Publicado: 2023 | Última revisión: mayo de 2026

Entender el «número de pases»

El concepto de «número de pases» es fundamental en el cultivo celular y se refiere al número de veces que una línea celular ha sido subcultivada o transferida a un medio de crecimiento fresco tras su reactivación inicial tras la crioconservación o su recepción de un banco de células de referencia. Esta métrica es fundamental para rastrear el linaje y el historial de un cultivo celular.

Descripción general del proceso

• En la práctica habitual del cultivo celular, cuando las células alcanzan una determinada densidad, se transfieren a un nuevo medio para mantener el crecimiento y evitar la sobreconfluencia. Cada una de estas transferencias se registra como un paso.
• Tradicionalmente, cuando recibíamos una línea celular, por ejemplo, en el paso 60 del depositante, continuábamos a partir de ese número de paso, incrementándolo con cada subcultivo. Esta práctica, aunque mantenía un hilo histórico, a menudo daba lugar a números de paso elevados desde el principio. Dado el uso extensivo y, a menudo, de décadas de ciertas líneas celulares, como la línea HeLa establecida en 1951, no es factible determinar el número total de pases desde el inicio de la línea celular.
• Para mejorar la claridad y la calidad de nuestros procesos de cultivo celular, revisamos este enfoque a principios de 2023. Ahora, cuando iniciamos un cultivo a partir de un nuevo vial, independientemente del número de pases del depositante, reiniciamos el recuento y comenzamos de nuevo desde el pase uno para cada lote fabricado.

Justificación

El pasaje es un procedimiento vital para garantizar la salud y la utilidad de los cultivos celulares para la investigación. Cuando las células crecen en exceso, experimentan inhibición por contacto, lo que reduce su tasa de proliferación y puede afectar negativamente a los resultados experimentales. Para mitigar estos problemas, Cytion aplica controles estrictos sobre las densidades celulares en las que se produce el subcultivo, manteniendo así un número bajo de pases durante la fabricación de sus líneas celulares. Esta precaución ayuda a prevenir los efectos adversos de un número excesivo de pases, como anomalías morfológicas, cambios en la tasa de crecimiento y deriva genética, que pueden hacer que las células difieran notablemente de su estado original. Los periodos prolongados de subcultivo también pueden aumentar el riesgo de contaminación microbiana.

Nuestro compromiso

Nos aseguramos de que las células suministradas a los investigadores se acerquen lo más posible a la composición genética y las características fenotípicas originales, lo que mejora la fiabilidad de los datos experimentales. Además, al documentar meticulosamente cada paso, Cytion contribuye a la trazabilidad y la reproducibilidad de la investigación, un compromiso que refleja los altos estándares de práctica en el cultivo celular. Se anima a los investigadores a mantener registros precisos de los números de paso, tanto en los recipientes de cultivo como en sus cuadernos de laboratorio, como referencia para el estado y el historial de sus cultivos celulares.

Consejos y errores comunes

Seguir el protocolo correcto es esencial, pero comprender los errores habituales puede ser igual de importante. Los procedimientos de cultivo celular son sensibles a pequeñas desviaciones en la técnica, el tiempo y la calidad de los reactivos. Los siguientes consejos reflejan las mejores prácticas recomendadas por el equipo científico de Cytion basadas en una amplia experiencia en cultivo celular.

• Precaliente siempre los reactivos a 37 °C antes de su uso para minimizar el choque térmico en las células.
• Trabaje con rapidez pero con cuidado: minimice el tiempo que las células pasan fuera de la incubadora.
• Utilice reactivos certificados y sometidos a pruebas de micoplasma para evitar la contaminación que pueda comprometer los resultados experimentales.
• Documente cada paso, incluyendo el número de pases, la fecha y las observaciones de la morfología celular.
• Valide su protocolo con un pequeño experimento piloto antes de pasar a una escala mayor para evitar el desperdicio de reactivos costosos.

Reactivos Cytion recomendados

Cytion ofrece una gama de reactivos para cultivo celular validados, diseñados específicamente para este protocolo. Todos los reactivos se someten a pruebas de rendimiento con líneas celulares de uso común y están disponibles con documentación completa. Visita cytion.com/Media-Reagents para ver la gama completa.