Medio de cultivo celular
El cultivo de células requiere un control medioambiental meticuloso para su crecimiento y mantenimiento satisfactorios. Un enfoque integral implica garantizar la esterilidad, el suministro de nutrientes, la estabilidad del pH y el control de la temperatura.
Condiciones estériles y suministro de nutrientes
Para evitar la contaminación y garantizar la viabilidad celular, es fundamental contar con un entorno estéril. Esto se consigue normalmente mediante técnicas asépticas y equipos especializados, como campanas de flujo laminar. Los nutrientes se suministran a través de los medios de cultivo, que contienen una mezcla de ingredientes esenciales, entre los que se incluyen:
- Sales inorgánicas: Vitales para mantener el equilibrio osmótico y proporcionar los iones necesarios para las actividades celulares.
- Hidratos de carbono: Sirven como fuentes de energía; la glucosa es el azúcar más utilizado.
- Aminoácidos: Los componentes básicos de las proteínas; algunos son esenciales y no pueden ser sintetizados por las células.
- Vitaminas: Actúan como cofactores de las reacciones enzimáticas; las vitaminas del grupo B son esenciales para el metabolismo celular.
- Ácidos grasos y lípidos: Componentes esenciales para la integridad y función de la membrana celular.
- Proteínas y péptidos: En los medios libres de suero, sustituyen a los factores de crecimiento y a las proteínas de unión típicamente suministradas por el suero.
- Suero: A menudo incluido como fuente de factores de crecimiento, aunque las alternativas sin suero están ganando popularidad para reducir la variabilidad y los riesgos de contaminación.
- estabilidad del pH y la temperatura: Las células suelen necesitar un intervalo de pH de 7,2-7,4 para un crecimiento óptimo. Esto se regula mediante sistemas amortiguadores, que pueden estar basados en CO2/bicarbonato o conseguirse químicamente utilizando agentes como el HEPES. La temperatura se mantiene en torno a 37 °C para imitar las condiciones fisiológicas.
Variantes y optimización de los medios
A lo largo de los años, se han desarrollado diversos medios basales para atender a tipos celulares específicos:
- Soluciones salinas equilibradas: Constituyen la base de formulaciones de medios más complejas.
- Los medios basales, como el medio esencial mínimo (MEM), se utilizan para cultivos primarios y células diploides.
- Medios Complejos: Como el RPMI 1640, son adecuados para una gama más amplia de células de mamíferos.
- Medios sin suero: Adaptados para aplicaciones específicas, reducen el riesgo de contaminación por componentes de origen animal.
Preparación de medios y control de calidad
Los medios pueden prepararse internamente a partir de ingredientes esenciales o comprarse como soluciones ya preparadas. El control de calidad implica garantizar la ausencia de contaminantes y la concentración adecuada de los ingredientes. La reconstitución de medios en polvo requiere agua de alta calidad, y los medios preparados deben esterilizarse, normalmente por filtración.
Uso del suero y consideraciones de seguridad
El uso de suero, en particular suero fetal bovino (FBS), es común debido a su rico contenido en factores de crecimiento. Sin embargo, debido a la preocupación por enfermedades como la encefalopatía espongiforme bovina (EEB), se siguen estrictos protocolos de pruebas y abastecimiento para garantizar la seguridad.
Directrices y tendencias normativas
Las normativas regulan los materiales de origen animal en los cultivos, haciendo hincapié en la importancia del abastecimiento y las pruebas. La tendencia a eliminar estos materiales en la medida de lo posible se refleja en el desarrollo de medios alternativos sin suero y sin animales.
En conclusión, los medios de cultivo celular desempeñan un papel fundamental en el crecimiento y mantenimiento de las células in vitro. Cada componente se selecciona y optimiza cuidadosamente para imitar el entorno in vivo, garantizando a las células condiciones de crecimiento, supervivencia y funcionalidad.
Lo que diferencia al DMEM de otros medios es su composición única. Contiene una concentración de aminoácidos y vitaminas cuatro veces superior a la del Medio Esencial Mínimo original de Eagle. Desarrollado inicialmente con glucosa baja (1 g/L) y piruvato sódico, el DMEM se emplea frecuentemente con niveles de glucosa más altos, con o sin piruvato sódico. En particular, el DMEM no contiene proteínas, lípidos ni factores de crecimiento, por lo que es necesario complementarlo. Para lograr un crecimiento óptimo, un enfoque común es complementar DMEM con 10% de suero fetal bovino (FBS). Además, el DMEM emplea un sistema tampón de bicarbonato sódico, que requiere un entorno con un 5-10% de CO2 para mantener un pH fisiológico.
El Medio Eagle Modificado de Dulbecco (DMEM) está muy bien considerado entre los medios definidos para el cultivo de células y tejidos, ya que satisface las necesidades de crecimiento de diversos fenotipos celulares adherentes. Supera al Medio de Eagle original, desarrollado en la década de 1950 para el cultivo de células de pollo, mediante la formulación suplementaria mejorada conocida como modificación de Dulbecco. Esta modificación eleva significativamente el contenido de determinados aminoácidos y vitaminas hasta cuatro veces en comparación con el medio original.
En el campo del cultivo celular, el DMEM desempeña un papel vital como medio de crecimiento para diferentes tipos celulares, incluidas las células primarias, las células madre y las células transformadas. Los investigadores también emplean la versión modificada de DMEM para una amplia gama de aplicaciones de investigación, como el descubrimiento de fármacos, la ingeniería de tejidos y el estudio de las vías de señalización celular.
Control de calidad
Filtrado estéril
Almacenamiento y vida útil
Almacenar entre +2°C y +8°C, protegido de la luz.
Una vez abierto, conservar a 4°C y utilizar en un plazo de 6-8 semanas.
Condiciones de envío
Temperatura ambiente
Conservación
Mantener refrigerado a +2°C a +8°C en la oscuridad. Evitar la congelación y el calentamiento frecuente a +37°C, ya que reduce la calidad del producto.
No calentar el medio a más de 37°C ni utilizar fuentes de calor no controladas, como aparatos de microondas.
Si sólo se va a utilizar una parte del medio, retirar la cantidad necesaria y calentarla a temperatura ambiente antes de su uso.
Composición
Categoría
Componentes
Concentración (mg/L)
Aminoácidos
Glicina
30.00
L-Arginina HCl
84.00
L-Cistina 2 HCl
62.57
L-Glutamina
584.00
L-Histidina HCl H2O
42.00
L-Isoleucina
105.00
L-Leucina
105.00
L-Lisina HCl
146.00
L-metionina
30.00
L-Fenilalanina
66.00
L-Serina
42.00
L-Treonina
95.00
L-Triptófano
16.00
L-Tirosina 2 Na 2H2O
103.79
L-Valina
94.00
Vitaminas
Cloruro de colina
4.00
D-pantotenato cálcico
4.00
Ácido fólico
4.00
mio-Inositol
7.20
Nicotinamida
4.00
Piridoxal HCl
4.00
Riboflavina
0.40
Tiamina HCl
4.00
Sales inorgánicas
CaCl2 2 H2O
265.00
Fe(NO3)3 9 H2O
0.10
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
200.10
NaCl
6400.00
NaHCO3
3700.00
NaH2PO4 2H2O
141.73
Otros componentes
D-Glucosa
4500.00
Sal sódica de rojo de fenol
15.90
Piruvato sódico
110.00
¿Qué contiene el EMEM?
El EMEM es una versión modificada del medio esencial mínimo de Eagle, que contiene solución salina equilibrada de Earle, aminoácidos no esenciales, L-glutamina, piruvato sódico y bicarbonato sódico. Es importante tener en cuenta que este nivel de bicarbonato sódico está pensado para su uso con un 5% de CO2 en el aire. Para mantener su eficacia, se recomienda almacenar el medio entre 2 °C y 8 °C en la oscuridad cuando no se utilice.
¿Para qué se utiliza el EMEM?
El medio esencial mínimo de Eagle (EMEM) es un medio de cultivo celular que puede mantener células en cultivo de tejidos. El medio contiene mayores concentraciones de aminoácidos, lo que permite una aproximación más exacta a la composición proteica de las células de mamífero cultivadas. El EMEM puede utilizarse para cultivar diversas células, como fibroblastos, células de la línea celular de cáncer de hígado humano (HepG2) y células astrocitarias derivadas de progenitores cerebrales fetales humanos (PDA). Suele utilizarse en presencia de suero fetal bovino (FBS), suero de ternera o suero de caballo.
¿En qué se diferencia el EMEM de otros medios de cultivo celular?
Aunque el EMEM y el medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) comparten algunas similitudes, también difieren. Ambos medios carecen de proteínas y contienen los aminoácidos, sales, glucosa y vitaminas necesarios para proporcionar energía a una célula y mantenerla en cultivo tisular. Sin embargo, la formulación del DMEM está modificada para contener hasta cuatro veces más vitaminas y aminoácidos y de dos a cuatro veces más glucosa que el EMEM. Cabe señalar que el EMEM también es diferente de la formulación original del MEM.
Control de calidad
Filtrado estéril
Almacenamiento y vida útil
Almacenar entre +2°C y +8°C, protegido de la luz.
Una vez abierto, conservar a 4°C y utilizar en un plazo de 6-8 semanas.
Condiciones de envío
Temperatura ambiente
Conservación
Mantener refrigerado a +2°C a +8°C en la oscuridad. Evitar la congelación y el calentamiento frecuente a +37°C, ya que reduce la calidad del producto.
No calentar el medio a más de 37°C ni utilizar fuentes de calor no controladas, como aparatos de microondas.
Si sólo se va a utilizar una parte del medio, retirar la cantidad necesaria y calentarla a temperatura ambiente antes de su uso.
Composición
Categoría
Componentes
Concentración (mg/L)
Aminoácidos
L-Arginina HCl
126.00
L-Cistina 2 HCl
31.30
L-Glutamina
292.00
L-Histidina HCl H2O
42.00
L-Isoleucina
52.00
L-Leucina
52.00
L-Lisina HCl
72.50
L-Metionina
15.00
L-Fenilalanina
32.00
L-Treonina
48.00
L-Triptófano
10.00
L-Tirosina 2 Na 2 H2O
51.90
L-Valina
46.00
Vitaminas
Cloruro de colina
1.00
Vitaminas
D-pantotenato cálcico
1.00
Ácido fólico
1.00
mio-Inositol
2.00
Nicotinamida
1.00
Piridoxal HCl
1.00
Riboflavina
0.10
Tiamina HCl
1.00
Sales inorgánicas
CaCl2 2 H2O
265.00
Sales inorgánicas
KCl
400.00
MgSO4
97.67
NaCl
6800.00
NaHCO3
2200.00
NaH2PO4
122.00
Otros componentes
D-Glucosa
1000.00
Otros componentes
Sal sódica de rojo de fenol
11.00
Una de sus notables ventajas es la capacidad de soportar el crecimiento celular sin necesidad de suplementos de suero. Esto elimina las posibles interferencias causadas por los componentes del suero, garantizando resultados experimentales consistentes y fiables. Al proporcionar un entorno de cultivo sin suero, Ham's F-12 Medium ofrece a los investigadores un mayor control sobre sus investigaciones.
Otra característica clave del medio Ham's F-12 es su idoneidad para el cultivo unicelular. Esto lo convierte en una excelente elección para una gran variedad de líneas celulares, incluidas las células CHO, las células pulmonares y las células L de ratón. La composición optimizada de nutrientes del medio facilita la fijación y el crecimiento eficientes de células individuales, permitiendo el establecimiento de cultivos celulares homogéneos con una reproducibilidad mejorada.
Además, el medio Ham's F-12 ha sido reconocido como el medio preferido para el ensayo de toxicidad clonal (CTA). Este ensayo desempeña un papel fundamental en la evaluación de los efectos citotóxicos de las sustancias sobre las células. Utilizando el medio Ham's F-12 en el CTA, los investigadores pueden evaluar con precisión el impacto de diversos compuestos o tratamientos en células individuales, proporcionando información valiosa sobre los perfiles toxicológicos.
Control de calidad
pH = 7,2 +/
- 0,02 a 20-25°C.
Cada lote ha sido sometido a pruebas de esterilidad y ausencia de micoplasma y bacterias.
Mantenimiento
Conservar refrigerado entre +2°C y +8°C en la oscuridad. La congelación y el calentamiento hasta +37° C minimizan la calidad del producto.
No calentar el medio a más de 37° C ni utilizar fuentes de calor incontrolables (por ejemplo, aparatos de microondas).
Si sólo se va a utilizar una parte del medio, retire esta cantidad del frasco y caliéntelo a temperatura ambiente.
La caducidad de cualquier medio, excepto el medio básico, es de 8 semanas a partir de la fecha de fabricación.
Composición
Componentes
mg/L
Sales inorgánicas
Cloruro de calcio x 2H2O
44,00
Sulfato de cobre(II) x 5H2O
0,00
Sulfato de hierro (II) x 7H2O
0,83
Cloruro de magnesio x 6H2O
122,00
Cloruro de potasio
223,65
Cloruro sódico
7599,00
hidrógeno fosfato de di-sodioanhidro
142,04
Sulfato de cinc x 7H2O
0,86
Otros componentes
D(+)-Glucosa anhidra
1801,60
Hipoxantina
4,08
Ácido linoleico
0,08
Ácido DL-α-lipoico
0,21
Rojo fenol
1,20
Putrescina x 2HCl
0,16
Piruvato sódico
110,00
Timidina
0,73
NaHCO3
1176,00
Aminoácidos
L-Alanina
8,91
L-Arginina x HCl
210,70
L-Asparagina x H2O
15,01
Ácido L-aspártico
13,31
L-cisteína x HCl x H2O
35,12
L-Alanil-L-Glutamina
217,30
L-ácido glutámico
14,71
Glicina
7,51
L-Histidina x HCl x H2O
20,96
L-Isoleucina
3,94
L-Leucina
13,12
L-Lisina x HCl
36,54
L-Metionina
4,48
L-Fenilalanina
4,96
L-Prolina
34,53
L-Serina
10,51
L-Treonina
11,91
L-Triptófano
2,04
L-Tirosina
5,44
L-Valina
11,71
Vitaminas
D(+)-Biotina
0,01
D-Pantotenato cálcico
0,24
Cloruro de colina
13,96
Ácido fólico
1,32
mio-inositol
18,02
Nicotinamida
0,04
Piridoxina x HCl
0,06
Riboflavina
0,04
Tiamina x HCl
0,34
Vitamina B12
1,36
Esta formulación única combina Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) y Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) en una proporción precisa de 1:1. La adición de L-glutamina mejora aún más su composición.
DMEM, derivado de Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), ofrece una mayor concentración de aminoácidos y vitaminas en comparación con su predecesor. En cambio, Ham's F-12 se basa en el medio Ham's F-10, proporcionando un conjunto complementario de componentes esenciales.
Para favorecer un crecimiento celular óptimo, es práctica común complementar DMEM:Ham's F12 con FBS a una concentración típica del 5-10%. Esta adición es necesaria ya que el medio carece de hormonas de crecimiento, lípidos y proteínas cruciales para el desarrollo celular.
DMEM:Ham's F12 incorpora un sistema tampón de pH y a menudo se complementa con rojo de fenol, un indicador de pH. Las células cultivadas en DMEM:Ham's F12, o en cualquier medio que utilice el sistema tampón bicarbonato, requieren un entorno controlado de CO2 del 5-10% para mantener los niveles de pH adecuados.
Control de calidad
Filtrado estéril
Almacenamiento y vida útil
Almacenar entre +2°C y +8°C, protegido de la luz.
Una vez abierto, conservar a 4°C y utilizar en un plazo de 6-8 semanas.
Condiciones de envío
Temperatura ambiente
Conservación
Mantener refrigerado a +2°C a +8°C en la oscuridad. Evitar la congelación y el calentamiento frecuente a +37°C, ya que reduce la calidad del producto.
No calentar el medio a más de 37°C ni utilizar fuentes de calor no controladas, como aparatos de microondas.
Si sólo se va a utilizar una parte del medio, retirar la cantidad necesaria y calentarla a temperatura ambiente antes de su uso.
Composición
Categoría
Componentes
Concentración (mg/L)
Aminoácidos
Glicina
18.75
L-Alanina
4.45
L-Arginina HCl
147.50
L-Asparagina H₂O
7.50
Ácido L-aspártico
6.65
L-cisteína HCl H₂O
17.56
L-Cistina 2 HCl
31.29
Ácido L-glutámico
7.35
L-Glutamina
365.00
L-Histidina HCl H₂O
31.48
L-Isoleucina
54.47
L-Leucina
59.05
L-Lisina HCl
91.25
L-metionina
17.24
L-Fenilalanina
35.48
L-Prolina
17.25
L-Serina
26.25
L-Treonina
53.45
L-triptófano
9.02
Sal disódica de L-tirosina
48.10
L-Valina
52.85
Vitaminas
D-Biotina
0.0035
Cloruro de colina
8.98
D-pantotenato cálcico
2.24
Ácido fólico
2.66
myo-Inositol
12.60
Nicotinamida
2.02
HCl de piridoxina
0.031
Piridoxal HCl
2.00
Riboflavina
0.219
Tiamina HCl
2.17
Vitamina B12
0.68
Sales inorgánicas
CaCl₂ 2 H₂O
154.50
CuSO₄ 5 H₂O
0.0013
Fe(NO₃)₃ 9 H₂O
0.05
FeSO₄ 7 H₂O
0.417
KCl
311.80
MgCl₂ 6 H₂O
61.20
MgSO₄
48.84
NaCl
6996.00
NaHCO₃
1200.00
Na₂HPO₄
71.02
NaH₂PO₄
54.30
ZnSO₄ 7 H₂O
0.432
Otros componentes
D-Glucosa
3151.00
Hipoxantina
2.40
HEPES
3574.50
Ácido linoleico
0.042
Ácido lipoico
0.105
Sal sódica roja de fenol
8.63
Putrescina 2 HCl
0.081
Piruvato sódico
55.00
Timidina
0.365
El medio Ham's F-12K (Kaighn's) está cuidadosamente formulado para optimizar las condiciones de cultivo celular. Presenta una composición enriquecida, que proporciona niveles elevados de componentes esenciales como aminoácidos y piruvato sódico, así como elementos adicionales como putrescina, timidina, hipoxantina y zinc. Estas adiciones permiten a los investigadores complementar el medio con un mínimo de suero o componentes definidos para tipos celulares específicos, facilitando unas condiciones experimentales precisas.
En particular, el medio Ham's F-12K (Kaighn's) no contiene proteínas ni factores de crecimiento. En consecuencia, a menudo es necesaria la suplementación con factores de crecimiento y Suero Fetal Bovino (FBS), lo que permite a los investigadores adaptar el medio a los requisitos de sus líneas celulares específicas. Para un rendimiento óptimo, la concentración de FBS debe optimizarse cuidadosamente para cada línea celular, garantizando un crecimiento y una funcionalidad óptimos.
Para mantener el pH fisiológico, el medio Ham's F-12K (Kaighn's) emplea un sistema tampón de bicarbonato sódico (2,5 g/L), que requiere un entorno controlado de 5-10% de CO2 durante el cultivo. Esto garantiza que el pH del medio se mantenga dentro del rango ideal para el crecimiento y la viabilidad de las células
Control de calidad
pH = 7,2 +/
- 0,02 a 20-25°C.
Cada lote ha sido sometido a pruebas de esterilidad y ausencia de micoplasma y bacterias.
Mantenimiento
Mantener refrigerado entre +2°C y +8°C en la oscuridad. La congelación así como el calentamiento hasta +37°C minimizan la calidad del producto.
No calentar el medio a más de 37°C ni utilizar fuentes de calor incontrolables (por ejemplo, aparatos de microondas).
Si sólo se va a utilizar una parte del medio, retire esta cantidad del frasco y caliéntelo a temperatura ambiente.
La caducidad de cualquier medio excepto el medio básico es de 8 semanas a partir de la fecha de fabricación.
Composición
Componentes
mg/L
Sales inorgánicas
Cloruro de calcio x 2H2O
135,24
Sulfato de cobre(II) x 5H2O
0,00
Sulfato de hierro (II) x 7H2O
0,83
Cloruro de magnesio x 6H2O
105,72
Sulfato de magnesio x 7H2O
394,49
Cloruro de potasio
283,29
Dihidrógeno fosfato de potasio
58,52
Cloruro sódico
7597,20
dihidrógeno fosfato sódicoanhidro
115,02
Sulfato de cinc x 7H2O
0,14
Otros componentes
D(+)-Glucosa anhidra
1260,00
Hipoxantina
4,08
Ácido DL-α-lipoico
0,21
Rojo de fenol
3,00
Putrescina x 2HCl
0,32
Piruvato sódico
220,00
NaHCO3
2500,00
Timidina
0,73
Aminoácidos
L-Alanina
17,82
L-Arginina x HCl
421,40
L-Asparagina x H2O
30,02
Ácido L-aspártico
26,62
L-cisteína x HCl x H2O
70,24
L-Glutamina
292,20
L-ácido glutámico
29,42
Glicina
15,01
L-Histidina x HCl x H2O
41,92
L-Isoleucina
7,87
L-Leucina
26,24
L-Lisina x HCl
73,04
L-Metionina
8,95
L-Fenilalanina
9,91
L-Prolina
69,06
L-Serina
21,02
L-Treonina
23,82
L-Triptófano
4,08
L-Tirosina
10,87
L-Valina
23,42
Vitaminas
D(+)-Biotina
0,07
D-Pantotenato cálcico
0,48
Cloruro de colina
13,96
Ácido fólico
1,32
mio-inositol
18,02
Nicotinamida
0,04
Piridoxina x HCl
0,06
Riboflavina
0,04
Tiamina x HCl
0,34
Vitamina B12
1,36
- 0,02 a 20-25 °C. Cada lote ha sido sometido a pruebas de esterilidad y ausencia de micoplasmas y bacterias. Mantenimiento Conservar refrigerado a una temperatura de entre +2 °C y +8 °C en un lugar oscuro. La congelación y el calentamiento a +37 °C minimizan la calidad del producto. No caliente el medio a más de 37 °C ni utilice fuentes de calor incontrolables (por ejemplo, microondas). Si solo se va a utilizar una parte del medio, retire esa cantidad del frasco y caliéntela a temperatura ambiente. La vida útil de cualquier medio, excepto el medio básico, es de 6 a 8 semanas a partir de la fecha de apertura. Composición Componentes mg/L Sales inorgánicasCloruro de calcio x 2H2O132,00 Sulfato de magnesio97,67 Cloruro de potasio400,00 Cloruro de sodio6460,00 Hidrogenofosfato disódico (anhidro)504,00 Otros componentesD(+)-glucosa (anhidra)3000 Glutatión (reducido)0,50 Peptona cárnica600,00 Sal sódica del rojo fenol11 AminoácidosL-alanina13,36 L-arginina x HCl42,14 L-asparagina x H2O45,03 Ácido L-aspártico19,97 L-cisteína x HCl x H2O31,75 L-glutamina (estable)219,15 Ácido L-glutámico22,07 Glicina7,51 L-histidina x HCl x H2O20,96 L-hidroxiprolina19,67 L-isoleucina39,36 L-leucina39,36 L-lisina x HCl36,54 L-metionina14,92 L-fenilalanina16,52 L-prolina17,27 L-serina26,28 L-treonina17,87 L-triptófano3,06 Sal disódica de L-tirosina26,10 L-valina17,57 VitaminasÁcido p-aminobenzoico1,00 Ácido ascórbico0,56 D(+)-biotina0,20 D-Pantotenato cálcico0,20 Cloruro de colina5,00 Ácido fólico10,0 Mioinositol36,00 Nicotinamida0,50 Ácido nicotínico0,50 Piridoxal HCl0,50 Clorhidrato de piridoxina0,50 Riboflavina0,20 Clorhidrato de tiamina0,20 Vitamina B122,00
IMDM es adecuado para cultivos celulares de alta densidad y rápida proliferación, incluyendo células Jurkat, COS-7 y macrófagos. Las diversas modificaciones de IMDM disponibles para una gama de aplicaciones de cultivo celular se pueden encontrar utilizando la herramienta de selección de medios. Los medios líquidos proporcionan nutrientes esenciales para todas las aplicaciones de cultivo celular. Cada uno de nuestros medios de cultivo celular de alta calidad se fabrica según la fórmula publicada inicialmente o las modificaciones necesarias para el rendimiento y la estabilidad constantes del medio de cultivo.
IMDM frente a DMEM
IMDM contiene nitrato potásico en lugar de nitrato férrico y HEPES y piruvato sódico. Los componentes adicionales del IMDM lo hacen más adecuado para tipos celulares especializados y aplicaciones específicas que el DMEM.
IMDM frente a RPMI
IMDM y RPMI tienen formulaciones diferentes que pueden ser relevantes para la estimulación con PMA/ionomicina. Una diferencia significativa es la concentración de Ca2+. Mientras que RPMI contiene 0,42 mM de Ca2+, IMDM contiene 1,49 mM.
Control de calidad
pH = 7,2 +/
- 0,02 a 20-25°C.
Cada lote ha sido sometido a pruebas de esterilidad y ausencia de micoplasma y bacterias.
Mantenimiento
Conservar refrigerado entre +2°C y +8°C en la oscuridad. La congelación y el calentamiento hasta +37° C minimizan la calidad del producto.
No calentar el medio a más de 37° C ni utilizar fuentes de calor incontrolables (por ejemplo, aparatos de microondas).
Si sólo se va a utilizar una parte del medio, retire esta cantidad del frasco y caliéntelo a temperatura ambiente.
La caducidad de cualquier medio, excepto el medio básico, es de 8 semanas a partir de la fecha de fabricación.
Composición
Componentes
mg/L
Sales inorgánicas
Cloruro de calcio x 2 H2O
219,00
Cloruro de potasio
330,00
Nitrato de potasio
0.076
Sulfato de magnesio anhidro
97,73
Cloruro sódico
4,505.00
Dihidrogenofosfato de sodio anhidro
109,00
Selenito de sodio
0,02
Otros componentes
D(+)-Glucosa anhidra
4,500.00
HEPES
5,958.00
Piruvato sódico
110,00
Rojo de fenol
15,00
Aminoácidos
L-alanina
25,00
L-Arginina x HCl
84,00
L-Asparagina x H2O
25,00
Ácido L-aspártico
30,00
L-Cistina x 2HCl
91,24
L-Glutamina
584,00
L-ácido glutámico
75,00
Glicina
30,00
L-Histidina x HCl x H2O
42,00
L-Isoleucina
104,80
L-Leucina
104,80
L-Lisina x HCl
146,20
L-Metionina
30,00
L-Fenilalanina
66,00
L-Prolina
40,00
L-Serina
42,00
L-Treonina
95,20
L-Triptófano
16,00
L-Tirosina x 2Na
104,20
L-Valina
93,60
Vitaminas
D(+)-Biotina
0.013
D-Pantotenato cálcico
4,00
Cloruro de colina
4,00
Ácido fólico
4,00
mio-inositol
7,20
Inicialmente diseñado para favorecer el crecimiento de células leucémicas humanas tanto en cultivos en suspensión como en monocapa, el medio RPMI 1640 ha evolucionado a través de modificaciones por parte de investigadores y proveedores comerciales hasta convertirse en adecuado para una diversa gama de células de mamíferos. Es excepcionalmente compatible con líneas celulares como HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocitos y carcinomas.
El medio RPMI 1640 se distingue de otros medios de cultivo celular por su composición única. Contiene una cantidad sustancial de fosfato, aminoácidos y vitaminas. En particular, contiene biotina, vitamina B12 y PABA, ausentes en el Medio Esencial Mínimo de Eagle o en el Medio Eagle Modificado de Dulbecco. Además, el medio RPMI 1640 presenta concentraciones significativamente elevadas de vitaminas inositol y colina. Sin embargo, no contiene proteínas, lípidos ni factores de crecimiento. En consecuencia, suele ser necesario complementarlo con un 10% de Suero Fetal Bovino (FBS) para proporcionar unas condiciones óptimas para el crecimiento celular.
El sistema tampón del medio RPMI 1640 se basa en el bicarbonato sódico y necesita un entorno con un 5-10% de CO2 para mantener un pH fisiológicamente adecuado. La inclusión del agente reductor glutatión distingue aún más este medio de otros.
Control de calidad
Filtrado estéril
Almacenamiento y vida útil
Almacenar entre +2°C y +8°C, protegido de la luz.
Una vez abierto, conservar a 4°C y utilizar en un plazo de 6-8 semanas.
Condiciones de envío
Temperatura ambiente
Conservación
Mantener refrigerado a +2°C a +8°C en la oscuridad. Evitar la congelación y el calentamiento frecuente a +37°C, ya que reduce la calidad del producto.
No calentar el medio a más de 37°C ni utilizar fuentes de calor no controladas, como aparatos de microondas.
Si sólo se va a utilizar una parte del medio, retirar la cantidad necesaria y calentarla a temperatura ambiente antes de su uso.
Composición
Categoría
Componentes
Concentración (mg/L)
Aminoácidos
Glicina
10.00
L-Alanil-L-Glutamina
434.40
L-Arginina
200.00
L-Asparagina H2O
56.82
Ácido L-aspártico
20.00
L-Cistina 2HCl
65.20
Ácido L-glutámico
20.00
L-Histidina HCl H2O
20.27
L-Hidroxi-L-Prolina
20.00
L-Isoleucina
50.00
L-Leucina
50.00
L-Lisina HCl
40.00
L-metionina
15.00
L-Fenilalanina
15.00
L-Prolina
20.00
L-Serina
30.00
L-Treonina
20.00
L-Triptófano
5.00
L-Tirosina 2Na 2H2O
28.83
L-Valina
20.00
Vitaminas
ácido p-amino benzoico
1.00
D-Biotina
0.20
Cloruro de colina
3.00
D-pantotenato cálcico
0.25
Ácido fólico
1.00
mio-Inositol
35.00
Nicotinamida
1.00
HCl de piridoxina
1.00
Riboflavina
0.20
Tiamina HCl
1.00
Vitamina B12
0.005
Sales inorgánicas
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Otros componentes
D-Glucosa
2000.00
L-Glutatión reducido
1.00
Sal sódica roja de fenol
5.30