el crecimiento.
Control de calidad
pH = 7,2 +/
- 0,02 a 20-25°C.
Cada lote ha sido sometido a pruebas de esterilidad y ausencia de micoplasma y bacterias.
Mantenimiento
Conservar refrigerado entre +2°C y +8°C en la oscuridad. La congelación y el calentamiento hasta +37° C minimizan la calidad del producto.
No calentar el medio a más de 37° C ni utilizar fuentes de calor incontrolables (por ejemplo, aparatos de microondas).
Si sólo se va a utilizar una parte del medio, retire esta cantidad del frasco y caliéntelo a temperatura ambiente.
La caducidad de cualquier medio, excepto el medio básico, es de 8 semanas a partir de la fecha de fabricación.
Composición
Componentes
mg/L
Sales inorgánicas
Cloruro de calcio x 2H2O
264,92
Nitrato de hierro (III) x 9H2O
0,72
Sulfato de magnesio
97,67
Cloruro de potasio
400,00
Acetato de sodio x 3H2O
82,95
Cloruro sódico
6,800.00
Dihidrogenofosfato de sodio x H2O
140,00
Otros componentes
Sulfato de adenina
10,00
AMP
0,20
ATP
1,00
Colesterol
0,20
2'-Deoxirribosa
0,50
D(+)-Glucosa anhidra
1,000.00
Glutatión (rojo.)
0,05
Guanina x HCl
0,30
Hipoxantina
0,30
Fenol rojo
10,00
D-Ribosa
0,50
Timina
0,30
Tween 80
4,90
Uracilo
0,30
Xantina
0,30
NaHCO3
2,200.00
Aminoácidos
L-Alanina
25,00
L-Arginina x HCl
70,00
Ácido L-aspártico
30,00
L-cisteína x HCl x H2O
0,10
L-Cistina
20,00
L-Glutamina estable
149,00
L-ácido glutámico
67,00
Glicina
50,00
L-Histidina x HCl x H2O
21,88
L-Hidroxiprolina
10,00
L-Isoleucina
20,00
L-Leucina
60,00
L-Lisina x HCl
70,00
L-Metionina
15,00
L-Fenilalanina
25,00
L-Prolina
40,00
L-Serina
25,00
L-Treonina
30,00
L-Triptófano
10,00
L-Tirosina
40,00
L-Valina
25,00
Vitaminas
ácido 4-amino benzoico
0,05
Ácido ascórbico
0,05
D(+)-Biotina
0,01
Calciferol
0,10
D-Pantotenato cálcico
0,01
Cloruro de colina
0,50
Ácido fólico
0,01
mio-inositol
0,05
Menadiona
0,01
Ácido nicotínico
0.025
Nicotinamida
0.025
Piridoxal x HCl
0.025
Piridoxol x HCl
0.025
Riboflavina
0,01
DL-α-Tocoferol fosfato sal disódica
0,01
Tiamina x HCl
0,01
Acetato de vitamina A
0,14
IMDM es adecuado para cultivos celulares de alta densidad y rápida proliferación, incluyendo células Jurkat, COS-7 y macrófagos. Las diversas modificaciones de IMDM disponibles para una gama de aplicaciones de cultivo celular se pueden encontrar utilizando la herramienta de selección de medios. Los medios líquidos proporcionan nutrientes esenciales para todas las aplicaciones de cultivo celular. Cada uno de nuestros medios de cultivo celular de alta calidad se fabrica según la fórmula publicada inicialmente o las modificaciones necesarias para el rendimiento y la estabilidad constantes del medio de cultivo.
IMDM frente a DMEM
IMDM contiene nitrato potásico en lugar de nitrato férrico y HEPES y piruvato sódico. Los componentes adicionales del IMDM lo hacen más adecuado para tipos celulares especializados y aplicaciones específicas que el DMEM.
IMDM frente a RPMI
IMDM y RPMI tienen formulaciones diferentes que pueden ser relevantes para la estimulación con PMA/ionomicina. Una diferencia significativa es la concentración de Ca2+. Mientras que RPMI contiene 0,42 mM de Ca2+, IMDM contiene 1,49 mM.
Control de calidad
pH = 7,2 +/
- 0,02 a 20-25°C.
Cada lote ha sido sometido a pruebas de esterilidad y ausencia de micoplasma y bacterias.
Mantenimiento
Conservar refrigerado entre +2°C y +8°C en la oscuridad. La congelación y el calentamiento hasta +37° C minimizan la calidad del producto.
No calentar el medio a más de 37° C ni utilizar fuentes de calor incontrolables (por ejemplo, aparatos de microondas).
Si sólo se va a utilizar una parte del medio, retire esta cantidad del frasco y caliéntelo a temperatura ambiente.
La caducidad de cualquier medio, excepto el medio básico, es de 8 semanas a partir de la fecha de fabricación.
Composición
Componentes
mg/L
Sales inorgánicas
Cloruro de calcio x 2 H2O
219,00
Cloruro de potasio
330,00
Nitrato de potasio
0.076
Sulfato de magnesio anhidro
97,73
Cloruro sódico
4,505.00
Dihidrogenofosfato de sodio anhidro
109,00
Selenito de sodio
0,02
Otros componentes
D(+)-Glucosa anhidra
4,500.00
HEPES
5,958.00
Piruvato sódico
110,00
Rojo de fenol
15,00
Aminoácidos
L-alanina
25,00
L-Arginina x HCl
84,00
L-Asparagina x H2O
25,00
Ácido L-aspártico
30,00
L-Cistina x 2HCl
91,24
L-Glutamina
584,00
L-ácido glutámico
75,00
Glicina
30,00
L-Histidina x HCl x H2O
42,00
L-Isoleucina
104,80
L-Leucina
104,80
L-Lisina x HCl
146,20
L-Metionina
30,00
L-Fenilalanina
66,00
L-Prolina
40,00
L-Serina
42,00
L-Treonina
95,20
L-Triptófano
16,00
L-Tirosina x 2Na
104,20
L-Valina
93,60
Vitaminas
D(+)-Biotina
0.013
D-Pantotenato cálcico
4,00
Cloruro de colina
4,00
Ácido fólico
4,00
mio-inositol
7,20
Medios de cultivo celular: Una visión general
En el campo de las ciencias de la vida, una de las metodologías más importantes es el cultivo celular. La extracción de células, tejidos u órganos de un animal o una planta y su posterior implantación en un entorno artificial favorable para su supervivencia y/o crecimiento es lo que se entiende por "cultivo celular" Las necesidades ambientales fundamentales para un desarrollo celular óptimo son una temperatura controlada, un sustrato para la fijación de las células, un medio de crecimiento adecuado y una incubadora que mantenga el pH y la osmolalidad óptimos. Las células deben disponer de estas condiciones para crecer en todo su potencial.
La selección de un medio de crecimiento adecuado para el cultivo in vitro es la fase más crítica y vital del cultivo celular. Un medio de crecimiento, también conocido como medio de cultivo, es un líquido o gel formulado para favorecer el desarrollo de los organismos a escala microscópica, celular o vegetal. El medio utilizado para cultivar células suele contener un aporte adecuado de energía y sustancias que controlan el ciclo celular. Los principales componentes de un medio de cultivo incluyen aminoácidos, vitaminas, sales inorgánicas, glucosa y suero. El suero se añade al medio porque actúa como fuente de factores de crecimiento, hormonas y factores de fijación. Además de proporcionar nutrientes, el medio también contribuye a mantener los niveles de pH y osmolalidad.
Tipos de medio utilizados en el cultivo celular
Tanto las células humanas como las animales pueden cultivarse en un medio artificial o sintético o en un medio totalmente natural que se complemente con elementos naturales. A continuación, le ofrecemos una visión general de los diferentes tipos de medios disponibles en la actualidad.
Medios naturales
En los medios naturales sólo pueden encontrarse fluidos biológicos que existan en su estado natural. Los medios naturales son muy útiles y fáciles para el cultivo de una amplia variedad de tipos de células animales. La falta de comprensión de los componentes precisos que constituyen los medios naturales es el principal factor que contribuye a la baja repetibilidad de los resultados obtenidos utilizando medios naturales.
Medios artificiales
La preparación de medios artificiales o sintéticos implica la adición de nutrientes (tanto orgánicos como inorgánicos), proteínas séricas, carbohidratos, cofactores, vitaminas y sales, así como fases gaseosas de O2 y CO2 [1].
Se han desarrollado varios tipos de medios artificiales para cumplir una o varias de las siguientes funciones: 1) Supervivencia inmediata (una solución salina equilibrada con un pH y una presión osmótica precisos). 2) Supervivencia prolongada (una solución salina equilibrada complementada con diferentes formulaciones de productos químicos orgánicos y/o suero). 3) Desarrollo indefinido. 4) Funciones especializadas.
Existen cuatro clasificaciones distintas para los medios artificiales:
Medios que contienen suero
El tipo de suplemento más frecuente en los medios utilizados para el cultivo de células animales es el suero fetal bovino. Se añade al medio de cultivo como suplemento de bajo coste para conseguir las mejores condiciones de crecimiento posibles. Además de actuar como transportador o quelante de nutrientes inestables o insolubles en agua, hormonas y factores de crecimiento, inhibidores de proteasas y otras sustancias, el suero también fija y neutraliza moléculas nocivas.
Medio sin suero
La presencia de suero en los medios presenta una serie de desventajas y tiene el potencial de causar importantes errores de interpretación en la investigación inmunológica [2, 3]. Se han creado diversos medios sin suero [4, 5]. Por lo general, estos medios están formulados específicamente para el cultivo de un único tipo celular, como el Knockout Serum Replacement y el Knockout DMEM de Thermo Fisher Scientific, y el medio mTESR de Stem Cell Technologies [6], para células madre [7].
Además, estos medios incorporan cantidades definidas de factores de crecimiento purificados, lipoproteínas y otras proteínas, que de otro modo son típicamente proporcionadas por el suero [8]. Estos medios suelen denominarse "medios de cultivo definidos", ya que los componentes que los componen se conocen bien.
Medios químicamente definidos
Estos medios incluyen componentes inorgánicos y orgánicos ultrapuros que no han sufrido ningún tipo de contaminación. También pueden incluir adiciones de proteínas puras, como factores de crecimiento.
la modificación genética de bacterias o levaduras, junto con la adición de determinados ácidos grasos, vitaminas, colesterol y aminoácidos, da lugar a la producción de sus componentes [9].
Medios sin proteínas
Los medios sin proteínas son aquellos que no incluyen ninguna proteína en absoluto y, en su lugar, sólo incluyen elementos no proteicos. En comparación con los medios con suero añadido, el uso de medios sin proteínas añadidas promueve una mayor proliferación celular y expresión de proteínas y facilita la purificación de cualquier producto generado en un proceso posterior [10-12]. Las proteínas no se incluyen en formulaciones como MEM y RPMI-1640. Sin embargo, podría administrarse un suplemento proteico si fuera necesario.
Medio de cultivo y sus componentes básicos
Los medios de cultivo comerciales pueden adquirirse en forma de polvo o de líquido y suelen incluir diversos nutrientes como aminoácidos, glucosa, sales, vitaminas y otros suplementos dietéticos.
Las necesidades de estos componentes son diferentes para cada línea celular, y estas variaciones son responsables del gran número de formulaciones diferentes de medios. Cada componente es responsable de una función determinada, que se describirá en los párrafos siguientes:
Sistemas tampón
Para mantener unas condiciones de crecimiento óptimas, es necesario controlar el pH, lo que suele hacerse mediante uno de los dos sistemas de amortiguación siguientes:
Sistema tampón natural
La relación CO2/H2CO3 en la atmósfera es igual a la del medio, lo que crea un mecanismo natural de amortiguación. Para preservar su mecanismo de amortiguación natural, los cultivos deben mantenerse en un entorno de aire con un 5-10% de CO2, lo que a menudo se consigue utilizando una incubadora de CO2. Una de las mejores ventajas de utilizar un tampón natural es que es barato y seguro.
HEPES
La amortiguación química mediante el zwitterion HEPES tiene una mayor capacidad de amortiguación en el intervalo de pH de 7,2-7,4 y no necesita un entorno gaseoso regulado. Para determinados tipos de células, una dosis mayor de HEPES puede ser perjudicial. Asimismo, los medios que contienen HEPES son mucho más susceptibles a los efectos fototóxicos de la luz fluorescente [13].
Rojo de fenol
El indicador de pH rojo fenol se incluye a menudo en los medios de cultivo disponibles en el mercado, lo que permite una monitorización continua del pH. Al expandir las células, los metabolitos producidos por éstas provocan un cambio en el pH y, por tanto, un cambio de color del medio. El rojo de fenol tiene un doble efecto sobre el color de un medio, volviéndolo amarillo a pH ácido y púrpura a pH alcalino. pH 7,4, el valor óptimo para el cultivo celular, hace que el medio aparezca de color rojo fluorescente.
Pero el rojo de fenol tiene algunos inconvenientes: En primer lugar, el rojo de fenol es capaz de simular la actuación de una serie de hormonas esteroideas, principalmente el estrógeno [14]. Por lo tanto, cuando se estudian células sensibles a los estrógenos, como el tejido mamario, se recomienda un medio sin rojo de fenol. El equilibrio sodio-potasio se ve alterado por la presencia de rojo fenol en varias formulaciones libres de suero. La adición de suero u hormona pituitaria bovina al medio puede contrarrestar este efecto [15]. En tercer lugar, la presencia de rojo de fenol dificulta la detección en experimentos de citometría de flujo.
Sales inorgánicas
Los medios que contienen sales inorgánicas, como iones de sodio, potasio y calcio, ayudan a mantener el equilibrio osmótico y regulan el potencial de membrana.
Aminoácidos
Dado que los aminoácidos son los componentes fundamentales de las proteínas, son un componente esencial de todos y cada uno de los medios de crecimiento celular que se han concebido. Dado que las células son incapaces de producir ciertos aminoácidos por sí mismas, es importante que el medio de cultivo incluya aminoácidos esenciales. Son necesarios para la proliferación de las células, y la concentración a la que están presentes determina la densidad celular máxima que puede alcanzarse. En particular, la L-glutamina, un aminoácido esencial, es especialmente crucial.
La L-glutamina funciona como fuente secundaria de energía para el metabolismo y contribuye con nitrógeno a la producción de NAD, NADPH y nucleótidos. Debido al hecho de que la L-glutamina es un aminoácido inestable que, con el tiempo, cambia a una forma que las células son incapaces de utilizar, debe aportarse al medio.
Además, pueden aportarse al medio aminoácidos no esenciales para reponer los que se hayan consumido a lo largo del proceso de crecimiento. El crecimiento de las células se potencia y su viabilidad aumenta cuando el medio de crecimiento se complementa con aminoácidos no esenciales.
Carbohidratos
Los hidratos de carbono en forma de azúcares son la principal fuente de energía. Muchos de los medios también incluyen maltosa y fructosa, además de los azúcares más comunes de glucosa y galactosa.
Proteínas y péptidos
Las proteínas y los péptidos más utilizados son la albúmina, la transferrina y la fibronectina, que son especialmente importantes en los medios que no incluyen suero. La albúmina, la transferrina, la aprotinina, la fetuina y la fibronectina son algunas de las proteínas que pueden encontrarse en el suero, que es una fuente rica en proteínas.
La albúmina es la principal proteína que se encuentra en la sangre, y su función es unir y transportar diversas sustancias, como agua, sales, ácidos grasos libres, hormonas y vitaminas, entre distintos órganos y células. La capacidad de la albúmina para unirse a sustancias químicas la convierte en una candidata eficaz para eliminar compuestos nocivos del medio en el que se cultivan las células.
La aprotinina es un agente protector en los sistemas de cultivo celular, ya que es estable a pH neutro y ácido, así como resistente a las altas temperaturas y a la destrucción que pueden causar las enzimas proteolíticas. Es capaz de inhibir varias serina proteasas, incluida la tripsina, entre otras.
La fetuina es una glicoproteína que puede detectarse en mayores cantidades en el suero de animales fetales y recién nacidos en comparación con el suero de adultos. Además, actúa como inhibidor de la serina proteasa. La proteína fibronectina es un componente esencial en el proceso de adhesión celular. La transferrina es una proteína que transporta hierro y se encarga de llevarlo a las membranas de las células.
Ácidos grasos y lípidos
Desempeñan un papel crucial en el medio libre de suero cuando éste está ausente.
Vitaminas
Numerosas vitaminas son necesarias para el desarrollo y la proliferación celular. Las células no pueden producir las vitaminas en cantidades adecuadas, por lo que son esenciales en el cultivo de tejidos como suplementos dietéticos.
En el cultivo celular, el suero es la principal fuente de vitaminas; sin embargo, los medios también se tratan con diversas vitaminas para adecuarlos a un tipo celular específico. Normalmente, las vitaminas del grupo B se utilizan para estimular el crecimiento.
Oligoelementos
Elementos químicos como el cobre, el zinc, el selenio y los intermediarios del ácido tricarboxílico se conocen como oligoelementos. Los oligoelementos se añaden a menudo a los medios que no incluyen suero para sustituir a los que suelen estar presentes en el suero. Estos elementos son componentes químicos importantes necesarios para un desarrollo celular sano. Muchas reacciones bioquímicas dependen de ciertos micronutrientes, como la actividad enzimática.
Suplementos del medio
El medio de crecimiento completo sugerido para ciertas líneas celulares necesita componentes adicionales que están ausentes en los medios de base y en el suero. Estos suplementos alimenticios favorecen el crecimiento celular y la función metabólica adecuada.
Aunque las hormonas, los factores de crecimiento y las moléculas de señalización son esenciales para la proliferación adecuada de determinadas líneas celulares, siempre deben tomarse las siguientes precauciones: Dado que la adición de suplementos podría alterar la osmolalidad del medio de crecimiento completo, lo que puede inhibir el desarrollo celular, siempre es aconsejable verificar la osmolalidad después de añadir suplementos. Para la mayoría de las líneas celulares, la osmolalidad óptima oscila entre 260 y 320 mOSM/kg.
Antibióticos
Los antibióticos se emplean a menudo para inhibir el desarrollo de contaminantes bacterianos y fúngicos [16], aunque no son esenciales para el crecimiento celular. Dado que los antibióticos podrían ocultar la contaminación por micoplasmas y bacterias resistentes, no se sugiere su uso rutinario para el cultivo celular [17, 18].
Además, los antibióticos pueden alterar el metabolismo de las células hipersensibles. A menudo se utilizan las combinaciones de penicilina y estreptomicina fabricadas por MilliporeSigma y Life Technologies. La plasmocina se ha utilizado en el cultivo de las líneas celulares de glioma TS603, TS516 y BT260 [19], y ha demostrado ser eficaz para eliminar la contaminación por micoplasma (20).
Suero
El suero contiene albúminas, factores de crecimiento e inhibidores del crecimiento. El suero es uno de los componentes más importantes del medio de cultivo celular porque proporciona aminoácidos, proteínas, vitaminas (especialmente vitaminas liposolubles como la A, D, E y K), hidratos de carbono, lípidos, hormonas, factores de crecimiento, minerales y oligoelementos.
El suero procedente de fuentes fetales y de terneros bovinos se utiliza a menudo para promover el desarrollo de las células cultivadas. El suero fetal es un suministro abundante de factores de crecimiento y es adecuado para la clonación celular y el desarrollo de células sensibles. Debido a su menor capacidad para promover el crecimiento, el suero de ternera se emplea en experimentos de inhibición por contacto. Los medios de crecimiento normales suelen incluir entre un 2% y un 10% de suero. La adición de suero al medio de cultivo tiene las siguientes finalidades [21]:
-
El suero aporta los nutrientes esenciales para las células (tanto en solución como unidos a proteínas).
-
El suero incluye varios factores de crecimiento y hormonas que intervienen en la promoción del crecimiento y la actividad celular especializada.
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Ofrece muchas proteínas de unión, como la albúmina y la transferrina, que transportan otras sustancias químicas al interior de la célula. Por ejemplo, la albúmina transporta grasas, vitaminas, hormonas, etc. al interior de las células.
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También aporta proteínas, como la fibronectina, que aumentan la adhesión celular al sustrato. Además, produce elementos esparcidores que ayudan a la expansión celular antes de la división.
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Aporta inhibidores de la proteasa que impiden la proteólisis en las células.
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También contiene minerales como Na+, K+, Zn2+ y Fe2+.
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Aumenta la viscosidad del medio, por lo que protege a las células de lesiones mecánicas durante la agitación del cultivo en suspensión.
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También es un tampón.
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