Κύτταρα CHO στη βιοπαραγωγή: CHO: Εφαρμογές και Καινοτομίες

Προερχόμενη από την ωοθήκη ενός κινέζικου χάμστερ, ηκυτταρική σειρά CHO είναι μια δύναμη στην ιατρική και βιολογική έρευνα με το ευρύ φάσμα εφαρμογών της. Αυτή η σειρά κυττάρων θηλαστικών προσφέρει ατελείωτες δυνατότητες, από την παραγωγή ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών έως την έκφραση γονιδίων, τον έλεγχο τοξικότητας, τη διατροφή και τις γενετικές μελέτες.

Το άρθρο μας εμβαθύνει στον συναρπαστικό κόσμο των κυττάρων CHO, διερευνώντας πώς αυτά τα κύτταρα έχουν φέρει επανάσταση στη βιοφαρμακευτική έρευνα και έχουν ανοίξει τον δρόμο για θεραπείες που σώζουν ζωές. Ετοιμαστείτε να ξεκλειδώσετε τα μυστικά των πανίσχυρων κυττάρων CHO και να ανακαλύψετε πώς οδηγούν σε πρωτοποριακές εξελίξεις στην ιατρική και όχι μόνο! Θα μάθετε όλα όσα πρέπει να ξέρετε πριν ξεκινήσετε, όπως:

Τι είναι η κυτταρική σειρά CHO

Από την ίδρυσή τους το 1957 από τον Theodore T. Puck, τα κύτταρα ωοθήκης κινεζικού χάμστερ (CHO) έχουν γίνει βασικό στοιχείο της βιολογικής και ιατρικής έρευνας λόγω της ταχείας ανάπτυξής τους και της υψηλής παραγωγής πρωτεϊνών. Αυτά τα επιθηλιακά κύτταρα, που προέρχονται από την ωοθήκη του κινεζικού χάμστερ, χρησιμοποιούνται ευρέως στη βιοκατασκευή, τη γενετική, τον έλεγχο τοξικότητας, τη διατροφή και τις μελέτες γονιδιακής έκφρασης.

Τα κύτταρα CHO μπορούν να παράγουν πρωτεΐνες με μετα-μεταφραστικές τροποποιήσεις (PTMs) παρόμοιες με εκείνες που απαντώνται στον άνθρωπο. Είναι επίσης ανεπαρκή στη σύνθεση προλίνης και δεν εκφράζουν τον υποδοχέα του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR), γεγονός που τα καθιστά ιδανικά για τη διερεύνηση διαφόρων μεταλλάξεων του EGFR.

Στη βιοκατασκευή, τα κύτταρα CHO χρησιμοποιούνται ευρέως για την παραγωγή μονοκλωνικών αντισωμάτων, ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών και εμβολίων. Περισσότερες από 60 θεραπευτικές πρωτεΐνες που παρασκευάζονται με κύτταρα CHO έχουν εγκριθεί για παραγωγή και η χρήση τους συνεχίζει να επεκτείνεται. Το άρθρο μας εξετάζει τις αξιοσημείωτες ιδιότητες και τις ποικίλες εφαρμογές των κυττάρων CHO, τονίζοντας τον κρίσιμο ρόλο τους στην προώθηση των εξελίξεων στη βιοϊατρική και όχι μόνο. Ετοιμαστείτε να εξερευνήσετε τον συναρπαστικό κόσμο των κυττάρων CHO και να ανακαλύψετε τις απαράμιλλες δυνατότητές τους στη βιοϊατρική έρευνα!

Κύτταρα CHO: Για την παραγωγή ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών

Στη βιομηχανία βιοτεχνολογίας, τα κύτταρα ωοθήκης κινέζικου χάμστερ (CHO) χρησιμοποιούνται συχνά για τη δημιουργία βιοφαρμακευτικών προϊόντων, όπως μονοκλωνικά αντισώματα, ανασυνδυασμένες πρωτεΐνες και εμβόλια.

Αν και μπορεί να μην το γνωρίζετε, τα κύτταρα ωοθήκης κινεζικού χάμστερ (CHO) μπορεί να ευθύνονται αν έχετε ποτέ υποβληθεί σε θεραπεία μονοκλωνικών αντισωμάτων. Αυτά τα ευπροσάρμοστα κύτταρα χρησιμοποιούνται συχνά από τη βιοφαρμακευτική βιομηχανία για την παραγωγή ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών που χρησιμοποιούνται στη βιοϊατρική έρευνα, στη διάγνωση και σε μια ποικιλία θεραπευτικών ουσιών. Τα θεραπευτικά προϊόντα που βασίζονται σε πρωτεΐνες και ονομάζονται μονοκλωνικά αντισώματα (mAbs) χρησιμοποιούνται για τη θεραπεία διαφόρων ασθενειών, όπως ο καρκίνος, οι αυτοάνοσες παθήσεις και οι μολυσματικές ασθένειες. Επειδή εκτελούν μετα-μεταφραστικές τροποποιήσεις που μοιάζουν με εκείνες στα ανθρώπινα κύτταρα, τα κύτταρα CHO χρησιμοποιούνται συχνά για την παρασκευή mAbs. Αυτές οι τροποποιήσεις είναι απαραίτητες για τη σωστή λειτουργία αυτών των θεραπευτικών.

Οι πρωτεΐνες που δημιουργούνται μέσω γενετικής μηχανικής είναι γνωστές ως ανασυνδυασμένες πρωτεΐνες. Εκτός από ερευνητικά αντιδραστήρια, μπορούν επίσης να χρησιμοποιηθούν ως θεραπευτικά και διαγνωστικά. Επειδή μπορούν να υποβληθούν σε μετα-μεταφραστικές τροποποιήσεις και έχουν πολύπλοκες γλυκοζυλιώσεις που μοιάζουν με αυτές που βρίσκονται στα ανθρώπινα κύτταρα, τα κύτταρα CHO είναι ιδιαίτερα κατάλληλα για την παραγωγή ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών λόγω της γρήγορης ανάπτυξής τους, της υψηλής έκφρασης πρωτεϊνών και της ικανότητάς τους να εκφράζουν μεγάλες ποσότητες πρωτεϊνών. Με αποδόσεις που κυμαίνονται από 3 έως 10 γραμμάρια ανά λίτρο καλλιέργειας, η κυτταρική σειρά CHO αλλάζει τα δεδομένα στα βιοφαρμακευτικά προϊόντα χάρη στην απαράμιλλη ικανότητά της να παράγει μαζικά θεραπευτικές πρωτεΐνες. Τα κύτταρα CHO αποτελούν πλέον ζωτικό συστατικό της σύγχρονης βιοϊατρικής χάρη στη γενετική βελτιστοποίηση, η οποία αυξάνει την ικανότητά τους να παράγουν μεγάλες ποσότητες ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών.

Τα εμβόλια είναι βιοφαρμακευτικά προϊόντα που χρησιμοποιούνται για την πρόληψη και τη θεραπεία λοιμώξεων που προκαλούνται από ιούς και βακτήρια. Τα εμβόλια κατά του COVID-19 συγκαταλέγονται μεταξύ εκείνων που παρασκευάζονται με κύτταρα CHO. Οι επιστήμονες έχουν δημιουργήσει διάφορες τεχνικές, συμπεριλαμβανομένης της γενετικής μηχανικής, της βελτιστοποίησης των μέσων και της ανάπτυξης διεργασιών, για να βελτιώσουν την απόδοση των κυττάρων CHO στην παραγωγή βιοφαρμάκων. Οι τεχνικές αυτές έχουν οδηγήσει στη δημιουργία συστημάτων καλλιέργειας υψηλής απόδοσης και χαμηλού κόστους για την παραγωγή βιοφαρμακευτικών προϊόντων με τη χρήση κυττάρων CHO. Το ευρύ φάσμα εφαρμογών για τα κύτταρα CHO περιλαμβάνει:

Φαρμακευτική μονάδα παραγωγής.

Κύτταρα CHO στη βιοφαρμακευτική παραγωγή

Τα κύτταρα CHO χρησιμοποιούνται για την παραγωγή διαφόρων βιοθεραπευτικών, συμπεριλαμβανομένων ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών και μονοκλωνικών αντισωμάτων που χρησιμοποιούνται για τη θεραπεία ασθενειών όπως ο καρκίνος, οι αυτοάνοσες διαταραχές και οι μολυσματικές ασθένειες. Η υιοθέτηση των κυττάρων CHO στα βιοφαρμακευτικά προϊόντα οφείλεται σε μεγάλο βαθμό στην ικανότητά τους να εκτελούν μετα-μεταφραστικές τροποποιήσεις παρόμοιες με τα ανθρώπινα κύτταρα, καθιστώντας τα ιδανικούς ξενιστές θηλαστικών για την παραγωγή συμβατών με τον άνθρωπο θεραπευτικών πρωτεϊνών. Η ολοκληρωμένη κατανόηση των πρωτεϊνικών προφίλ των κυττάρων ξενιστών CHO και η εφαρμογή τεχνικών ELISA για τις πρωτεΐνες των κυττάρων ξενιστών είναι αναπόσπαστο στοιχείο για τη διασφάλιση της καθαρότητας και της ασφάλειας των βιοφαρμακευτικών προϊόντων που παράγονται σε συστήματα κυττάρων CHO. Ως αποτέλεσμα, τα κύτταρα CHO έχουν εδραιώσει τη θέση τους ως πολυλειτουργική πλατφόρμα στη βιομηχανία βιοτεχνολογίας.

Εξελίξεις στην παραγωγή αντισωμάτων από κύτταρα CHO

Τα κύτταρα CHO χρησιμοποιούνται ευρέως για την παραγωγή μονοκλωνικών αντισωμάτων, τα οποία έχουν φέρει επανάσταση στον τομέα της βιοϊατρικής παρέχοντας στοχευμένες θεραπείες για διάφορες ασθένειες. Τα κύτταρα CHO έχουν γίνει ο ακρογωνιαίος λίθος στην έκφραση ανασυνδυασμένων αντισωμάτων και στην παραγωγή πρωτεϊνικών θεραπευτικών ουσιών λόγω της ικανότητάς τους να διπλώνουν, να συναρμολογούν και να τροποποιούν σωστά τις ανθρώπινες πρωτεΐνες. Η παραγωγή αντισωμάτων από κύτταρα CHO έχει εξελιχθεί με τις βελτιώσεις στις τεχνικές κυτταροκαλλιέργειας και τη μηχανική των κυττάρων CHO, οδηγώντας σε υψηλής ποιότητας κύτταρα CHO, τα οποία είναι ζωτικής σημασίας για την ανάπτυξη βιοφαρμακευτικών προϊόντων. Για τη βελτιστοποίηση των συστημάτων κυττάρων CHO με σκοπό την αύξηση της αποδοτικότητας της παραγωγής αντισωμάτων έχουν εφαρμοστεί ολοκληρωμένες προσεγγίσεις βιοτεχνολογίας, συμπεριλαμβανομένης της τεχνολογίας DNA και εξελιγμένων μεθόδων κυτταροκαλλιέργειας.

Μοριακή βιολογία και μηχανική κυττάρων CHO

Η συγχώνευση τεχνικών μοριακής βιολογίας με την καλλιέργεια κυττάρων CHO οδήγησε στη δημιουργία διαγονιδιακών σειρών κυττάρων CHO και στη χειραγώγηση μεταλλαγμένων κυττάρων κινεζικού χάμστερ για την επίτευξη επιθυμητών χαρακτηριστικών. Αυτές οι πρόοδοι στην κυτταρική μηχανική και την τεχνολογία DNA διευκόλυναν την ανάπτυξη κυττάρων CHO ικανών να παράγουν συγκεκριμένες ανασυνδυασμένες πρωτεΐνες με υψηλή αποτελεσματικότητα. Η διερεύνηση προσεγγίσεων καλλιέργειας ευκαρυωτικών κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων των κυττάρων CHO και HeLa, συνέβαλε στην καλύτερη κατανόηση των κυτταρικών μηχανισμών και στη βελτιστοποίηση των καλλιεργειών κυττάρων θηλαστικών για την παραγωγή θεραπευτικών πρωτεϊνών.

Αλλά δεν είναι μόνο αυτό! Τα κύτταρα CHO έχουν και άλλες συναρπαστικές εφαρμογές στη βιοϊατρική έρευνα, όπως:

Έλεγχος τοξικότητας: Τα κύτταρα CHO χρησιμοποιούνται για την αξιολόγηση της τοξικότητας των φαρμάκων, συμπεριλαμβανομένων των αντικαρκινικών και αντι-ιικών θεραπευτικών παραγόντων. Για παράδειγμα, μια μελέτη διερεύνησε την ειδική για τον καρκίνο του μαστού δράση των λιπαρών οξέων που προέρχονται από μικροφύκη της Ανταρκτικής, χρησιμοποιώντας CHO ως κυτταρική σειρά ελέγχου.
Γονιδιακή έκφραση: Τα κύτταρα CHO χρησιμοποιούνται για τη σταθερή και παροδική έκφραση γονιδίων για μελέτες γονιδιακής λειτουργίας ή στοχευμένη παραγωγή πρωτεϊνών. Τα εργαλεία γονιδιακής επεξεργασίας χρησιμοποιούνται για την ανάπτυξη μοντέλων γονιδιακών knock-in και knockout σε κυτταρικές σειρές CHO.

Μελλοντικές προοπτικές στην έρευνα με κύτταρα CHO

Η συνεχιζόμενη έρευνα και ανάπτυξη στα συστήματα κυττάρων CHO επικεντρώνεται στην ενίσχυση της αποτελεσματικότητας και της ευελιξίας αυτών των κυττάρων στη βιοφαρμακευτική παραγωγή. Καθώς τα κύτταρα CHO παραμένουν στην πρωτοπορία των ανασυνδυασμένων πρωτεϊνοθεραπειών, ο ρόλος τους στο μέλλον της ιατρικής και της βιοτεχνολογίας είναι σημαντικός, υποσχόμενα νέες εξελίξεις στην ανάπτυξη αντισωμάτων και στην παραγωγή θεραπειών που σώζουν ζωές.

Ανακαλύψτε τα οφέλη των ισχυρών κυττάρων CHO

Ακολουθούν ορισμένα βασικά πλεονεκτήματα της κυτταρικής σειράς CHO που την καθιστούν ελκυστικό ερευνητικό εργαλείο.

Ευκολία στην καλλιέργεια: Οι διαδικασίες και οι συνθήκες καλλιέργειας της κυτταρικής σειράς CHO δεν είναι ιδιότροπες. Τα κύτταρα αυτά είναι ανθεκτικά και μπορούν να ανεχθούν ποικίλες μεταβολές της θερμοκρασίας και του pH. Συνεπώς, είναι ιδανικά για καλλιέργεια μεγάλης κλίμακας.
Μετα-μεταφραστικές τροποποιήσεις: Τα κύτταρα αυτά είναι παρόμοια με τα ανθρώπινα κύτταρα και μπορούν να παράγουν παρόμοιες μετα-μεταφραστικές τροποποιήσεις. Έτσι, τα κύτταρα CHO μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την παραγωγή βιοσυμβατών βιολογικών προϊόντων με εξαιρετική φαρμακευτική δράση.
Υψηλή παραγωγικότητα: Τα κύτταρα CHO χρησιμοποιούνται ευρέως για την παραγωγή υψηλών αποδόσεων ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών. Η γενετική βελτιστοποίηση της κυτταρικής σειράς CHO έχει οδηγήσει σε περίπου 3-10 γραμμάρια πρωτεΐνης ανά λίτρο καλλιέργειας.
Γονιδιακή έκφραση: Ως εκ τούτου, χρησιμοποιούνται συχνά για μελέτες παροδικής και σταθερής έκφρασης. Επιπλέον, χρησιμοποιούνται πολλά γενετικά εργαλεία για την ανάπτυξη μοντέλων γονιδιακών knock-in και knockout με τη χρήση της κυτταρικής σειράς CHO.
Κυβερνητικές εγκρίσεις: Τα κύτταρα CHO έχουν χρησιμοποιηθεί σε σχεδόν 50 βιοθεραπευτικά φάρμακα που έχουν εγκριθεί στις ΗΠΑ και την ΕΕ.
Χαμηλή ευαισθησία στους ιούς: Λόγω της προέλευσης από χάμστερ, ο κίνδυνος διάδοσης ανθρώπινων ιών είναι μειωμένος, μειώνοντας την απώλεια παραγωγής και αυξάνοντας τη βιοασφάλεια.

Βασικά χαρακτηριστικά των κυττάρων CHO

Μορφολογία: Τα κύτταρα CHO παρουσιάζουν εμφάνιση που μοιάζει με επιθηλιακά κύτταρα με επιμήκη και ινοβλαστικό σχήμα. Είναι προσκολλημένα και συνήθως αναπτύσσονται σε μονοστρωματικές στρώσεις.
Μέγεθος κυττάρων: Η μέση διάμετρος των κυττάρων CHO κυμαίνεται μεταξύ 12-14 μm.
Γονιδίωμα και πλουδισμός: Τα κύτταρα CHO είναι ανευπλοειδή, διαθέτοντας 21 χρωμοσώματα, γεγονός που διαφέρει από τον ευπλοειδή αριθμό χρωμοσωμάτων που απαντάται στο κινεζικό χάμστερ. Ο καρυότυπος των κυττάρων CHO χαρακτηρίζεται από πολλαπλές δομικές αναδιατάξεις, συμπεριλαμβανομένης της μερικής απώλειας του χρωμοσώματος 2 και του υλικού Χ.

Μικροσκοπικές εικόνες κυττάρων CHO: σε υψηλή συρροή (αριστερά) και σε συρροή περίπου 50% (δεξιά).

Σύγκριση της κυτταρικής σειράς CHO Vs CHO-K1

Από το 1956 που αναφέρθηκε η αρχική κυτταρική γραμμή CHO, έχουν δημιουργηθεί πολλές παραλλαγές της κυτταρικής γραμμής για διάφορους σκοπούς. Η CHO-K1 δημιουργήθηκε από έναν ενιαίο κλώνο κυττάρων CHO το 1957 και η CHO-DXB11 (επίσης γνωστή ως CHO-DUKX) δημιουργήθηκε στη συνέχεια μέσω μεταλλαξιγένεσης με μεθανοσουλφονικό αιθυλεστέρα. Ωστόσο, η χρησιμότητά τους ήταν περιορισμένη λόγω της ικανότητάς τους να επανέρχονται σε δραστηριότητα DHFR όταν μεταλλάσσονται. Αργότερα, τα κύτταρα CHO μεταλλάχθηκαν με ακτινοβολία γάμμα για την παραγωγή του CHO-DG44, στο οποίο και τα δύο αλληλόμορφα DHFR εξαλείφθηκαν πλήρως. Αυτά τα στελέχη με ανεπάρκεια DHFR απαιτούν γλυκίνη, υποξανθίνη και θυμιδίνη για την ανάπτυξη και χρησιμοποιούνται ευρέως για τη βιομηχανική παραγωγή πρωτεϊνών. Άλλα συστήματα επιλογής έχουν γίνει έκτοτε δημοφιλή και κύτταρα ξενιστές όπως τα CHO-K1, CHO-S και CHO-Pro minus έχουν αποδειχθεί ότι παράγουν υψηλά επίπεδα πρωτεϊνών. Λόγω της γενετικής αστάθειας, αυτές οι κυτταρικές σειρές συχνά καλλιεργούνται σε βιοαντιδραστήρες καλλιέργειας εναιωρήματος σε μέσα χωρίς ζωικά συστατικά ή σε χημικά καθορισμένα μέσα. Συζητήθηκαν επίσης οι πολυπλοκότητες της γενετικής των κυττάρων CHO και της κλωνικής παραγωγής.

Ξεκλειδώστε ανακαλύψεις με τα κύτταρα CHO μας

Δέκα συμβουλές για την καλλιέργεια κυττάρων CHO

Η κυτταρική σειρά CHO είναι μια κυτταρική σειρά χαμηλής συντήρησης που καλλιεργείται εύκολα.
Τα κύτταρα CHO έχουν γρήγορο χρόνο διπλασιασμού του πληθυσμού 14-17 ώρες.
Τα κύτταρα CHO είναι προσκολλημένα και αναπτύσσονται ως μονοστρώματα ή μπορούν να προσαρμοστούν για να αναπτυχθούν σε εναιώρημα.
Υποκαλλιεργήστε τα κύτταρα CHO στο 80-90% confluency χρησιμοποιώντας Accutase.
Σποράστε κύτταρα CHO σε πυκνότητα κυττάρων 1 x¹⁰⁴ κύτταρα/cm2 για να προκύψει μια συνεκτική μονοστοιβάδα σε περίπου 4 ημέρες.
Για βέλτιστη καλλιέργεια, χρησιμοποιήστε ένα μίγμα DMEM και Ham's F12 50:50 συμπληρωμένο με 5% FBS και L-γλουταμίνη.
Ανανεώστε το μέσο ανάπτυξης 2-3 φορές την εβδομάδα.
Καλλιεργήστε τα κύτταρα CHO σε υγροποιημένο επωαστήρα συμπληρωμένο με αέριο CO2 5% στους 37°C.
Αποθηκεύστε τα κύτταρα CHO στην αέρια ή υγρή φάση του υγρού αζώτου (-196°C).
Ακολουθήστε την κατευθυντήρια γραμμή επιπέδου βιοασφάλειας 1 για το χειρισμό και την καλλιέργεια της κυτταρικής σειράς CHO.

Πρωτόκολλα, βίντεο και πρόσφατες δημοσιεύσεις για τα κύτταρα CHO

Ακολουθούν ορισμένοι εξαιρετικοί πόροι που μπορείτε να εξερευνήσετε για να μάθετε σχετικά με την καλλιέργεια και τη συντήρηση της κυτταρικής σειράς CHO.

Ένα εκτενές πρωτόκολλο κυτταρικής καλλιέργειας για τα κύτταρα CHO: Αυτός ο σύνδεσμος μπορεί να σας βοηθήσει να μάθετε τα πάντα για την υποκαλλιέργεια και τη διαμόλυνση κυττάρων CHO.
Κύτταρα CHO: Αυτός ο ιστότοπος θα παρέχει βασικές πληροφορίες για την καλλιέργεια κυττάρων σχετικά με τη σειρά κυττάρων CHO, συμπεριλαμβανομένης της διάσπασης, της αποθήκευσης, της κατάψυξης και της απόψυξης των κυττάρων κ.λπ.
Απόψυξη κυττάρων CHO: Αυτό το βίντεο δείχνει ένα υποδειγματικό πρωτόκολλο απόψυξης για κατεψυγμένα κύτταρα CHO.

Πρωτόκολλα διαμόλυνσης για την κυτταρική σειρά CHO

Τα κύτταρα CHO επιδέχονται σε μεγάλο βαθμό τόσο την παροδική όσο και τη σταθερή διαμόλυνση γονιδίων. Ακολουθούν ορισμένοι πόροι που παρέχουν χρήσιμες πληροφορίες σχετικά με πρωτόκολλα διαμόλυνσης κυτταρικής σειράς CHO.

Διαμόλυνση κυττάρων CHO: Αυτό το δημοσιευμένο άρθρο παρέχει ένα πρωτόκολλο παροδικής διαμόλυνσης για τη σειρά κυττάρων CHO με χρήση γραμμικής πολυαιθυλενοϊμίνης (PEI).
Μέθοδοι διαμόλυνσης για κύτταρα CHO: Αυτό το άρθρο εξηγεί διαφορετικές στρατηγικές για την αποτελεσματική διαμόλυνση των κυτταρικών σειρών CHO με τη χρήση διαφορετικών αντιδραστηρίων διαμόλυνσης.
Μεταβατική διαμόλυνση κυττάρων CHO: Αυτό το βίντεο χρησιμοποιεί εικόνες για να εξηγήσει βασικές έννοιες σχετικά με τις μελέτες παροδικής έκφρασης σε κύτταρα CHO.

430,00 €*

Περιεχόμενο: 1.5 milliliter

Τιμές χωρίς φόρους συν έξοδα αποστολής

cryovial

Αριθμός προϊόντος: 603479

Ενδιαφέρουσες ερευνητικές δημοσιεύσεις που χρησιμοποιούν κύτταρα CHO

Ακολουθούν περιλήψεις διαφόρων μελετών που έχουν χρησιμοποιήσει κύτταρα CHO:

Μελέτη: "SARS-CoV-2 spike ectodomain μέσω παροδικής γονιδιακής έκφρασης σε κύτταρα CHO" (2021)
- Σκοπός: Έκφραση της εκτοδομεΐνης αιχμής SARS-CoV-2 σε κύτταρα CHO με τη χρήση τριών μεθόδων παροδικής διαμόλυνσης για υψηλή παραγωγικότητα.
- Μεθοδολογία: Τα κύτταρα CHO διαμολύνθηκαν με πλασμίδια που κωδικοποιούν την εκτοδομεΐνη αιχμής SARS-CoV-2 πλήρους μήκους χρησιμοποιώντας τρεις μεθόδους παροδικής διαμόλυνσης. Η έκφραση των πρωτεϊνών αξιολογήθηκε με ELISA και Western blot.
- Βασικά ευρήματα: Και οι τρεις μέθοδοι παροδικής διαμόλυνσης έδειξαν υψηλά επίπεδα πρωτεϊνικής έκφρασης, με την υψηλότερη απόδοση να επιτυγχάνεται με τη μέθοδο της πολυαιθυλενιμίνης.
Μελέτη: "Κατασκευή μιας σταθερής κυτταρικής σειράς CHO για την έκφραση ενός αντιγόνου εμβολίου του ιού MERS-coronavirus" (2018)
- Σκοπός: Παραγωγή αντιγόνου του ιού MERS-coronavirus σε κύτταρα CHO για χρήση ως μελλοντικό υποψήφιο εμβόλιο.
- Μεθοδολογία: Τα κύτταρα CHO διαμολύνθηκαν με ένα πλασμίδιο που κωδικοποιεί το αντιγόνο του ιού MERS-coronavirus και επιλέχθηκαν για σταθερή έκφραση με τη χρήση γενετικίνης. Η έκφραση των πρωτεϊνών αξιολογήθηκε με ELISA και Western blot.
- Βασικά ευρήματα: Η ανάλυση των πρωτεϊνών έγινε με τη μέθοδο της βλεννογονικής ανάλυσης: Η σταθερή κυτταρική σειρά CHO παρουσίασε υψηλά επίπεδα πρωτεϊνικής έκφρασης και σταθερότητα σε πολλαπλά περάσματα.
Μελέτη: "Κυτταροτοξική δράση λιπαρών οξέων από μακροφύκη της Ανταρκτικής στην ανάπτυξη ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων του μαστού" (2018)
- Σκοπός: Χρήση κυττάρων CHO ως ελέγχου για την αξιολόγηση της τοξικότητας αντικαρκινικών παραγόντων έναντι φυσιολογικών κυττάρων.
- Μεθοδολογία: Τα κύτταρα CHO καλλιεργήθηκαν και υποβλήθηκαν σε θεραπεία με λιπαρά οξέα από τα μακροφύκη της Ανταρκτικής και η βιωσιμότητα των κυττάρων αξιολογήθηκε με τη δοκιμασία MTT.
- Βασικά ευρήματα: Οι εξετάσεις έδειξαν, ότι τα κυτταρικά κύτταρα δεν είναι δυνατόν να καταστραφούν: Τα λιπαρά οξέα από τα μακροφύκη της Ανταρκτικής δεν εμφάνισαν κυτταροτοξικές επιδράσεις στα κύτταρα CHO, γεγονός που υποδηλώνει πιθανή χρήση ως αντικαρκινικός παράγοντας με επιλεκτικότητα για τα καρκινικά κύτταρα.
Μελέτη: "Η απενεργοποίηση του γονιδίου της κασπάσης-7 βελτιώνει την έκφραση της ανασυνδυασμένης πρωτεΐνης σε κυτταρική σειρά CHO μέσω της διακοπής του κυτταρικού κύκλου στη φάση G2/M" (2022)
- Σκοπός: Η γενετική τροποποίηση των κυττάρων CHO για τη βελτίωση της έκφρασης ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών.
- Μεθοδολογία: Το γονίδιο της κασπάσης-7 εξουδετερώθηκε σε κύτταρα CHO με τη χρήση της τεχνολογίας CRISPR/Cas9 και η έκφραση των πρωτεϊνών αξιολογήθηκε με Western blot και μικροσκοπία φθορισμού.
- Βασικά ευρήματα: Η ανάλυση των αποτελεσμάτων της μελέτης έγινε με τη μέθοδο της ανίχνευσης του κασσιπώματος: Η απενεργοποίηση του γονιδίου της κασπάσης-7 σε κύτταρα CHO είχε ως αποτέλεσμα τη βελτίωση της έκφρασης των πρωτεϊνών, πιθανότατα λόγω της διακοπής του κυτταρικού κύκλου στη φάση G2/M που προκαλείται από την απώλεια της κασπάσης-7.
Μελέτη: "Ανάπτυξη κυτταρικής σειράς CHO για τη σταθερή παραγωγή ανασυνδυασμένων αντισωμάτων έναντι της ανθρώπινης MMP9" (2015)
- Σκοπός: Παραγωγή μονοκλωνικών αντισωμάτων έναντι της ανθρώπινης πρωτεΐνης MMP9 σε κύτταρα CHO.
- Μεθοδολογία: Τα κύτταρα CHO διαμολύνθηκαν με πλασμίδια που κωδικοποιούν το αντίσωμα έναντι της ανθρώπινης MMP9 και επιλέχθηκαν για σταθερή έκφραση με τη χρήση γενετικίνης. Η έκφραση των πρωτεϊνών αξιολογήθηκε με ELISA και Western blot.
- Βασικά ευρήματα: Η ανάλυση της πρωτεΐνης έγινε με τη μέθοδο της ανίχνευσης: Η σταθερή κυτταρική σειρά CHO παρουσίασε υψηλά επίπεδα έκφρασης του αντισώματος και σταθερότητα σε πολλαπλά περάσματα, γεγονός που υποδηλώνει πιθανή χρήση σε θεραπευτικές εφαρμογές που στοχεύουν στην ανθρώπινη MMP9.

Συχνές ερωτήσεις σχετικά με τα κύτταρα CHO

Αναφορές

Reinhart, D., et al., Bioprocessing of Recombinant CHO-K1, CHO-DG44, and CHO-S: CHO Expression hosts favor είτε την παραγωγή mAb είτε τη σύνθεση βιομάζας. Biotechnology journal, 2019. 14(3): p. 1700686.
Pan, X., et al., Metabolic characterization of a CHO cell size increase phase in fed-batch cultures. Εφαρμοσμένη μικροβιολογία και βιοτεχνολογία, 2017. 101: p. 8101-8313.
Turilova, V.I., T.S. Goryachaya, and T.K. Yakovleva, Chinese hamster ovary cell line DXB-11: chromosomal instability and karyotype heterogeneity. Molecular Cytogenetics, 2021, 14(1): p. 1-12.
Hunter, M., et al., βελτιστοποίηση της έκφρασης πρωτεϊνών σε κύτταρα θηλαστικών. Τρέχοντα πρωτόκολλα στην επιστήμη των πρωτεϊνών, 2019. 95(1): p. e77.
Nyon, M.P., et al., Engineering a stable CHO cell line for the expression of a MERS-coronavirus vaccine antigen. Vaccine, 2018. 36(14): p. 1853-1862.
Pacheco, B.S., et al., Cytotoxic activity of fatty acids from Antarctic macroalgae on the growth of human breast cancer cells. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology, 2018. 6: p. 185.
Ryu, J., et al., Ανάπτυξη κυτταρικής σειράς CHO για τη σταθερή παραγωγή ανασυνδυασμένων αντισωμάτων έναντι της ανθρώπινης MMP9. BMC biotechnology, 2022. 22(1): p. 8.