Διάλυμα αποκόλλησης κυττάρων Accutase με EDTA και φαινόλη κόκκινη – 100 ml

Το Accutase είναι ένα έτοιμο προς χρήση, αποστειρωμένο και φιλτραρισμένο διάλυμα αποκόλλησης κυττάρων, σχεδιασμένο ως μια ήπια εναλλακτική λύση της τρυψίνης/EDTA για τη διάσπαση προσκολλημένων κυττάρων θηλαστικών από τυπικά πλαστικά σκεύη καλλιέργειας ιστών και επιφάνειες με επίστρωση προσκόλλησης. Συνδυάζει πρωτεολυτική και κολλαγενολυτική ενζυμική δράση σε ένα ισορροπημένο αλατούχο διάλυμα για να προσφέρει αποτελεσματική αλλά ελεγχόμενη διάσπαση, διατηρώντας τις πρωτεΐνες της κυτταρικής επιφάνειας και υποστηρίζοντας υψηλή βιωσιμότητα μετά τη μεταμόσχευση και ταχεία επαναπροσκόλληση.

Η σύνθεση του Accutase βασίζεται στο φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα Dulbecco (DPBS) με EDTA και φαινόλη κόκκινη ως οπτικό δείκτη pH. Τα ένζυμα είναι μη θηλαστικής και μη βακτηριακής προέλευσης, καθιστώντας το Accutase ιδιαίτερα κατάλληλο για την έρευνα με βλαστικά κύτταρα, τις ροές εργασίας εμβολίων και οποιαδήποτε εφαρμογή όπου πρέπει να ελαχιστοποιηθούν οι μολυσματικές ουσίες ζωικής ή μικροβιακής προέλευσης. Το διάλυμα αυτοαναστέλλεται στους 37 °C, οπότε δεν απαιτείται αντιδραστήριο εξουδετέρωσης ή μέσο που περιέχει ορό μετά την αποκόλληση – τα κύτταρα μπορούν να μεταφερθούν απευθείας σε φρέσκο μέσο.

Βασικά χαρακτηριστικά

Έτοιμο προς χρήση 1x υγρό με αποστειρωμένο φιλτράρισμα – δεν απαιτείται αραίωση ή ανασύσταση
Συνδυασμένη πρωτεολυτική και κολλαγενολυτική ενζυμική δραστηριότητα για ήπια αποκόλληση
Κάθε παρτίδα τυποποιείται σε καθορισμένη δραστικότητα αποκόλλησης για συνέπεια μεταξύ των παρτίδων
Ενζυμική προέλευση μη θηλαστικών και μη βακτηριακή
Αυτοαναστέλλεται στους 37 °C – δεν απαιτείται ουδέτερο διάλυμα
Συντεθειμένο σε PBS Dulbecco με EDTA
Περιλαμβάνεται φαινόλη κόκκινη ως οπτικός δείκτης pH
pH 6,8 – 7,8


Τυπικές εφαρμογές
Το Accutase διαχωρίζει απαλά μια ευρεία ποικιλία προσκολλημένων και ευαίσθητων τύπων κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων των ανθρώπινων εμβρυϊκών βλαστικών κυττάρων (hESCs), των ανθρώπινων επαγωγικών πολυδύναμων βλαστικών κυττάρων (iPSCs), των νευρικών βλαστικών κυττάρων, των πρωτογενών νευρώνων και των συνήθως καλλιεργούμενων προσκολλημένων σειρών όπως HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 και A549. Τυπικές περιπτώσεις χρήσης περιλαμβάνουν:

Συνηθισμένη υποκαλλιέργεια και μεταμόσχευση προσκολλημένων κυττάρων θηλαστικών
Απαλή αποσύνδεση μεμονωμένων κυττάρων από hESCs, iPSCs και άλλες ευαίσθητες σειρές
Προετοιμασία δειγμάτων για κυτταρομετρία ροής και ανάλυση FACS
Ανάλυση δεικτών κυτταρικής επιφάνειας όπου η ακεραιότητα του επιτόπου έχει σημασία
Δοκιμές κυτταρικής μετανάστευσης, πολλαπλασιασμού και απόπτωσης
Δοκιμές ηρεμίας μέσω στέρησης ορού και μελέτες μεταμόλυνσης ογκογονιδίων
Δοκιμές μετανάστευσης καρκινικών κυττάρων και κυττάρων νευρικής ακρολοφίας
Αύξηση της παραγωγής σε ροές εργασίας βιοαντιδραστήρων

Για συνήθη εργασίες, εφαρμόστε περίπου 10 ml Accutase ανά 75 cm2 επιφάνειας καλλιέργειας και επωάστε για 5–10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Ο βέλτιστος χρόνος επώασης πρέπει να προσδιορίζεται για κάθε κυτταρική σειρά και δεν πρέπει να υπερβαίνει τη μία ώρα. Πριν από την προσθήκη, ξεπλύνετε το στρώμα κυττάρων με διάλυμα αλάτων χωρίς Ca2+/Mg2+, όπως DPBS χωρίς ασβέστιο και μαγνήσιο, για να απομακρύνετε υπολείμματα ορού και δισθενή κατιόντα.

Χειρισμός και αποθήκευση
Αποθηκεύστε το κλειστό φιαλίδιο κατεψυγμένο στους -15 °C ή χαμηλότερα. Ξεπαγώστε είτε σε θερμοκρασία δωματίου είτε κατά τη διάρκεια της νύχτας στους +2 °C έως +8 °C. Μην ξεπαγώνετε το Accutase σε υδατόλουτρο στους 37 °C, καθώς οι αυξημένες θερμοκρασίες μειώνουν την ενζυμική δραστηριότητα. Μετά την απόψυξη, το διάλυμα μπορεί να αποθηκευτεί για έως και 2 μήνες στους +2 °C έως +8 °C. Μην το αποθηκεύετε σε θερμοκρασία δωματίου. Μην προθερμαίνετε το αντιδραστήριο στους 37 °C πριν από την εφαρμογή – προσθέστε το απευθείας στα πλυμένα κύτταρα σε θερμοκρασία δωματίου. Για μακροχρόνια διάρκεια ζωής, συνιστάται η διαίρεση σε μερίδες μίας χρήσης, ώστε να αποφεύγονται οι επαναλαμβανόμενοι κύκλοι απόψυξης. Εργάζεστε πάντα υπό ασηπτικές συνθήκες.

Ποιότητα
Παρασκευάζεται σύμφωνα με αυστηρά πρότυπα ποιότητας. Κάθε παρτίδα Accutase υποβάλλεται σε αποστειρωτική διήθηση και ελέγχεται ως προς την αποστείρωση, το pH, την εμφάνιση και τη δραστικότητα διάσπασης, ώστε να διασφαλίζεται σταθερή και αναπαραγώγιμη απόδοση από παρτίδα σε παρτίδα.

Προδιαγραφές προϊόντος



Προδιαγραφές
Λεπτομέρεια



Τύπος προϊόντοςΑντιδραστήριο αποκόλλησης/διαχωρισμού κυττάρων
ΜορφήΣτεγνό-φιλτραρισμένο υγρό, έτοιμο προς χρήση
Όγκος100 ml
Συγκέντρωση εργασίας1x (έτοιμο προς χρήση)
Ενζυμική δραστικότηταΣυνδυασμένη πρωτεολυτική και κολλαγενολυτική
Προέλευση ενζύμουΜη θηλαστικό και μη βακτηριακό
Σύστημα ρυθμιστικού διαλύματοςPBS Dulbecco με EDTA
Δείκτης pHΦαινόλη κόκκινη
Εύρος pH6,8 – 7,8
ΕμφάνισηΔιαυγές διάλυμα, χρώματος από ανοιχτό κόκκινο έως πορτοκαλί
Θερμοκρασία αποθήκευσης-15 °C ή χαμηλότερη
Σταθερότητα μετά την απόψυξηΈως 2 μήνες στους +2 °C έως +8 °C
Συνιστώμενος όγκος χρήσης~10 ml ανά 75 cm2 επιφάνειας καλλιέργειας
Τυπικός χρόνος επώασης5 – 10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου
Συνθήκες αποστολήςΚατεψυγμένο σε ξηρό πάγο
Προβλεπόμενη χρήσηΜόνο για ερευνητική χρήση και περαιτέρω παραγωγή



Σύνθεση (Σύνθεση ανά λίτρο)



Συστατικό
Συγκέντρωση (mg/L)




Ανόργανα άλατα

Χλωριούχο νάτριο (NaCl)8000,00
Υδρογενικό φωσφορικό νάτριο (Na2HPO4)1150,00
Χλωριούχο κάλιο (KCl)200,00
Διυδροφωσφορικό κάλιο (KH2PO4)200,00

Άλλα συστατικά

EDTA · 4Na (τετρανατριούχο EDTA)220,00
Φαινόλη κόκκινη3,00
Ιδιόκτητο μείγμα ενζύμων (πρωτεολυτική και κολλαγενολυτική δράση)1x



Το Accutase είναι σήμα κατατεθέν της Innovative Cell Technologies, Inc.

Διάλυμα φυσιολογικού ορού ρυθμισμένου με φωσφορικά άλατα (PBS)
Το ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών αλάτων (PBS) είναι ένα ευρέως χρησιμοποιούμενο ρυθμιστικό διάλυμα στη βιολογική και χημική έρευνα. Διαδραματίζει κρίσιμο ρόλο στη διατήρηση της ισορροπίας του pH και της ωσμωτικότητας κατά τη διάρκεια διαφόρων πειραματικών διαδικασιών, συμπεριλαμβανομένης της επεξεργασίας ιστών και της καλλιέργειας κυττάρων. Το διάλυμά μας PBS είναι σχολαστικά παρασκευασμένο με συστατικά υψηλής καθαρότητας για να διασφαλίζεται η σταθερότητα και η αξιοπιστία σε κάθε πείραμα. Η οσμωτικότητα και οι συγκεντρώσεις ιόντων του PBS μας μιμούνται στενά εκείνες του ανθρώπινου σώματος, καθιστώντας το ισότονο και μη τοξικό για τα περισσότερα κύτταρα.

Σύνθεση του διαλύματος PBS
Το διάλυμά μας PBS είναι ένα ρυθμισμένο ως προς το pH μείγμα φωσφορικών ρυθμιστικών διαλυμάτων και αλατούχων διαλυμάτων υπερκαθαρού βαθμού. At a 1X working concentration, it contains:

8000 mg/l χλωριούχο νάτριο (NaCl)
200 mg/L Χλωριούχο κάλιο (KCl)
1150 mg/L Φωσφορικό νάτριο διβασικό άνυδρο (Na2HPO4)
200 mg/L Φωσφορικό κάλιο μονοβασικό άνυδρο (KH2PO4)

Αυτή η σύνθεση εξασφαλίζει βέλτιστη ισορροπία pH και ιόντων, κατάλληλη για ένα ευρύ φάσμα βιολογικών εφαρμογών.

Εφαρμογές του διαλύματος PBS
Το διάλυμά μας PBS είναι ιδανικό για διάφορες εφαρμογές στη βιολογική έρευνα. Οι ισοτονικές και μη τοξικές ιδιότητές του το καθιστούν κατάλληλο για αραίωση ουσιών και ξέπλυμα κυτταρικών δοχείων. Τα διαλύματα PBS που περιέχουν EDTA είναι αποτελεσματικά για την αποδέσμευση προσκολλημένων και συσσωματωμένων κυττάρων. Ωστόσο, τα δισθενή μέταλλα, όπως ο ψευδάργυρος, δεν πρέπει να προστίθενται στο PBS, καθώς αυτό μπορεί να προκαλέσει καθίζηση. Σε τέτοιες περιπτώσεις συνιστώνται τα ρυθμιστικά διαλύματα Good. Επιπλέον, το διάλυμά μας PBS είναι μια αποδεκτή εναλλακτική λύση σε μέσο μεταφοράς ιών για τη μεταφορά και αποθήκευση ιών RNA, συμπεριλαμβανομένου του SARS-CoV-2.

Ποιοτικός έλεγχος

Αποστειρωμένο και φιλτραρισμένο


Αποθήκευση και διάρκεια ζωής

Φυλάσσεται στους +2°C έως +25°C, προστατευμένο από το φως.
Αφού ανοιχτεί, να φυλάσσεται στους 2°C έως 25°C και να χρησιμοποιείται εντός 24 μηνών.


Συνθήκες αποστολής

Θερμοκρασία περιβάλλοντος


Συντήρηση

Διατηρείται στο ψυγείο σε θερμοκρασία +2°C έως +8°C στο σκοτάδι. Αποφύγετε την κατάψυξη και τη συχνή θέρμανση στους +37°C, καθώς μειώνεται η ποιότητα του προϊόντος.
Μην θερμαίνετε το μέσο πάνω από τους 37°C και μη χρησιμοποιείτε ανεξέλεγκτες πηγές θερμότητας, όπως συσκευές μικροκυμάτων.
Εάν πρόκειται να χρησιμοποιηθεί μόνο ένα μέρος του μέσου, αφαιρέστε την απαιτούμενη ποσότητα και θερμάνετέ το σε θερμοκρασία δωματίου πριν από τη χρήση.

Σύνθεση



Κατηγορία
Συστατικά
Συγκέντρωση (mg/L)


Άλατα
Χλωριούχο κάλιο
200



Φωσφορικό κάλιο μονοβασικό άνυδρο
200



Χλωριούχο νάτριο
8000



Φωσφορικό νάτριο διβασικό άνυδρο
1150

Τα μυκοπλάσματα είναι μικροί προκαρυωτικοί οργανισμοί που είναι πολύ μικροί για να είναι ορατοί στο μικροσκόπιο και δεν μπορούν να εξαλειφθούν με τα κοινά αντιβιοτικά αντιδραστήρια. Το μυκόπλασμα μπορεί να επηρεάσει την κυτταρική ανάπτυξη, τον πολλαπλασιασμό και τη μορφολογία των κυτταρικών σειρών, γεγονός που μπορεί να οδηγήσει σε αναξιόπιστα πειραματικά αποτελέσματα. περίπου 15 έως 35% των εργαστηριακών κυτταρικών καλλιεργειών είναι μολυσμένες με μυκόπλασμα. Ως εκ τούτου, συνιστάται συχνός έλεγχος για να εξασφαλιστεί ένα περιβάλλον απαλλαγμένο από μυκόπλασμα.
Μέθοδος ανάλυσης
Η CLS προσφέρει τόσο βραχυπρόθεσμες όσο και μακροπρόθεσμες δοκιμές για την ανίχνευση μυκοπλάσματος. Στην πρώτη περίπτωση, τα δείγματα εξετάζονται αμέσως μετά την άφιξή τους, ενώ στη δεύτερη ξεκινά η κυτταροκαλλιέργεια και τα κύτταρα εξετάζονται μετά από 14 ημέρες καλλιέργειας χωρίς αντιβιοτικά. Η εξέταση του μυκοπλάσματος πραγματοποιείται με τη χρήση συστήματος ανίχνευσης δύο σημείων τόσο με το κιτ ανίχνευσης PlasmoTest™
- Mycoplasma Detection Kit (Invivogen) όσο και με το κιτ ανίχνευσης Certus QC
- mycoADVANCED (Certus).
Δείγματα

Για την ταχεία εξέταση, παρακαλείστε να προσκομίσετε τουλάχιστον 50 μl εναιωρήματος κυττάρων που περιέχουν 50.000 κύτταρα. Το εναιώρημα κυττάρων μπορεί να αποσταλεί σε θερμοκρασία περιβάλλοντος.
Για τη δοκιμή premium, παρακαλείστε να προσκομίσετε τουλάχιστον 1 εκατομμύριο κύτταρα σε κατάλληλο μέσο κατάψυξης, ώστε να διασφαλιστεί μια εύρωστη και υγιής καλλιέργεια για την καλλιέργεια και την επακόλουθη εξέταση των κυττάρων. Παρακαλείστε να αποστείλετε τα δείγματα σε ξηρό πάγο.

Παρακαλείστε να συμπληρώσετε το Έντυπο Δείγματος Δοκιμών Μυκοπλάσματος και να το συμπεριλάβετε στην αποστολή του δείγματός σας.

Χρωματομετρική δοκιμασία αναφοράς
Αυτή η δοκιμή είναι μια χρωματομετρική ανάλυση με βάση τα κύτταρα. Παρουσία μυκοπλάσματος, μια σειρά κυττάρων-δημοσιογράφων επάγει έναν καταρράκτη σηματοδότησης που προκαλεί αλλαγή χρώματος στο μέσο από κόκκινο σε μπλε. Η δοκιμασία εκτελείται σε πλάκες πολλαπλών κοιλοτήτων 96 φρεατίων. Τα σήματα ανιχνεύονται σε φασματοφωτόμετρο μικροπλάκας στα 620-655 nm. Ανιχνεύονται όλα τα είδη μυκοπλάσματος και αχολέπλασμα, αλλά και άλλες προσμίξεις στην κυτταροκαλλιέργεια, όπως βακτήρια.
Ισοθερμική ενίσχυση
Η ισοθερμική ενίσχυση είναι μια γρήγορη και αξιόπιστη εξέταση που βασίζεται στην ισοθερμική ενίσχυση του ειδικού για το μυκόπλασμα DNA σε συνδυασμό με ανίχνευση σε πραγματικό χρόνο με χρήση χρωστικής που παρεμβάλλεται στο DNA. Η δοκιμασία είναι ικανή να ανιχνεύσει έξι από τα πιο κοινά είδη που ευθύνονται για >95% των επιμολύνσεων: Arginini, M.fermentans, M.hominis και A.laidlawii. Λόγω της ομολογίας της αλληλουχίας θα ανιχνευθούν και άλλα είδη μυκοπλάσματος (M.pneumoniae, M.gallisepticum και M.synoviae). Για να προσδιοριστεί αν το δείγμα είναι θετικό ή αρνητικό για μυκόπλασμα, μελετάται η θερμοκρασία τήξης (Tm).