NCI-H441-Zellen
















Einblicke in die NCI-H441-Zelllinie
Beschreibung | Die NCI-H441-Zelllinie, auch bekannt als H441, die 1982 aus dem Pleuraerguss eines männlichen Patienten mit papillärem Adenokarzinom der Lunge gewonnen wurde, ist eine gut charakterisierte epitheliale Adenokarzinom-Zelllinie. Diese Zellen werden in der biologischen Forschung aufgrund ihrer Relevanz für die Biologie des Lungenepithels häufig verwendet, was sie zu einem wichtigen In-vitro-Modell für Studien über den transepithelialen Transport und die epitheliale Barrierefunktion macht. Die NCI-H441-Zelllinie ist ein wichtiges Instrument, um unser Verständnis der Arzneimitteldisposition und Tumorkinetik in der Lunge zu verbessern. Ihre Verwendung in 3D-Zellkulturmodellen ermöglicht eine detaillierte Untersuchung der Aufnahme, Verteilung, Verstoffwechselung und Ausscheidung von Arzneimitteln in der Lungenumgebung, die den Bedingungen in vivo sehr nahe kommt. Aufgrund ihres Ursprungs und ihrer Eigenschaften sind NCI-H441-Zellen besonders wertvoll für die Forschung, die sich auf die distale Lunge und damit verbundene Krankheiten, einschließlich Lungenadenokarzinom, konzentriert. Sie dienen als stabiles und relevantes Zellmodell für das Verständnis der Mechanismen von Lungenkrankheiten und die Bewertung potenzieller therapeutischer Maßnahmen. NCI-H441-Zellen sind für 3D-Zellkulturen, Hochdurchsatz-Screening und toxikologische Studien von großer Bedeutung und liefern wertvolle Daten über zelluläre Reaktionen und die Wirksamkeit therapeutischer Wirkstoffe. Eine bemerkenswerte Anwendung der menschlichen Zelllinie H441 ist ihre Verwendung als Transfektionswirt für die Expression des pulmonalen Surfactant-Proteins (SP-B) unter Verwendung des Glühwürmchen-Luciferase-Reportersystems, was ihre Rolle bei biopharmazeutischen Inhalations- und transepithelialen Transportstudien unterstreicht. Diese Fähigkeit sowie die Expression der mRNA und des Proteins für das Haupt-Surfactant-Apoprotein (SP-A) unterstreichen die Bedeutung der Zelllinie bei der Untersuchung von Lungenfunktionen und -erkrankungen, insbesondere bei solchen, die die Surfactant-Regulation und -Synthese betreffen. |
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Organismus | Menschen |
Gewebe | Lunge |
Krankheit | Papilläres Adenokarzinom |
Metastasierender Ort | Perikarderguss |
Synonyme | H441, H-441, NCI-H441-4, NCI-441, NCIH441 |
Eigenschaften
Alter | 33 Jahre |
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Geschlecht | Männlich |
Ethnizität | Europäisch |
Zelltyp | Club-Zelle |
Wachstumseigenschaften | Adhärent |
Identifikatoren / Biosicherheit / Zitate
Zitat | NCI-H441 (Cytion-Katalognummer 305219) |
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Biosicherheitsstufe | 1 |
Genetisches Profil
Karyotyp | Die NCI-H441-Zelllinie weist einen hyperdiploiden Karyotyp auf, mit einer durchschnittlichen Chromosomenzahl von 52, obwohl Variationen von 44 bis 59 Chromosomen dokumentiert wurden. |
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Umgang mit NCI-H441-Zellen
Nährboden | RPMI 1640, w: 2,1 mM stabiles Glutamin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820700a) |
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Mittlere Supplemente | Supplemente des Mediums mit 10% FBS |
Passage-Lösung | Accutase |
Verdopplungszeit | 58 Stunden |
Subkultivierung | Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten. |
Splitverhältnis | 1:3 bis 1:8 |
Medienwechsel | 2 bis 3 Mal pro Woche |
Einfriermedium | CM-1 (Cytion Katalognummer 800100) |
Handhabung von kryokonservierten Kulturen |
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Qualitätskontrolle
Sterilität | Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen. Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft. |
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STR profile |
Amelogenin: x,y
CSF1PO: 11,12
D13S317: 9
D16S539: 9,13
D5S818: 11,12
D7S820: 10
TH01: 9,3
TPOX: 8,1
vWA: 17
D3S1358: 18
D21S11: 32,2
D18S51: 18,19
Penta E: 12
Penta D: 10,12
D8S1179: 8,14
FGA: 24,25
|
Erforderliche Produkte
Ursprünglich für das Wachstum menschlicher Leukämiezellen in Suspensions
- und Monolayer-Kulturen konzipiert, hat sich RPMI 1640 Medium durch Modifikationen von Forschern und kommerziellen Anbietern weiterentwickelt und ist heute für eine Vielzahl von Säugetierzellen geeignet. Es ist außergewöhnlich kompatibel mit Zelllinien wie HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, Astrozyten und Karzinomen.
RPMI 1640 Medium hebt sich von anderen Zellkulturmedien durch seine einzigartige Zusammensetzung ab. Es enthält eine erhebliche Menge an Phosphat, Aminosäuren und Vitaminen. Insbesondere enthält es Biotin, Vitamin B12 und PABA, die in Eagle's Minimal Essential Medium oder Dulbecco's Modified Eagle Medium nicht vorhanden sind. Darüber hinaus weist RPMI 1640 Medium deutlich erhöhte Konzentrationen der Vitamine Inositol und Cholin auf. Es enthält jedoch keine Proteine, Lipide oder Wachstumsfaktoren. Daher ist in der Regel eine Ergänzung mit 10 % fötalem Rinderserum (FBS) erforderlich, um optimale Bedingungen für das Zellwachstum zu schaffen.
Das Puffersystem von RPMI 1640 Medium basiert auf Natriumbicarbonat (2,0 g/L) und erfordert eine 5-10%ige CO2-Umgebung, um einen physiologisch angemessenen pH-Wert zu erhalten. Durch die Zugabe des Reduktionsmittels Glutathion unterscheidet sich dieses Medium weiter von anderen.
Die einzigartige Zusammensetzung dieser RPMI-Formulierung umfasst 2,1 mM stabiles Glutamin, 2,0 Gramm pro Liter NaHCO3 und Phenolrot.
Qualitätskontrolle
pH = 7,2 +/
- 0,02 bei 20-25°C.
Jede Charge wurde auf Sterilität und Abwesenheit von Mykoplasmen und Bakterien getestet.
Wartung
Kühl aufbewahren bei +2°C bis +8°C im Dunkeln. Einfrieren und Erwärmen bis zu +37° C mindern die Qualität des Produkts.
Erwärmen Sie das Medium nicht auf mehr als 37° C und verwenden Sie keine unkontrollierbaren Wärmequellen (z.B. Mikrowellengeräte).
Wenn nur ein Teil des Mediums verwendet werden soll, nehmen Sie diese Menge aus der Flasche und erwärmen Sie sie bei Raumtemperatur.
Die Haltbarkeit eines jeden Mediums mit Ausnahme des Basismediums beträgt 8 Wochen ab Herstellungsdatum.
Zusammensetzung
Bestandteile
mg/L
Anorganische Salze
Kalziumnitrat x 4H2O
100,00
Magnesiumsulfat wasserfrei
48,83
Kaliumchlorid
400,00
Natriumchlorid
5,950.00
di-Natriumhydrogenphosphat
800,49
Sonstige Bestandteile
D(+)-Glucose wasserfrei
2,000.00
Glutathion (red.)
1,00
Phenol rot
5,00
NaHCO3
2,000.00
Aminosäuren
L-Arginin x HCl
241,86
L-Asparagin x H2O
56,82
L-Asparaginsäure
20,00
L-Cystin x 2HCl
65,19
L-Alanyl-L-Glutamin
447,00
L-Glutaminsäure
20,00
Glycin
10,00
L-Histidin x HCl x H2O
20,27
L-Hydroxyprolin
20,00
L-Isoleucin
50,00
L-Leucin
50,00
L-Lysin x HCl
40,00
L-Methionin
15,00
L-Phenylalanin
15,00
L-Prolin
20,00
L-Serin
30,00
L-Threonin
20,00
L-Tryptophan
5,00
L-Tyrosin x 2Na
28,83
L-Valin
20,00
Vitamine
p-Aminobenzoesäure
1,00
D-(+)-Biotin
0,20
D-Calciumpantothenat
0,25
Cholinchlorid
3,00
Folsäure
1,00
myo-Inositol
35,00
Nicotinamid
1,00
Pyridoxin x HCl
1,00
Riboflavin
0,20
Thiamin x HCl
1,00
Vitamin B12
0.005
Ursprünglich für das Wachstum menschlicher Leukämiezellen in Suspensions
- und Monolayer-Kulturen konzipiert, hat sich RPMI 1640 Medium durch Modifikationen von Forschern und kommerziellen Anbietern weiterentwickelt und ist heute für eine Vielzahl von Säugetierzellen geeignet. Es ist außergewöhnlich kompatibel mit Zelllinien wie HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, Astrozyten und Karzinomen.
RPMI 1640 Medium hebt sich von anderen Zellkulturmedien durch seine einzigartige Zusammensetzung ab. Es enthält eine erhebliche Menge an Phosphat, Aminosäuren und Vitaminen. Insbesondere enthält es Biotin, Vitamin B12 und PABA, die in Eagle's Minimal Essential Medium oder Dulbecco's Modified Eagle Medium nicht vorhanden sind. Darüber hinaus weist RPMI 1640 Medium deutlich erhöhte Konzentrationen der Vitamine Inositol und Cholin auf. Es enthält jedoch keine Proteine, Lipide oder Wachstumsfaktoren. Daher ist in der Regel eine Ergänzung mit 10 % fötalem Rinderserum (FBS) erforderlich, um optimale Bedingungen für das Zellwachstum zu schaffen.
Das Puffersystem von RPMI 1640 Medium basiert auf Natriumbicarbonat (2,0 g/L) und erfordert eine 5-10%ige CO2-Umgebung, um einen physiologisch angemessenen pH-Wert zu erhalten. Die Zugabe des Reduktionsmittels Glutathion unterscheidet dieses Medium weiter von anderen.
Dieses RPMI 1640-Medium enthält 4,5 Gramm Glukose pro Liter.
Qualitätskontrolle
pH = 7,2 +/
- 0,02 bei 20-25°C.
Jede Charge wurde auf Sterilität und Abwesenheit von Mykoplasmen und Bakterien getestet.
Wartung
Kühl aufbewahren bei +2°C bis +8°C im Dunkeln. Einfrieren und Erwärmen bis zu +37° C mindern die Qualität des Produkts.
Erwärmen Sie das Medium nicht auf mehr als 37° C und verwenden Sie keine unkontrollierbaren Wärmequellen (z.B. Mikrowellengeräte).
Wenn nur ein Teil des Mediums verwendet werden soll, nehmen Sie diese Menge aus der Flasche und erwärmen Sie sie bei Raumtemperatur.
Die Haltbarkeit eines jeden Mediums mit Ausnahme des Basismediums beträgt 8 Wochen ab Herstellungsdatum.
Zusammensetzung
Bestandteile
mg/L
Anorganische Salze
Kalziumnitrat x 4H2O
100,00
Magnesiumsulfat wasserfrei
48,83
Kaliumchlorid
400,00
Natriumchlorid
5450,00
di-Natriumhydrogenphosphat
800,49
Sonstige Bestandteile
D(+)-Glucose wasserfrei
4500,00
Glutathion (red.)
1,00
HEPES
2383,00
Phenol rot
5,00
Natriumpyruvat
110,00
Aminosäuren
L-Arginin x HCl
241,86
L-Asparagin x H2O
56,82
L-Asparaginsäure
20,00
L-Cystin x 2HCl
65,19
L-Glutamin
300,00
L-Glutaminsäure
20,00
Glycin
10,00
L-Histidin x HCl x H2O
20,27
L-Hydroxyprolin
20,00
L-Isoleucin
50,00
L-Leucin
50,00
L-Lysin x HCl
40,00
L-Methionin
15,00
L-Phenylalanin
15,00
L-Prolin
20,00
L-Serin
30,00
L-Threonin
20,00
L-Tryptophan
5,00
L-Tyrosin x 2Na
28,83
L-Valin
20,00
Vitamine
p-Aminobenzoesäure
1,00
D-(+)-Biotin
0,20
D-Calciumpantothenat
0,25
Cholinchlorid
3,00
Folsäure
1,00
myo-Inositol
35,00
Nicotinamid
1,00
Pyridoxin x HCl
1,00
Riboflavin
0,20
Thiamin x HCl
1,00
Vitamin B12
0,01
NaHCO3
1500,00
- eine schonende Alternative zu Trypsin
Accutase ist eine Zellablösungslösung, die die Zellkulturindustrie revolutioniert. Es ist eine Mischung aus proteolytischen und kollagenolytischen Enzymen, die die Wirkung von Trypsin und Kollagenase nachahmt. Im Gegensatz zu Trypsin enthält Accutase keine Säugetier
- oder Bakterienbestandteile und ist sehr viel schonender für die Zellen, was es zu einer idealen Lösung für die routinemäßige Ablösung von Zellen von Standardplastikgefäßen für die Gewebekultur und adhäsionsbeschichteten Plastikgefäßen macht. In diesem Blogbeitrag gehen wir auf die Vorteile und Einsatzmöglichkeiten von Accutase ein und zeigen, wie es die Zellkultur verändert.
Vorteile von Accutase
Accutase hat mehrere Vorteile gegenüber herkömmlichen Trypsinlösungen. Erstens kann es immer dann eingesetzt werden, wenn eine sanfte und effiziente Ablösung von adhärenten Zelllinien erforderlich ist, und ist somit ein direkter Ersatz für Trypsin. Zweitens funktioniert Accutase sehr gut bei embryonalen und neuronalen Stammzellen, und es hat sich gezeigt, dass die Lebensfähigkeit dieser Zellen nach der Passage erhalten bleibt. Drittens bewahrt Accutase die meisten Epitope für die anschließende durchflusszytometrische Analyse, was es ideal für die Analyse von Zelloberflächenmarkern macht.
Außerdem muss Accutase bei der Passage von adhärenten Zellen nicht neutralisiert werden. Durch die Zugabe weiterer Medien nach der Zellteilung wird die Accutase verdünnt, so dass sie nicht mehr in der Lage ist, Zellen abzulösen. Dadurch entfällt der Schritt der Inaktivierung, und die Zellkulturtechniker sparen Zeit. Schließlich muss Accutase nicht aliquotiert werden, und eine Flasche ist im Kühlschrank 2 Monate lang haltbar.
Anwendungen von Accutase
Accutase ist ein direkter Ersatz für Trypsinlösung und kann für die Passage von Zelllinien verwendet werden. Darüber hinaus eignet sich Accutase gut zum Ablösen von Zellen für die Analyse vieler Zelloberflächenmarker mittels Durchflusszytometrie und für die Zellsortierung. Andere nachgeschaltete Anwendungen der Accutase-Behandlung umfassen die Analyse von Zelloberflächenmarkern, Viruswachstumstests, Zellproliferation, Tumorzellmigrationsassays, routinemäßige Zellpassage, Produktionsskalierung (Bioreaktor) und Durchflusszytometrie.
Zusammensetzung von Accutase
Accutase enthält keine Bestandteile von Säugetieren oder Bakterien und ist eine natürliche Enzymmischung mit proteolytischer und kollagenolytischer Enzymaktivität. Es ist in einer viel niedrigeren Konzentration als Trypsin und Kollagenase formuliert, wodurch es weniger toxisch und sanfter, aber genauso wirksam ist.
Wirksamkeit von Accutase
Accutase ist nachweislich effizient bei der Ablösung von Primär
- und Stammzellen und erhält die hohe Lebensfähigkeit der Zellen im Vergleich zu Enzymen tierischen Ursprungs wie Trypsin. 100 % der Zellen werden nach 10 Minuten zurückgewonnen, und dank der Selbstverdauung von Accutase ist es unbedenklich, Zellen bis zu 45 Minuten in Accutase zu belassen.
Zusammenfassung
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass Accutase eine leistungsstarke Lösung ist, die das Spiel in der Zellkultur verändert. Mit seiner sanften Natur, Effizienz und Vielseitigkeit ist Accutase die ideale Alternative zu Trypsin. Wenn Sie nach einer zuverlässigen und effizienten Lösung für die Zellablösung suchen, ist Accutase die richtige Lösung für Sie.