Κυτταρική γραμμή Jurkat E6.1

Το Jurkat E6.1 είναι ένας κλώνος της κυτταρικής σειράς Jurkat, μιας αθάνατης ανθρώπινης κυτταρικής σειράς Τ-λεμφοκυττάρων που προέρχεται από περιφερικό αίμα. Καθιερώθηκαν για πρώτη φορά το 1977 και χρησιμοποιούνται σε έρευνες που σχετίζονται με τη σηματοδότηση των υποδοχέων Τ-κυττάρων, τις θεραπείες υιοθεσίας Τ-κυττάρων και άλλων λεμφοκυττάρων κατά του καρκίνου, την έρευνα των πρωτο-ογκογονιδίων που σχετίζονται με το αίμα, την κυτταρική επιβίωση και τη διαφοροποίηση των κυττάρων.

Σε αυτό το άρθρο, θα συμπεριλάβουμε όλες τις πληροφορίες και τις προϋποθέσεις που πρέπει να κατανοήσετε πριν ξεκινήσετε την εργασία σας με κλωνοποιημένες κυτταρικές σειρές Jurkat E6.1, οι οποίες περιλαμβάνουν:

  1. Προέλευση, ιστορία και γενικές πληροφορίες
  2. Χαρακτηριστικά κυτταρικής καλλιέργειας
  3. Εφαρμογές των κυτταρικών σειρών Jurkat E6.1
  4. Ερευνητικές δημοσιεύσεις
  5. Πλεονεκτήματα και περιορισμοί
  6. Πηγές: Πηγές: Πρωτόκολλα, βίντεο και άλλα

1. Προέλευση, ιστορία και γενικές πληροφορίες

Εδώ θα βρείτε όλες τις απαραίτητες πληροφορίες σχετικά με την ιστορία, την προέλευση και τα γενικά χαρακτηριστικά της κυτταρικής σειράς Jurkat E6.1 και τον χειρισμό τους στην κυτταροκαλλιέργεια.

  • Το Jurkat E6.1 είναι μια αθάνατη κυτταρική σειρά ανθρώπινων Τ-λεμφοκυττάρων. Αυτή η κλωνοποιημένη κυτταρική σειρά είναι παράγωγο της κυτταρικής σειράς Jurkat που ελήφθη από το περιφερικό αίμα ενός 14χρονου αγοριού που έπασχε από οξεία λεμφοβλαστική λευχαιμία το 1976. Μετά την απομόνωση από το αίμα, αυτή η κυτταρική σειρά ονομάστηκε αρχικά JM, καθώς τα JM και Jurkat υποδηλώνουν ότι αυτές οι κυτταρικές σειρές έχουν απομονωθεί από τον ίδιο ασθενή. Η κυτταρική σειρά Jurkat E6.1 κλωνοποιήθηκε από κυτταρικά παράγωγα γνωστά ως Jurkat-FHCRC.
  • Οι κυτταρικές σειρές E6.1 προέρχονται από λευχαιμία- οι εν λόγω κυτταρικές σειρές χρησιμοποιούνται για την αύξηση της έκφρασης της IL-2 μέσω προσομοίωσης με μονοκλωνικά αντισώματα ή λεκτίνη. Εκφράζουν υποδοχείς αντιγόνων Τ-κυττάρων- επομένως, οι κυτταρικές αυτές σειρές μπορούν να χρησιμοποιηθούν στη μελέτη διαταραχών του ανοσοποιητικού συστήματος και στην έρευνα ανοσο-ογκολογίας.
  • Κυτταρική μορφολογία των κυττάρων Jurkat E6.1: Τα κύτταρα Jurkat E6.1 απομονώθηκαν από έναν ασθενή με λευχαιμία και έχουν τροποποιημένη μορφολογία σε σύγκριση με τα Τ-λεμφοκύτταρα καθιστώντας τα αθάνατες κυτταρικές σειρές. Το λεμφοβλαστικό κύτταρο σχηματίζεται όταν τα αφελή λεμφοκύτταρα ενεργοποιούνται με την παρουσίαση αντιγόνου από αντιγονοπαρουσιαστικά κύτταρα. Αυτό έχει ως αποτέλεσμα την αυξημένη ανάπτυξη του πυρήνα, του κυτταροπλάσματος, του mRNA και των πρωτεϊνών.
  • Μέγεθος κυττάρων: Οι κυτταρικές σειρές Jurkat E6.1 είναι κλωνοποιημένες αθάνατες με συχνότερα τη διάμετρο να κυμαίνεται από 10-16 μm (η διάμετρος μπορεί να ποικίλλει ανάλογα με τον τύπο του εναιωρήματος). Αυτές οι κυτταρικές σειρές έχουν εξαιρετικά σφαιρικό κυτταρικό σχήμα.
  • Γονιδίωμα και αριθμός χρωμοσωμάτων: Αυτές οι κυτταρικές σειρές είναι ψευδοδιπλοειδείς κυτταρικές σειρές ανθρώπινων Τ-λεμφοκυττάρων, με πρότυπο χρωμόσωμα το χρωμόσωμα 46. Αυτές δείχνουν επίσης ότι το πρότυπο χρωμόσωμα είναι παρόν σε ποσοστό περίπου 74% και παρουσιάζει ποσοστό πολυπλοειδίας περίπου 5,3%. Οι μελέτες καρυότυπου έδειξαν έναν καρυότυπο με 46, X, Y, -2, -18, del (2) (p21p23), del (18) (p11.2). Τα χρωμοσώματα Χ και Υ έχουν συνήθως ένα κανονικό αντίγραφο στις περισσότερες κυτταρικές σειρές.
  • Κυτταρικές σειρές Jurkat έναντι κυτταρικών σειρών E6.1 Jurkat: Οι κυτταρικές σειρές Jurkat είναι οι πρωτογενείς μητρικές κυτταρικές σειρές που απομονώθηκαν για πρώτη φορά από τον ασθενή με οξεία λεμφοβλαστική λευχαιμία. Ωστόσο, οι κυτταρικές σειρές E6.1 Jurkat είναι κλωνοποιημένα παράγωγα των κυτταρικών σειρών Jurkat-FHCRC.

Τ κύτταρα που καταπολεμούν τον καρκίνο: CAR T κυτταρική ανοσοθεραπεία.

2. χαρακτηριστικά κυτταρικής καλλιέργειας


Βασικά σημεία για την καλλιέργεια κυττάρων B16

Χρόνος διπλασιασμού του πληθυσμού

Ο χρόνος διπλασιασμού του πληθυσμού των κυτταρικών σειρών Jurkat είναι περίπου 20,7 ώρες, επιτρέποντας τη σχετικά ταχεία ανάπτυξη των κυττάρων.

Προσκολλημένα ή μη προσκολλημένα

E6.1 Οι κυτταρικές σειρές Jurkat αναπτύσσονται με μη προσκολλητικό τρόπο, υπάρχοντας σε εναιώρημα είτε ως ανάπτυξη μονής στιβάδας είτε ως ελεύθερα επιπλέουσες μάζες.

Πυκνότητα σποράς

Η συνιστώμενη πυκνότητα σποράς για τις κυτταρικές σειρές E6.1 Jurkat είναι 1,0-2,0 x 105 βιώσιμα κύτταρα/ml για να εξασφαλιστεί υγιής προσκόλληση και βέλτιστη κυτταρική ανάπτυξη.

Μέσο ανάπτυξης

Το απαιτούμενο μέσο ανάπτυξης για τις κυτταρικές σειρές E6.1 Jurkat είναι το μέσο RPMI-1640 της ATCC (ATCC 30-2001). Το πλήρες μέσο παρασκευάζεται με την προσθήκη των καθορισμένων συστατικών, συμπεριλαμβανομένου του εμβρυϊκού ορού βοοειδών (ATCC 30-2002), ώστε να επιτευχθεί τελική συγκέντρωση 10%.

Συνθήκες ανάπτυξης

Οι κυτταρικές σειρές E6.1 Jurkat μπορούν να καλλιεργηθούν σε κατάλληλο επωαστήρα με διαθεσιμότητα 5% αέρα και CO2 χρησιμοποιώντας μέσο RPMI-1640 και εμβρυϊκό ορό βοοειδών.

Συνθήκες αποθήκευσης

Η μακροχρόνια αποθήκευση των κυτταρικών σειρών Jurkat σε κατάσταση κατεψυγμένης καλλιέργειας θα πρέπει να αποθηκεύεται στους -130 βαθμούς Κελσίου ή σε υγρό άζωτο σε φάση ατμών. Η αποθήκευσή τους στους -70 βαθμούς Κελσίου μπορεί να οδηγήσει σε απώλεια της βιωσιμότητας των κυττάρων.

Κατάψυξη

Μια ποσότητα περίπου 0,5-1,0 ml εναιωρήματος κυτταρικών σειρών αποθηκεύεται σε κρυογονικά σωληνάρια για τη διατήρηση των κυτταρικών σειρών. Τα σωληνάρια αυτά τοποθετούνται στη συνέχεια σε δοχείο κρυοσυντήρησης στους -70 βαθμούς Κελσίου. Τα σωληνάρια μεταφέρονται σε δεξαμενή υγρού αζώτου και αποθηκεύονται στην αέρια φάση την επόμενη ημέρα.

Απόψυξη

Για την απόψυξη των κυτταρικών σειρών Jurkat, τα φιαλίδια κυτταρικού εναιωρήματος πρέπει να τοποθετούνται σε υδατόλουτρο στους 37 βαθμούς Κελσίου. Το εναιώρημα μπορεί να αποψυχθεί για 2 λεπτά με ήπια ανάδευση. Είναι σημαντικό να διατηρείται το καπάκι του φιαλιδίου εκτός του υδατόλουτρου για την αποφυγή μόλυνσης των κυτταρικών σειρών.

Επίπεδο βιοασφάλειας

Η ανάπτυξη των κυτταρικών σειρών Jurkat απαιτεί επίπεδο βιοασφάλειας BSL-1 στο εργαστηριακό περιβάλλον, διασφαλίζοντας την τήρηση των βασικών προφυλάξεων ασφαλείας.

Κύτταρα Jurkat E6.1 που αναπτύσσονται σε συστάδες σε μεγέθυνση 10x και 20x.

3. εφαρμογές των κυτταρικών σειρών Jurkat E6.1


Η κυτταρική σειρά Jurkat E6.1 χρησιμοποιείται κυρίως στην έρευνα και τη μελέτη διαταραχών που συνδέονται με το ανοσοποιητικό σύστημα και τους σχετιζόμενους με αυτό καρκίνους. Επιπλέον, είναι κατάλληλη για τη μελέτη ορισμένων περιπλοκών που σχετίζονται με τη λοίμωξη από τον ιό HIV, δεδομένου ότι ο υποδοχέας των CD4 Τ κυττάρων είναι απαραίτητος για την είσοδο του ρετροϊού.

Ορισμένοι βασικοί τομείς στους οποίους χρησιμοποιούνται αυτές οι κυτταρικές σειρές αναλύονται παρακάτω:

Πρότυπο σύστημα για τη σηματοδότηση των Τ κυττάρων και τα αποπτωτικά μονοπάτια: Αυτή η κυτταρική σειρά Τ-κυτταρικής λευχαιμίας χρησιμοποιείται εκτενώς στην έρευνα που αφορά τον καταρράκτη σηματοδότησης του TCR. Το Jurkat E6.1 απελευθερώνει περισσότερη IL-2 και IL-8 που στη συνέχεια βοηθούν στην ενεργοποίηση των Τ-κυττάρων και πυροδοτούν τα φλεγμονώδη μονοπάτια. Αυτή η κυτταρική σειρά είναι επίσης γνωστή για την υπερφωσφορυλιωμένη Pyk2 και την αυξημένη παραγωγή Vav1 που επηρεάζει καθοριστικά την αναδιάταξη του κυτταροσκελετού της ακτίνης στα Τ κύτταρα. Ο διαχωρισμός του TCR στην κυτταρική σειρά Jurkat E6-1 μπορεί επίσης να βελτιωθεί με τη βίαιη έκφραση του LFA-1 που κατά συνέπεια ενισχύει τη σηματοδότηση του TCR και την έκφραση της IL-2 . Μελέτες κυτταρικού πολλαπλασιασμού και κυτταρικού κύκλου διεξάγονται επίσης στις κυτταρικές σειρές Jurkat E6.1. Έχουν προτιμηθεί για τη μελέτη των αποπτωτικών μονοπατιών και της επαγωγής βλάβης του DNA από ενώσεις που προέρχονται από θαλάσσιες και φυτικές πηγές. Μια μελέτη του 2013 αξιολόγησε την επίδραση του κλιματιζόμενου μέσου επιγονικού καρχαρία σε ανθρώπινα κύτταραμε τη χρήση αυτών των κυτταρικών σειρών. Ομοίως, μελετήθηκε η κατασταλτική επίδραση της φυτικής προέλευσης ιρσουτίνης στον κυτταρικό πολλαπλασιασμό σε κυτταρικές σειρές Jurkat E6.1. Συχνά οι αντικαρκινικές μελέτες χρησιμοποιούν επίσης την Jurkat E6.1 για την αξιολόγηση των επιλεγμένων στόχων τους. Η επίδραση θαλάσσιων νευροτοξινών όπως οι Brevetoxins (PbTx ) έχει επίσης μελετηθεί σε αυτές τις κυτταρικές σειρές.

Μελέτες HIV: Μία από τις σημαντικότερες εφαρμογές των κυτταρικών σειρών Jurkat E6.1 είναι η ικανότητά τους να χρησιμεύουν ως κατάλληλο μοντέλο για μελέτες HIV λόγω της ιδιότητάς τους να επιλέγουν διαφορετικά σηματοδοτικά συμβάντα που επάγουν TCA. Οι κυτταρικές σειρές Jurkat E6.1 δεν έχουν χρησιμοποιηθεί μόνο για την κατανόηση της ενεργοποίησης του HIV αλλά και για την ανάλυση των μηχανισμών πίσω από τη λανθάνουσα κατάσταση του HIV. Η αντιγραφή και η μόλυνση του HIV έχουν μελετηθεί σε τεράστιο βαθμό σε αυτές τις κυτταρικές σειρές, όπου μπορούν να υποβληθούν σε γονιδιακή επεξεργασία και γονιδιακό knockout, όπως έγινε με μια μελέτη το 2021. Ο αντίκτυπος της χορήγησης φαρμάκων στη μόλυνση από τον HIV, όπως η μακράς δράσης efavirenz (Efa)-enfuvirtide (Enf) Co-loaded polymer-lipid hybrid nanoparticles (PLN) στην είσοδο του ιού χρησιμοποίησε τις κυτταρικές σειρές Jurkat E6.1. Η τροποποιημένη με CRISPR/Cas9 Jurkat E6.1 έχει χρησιμοποιηθεί πολλές φορές για τη μελέτη των μηχανισμών που εμπλέκονται στην είσοδο, τον πολλαπλασιασμό και τη μόλυνση του HIV.

4. ερευνητικές δημοσιεύσεις


Ακολουθούν μερικά αξιοσημείωτα παραδείγματα από τη μεγάλη συλλογή ερευνών, που περιλαμβάνουν κυτταρικές σειρές Jurkat E6.1.

Ο μεταβολίτης του σεληνίου μεθυλοσεληνόλη ρυθμίζει την έκφραση συνδέσμων που προκαλούν την ενεργοποίηση του ανοσοποιητικού συστήματος μέσω του υποδοχέα NKG2D των λεμφοκυττάρων

Χρησιμοποιώντας Jurkat E6.1, επωασμένο σε διαφορετικές ενώσεις σεληνίου για τη μελέτη της έκφρασης των συνδέσμων και της επιφανειακής έκφρασης του MICA/B.

Το καρακασινικό οξύ, ένα ent-3,4-σεκο-καουρένιο, προάγει την απόπτωση και την κυτταρική διαφοροποίηση μέσω της αναστολής της οδού σήματος NFkB σε λευχαιμικά κύτταρα.

Κατανόηση της κυτταροτοξικότητας που προκαλείται από το οξύ καρακαζίνης σε ανθρώπινες σειρές Τ κυττάρων, όπως οι Jurkat E6.1 και HL-60.

Στοιχεία ανάπτυξης in vitro ανθεκτικότητας στο φάρμακο αζιδοθυμιδίνη σε κυτταρικές σειρές Τ-λεμφοκυτταρικής λευχαιμίας (Jurkat E6-1/AZT-100) και σε παιδιατρικούς ασθενείς με λοίμωξη από τον ιό HIV-1

Χρησιμοποιήθηκε η Jurkat E6.1 επωασμένη μακροχρόνια με το φάρμακο AZT για τη μελέτη της ανθεκτικότητας στην αζιδοθυμιδίνη (AZT) σε ασθενείς με λοίμωξη HIV-1.

Μελέτες κυτταρικής γραμμής Jurkat E6.1 σχετικά με τις επιδράσεις ορισμένων βιο-ινδόλων στη ρευστότητα της μεμβράνης

Αυτή η έρευνα χρησιμοποίησε ένα σύστημα ανάλυσης πολωμένου φθορισμού για να κατανοήσει την επίδραση των βιο-ινδόλων, συμπεριλαμβανομένων της σεροτονίνης, της τρυπτοφάνης και της μελατονίνης, στη ρευστότητα της κυτταρικής μεμβράνης στις κυτταρικές σειρές Jurkat E6.1.

Μοριακός μηχανισμός επαγωγής της απόπτωσης στα κύτταρα Jurkat E6-1 από εκχύλισμα αλκαλοειδών Tribulus terrestris

Το εκχύλισμα αλκαλοειδώναπό το Tribulus terristris προκάλεσε απόπτωση σε κύτταρα Jurkat E6.1 για την κατανόηση του υποκείμενου μηχανισμού δράσης.

Η αύξηση της έκφρασης του LFA-1 ενισχύει την αρχιτεκτονική της ανοσολογικής σύναψης και τη σηματοδότηση των υποδοχέων των Τ κυττάρων στα κύτταρα Jurkat E6.1

Η σηματοδότηση των υποδοχέων των Τ κυττάρων στα κύτταρα Jurkat E6.1 ενισχύθηκε με τη βίαιη αύξηση της έκφρασης του LFA-1.

5. πλεονεκτήματα και περιορισμοί


Όπως και άλλες κυτταρικές σειρές, η Jurkat E6.1 έχει τα πλεονεκτήματα και τους περιορισμούς της.

Πλεονεκτήματα

Υπάρχουν πολλοί λόγοι για τους οποίους προτιμάται σε αυτές τις εφαρμογές:

  • Τρόπος ανάπτυξης

    Το Jurkat E6.1 είναι μια εναιωρούμενη και μη προσκολλημένη κυτταρική σειρά, που σημαίνει ότι αναπτύσσεται εν αιωρήσει και δεν προσκολλάται στην επιφάνεια καλλιέργειας.

  • Έκφραση γονιδίων

    Η κυτταρική σειρά Jurkat E6.1 εκφράζει γονίδια που κωδικοποιούν την ιντερλευκίνη-2 (IL-2) και το CD3. Κατά τη διέγερση με μονοκλωνικά αντισώματα, λεκτίνες ή εστέρες φορβόλης έναντι του αντιγονικού συμπλέγματος Τ3, έχει αποδειχθεί ότι τα κύτταρα αυτά παράγουν ενισχυμένη IL-2.

  • Έκφραση αντιγόνων

    Η κυτταρική σειρά Jurkat E6.1 εκφράζει το αντιγόνο CD3, που σχετίζεται με την ενεργοποίηση και τη σηματοδότηση των Τ κυττάρων.

  • Δείκτες έκφρασης

    Η κυτταρική σειρά εκφράζει τους δείκτες του υποδοχέα αντιγόνου των Τ κυττάρων (TCR), οι οποίοι είναι ζωτικής σημασίας για την αναγνώριση των Τ κυττάρων και την ανοσολογική απόκριση.

  • Εφαρμογή για διαμόλυνση

    Η κυτταρική σειρά κλώνου Jurkat E6.1 είναι κατάλληλη για πειράματα διαμόλυνσης ξενιστών, επιτρέποντας την εισαγωγή εξωγενούς γενετικού υλικού στα κύτταρα για διάφορους ερευνητικούς σκοπούς.

Περιορισμοί

Μετά τα πλεονεκτήματα, ας εξετάσουμε τους περιορισμούς που σχετίζονται με τη χρήση των κυτταρικών σειρών Jurkat E6.1:

  • Διαμόλυνση κυττάρων με ιικό φορέα

    Η διαμόλυνση των κυττάρων Jurkat E6.1 αποτελεί πρόκληση λόγω της Τ-κυτταρικής τους προέλευσης. Συνήθως, απαιτούνται ακριβοί και χρονοβόροι ιικοί φορείς για τη γενετική τροποποίηση. Οι μη ιικοί φορείς έχουν δείξει χαμηλή αποτελεσματικότητα διαμόλυνσης και σημαντική τοξικότητα στα κύτταρα Jurkat.

  • Βακτηριακή μόλυνση

    Οι καλλιέργειες κυττάρων Jurkat E6.1 θα πρέπει να παρακολουθούνται για πιθανή βακτηριακή επιμόλυνση ώστε να διασφαλίζεται η ακεραιότητα των πειραματικών αποτελεσμάτων.

  • Ιογενείς επιμολύνσεις

    Οι κυτταρικές σειρές Jurkat E6.1 εκφράζουν διάφορους υποδοχείς χημειοκινών και χαμηλά επίπεδα CD4, διευκολύνοντας την είσοδο του ιού. Αυτό τις καθιστά ευάλωτες σε ιούς που μολύνουν Τ-κύτταρα, όπως ο HTLV και ο HIV.

6.πόροι: Βίντεο & Περισσότερα

Αυτή η ενότητα θα καλύψει τις μεθόδους και τα πρωτόκολλα για την καλλιέργεια και τη διαμόλυνση κυττάρων, καθώς και εκπαιδευτικά βίντεο σχετικά με αυτή την κυτταρική σειρά:

Πρωτόκολλα καλλιέργειας κυττάρων

Ακολουθούν ορισμένες βασικές διαδικασίες καλλιέργειας που πρέπει να ακολουθήσετε για αυτή την κυτταρική σειρά:

Πρωτόκολλα διαμόλυνσης

Ακολουθεί ο κατάλογος των διαφόρων διαθέσιμων πρωτοκόλλων διαμόλυνσης:

Βίντεο για τον κλώνο Jurkat E6.1

Υπάρχουν πολλά εξαιρετικά βίντεο που καλύπτουν έννοιες κυτταροκαλλιέργειας, διαδικασίες, πολλαπλασιασμό, εκχύλιση και άλλα θέματα.

Εντοπίσαμε ότι βρίσκεστε σε διαφορετική χώρα ή χρησιμοποιείτε διαφορετική γλώσσα του προγράμματος περιήγησης από την τρέχουσα επιλεγμένη. Θα θέλατε να αποδεχτείτε τις προτεινόμενες ρυθμίσεις

Κλείστε το