Κύτταρα Vero: Μελέτες για τους ιούς και την καινοτομία των εμβολίων

Η κυτταρική σειρά Vero, ένα αθάνατο μοντέλο κυττάρων θηλαστικών που προέρχεται από τα επιθηλιακά κύτταρα των νεφρών του αφρικανικού πράσινου πιθήκου, βρίσκεται στην πρώτη γραμμή της έρευνας στην ιολογία, τη μικροβιολογία και την κυτταρική και μοριακή βιολογία. Η ευρεία εφαρμογή τους καλύπτει την ανάπτυξη εμβολίων, τον φαρμακευτικό έλεγχο και τη διερεύνηση της βιολογίας ιών και παρασίτων, της ανοσολογίας όγκων και των ανοσοθεραπευτικών στρατηγικών.

Προέλευση και βασικά χαρακτηριστικά των κυττάρων Vero

Η εμβάθυνση σε μια κυτταρική σειρά όπως η Vero προκαλεί διάφορες ερωτήσεις: Τι ακριβώς είναι τα κύτταρα Vero Πώς δημιουργήθηκε η κυτταρική σειρά Vero Ποια είναι η ιστορία πίσω από το όνομα "Vero" Αυτό το τμήμα έχει ως στόχο να διευκρινίσει τη γένεση και τα κύρια χαρακτηριστικά των κυττάρων Vero.

Η δημιουργία της κυτταρικής σειράς Vero χρονολογείται από το 1962, προερχόμενη από τα επιθηλιακά κύτταρα των νεφρών του αφρικανικού πράσινου πιθήκου. Η γραμμή αυτή καλλιεργήθηκε από τους Y. Kawakita και Yasumura στο Πανεπιστήμιο Chiba της Ιαπωνίας. Ο όρος "Vero" προέρχεται από το "Verda reno" στην Εσπεράντο, που μεταφράζεται ως "πράσινο νεφρό", αν και το "Vero" απηχεί επίσης την έννοια της "αλήθειας"

Τα κύτταρα Vero σχηματίζουν συνήθως μονοστρώματα, αλλά μπορούν να προσαρμοστούν σε καλλιέργειες εναιωρήματος, εμφανίζοντας μια δομή που μοιάζει με επιθήλιο. Τα κύτταρα αυτά χαρακτηρίζονται από στρογγυλεμένο έως επιμήκες σχήμα και μέση διάμετρο περίπου 17 μm. Αξίζει να σημειωθεί ότι τα κύτταρα Vero παρουσιάζουν υποδιπλοειδή αριθμό χρωμοσωμάτων, με τον μέσο αριθμό χρωμοσωμάτων να είναι 58 στο 66% περίπου του κυτταρικού πληθυσμού, αν και παραλλαγές με υψηλότερους πλουδισμούς υπάρχουν σε ένα μικρό κλάσμα (1,7%) των κυττάρων.

Κλώνοι κυττάρων Vero και οι μοναδικές τους ιδιότητες

Οι διακριτοί κλώνοι που προέρχονται από την κυτταρική σειρά Vero παρουσιάζουν μοναδικά χαρακτηριστικά που τους διαφοροποιούν από την αρχική σειρά. Μεταξύ αυτών, δύο αξιοσημείωτοι κλώνοι κυττάρων Vero είναι οι εξής:

• Κυτταρική σειρά Vero E6: Γνωστός και ως Vero C1008, αυτός ο κλώνος προέρχεται από τα κύτταρα Vero 76 και απομονώθηκε το 1979 από τον P.J. Price χρησιμοποιώντας μια τεχνική αραίωσης σε πλάκες μικροτιτλοδότησης. Τα κύτταρα Vero E6 είναι ιδιαίτερα κατάλληλα για την καλλιέργεια ιών που πολλαπλασιάζονται αργά.

• Κύτταρα Vero 76: Προερχόμενα από το νεφρό ενός αφρικανικού πράσινου πιθήκου το 1968, τα κύτταρα αυτά διατηρούν την επιθηλιακή μορφολογία που χαρακτηρίζει τα κύτταρα Vero.

Αυτές οι παραλλαγές των κυττάρων Vero, μαζί με τη μητρική σειρά, εξακολουθούν να διαδραματίζουν καθοριστικό ρόλο στην πρόοδο της ιολογικής έρευνας και στην ανάπτυξη ιατρικών παρεμβάσεων, σηματοδοτώντας τη σημασία τους στην επιστημονική κοινότητα.

Πληροφορίες καλλιέργειας

Η καλλιέργεια των κυττάρων Vero, μιας κυτταρικής σειράς πιθήκων, απαιτεί εξοικείωση με συγκεκριμένες παραμέτρους, όπως ο χρόνος διπλασιασμού, η πυκνότητα σποράς και το κατάλληλο μέσο ανάπτυξης.

• Χρόνος διπλασιασμού πληθυσμού: Ο χρόνος διπλασιασμού για τα κύτταρα Vero είναι περίπου 24 ώρες.

• Προσκόλληση: Τα κύτταρα Vero προσκολλώνται σε επιφάνειες και συνήθως σχηματίζουν μονοστρώματα κατά την καλλιέργεια.

• Πυκνότητα σποράς: Συνιστάται να ξεκινήσετε με πυκνότητα σποράς 1 x 10^4 κύτταρα/cm^2. Για την καλλιέργεια προσκολλημένων κυττάρων Vero, πλύντε τα με PBS και επεξεργαστείτε τα με Accutase για να αποκολληθούν. Μετά την αποκόλληση, φυγοκεντρίστε τα κύτταρα, επαναδιαλύστε τα σε φρέσκο μέσο και μεταφέρετέ τα σε νέες φιάλες καλλιέργειας.

• Μέσο ανάπτυξης: Τόσο το Ham's F12 όσο και το DMEM είναι κατάλληλα μέσα για την καλλιέργεια των κυττάρων Vero. Αυτά θα πρέπει να συμπληρώνονται με 2,5 mM L-γλουταμίνης και 5% εμβρυϊκό ορό βοοειδών (FBS) για να υποστηριχθεί η βέλτιστη ανάπτυξη. Το μέσο πρέπει να ανανεώνεται δύο έως τρεις φορές την εβδομάδα.

• Συνθήκες ανάπτυξης: Τα κύτταρα Vero ευδοκιμούν σε θερμοκρασία 37°C σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα που τροφοδοτείται με 5% CO2.

• Αποθήκευση: Για μακροχρόνια αποθήκευση, τα κύτταρα Vero πρέπει να διατηρούνται σε θερμοκρασίες κάτω των -150°C, είτε σε καταψύκτη εξαιρετικά χαμηλών θερμοκρασιών είτε σε φάση ατμών υγρού αζώτου.

• Διαδικασία κατάψυξης και μέσο: Για την κρυοσυντήρηση, χρησιμοποιήστε ως μέσο κατάψυξης το CM-1 ή το CM-ACF ή το μέσο ανάπτυξης με FBS και DMSO. Χρησιμοποιήστε μια τεχνική αργής κατάψυξης, μειώνοντας τη θερμοκρασία σταδιακά κατά 1°C ανά λεπτό.

• Διαδικασία απόψυξης: Ξεπαγώστε τα κύτταρα Vero βυθίζοντας το δοχείο σε υδατόλουτρο 37°C και αναδεύοντάς το απαλά για 40-60 δευτερόλεπτα. Στη συνέχεια, αραιώστε τα κύτταρα σε φρέσκο μέσο, φυγοκεντρίστε τα για να απομακρύνετε το κρυοπροστατευτικό μέσο, επαναδιαλύστε τα σε φρέσκο μέσο ανάπτυξης και τοποθετήστε τα σε νέα φιάλη για να ανακάμψουν και να αναπτυχθούν.

• Επίπεδο βιοασφάλειας: Τα κύτταρα Vero πρέπει να χειρίζονται σε εργαστήριο που πληροί τις απαιτήσεις για το επίπεδο βιοασφάλειας 1.

Εφαρμογές της κυτταρικής σειράς Vero στην έρευνα

Η κυτταρική σειρά Vero έχει πολυάριθμες ερευνητικές εφαρμογές στους τομείς της κυτταρικής βιολογίας και της ιολογίας. Εδώ, συζητήσαμε ορισμένες συγκεκριμένες.

Κύτταρα Vero στην έρευνα για τους ιούς και την παραγωγή εμβολίων

Τα κύτταρα Vero, που προέρχονται από κύτταρα νεφρού αφρικανικής πράσινης μαϊμούς, έχουν γίνει βασικό στοιχείο στη βιολογική διαδικασία ανάπτυξης εμβολίων για διάφορους ιούς, συμπεριλαμβανομένων του ιού της πολιομυελίτιδας και του ιού της ιαπωνικής εγκεφαλίτιδας. Η προσαρμοστικότητά τους τόσο σε καλλιέργειες προσκολλημένων όσο και σε καλλιέργειες εναιωρήματος και η ευρεία ικανότητά τους να υποστηρίζουν ιούς, συμπεριλαμβανομένων παθογόνων όπως ο ιός des petits ruminants, αναδεικνύουν τη σημασία τους για την απομόνωση ιών και την ανάπτυξη εμβολίων.

Πολυάριθμες μελέτες έχουν χρησιμοποιήσει κύτταρα Vero για την παραγωγή ανθρώπινων εμβολίων. Για παράδειγμα, μια αξιοσημείωτη μελέτη που δημοσιεύθηκε το 2019 κατέδειξε τη χρήση κυττάρων Vero στην ανάπτυξη αδρανοποιημένου εμβολίου για τον ιό του κίτρινου πυρετού [2].

Τα κύτταρα Vero χρησιμοποιούνται συνήθως σε μελέτες ιογενούς λοίμωξης, όπως μια μελέτη που διεξήχθη το 2020, η οποία μόλυνε κύτταρα Vero με διαφορετικές απομονώσεις του ιού SARS-CoV-2 για τη μελέτη των αναπτυξιακών ιδιοτήτων του ιού [4]. Ομοίως, μια άλλη μελέτη διερεύνησε τις κυτταρικές αποκρίσεις στη μόλυνση από τον ιό SARS-CoV-2 χρησιμοποιώντας κυτταρική καλλιέργεια Vero [5].

Ο ρόλος των κυττάρων Vero στη μηχανική ιστών και στην ανάπτυξη βιολογικών διεργασιών στα ανώτερα στάδια

Πέρα από την παραγωγή εμβολίων, τα κύτταρα Vero συμβάλλουν στη μηχανική ιστών και στον ευρύτερο τομέα της ανάπτυξης βιολογικών διεργασιών, υπογραμμίζοντας την ανάγκη για συνεχή έρευνα των ιδιοτήτων και των εφαρμογών τους. Η επιλογή των κατάλληλων υποομάδων κυττάρων Vero είναι το κλειδί για τη μεγιστοποίηση του δυναμικού τους στη βιοτεχνολογία και τη φαρμακευτική βιομηχανία.

Εφαρμογή των κυττάρων Vero σε δοκιμές αποτελεσματικότητας και ασφάλειας φαρμάκων

Τα κύτταρα Vero χρησιμοποιούνται συχνά σε δοκιμές φαρμάκων για την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας και της ασφάλειας φαρμακευτικών ενώσεων. Τα κύτταρα αυτά θεωρούνται συχνά πρότυπο μοντέλο για τα φυσιολογικά νεφρικά κύτταρα σε μελέτες που διερευνούν τις κυτταροτοξικές επιδράσεις διαφόρων φαρμάκων και θεραπευτικών παραγόντων. Για παράδειγμα, σε έρευνα που συνέκρινε την επίδραση των εκχυλισμάτων ρίζας του φυτού Terminalia avicennioides τόσο στην HepG2, μια καρκινική κυτταρική σειρά του ήπατος, όσο και στα κύτταρα Vero, που προέρχονται από το επιθήλιο των νεφρών πιθήκων, διαπιστώθηκε ότι τα εκχυλίσματα ήταν πιο επιζήμια για τα καρκινικά κύτταρα από ό,τι για τα φυσιολογικά κύτταρα.

Περιορισμοί των κυττάρων Vero

Ενώ τα κύτταρα Vero χρησιμοποιούνται ευρέως, έχουν τους περιορισμούς τους, όπως η παραγωγή τοξίνης Vero και οι γονιδιωματικές αλλοιώσεις που μπορεί να επηρεάσουν ορισμένες εφαρμογές. Η κατανόηση των ειδικών υπογραμμών και των γονιδιωματικών χαρακτηριστικών των κυττάρων Vero, συμπεριλαμβανομένης της γραμμής Vero F6, είναι απαραίτητη για τη βελτιστοποίηση της χρήσης τους σε διάφορες βιολογικές διεργασίες.

Εξερευνήστε τα κύτταρα Vero και τα παράγωγά μας για πρωτοποριακές ερευνητικές εφαρμογές

Ερευνητικές δημοσιεύσεις

Ακολουθούν ορισμένες πρόσφατες και περισσότερο αναφερόμενες ερευνητικές δημοσιεύσεις με κύτταρα Vero.

Προσαρμογή των κυττάρων Vero σε ανάπτυξη εναιωρήματος για την παραγωγή του ιού της λύσσας σε διαφορετικά μέσα χωρίς ορό

Αυτή η μελέτη που δημοσιεύθηκε στο Vaccine Journal (2019) προσάρμοσε τα κύτταρα Vero να αναπτύσσονται σε καλλιέργειες εναιωρήματος για την παραγωγή του ιού της λύσσας σε υψηλούς τίτλους χρησιμοποιώντας διάφορα μέσα χωρίς ορό.

Ευαισθησία του Toxoplasma gondii σε αιθανολικό εκχύλισμα του Tinospora crispa σε κύτταρα Vero

Αυτή η εργασία δημοσιεύθηκε στο περιοδικό Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine το 2019. Η μελέτη πρότεινε ότι το αιθανολικό εκχύλισμα του φυτού Tinospora crispa ασκεί επιβλαβή επίδραση στο παράσιτο Toxoplasma gondii. Ωστόσο, είναι ασφαλές για τα κύτταρα του ξενιστή (την κυτταρική σειρά Vero).

Επιδράσεις του εκχυλίσματος φύλλων Colchicum baytopiorum στην κυτταροτοξικότητα και στις οδούς κυτταρικού θανάτου στις κυτταρικές σειρές C-4 I και Vero

Αυτό το άρθρο δημοσιεύθηκε από το Journal of the Balkan Union of Oncology το 2021. Σε αυτό το stidy, οι Ozlem Dagdeviren Ozsoylemez και Gul Ozcan διερεύνησαν την κυτταροτοξική επίδραση του εκχυλίσματος φύλλων Colchicum baytopiorum στις κυτταρικές σειρές C-4I και Vero.

Η ρεσβερατρόλη αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό του κοροναϊού του σοβαρού οξέος αναπνευστικού συνδρόμου 2 (SARS-CoV-2) σε καλλιεργημένα κύτταρα Vero

Αυτή η μελέτη στο Phytotherapy Research (2021) χρησιμοποίησε κύτταρα Vero μολυσμένα με SARS-CoV-2 για να διερευνήσει τη θεραπευτική επίδραση της ρεσβερατρόλης στον πολλαπλασιασμό του ιού.

Οι λιπόφιλες στατίνες αναστέλλουν την παραγωγή του ιού Zika σε κύτταρα Vero

Αυτή η δημοσίευση στο Nature Scientific Reports (2019) προτείνει ότι οι λιπόφιλες στατίνες, δηλαδή η τεριβαστατίνη, η λοβαστατίνη, η φουβαστατίνη, η σιμβαστατίνη και η μεβαστατίνη, μπορούν να παρεμποδίσουν την παραγωγή του ιού Ζίκα σε κύτταρα Vero.

Πηγές για τα κύτταρα Vero: Vero: πρωτόκολλα, βίντεο και άλλα

• Διαμόλυνση των κυττάρων Vero: Αυτός ο σύνδεσμος θα σας καθοδηγήσει σε ένα πρωτόκολλο διαμόλυνσης για κύτταρα Vero.
• Διαμόλυνση της κυτταρικής σειράς Vero: Αυτό το βίντεο εξηγεί ένα πρωτόκολλο διαμόλυνσης για την κυτταρική σειρά Vero.
• Υποκαλλιέργεια κυττάρων Vero: Αυτό το βίντεο περιγράφει γενικές συστάσεις υποκαλλιέργειας για προσκολλημένες κυτταρικές σειρές.

Πρωτόκολλα καλλιέργειας κυττάρων

• Καλλιέργεια κυττάρων Vero: Αυτός ο ιστότοπος περιέχει ένα καλά επεξηγηματικό πρωτόκολλο για την καλλιέργεια κυττάρων Vero.
• Καλλιέργεια κυττάρων Vero: Αυτό το έγγραφο μπορεί να σας βοηθήσει να μάθετε το πρωτόκολλο για τον πολλαπλασιασμό, τη διατήρηση και την κατάψυξη των κυττάρων Vero.

Αναφορές

1. Ammerman, N.C., M. Beier-Sexton, and A.F. Azad, Growth and maintenance of Vero cell lines. Τρέχοντα πρωτόκολλα στη μικροβιολογία, 2008. 11(1): σ. A. 4E. 1-A. 4E. 7.
2. Pato, T.P., et al., Purification of yellow fever virus produced in Vero cells for inactivated vaccine manufacture. Vaccine, 2019. 37(24): p. 3214-3220.
3. Aliyu-Amoo, H., et al., Antiproliferative effect of extracts and fractions of the root of Terminalia avicennioides (Combretaceae) Guill and Perr. on HepG2 and Vero cell lines. Clinical Phytoscience, 2021, 7(1): σ. 1-7.
4. Yao, P., et al., Απομόνωση και χαρακτηριστικά ανάπτυξης του SARS-CoV-2 σε κύτταρα Vero. Virologica Sinica, 2020. 35(3): p. 348-350.
5. Park, B.K., et al., Διαφορική σηματοδότηση και παραγωγή ιού σε κύτταρα Calu-3 και Vero κατά τη μόλυνση με SARS-CoV-2. Biomolecules & Therapeutics, 2021. 29(3): p. 273.