Línea celular Neuro-2a

Neuro-2a es una línea celular neuronal de ratón ampliamente utilizada en la investigación neurocientífica. Principalmente, estas células se emplean para estudiar el desarrollo neuronal, la diferenciación, la neurotoxicidad, las vías de señalización celular y el crecimiento axonal. Además, se utilizan para el desarrollo y el cribado de fármacos.

Este artículo se centra en aspectos importantes de las células de neuroblastoma Neuro-2a que podrían ayudarle antes de empezar a trabajar con ellas. Abarcará principalmente:

Atributos generales y origen de las células Neuro-2a
Información sobre el cultivo de la línea celular Neuro-2a
Ventajas e inconvenientes de la línea celular Neuro-2a
Aplicaciones de la línea celular Neuro-2a en investigación
Publicaciones de investigación sobre células Neuro-2a
Recursos para las células Neuro-2a: Protocolos, vídeos y más

1. Atributos generales y origen de las células Neuro-2a

Esta parte del artículo cubrirá los antecedentes y las características básicas de la línea celular Neuro-2a que es esencial conocer antes de trabajar con ella. Aquí aprenderá: ¿Qué es la línea celular Neuro-2a? ¿Cuál es el origen de la línea celular Neuro-2a? ¿Qué es la diferenciación celular Neuro-2a? ¿Cuál es el tamaño de una célula Neuro-2a? ¿Cuál es la morfología de las células Neuro-2a?

Las células Neuro-2a se originaron a partir de un tumor espontáneo (neuroblastoma) de un ratón albino (cepa A). La línea celular fue creada por R.J. Klebe y F.H. Ruddle.
Las células de neuroblastoma Neuro-2a presentan una morfología de células madre neuronales y ameboides.
El tamaño de las células Neuro-2a es de 12 micrómetros [1].
El número cromosómico de las células Neuro-2a puede oscilar entre 59 y 193, con un número modal de 95. El cariotipo de estas células de neuroblastoma es inestable dentro de un rango de 94 a 98 cromosomas.

Ilustración de la señalización neuronal: representación en 3D de la liberación de neurotransmisores en la brecha sináptica por la neurona presináptica, desencadenada por la afluencia de Ca2+, que conduce a la activación de canales iónicos y a la afluencia de Na+ en la neurona postsináptica.

2. Información sobre el cultivo de la línea celular Neuro-2a

Las células Neuro-2a se utilizan ampliamente en los laboratorios de investigación neurocientífica. Antes de trabajar con estas células, debería aprender la información imprescindible sobre el cultivo celular que se menciona a continuación. Esto puede ayudarle a trabajar con ellas con facilidad. Usted sabrá: ¿Qué es un medio de cultivo celular Neuro-2a? ¿Cómo se cultivan las células Neuro-2a? ¿Cuál es el tiempo de duplicación de las células Neuro-2a? ¿Cuál es la densidad de siembra de Neuro-2a? ¿Cuál es el protocolo de cultivo de células Neuro-2a? ¿Cuál es el medio de cultivo de las células Neuro-2a?

Puntos clave para el cultivo de células Neuro-2a

Tiempo de duplicación:	El tiempo de duplicación de las células Neuro-2a es de aproximadamente 70 horas.
Adherentes o en suspensión:	Neuro-2a es una línea celular adherente.
Densidad de siembra:	La densidad de siembra celular optimizada para la línea celular Neuro-2a es de 1 x¹⁰⁴ ^células/cm2. Para la siembra, las células se lavan con solución salina tampón fosfato libre de magnesio y calcio (1x). Posteriormente, se añade una solución de pasaje (Accutase), y las células se incuban durante 8 a 10 minutos a temperatura ambiente. Tras la disociación celular, se añade medio fresco y se centrifugan las células. El sedimento celular recogido se resuspende cuidadosamente y las células se vierten en un recipiente de cultivo para su crecimiento.
Medio de cultivo:	Para el cultivo de células Neuro-2a se utiliza EMEM. Contiene un 10% de FBS, 2 mM de L-Glutamina, 1,5 g/L de NaHCO3, EBSS, 1 mM de piruvato sódico y NEAA para un crecimiento celular ideal. Los medios deben sustituirse de 1 a 2 veces por semana.
Condiciones de crecimiento:	Los cultivos de Neuro-2a se mantienen en una incubadora humidificada a 37°C conectada a un suministro de CO2 al 5%.
Almacenamiento:	Las células deben almacenarse a una temperatura inferior a -150 °C en un congelador eléctrico de temperatura ultrabaja o en la fase de vapor de nitrógeno líquido a largo plazo.
Proceso y medio de congelación:	Para congelar las células Neuro-2a se utilizan los medios CM-1 o CM-ACF. Las células se congelan mediante un proceso de congelación lento que sólo permite un descenso de 1 °C por minuto. Esto protege a las células del shock y mantiene su viabilidad.
Proceso de descongelación:	Para descongelar cultivos congelados, se coloca el vial en un baño de agua a 37 °C durante 40 a 60 segundos hasta que sólo quede un pequeño grumo de hielo. A continuación, se añade el medio de cultivo y se centrifugan las células. Este paso ayuda a eliminar los componentes del medio de congelación. A continuación, se resuspende el sedimento celular y se transfieren las células a un nuevo matraz lleno de medio de cultivo. A continuación, las células se colocan en una incubadora a 37 °C durante un mínimo de 24 horas.
Nivel de bioseguridad:	Los laboratorios de nivel de bioseguridad 1 son obligatorios para manipular y mantener cultivos de Neuro-2a.

Imagen microscópica de un pasaje temprano de células adherentes de neuroblastoma Neuro 2a que muestra su morfología con aumentos de 10x y 20x.

3. Ventajas e inconvenientes de la línea celular Neuro-2a

Las células Neuro-2a poseen algunas ventajas e inconvenientes que las distinguen de otras líneas celulares neuronales. A continuación se enumeran algunos pros y contras notables de estas células.

Ventajas

Las ventajas de la línea celular de neuroblastoma murino Neuro-2a son:

Fácil de mantener
La línea celular Neuro-2a no está asociada a procedimientos de cultivo celular complejos o intrincados. Son fáciles de cultivar y mantener en los laboratorios de investigación.
Modelo celular neuronal in vitro
Neuro-2a es un cómodo modelo celular neuronal ampliamente utilizado por los investigadores en estudios de desarrollo y diferenciación neuronal.

Desventajas

Las desventajas de las células Neuro-2a son:

Origen murino
Neuro-2a es de origen murino, y los investigadores deben tener cuidado al extrapolar los resultados de estudios basados en ratones a la salud y la enfermedad humanas, ya que la biología del ratón y la humana pueden diferir significativamente.

4. Aplicaciones de la línea celular Neuro-2a en investigación

Las células Neuro-2a ofrecen muchas aplicaciones en el campo de la investigación neurocientífica. A continuación se exponen algunos usos prometedores de esta línea celular:

Desarrollo neuronal: Neuro-2a es un modelo celular neuronal in vitro que se utiliza ampliamente para estudiar el desarrollo neuronal y procesos relacionados como la diferenciación, el crecimiento axonal y la formación de sinapsis. Un estudio realizado en 2020 utilizó células Neuro-2a para explorar el papel del microARN-124 en la diferenciación de células neuronales inducida por ácido retinoico [2]. Otro estudio investigó el receptor gamma de ácido retinoico Neuro 2a (RARG) y la expresión de miRNA-124 en la línea celular de neuroblastoma (N2A). Este estudio propuso que RARG es el objetivo de miR-124 y suprime el crecimiento de las neuritas [3].
Neurotoxicidad: Neuro-2a también se utiliza para evaluar los efectos tóxicos de fármacos, sustancias químicas o factores ambientales sobre las células neuronales. Por ejemplo, un estudio realizado por Zhihong Yin y sus colaboradores investigó la neurotoxicidad del bisfenol A (BPA), una sustancia química ambiental, utilizando células Neuro-2a. Observaron que el BPA reprime la diferenciación y proliferación de las células neuronales alterando su integridad celular y sináptica [4].
Cribado de fármacos: Las células Neuro-2a también se emplean para evaluar las actividades terapéuticas de varios fármacos, compuestos y productos naturales. Por ejemplo, en un estudio se utilizaron células Neuro-2a y se estudió el potencial antioxidante del extracto de la planta Gingko biloba. Además, la investigación propuso que provoca una disminución de la agregación de Aβ y puede ser un tratamiento potencial para la enfermedad de Alzheimer [5].

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5. Publicaciones de investigación sobre las células Neuro-2a

He aquí algunos artículos de investigación interesantes sobre la línea celular Neuro-2a.

Las alcamidas similares a la piperina de Piper nigrum inducen el promotor de BDNF y promueven el crecimiento de neuritas en células Neuro-2a

Este estudio en el Journal of Natural Medicines, 2018 investigó los efectos terapéuticos de las alcamidas aisladas de la pimienta blanca (P. nigrum) en las células neuronales Neuro-2a.

La regulación a la baja de Nkx2. 1 está implicada en la anormalidad cerebral inducida por el exceso de ácido retinoico

Esta investigación publicada en Acta Biochimica et Biophysica Sinica, 2020 propuso que el gen Nkx2.1 desempeña un papel importante en el desarrollo del cerebro del ratón al regular la cascada de señalización Shh.

La exposición al bisfenol A induce neurotoxicidad asociada a disfunción sináptica y citoesquelética en células neuro-2a

Este artículo se publicó en la revista Toxicology and Industrial Health (2023) y propuso que una sustancia química ambiental, el bisfenol A, desencadena neurotoxicidad en células neuro-2a y altera su disfunción sináptica y citoesquelética.

La modulación por hexarelina de las vías MAPK y PI3K/Akt en células Neuro-2A inhibe la toxicidad apoptótica inducida por peróxido de hidrógeno

Este artículo publicado en Pharmaceuticals (2021) propuso que un fármaco, la hexarelina, modula la cascada PI3K/AKT y MAPK en células de neuroblastoma (Neuro-2a) e inhibe la apoptosis de células neuro-2a inducida por peróxido de hidrógeno.

El extracto etanólico de Emblica officinalis suprime la neuroinflamación en la microglía y promueve el crecimiento de neuritas en células Neuro2a

Este artículo de investigación publicado en Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2021) propone que el extracto de fruta de Emblica officinalis suprime la neuroinflamación en las células Neuro-2a y, por tanto, puede ser beneficioso para las enfermedades neuroinflamatorias.

6. Recursos para las células Neuro-2a: Protocolos, vídeos y más

A continuación se enumeran los recursos en línea disponibles sobre las células Neuro-2a. Incluyen el cultivo de células Neuro-2a y el protocolo de transfección.

Protocolo de transfección de Neuro-2a: Neuro-2a es un huésped de transfección adecuado. Este enlace le guiará sobre el protocolo de transfección de la línea celular. La eficacia de transfección de Neuro-2a varía de un reactivo a otro.

El siguiente enlace contiene el protocolo de cultivo celular de Neuro-2a.

Protocolo de cultivo celular Neuro-2a: Este enlace le ayudará a conocer el protocolo de subcultivo de células Neuro 2a.
Células Neuro-2a: Este sitio web contiene información exhaustiva sobre los medios de cultivo de células Neuro-2a, la densidad de siembra y los protocolos de subcultivo y manipulación de cultivos criopreservados y proliferativos.

Referencias

Lulevich, V., et al., Single-cell mechanics provides a sensitive and quantitative means for probing amyloid-beta peptide and neuronal cell interactions. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(31): p. 13872-7.
You, Q., et al., Papel de miR-124 en la regulación de la diferenciación celular Neuro-2A inducida por ácido retinoico. Neural Regen Res, 2020. 15(6): p. 1133-1139.
Su, X., et al., Retinoic acid receptor gamma is targeted by microRNA-124 and inhibits neurite outgrowth. Neurofarmacología, 2020. 163: p. 107657.
Yin, Z., et al., Bisphenol-A exposure induced neurotoxicity and associated with synapse and cytoskeleton in Neuro-2a cells. Toxicología in Vitro, 2020. 67: p. 104911.
Chen, L., et al., El extracto de Gingko biloba (EGb) inhibe el estrés oxidativo en células neuro 2A que sobreexpresan APPsw. BioMed research international, 2019. 2019.