Κυτταρική σειρά A375 – Οδηγός για την έρευνα στο μελάνωμα

Η A375 είναι μια κυτταρική σειρά ανθρώπινου μελανώματος που χρησιμοποιείται ευρέως στην τοξικολογία και την ανοσο-ογκολογική έρευνα. Οι ερευνητές χρησιμοποιούν αυτή την κυτταρική σειρά για να μελετήσουν τη βιολογία του καρκίνου και τις οδούς σηματοδότησης, να δοκιμάσουν ή να διαλέξουν πιθανά αντικαρκινικά φάρμακα και να αναπτύξουν νέες και αποτελεσματικές θεραπείες.

Προέλευση και γενικά χαρακτηριστικά των κυττάρων A375

Η γνώση της προέλευσης και των γενικών χαρακτηριστικών μιας κυτταρικής σειράς μπορεί να σας βοηθήσει να σχεδιάσετε τη χρήση της στην έρευνα. Αυτή η ενότητα του άρθρου θα καλύψει την προέλευση και τα χαρακτηριστικά της κυτταρικής σειράς A375. Για παράδειγμα, τι είναι η κυτταρική σειρά A375; Ποια είναι τα χαρακτηριστικά της κυτταρικής σειράς A375; Από πού προέρχονται τα κύτταρα A375; Ποια είναι η μορφολογία των κυττάρων μελανώματος A375; Ποιο είναι το μέγεθος των κυττάρων A375;

• Η κυτταρική σειρά καρκίνου του δέρματος A375 προήλθε από την καλλιέργεια εξωφυτικού ιστού ενός συμπαγούς όγκου μιας 54χρονης γυναίκας με κακοήθη μελάνωμα [1].
• Τα κύτταρα A375 έχουν επιθηλιακή μορφολογία.
• Το μέγεθος των κυττάρων A375 είναι σχετικά μικρότερο σε σύγκριση με άλλες κυτταρικές σειρές. Έχουν διάμετρο περίπου 12 µm.
• Τα κύτταρα μελανώματος A375 είναι υποτριπλοειδή. Ο μέσος αριθμός χρωμοσωμάτων για αυτή τη κυτταρική σειρά είναι 62. Συνήθως, κάθε κύτταρο έχει εννέα χρωμοσώματα δείκτες και ένα αντίγραφο των φυσιολογικών χρωμοσωμάτων N2, N6 και N22.

Κύτταρα A375: Πληροφορίες για την κυτταροκαλλιέργεια

Οι καλλιέργειες κυττάρων A375 είναι εύκολο να διατηρηθούν. Δεν έχουν ιδιαίτερα απαιτητικές προδιαγραφές καλλιέργειας. Αυτή η ενότητα θα σας βοηθήσει να μάθετε τις απαραίτητες πληροφορίες για την καλλιέργεια κυττάρων. Όπως, για παράδειγμα, ποιος είναι ο χρόνος διπλασιασμού των A375. Ποιο είναι το μέσο καλλιέργειας της κυτταρικής σειράς A375; Ποια είναι η πυκνότητα σποράς των A375; Είναι τα κύτταρα μελανώματος A375 προσκολλητικά;

Βασικά σημεία για την καλλιέργεια κυττάρων A375

Χρόνος διπλασιασμού του πληθυσμού:

Ο χρόνος διπλασιασμού των A375 είναι 20 ώρες.

Προσκολλητικά ή σε εναιώρημα:

Το A375 είναι μια προσκολλητική κυτταρική σειρά ανθρώπινου μελανώματος.

Πυκνότητα σποράς:

Η πυκνότητα 1 x 10⁴ κύτταρα/cm² είναι ιδανική για καλλιέργειες κυττάρων A375. Τα προσκολλημένα κύτταρα ξεπλένονται με 1 x φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα (PBS) και επωάζονται με διάλυμα μεταφοράς (Accutase). Στη συνέχεια, στα κύτταρα προστίθενται καλλιεργητικά μέσα και φυγοκεντρίζονται. Τα συλλεγμένα κύτταρα επαναδιαλύονται σε καλλιεργητικό μέσο και μεταφέρονται σε νέες φιάλες για ανάπτυξη.

Μέσο ανάπτυξης:

Το DMEM συνιστάται ως ιδανικό μέσο A375 όταν συμπληρώνεται με 10% εμβρυϊκό βοοειδές ορό (FBS), 4,5 g/L γλυκόζη, 1,5 g/L NaHCO3, 4 mM L-γλουταμίνη και 1,0 mM πυρουβικό νάτριο. Το μέσο A375 πρέπει να ανανεώνεται 2-3 ημέρες την εβδομάδα.

Συνθήκες ανάπτυξης:

Τα κύτταρα μελανώματος A375 καλλιεργούνται σε υγραντικό επωαστήρα (37 °C) με παροχή 5% CO2.

Αποθήκευση:

Τα κατεψυγμένα κύτταρα A375 πρέπει να διατηρούνται σε θερμοκρασία κάτω των -150 °C στην ατμοσφαιρική φάση υγρού αζώτου ή σε ηλεκτρικό καταψύκτη.

Διαδικασία κατάψυξης και μέσο:

Για την κατάψυξη της κυτταρικής σειράς A375 χρησιμοποιούνται τα μέσα CM-1 ή CM-ACF. Έχει επιλεγεί μια διαδικασία αργής κατάψυξης που επιτρέπει τη σταδιακή μείωση της θερμοκρασίας κατά 1°C, προκειμένου να προστατευθεί η βιωσιμότητα των κυττάρων.

Διαδικασία απόψυξης:

Το φιαλίδιο με τα κατεψυγμένα κύτταρα μελανώματος A375 ανακινείται γρήγορα σε υδατόλουτρο για 40 έως 60 δευτερόλεπτα, έως ότου απομείνει μόνο ένας μικρός σβώλος πάγου. Στα κύτταρα προστίθενται φρέσκα μέσα και φυγοκεντρίζονται για την απομάκρυνση των στοιχείων του μέσου κατάψυξης. Το ίζημα κυττάρων που λαμβάνεται ανασυστάται εκ νέου και μεταφέρεται σε νέες φιάλες.

Επίπεδο βιοασφάλειας:

Οι καλλιέργειες A375 χειρίζονται και διατηρούνται σε εργαστηριακές εγκαταστάσεις βιοασφάλειας επιπέδου 1.

Ερευνητικές εφαρμογές της κυτταρικής σειράς A375

Η κυτταρική σειρά A375 έχει εκτεταμένες ερευνητικές εφαρμογές στην έρευνα για τον καρκίνο. Ακολουθούν μερικοί από τους συνήθεις τομείς όπου χρησιμοποιούνται τα κύτταρα A375.

• Έρευνα για τον καρκίνο: Τα κύτταρα A375 έχουν ευρεία εφαρμογή στην έρευνα για το μελάνωμα. Οι ερευνητές χρησιμοποίησαν αυτά τα κύτταρα για να διερευνήσουν τη βιολογία του καρκίνου του δέρματος, τις διεργασίες και τους υποκείμενους μηχανισμούς κυτταρικής σηματοδότησης, συμπεριλαμβανομένης της κυτταρικής πολλαπλασιασμού, της μετανάστευσης και της εισβολής. Αυτό μπορεί επίσης να βοηθήσει τους ερευνητές να εντοπίσουν νέους μοριακούς θεραπευτικούς στόχους. Μια μελέτη που διεξήχθη από τον Lin Zhu και τους συνεργάτες του το 2019 χρησιμοποίησε εξαιρετικά επιθετικά κύτταρα μελανώματος A375 και ανακάλυψε τον ρόλο του microRNA-3662 στην ανάπτυξη και την εισβολή των κυττάρων μελανώματος A375. Τα ευρήματα της μελέτης αναφέρουν ότι το microRNA-3662 στοχεύει το γονίδιο ZEB1 και ρυθμίζει την ανάπτυξη των κυττάρων μελανώματος in vitro και in vivo στο μοντέλο όγκου A375 [2]. Ομοίως, έρευνα που διεξήχθη το 2018 διαπίστωσε ότι οι οδοί PI3K/AKT και MAPK/ERK εμπλέκονται στον πολλαπλασιασμό και τη μετάσταση της κυτταρικής σειράς A375 [3].
• Ανακάλυψη και δοκιμή φαρμάκων: Η κυτταρική σειρά A375 αποτελεί ένα χρήσιμο in vitro μοντέλο όγκου για τη δοκιμή και τον έλεγχο πιθανών αντικαρκινικών παραγόντων. Οι ερευνητές αξιολογούν την τοξικότητα και την αποτελεσματικότητα νέων χημειοθεραπευτικών φαρμάκων, ενώσεων και άλλων θεραπειών χρησιμοποιώντας αυτά τα κύτταρα μελανώματος A375. Για παράδειγμα, μια μελέτη διερεύνησε τις αντικαρκινικές ιδιότητες μικρο- και νανοκυστιδίων που προέρχονται από γκρέιπφρουτ σε ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα μελανώματος A375. Τα αποτελέσματα αποκάλυψαν ότι τα μικρο- και νανοκυστίδια προκαλούν διακοπή του κυτταρικού κύκλου και απόπτωση και παρεμποδίζουν την έκφραση γονιδίων στον πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση και την εισβολή των κυττάρων [4].

Κύτταρα A375: Δημοσιεύσεις

Εδώ αναφέρονται ορισμένες σημαντικές ερευνητικές δημοσιεύσεις που αφορούν τα κύτταρα A375.

Η βιταμίνη D και τα αναλόγα της με χαμηλή ασβεστιογόνο δράση ρυθμίζουν τις αντικαρκινικές ιδιότητες της σισπλατίνης και της δακαρβαζίνης στην ανθρώπινη κυτταρική σειρά μελανώματος A375

Η μελέτη αυτή δημοσιεύθηκε στο Journal of Oncology το 2019. Η μελέτη πρότεινε ότι η συνθεραπεία με βιταμίνη D και ανάλογα βελτιώνει την αντικαρκινική δράση της σισπλατίνης και της δακαρβαζίνης στα κύτταρα μελανώματος A375.

In vitro αξιολόγηση των αντιμελανοματικών αποτελεσμάτων (κυτταρική σειρά A375) του τζελ και των εκχυλισμάτων ολόκληρων φύλλων από επιλεγμένα είδη αλόης

Η έρευνα αυτή δημοσιεύθηκε στο Journal of Herbal Medicine το 2022. Η μελέτη αυτή διερεύνησε τις αντιμελανοματικές επιδράσεις του τζελ αλόης βέρα σε κύτταρα μελανώματος A375.

Το μέλος 2 της οικογένειας Fermitin προάγει την εξέλιξη του μελανώματος ενισχύοντας τη σύνδεση του p-α-Pix με το Rac1 για την ενεργοποίηση της οδού MAPK

Αυτή η μελέτη στο Oncogene (2021) πρότεινε ότι το μέλος της οικογένειας fermitin 2 (FERMT2 ή kindlin-2) ενθαρρύνει την εξέλιξη του μελανώματος μέσω της ενεργοποίησης της MAPK μέσω της σύνδεσης με το p-α-Pix και το Rac1.

Το FARP1 διευκολύνει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων μέσω της ρύθμισης της οδού σηματοδότησης MAPK στο δερματικό μελάνωμα

Αυτή η μελέτη στο The American Journal of Dermatopathology (2019) πρότεινε ότι το FARP1 μπορεί να διευκολύνει την ανάπτυξη και την εξέλιξη του δερματικού μελανώματος. Επομένως, μπορεί να αποτελέσει έναν χρήσιμο θεραπευτικό στόχο.

Κυτταροτοξικό και αποπτωτικό δυναμικό εκχυλισμάτων Phyllodium elegans σε ανθρώπινες καρκινικές κυτταρικές σειρές

Αυτό το ερευνητικό άρθρο δημοσιεύθηκε στο Bioengineered (2019). Η μελέτη αυτή διερεύνησε την κυτταροτοξική και αποπτωτική δράση ενός εκχυλίσματος του φυτού Phyllodium elegans σε ανθρώπινες καρκινικές κυτταρικές σειρές, συμπεριλαμβανομένης της A375.

Πόροι για τη σειρά κυττάρων A375: Πρωτόκολλα, βίντεο και άλλα

Ακολουθούν μερικές διαδικτυακές πηγές που αφορούν τα κύτταρα A375.

• Μεταφορά γονιδίου σε κύτταρα A375: Αυτό το εκπαιδευτικό βίντεο θα σας βοηθήσει να μάθετε βήμα προς βήμα τη μεταφορά γονιδίου σε κύτταρα A375.
• Καλλιέργεια κυττάρων: Αυτό το βίντεο περιέχει πολύ χρήσιμες πληροφορίες σχετικά με την καλλιέργεια κυτταρικών σειρών.

Τα πρωτόκολλα κυτταρικής καλλιέργειας για τα κύτταρα A375 παρατίθενται εδώ.

• Κυτταρική σειρά A375: Αυτός ο σύνδεσμος περιέχει χρήσιμες πληροφορίες σχετικά με την καλλιέργεια και τη συντήρηση της κυτταρικής σειράς A375, συμπεριλαμβανομένων των μέσων A375 και του χειρισμού κατεψυγμένων και πολλαπλασιαζόμενων καλλιεργειών A375.

Βιβλιογραφία

1. Avram, S., et al., Standardization of A375 human melanoma models on chicken embryo chorioallantoic membrane and Balb/c nude mice. Oncol Rep, 2017. 38(1): σ. 89-99.
2. Zhu, L., et al., Το MicroRNA-3662 στοχεύει το ZEB1 και μετριάζει την εισβολή της εξαιρετικά επιθετικής κυτταρικής σειράς μελανώματος A375. Cancer Manag Res, 2019. 11: σ. 5845-5856.
3. Peng, X., et al., Η οξυφαδιχαλκόνη C αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό και τη μετάσταση των κυττάρων του μελανώματος A375 μέσω της καταστολής των οδών PI3K/Akt και MAPK/ERK. Life sciences, 2018. 206: σ. 35-44.
4. Stanly, C., et al., Τα μικρο- και νανοκυστίδια που προέρχονται από γκρέιπφρουτ παρουσιάζουν διακριτά προφίλ μεταβολόματος και αντικαρκινικές δραστηριότητες στην ανθρώπινη κυτταρική σειρά μελανώματος A375. Cells, 2020. 9(12): σ. 2722.