Κύτταρα HK-2 - Διερεύνηση της νεφρικής λειτουργίας και παθολογίας με κύτταρα HK-2 στη νεφρολογική έρευνα
Το HK-2 είναι μια αθανατοποιημένη σειρά ανθρώπινων επιθηλιακών κυττάρων νεφρού που χρησιμοποιείται συνήθως στην τοξικολογική έρευνα. Οι ερευνητές αξιολογούν τις επιδράσεις των περιβαλλοντικών τοξινών σε αυτά τα νεφρικά κύτταρα. Επιπλέον, χρησιμοποιούν επίσης κύτταρα HK-2 για τη διερεύνηση νεφρικών παθήσεων και των υποκείμενων μηχανισμών τους.
- Μέσο ανάπτυξης
- Το ιδανικό μέσο για τα κύτταρα HK-2 είναι ένα μέσο κυτταρικής σειράς κερατινοκυττάρων που περιέχει 10% εμβρυϊκό βοοειδές ορό, 0,05 mg/ml εκχύλισμα βοοειδούς υπόφυσης (BPE) και 5 ng/ml επιδερμικό αυξητικό παράγοντα (EGF). Το μέσο πρέπει να αντικαθίσταται κάθε 2 έως 3 ημέρες την εβδομάδα.
- Χρόνος διπλασιασμού
- Ο χρόνος διπλασιασμού για τα κύτταρα HK-2 κυμαίνεται μεταξύ 47,3 ωρών και 61,7 ωρών.
- Τύπος ανάπτυξης
- Η κυτταρική σειρά επιθηλιακών κυττάρων νεφρού HK-2 είναι προσκολλητική.
- Επίπεδο βιοασφάλειας
- BSL-2
- Διαθέσιμο από
- Cytion — Παραγγελία HK-2
- Κύτταρα HK-2: Προέλευση και γενικά χαρακτηριστικά
- Κυτταρική σειρά HK-2: Πληροφορίες καλλιέργειας
- Πλεονεκτήματα και περιορισμοί των κυττάρων HK-2
- Εφαρμογές της κυτταρικής σειράς HK-2 στην έρευνα
- 5. Κύτταρα HK-2: Ερευνητικές δημοσιεύσεις
- Πόροι για τη σειρά κυττάρων HK-2: Πρωτόκολλα, βίντεο και άλλα
- Συχνές ερωτήσεις
Κύτταρα HK-2: Προέλευση και γενικά χαρακτηριστικά
Η προέλευση και τα γενικά χαρακτηριστικά μιας κυτταρικής σειράς είναι απαραίτητο να γνωρίζονται για τον σωστό χειρισμό, τη συντήρηση και τη χρήση μιας κυτταρικής σειράς. Αυτό το τμήμα του άρθρου θα καλύψει τα εξής: Τι είναι τα κύτταρα HK-2 στον ανθρώπινο νεφρό 2; Ποιος είναι ο ρόλος του HK2; Τι είναι τα κύτταρα HK2; Ποια είναι η προέλευση της κυτταρικής σειράς HK-2; Ποιο είναι το μέγεθος και η μορφολογία των κυττάρων HK-2;
- Τα κύτταρα ανθρώπινου νεφρού 2 (HK-2) είναι ένας τύπος κυττάρων του εγγύς σωληναρίου που προέρχονται από φυσιολογικό νεφρικό ιστό ενήλικου Ευρωπαίου. Η κυτταρική σειρά HK-2 δημιουργήθηκε με τη μεταμόλυνση νεφρικών κυττάρων με έναν ανασυνδυασμένο ρετροϊό που περιλάμβανε τα γονίδια E6/E7 του ιού των ανθρώπινων θηλωμάτων 16. Αυτό το πείραμα προκάλεσε την αθανατοποίηση και τη δημιουργία μιας συνεχώς αναπτυσσόμενης κυτταρικής σειράς επιθηλιακών κυττάρων νεφρού HK-2.
- Τα κύτταρα HK-2 παρουσιάζουν επιθηλιακή μορφολογία.
- Το μέγεθος των κυττάρων HK-2 κυμαίνεται μεταξύ 17,4 και 18,6 µm σε διάμετρο. Η μέση διάμετρος είναι 18,2 µm [1].
Κυτταρική σειρά HK-2: Πληροφορίες για την καλλιέργεια
Οι πληροφορίες σχετικά με την καλλιέργεια της κυτταρικής σειράς ανθρώπινου νεφρού 2 μπορούν να σας βοηθήσουν σημαντικά πριν ξεκινήσετε να εργάζεστε με αυτήν. Σε αυτή την ενότητα του άρθρου αναφέρονται βασικές πληροφορίες για την καλλιέργεια κυττάρων HK-2. Θα μάθετε: Είναι τα κύτταρα HK-2 προσκολλητικά; Ποιος είναι ο χρόνος διπλασιασμού των κυττάρων HK-2; Ποιο μέσο χρησιμοποιείται για την καλλιέργεια κυττάρων HK-2;
Βασικά σημεία για την καλλιέργεια κυττάρων HK-2
Χρόνος διπλασιασμού του πληθυσμού:
Ο χρόνος διπλασιασμού για τα κύτταρα HK-2 κυμαίνεται μεταξύ 47,3 ωρών και 61,7 ωρών.
Προσκολλητικά ή σε εναιώρημα:
Η σειρά επιθηλιακών κυττάρων νεφρού HK-2 είναι προσκολλητική.
Αναλογία υποκαλλιέργειας:
Τα κύτταρα HK-2 υποκαλλιεργούνται σε αναλογία 1:2 έως 1:4. Τα προσκολλημένα κύτταρα HK-2 πλένονται με 1 x PBS και επωάζονται σε θερμοκρασία περιβάλλοντος για 8 έως 10 λεπτά μετά την προσθήκη διαλύματος Accutase. Προστίθεται καλλιεργητικό μέσο στα αποσυνδεδεμένα κύτταρα και φυγοκεντρείται. Τα συλλεγμένα κύτταρα επαναδιαλύονται προσεκτικά και μεταφέρονται σε νέες φιάλες για καλλιέργεια.
Μέσο ανάπτυξης:
Το ιδανικό μέσο για τα κύτταρα HK-2 είναι το μέσο κυτταρικής σειράς κερατινοκυττάρων που περιέχει 10% εμβρυϊκό βοοειδές ορό, 0,05 mg/ml εκχύλισμα βοοειδούς υπόφυσης (BPE) και 5 ng/ml επιδερμικό αυξητικό παράγοντα (EGF). Τα μέσα πρέπει να αντικαθίστανται κάθε 2 έως 3 ημέρες την εβδομάδα.
Συνθήκες ανάπτυξης:
Οι καλλιέργειες της κυτταρικής σειράς ανθρώπινου νεφρού 2 διατηρούνται σε υγραντικό επωαστήρα με παροχή 5% CO2 στους 37°C.
Αποθήκευση:
Τα κατεψυγμένα κύτταρα αποθηκεύονται στην ατμοσφαιρική φάση υγρού αζώτου ή σε θερμοκρασία κάτω των -150 °C σε καταψύκτη εξαιρετικά χαμηλής θερμοκρασίας.
Διαδικασία κατάψυξης και μέσο:
Τα μέσα κατάψυξης CM-1 ή CM-ACF είναι ιδανικά για την κατάψυξη κυττάρων HK-2. Εν συντομία, επιλέγεται μια μέθοδος αργής κατάψυξης που επιτρέπει πτώση της θερμοκρασίας μόνο κατά 1 βαθμό Κελσίου ανά λεπτό και προστατεύει τα κύτταρα από οποιοδήποτε σοκ.
Διαδικασία απόψυξης:
Τα κατεψυγμένα κύτταρα αποψύχονται σε υδατόλουτρο ρυθμισμένο στους 37 βαθμούς Κελσίου. Σε αυτά τα κύτταρα προστίθενται φρέσκα μέσα καλλιέργειας και ανασυσσωματώνονται. Στη συνέχεια, τα κύτταρα μεταφέρονται σε νέα φιάλη που περιέχει μέσα ανάπτυξης. Μετά από 24 ώρες, τα μέσα αντικαθίστανται για την απομάκρυνση των συστατικών των μέσων κατάψυξης.
Επίπεδο βιοασφάλειας:
Οι καλλιέργειες κυττάρων HK-2 διατηρούνται σε εργαστήρια βιοασφάλειας επιπέδου 1.
Πλεονεκτήματα και περιορισμοί των κυττάρων HK-2
Το HK-2 είναι μια ευρέως χρησιμοποιούμενη σειρά κυττάρων επιθηλίου του εγγύς σωληναρίου του ανθρώπου. Όπως και άλλες σειρές κυττάρων, παρουσιάζει ορισμένα πλεονεκτήματα και περιορισμούς. Σε αυτή την ενότητα θα συζητηθούν ορισμένα βασικά πλεονεκτήματα και μειονεκτήματα της σειράς κυττάρων Human Kidney 2.
Πλεονεκτήματα
Τα κύρια πλεονεκτήματα της κυτταρικής σειράς HK-2 περιλαμβάνουν:
Καλά χαρακτηρισμένη
Η κυτταρική σειρά HK-2 έχει χαρακτηριστεί εκτενώς όσον αφορά τη μορφολογία, το μέγεθος και το γονιδίωμά της. Έχουν διεξαχθεί πολυάριθμες ερευνητικές μελέτες σχετικά με αυτά τα φυσιολογικά νεφρικά κύτταρα.
Αθανατοποιημένη
Η HK-2 είναι μια συνεχής κυτταρική σειρά με παρατεταμένη διάρκεια ζωής, γεγονός που της επιτρέπει να πολλαπλασιάζεται μέσω αρκετών πασών. Αυτό το χαρακτηριστικό εξασφαλίζει συνεχή προμήθεια κυττάρων για εργαστηριακά πειράματα.
Χαρακτηριστικά επιθηλίου του εγγύς σωληναρίου
Τα κύτταρα HK-2 παρουσιάζουν έναν καλά διαφοροποιημένο φαινότυπο, χαρακτηριστικό των κυττάρων του εγγύς σωληναρίου (PTC) που βρίσκονται στον ανθρώπινο νεφρό. Αυτό το μοναδικό χαρακτηριστικό καθιστά τα κύτταρα HK-2 ένα πολύτιμο in vitro μοντέλο για τη μελέτη της νεφρικής φυσιολογίας, των κυτταρικών διεργασιών και των αντιδράσεων σε διάφορα ερεθίσματα.
Περιορισμοί
Ακολουθούν ορισμένοι περιορισμοί της κυτταρικής σειράς HK-2:
Μοντέλο in vitro
Τα HK-2 χρησιμεύουν ως in vitro μοντέλο φυσιολογικών νεφρικών κυττάρων, παρουσιάζοντας ιδιαίτερα χαρακτηριστικά επιθηλιακών κυττάρων του εγγύς σωληναρίου. Ωστόσο, ενδέχεται να μην αναπαράγουν πλήρως την πολυπλοκότητα του ανθρώπινου νεφρικού ιστού και του μικροπεριβάλλοντος που συναντάται in vivo.
Εφαρμογές της κυτταρικής σειράς HK-2 στην έρευνα
Η κυτταρική σειρά HK-2 έχει πολυάριθμες εφαρμογές στην τοξικολογική έρευνα. Εδώ, έχουμε συζητήσει μερικές συγκεκριμένες και σημαντικές ερευνητικές χρήσεις αυτής της ανθρώπινης κυτταρικής σειράς εγγύς σωληναρίων.
- Νεφρική φυσιολογία: Τα κύτταρα HK-2 χρησιμοποιούνται συνήθως για τη μελέτη της φυσιολογίας και των λειτουργιών των φυσιολογικών νεφρών. Οι ερευνητές χρησιμοποιούν αυτά τα επιθηλιακά κύτταρα του εγγύς σωληναρίου για να διερευνήσουν τα ιοντικά κανάλια, τις διαδικασίες μεταφοράς και άλλους κυτταρικούς μηχανισμούς που ρυθμίζουν την ομοιόσταση των νεφρών. Για παράδειγμα, οι ερευνητές μελέτησαν τον ρόλο των διαύλων Transient Receptor Potential Channel 6 (TRPC6) στο (+)-Conocarpan (CNCP), ένα νεολιγνάνη, που προκάλεσε κυτταρικό θάνατο στα επιθηλιακά κύτταρα των νεφρών, HK-2 [2].
- Νεφρικές παθήσεις: Η κυτταρική σειρά ανθρώπινου νεφρού 2 χρησιμοποιείται για τη διερεύνηση διαφόρων νεφρικών παθήσεων, όπως η οξεία νεφρική βλάβη και η διαβητική νεφροπάθεια, καθώς και των υποκείμενων κυτταρικών και μοριακών μηχανισμών τους. Για παράδειγμα, έρευνα διαπίστωσε ότι τα επίπεδα μεθυλίωσης της πρωτεΐνης Klotho συνδέονται με νεφρική βλάβη. Η μείωση της μεθυλίωσης του προαγωγού του γονιδίου Klotho μπορεί να ενισχύσει την έκφρασή του και να ανακουφίσει τη νεφρική βλάβη που προκαλείται σε μοντέλα διαβητικών ποντικών db/db και σε κύτταρα HK-2 που έχουν υποβληθεί σε θεραπεία με υψηλή γλυκόζη [3].
- Τοξικολογικές μελέτες: Τα κύτταρα HK-2 αποτελούν ένα εξαιρετικό ερευνητικό εργαλείο για την αξιολόγηση των πιθανών επιδράσεων διαφόρων φαρμάκων, χημικών ουσιών και περιβαλλοντικών ρύπων. Οι μελέτες αυτές μπορούν να βοηθήσουν τους ερευνητές να αξιολογήσουν την ασφάλεια των φαρμάκων και τις παρενέργειές τους στα νεφρικά κύτταρα. Για παράδειγμα, μια μελέτη που δημοσιεύθηκε το 2022 αξιολόγησε τις πιθανές επιδράσεις των πολυσακχαριτών και του υδατικού εκχυλίσματος του φυσικού βοτάνου Polygonatumkingianum (PK) στη νεφροτοξικότητα που προκαλείται από το ουράνιο σε κύτταρα HK-2. Διαπίστωσαν ότι το PK ασκεί προστατευτική δράση και προλαμβάνει τη δηλητηρίαση από ουράνιο στα νεφρικά κύτταρα [4].
5. Κύτταρα HK-2: Ερευνητικές δημοσιεύσεις
Ακολουθούν μερικές ενδιαφέρουσες ερευνητικές δημοσιεύσεις που αφορούν τα νεφρικά επιθηλιακά κύτταρα HK-2.
Αυτή η μελέτη στο περιοδικό Diabetes, Metabolic Syndrome, and Obesity (2022) πρότεινε ότι το κυκλικό RNA HIPK3 μπορεί να μειώσει την αναστολή του πολλαπλασιασμού των κυττάρων HK-2 που προκαλείται από την τοξικότητα της υψηλής γλυκόζης. Επιπλέον, μπορεί να αναστέλλει τον κυτταρικό θάνατο ρυθμίζοντας την αλυσιδωτή αντίδραση miR-326/miR-487a-3p/SIRT1.
Αυτή η ερευνητική δημοσίευση στο Nanomedicine (2020) αξιολόγησε διαφορετικούς μηχανισμούς τοξικότητας των νανοσωματιδίων χρυσού (AuNPs) σε καρκινικά κύτταρα 786-0 και επιθηλιακά κύτταρα του εγγύς σωληναρίου HK-2.
Αυτό το άρθρο δημοσιεύθηκε στο Renal Failure (2022). Τα ευρήματα αναφέρουν ότι το microRNA-320c μπορεί να μειώσει την τοξικότητα που προκαλείται από την υψηλή γλυκόζη στα νεφρικά κύτταρα (HK-2) στοχεύοντας το PTEN και αναστέλλοντας τη σηματοδότηση PI3K/AKT.
Αυτή η μελέτη στο Tissue Engineering Part A (2022) πρότεινε ότι τα εξωσώματα που προέρχονται από μεσεγχυματικά βλαστοκύτταρα αποτρέπουν την επιθηλιακή-μεσεγχυματική μετάβαση των νεφρικών κυττάρων HK-2.
Το άρθρο στο Journal of Pharmacy and Pharmacology (2019) αναφέρει ότι το lncRNA TapSAKI ενισχύει την φλεγμονώδη απόκριση και τον κυτταρικό θάνατο των HK-2 ρυθμίζοντας την οδό σηματοδότησης microRNA-22/PTEN/TLR4/NF-κB.
Πόροι για τη κυτταρική σειρά HK-2: Πρωτόκολλα, βίντεο και άλλα
Η HK-2 είναι μια γνωστή κυτταρική σειρά. Ακολουθούν ορισμένοι πόροι που περιγράφουν το πρωτόκολλο καλλιέργειας κυττάρων HK-2.
- Καλλιέργεια κυττάρων HK-2: Αυτός ο ιστότοπος είναι πλούσιος σε πληροφορίες σχετικά με την καλλιέργεια κυττάρων HK-2. Παρέχει, μεταξύ άλλων, τη συνταγή του μέσου καλλιέργειας HK-2, το πρωτόκολλο μεταμόσχευσης και το πρωτόκολλο χειρισμού και συντήρησης πολλαπλασιαστικών και κρυοσυντηρημένων καλλιεργειών.
- Μεταμόσχευση κυττάρων: Αυτό το βίντεο θα σας βοηθήσει να μάθετε ένα γενικό πρωτόκολλο διαίρεσης ή μεταμόσχευσης για προσκολλημένες κυτταρικές σειρές.
Αναφορές
- Handl, J., et al., Η επίδραση της επαναλαμβανόμενης μεταμόσχευσης στην ευαισθησία των ανθρώπινων κυττάρων HK-2 του εγγύς σωληναρίου σε τοξικές ενώσεις. Physiological Research, 2020. 69(4): σ. 731.
- Yang, G., et al., Η ενεργοποίηση των διαύλων TRPC6 συμβάλλει στον επαγόμενο από (+)-conocarpan αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο στα κύτταρα HK-2. Food and Chemical Toxicology, 2019. 129: σ. 281-290.
- Yang, X.H., et al., Η EGCG μετριάζει τη νεφρική βλάβη μέσω της αντιστροφής της υπερμεθυλίωσης του klotho σε διαβητικά ποντίκια db/db και κύτταρα HK-2. Oxidative Medicine and Cellular Longevity, 2020. 2020.
- Li, W., et al., Προστατευτικές επιδράσεις των πολυσακχαριτών Polygonatum kingianum και του υδατικού εκχυλίσματος στην τοξικότητα που προκαλείται από το ουράνιο σε ανθρώπινα νεφρικά κύτταρα (HK-2). International Journal of Biological Macromolecules, 2022. 202: σ. 68-79.