NCI-H1299-RFP-Zellen
800,00 €*
Die Produkte werden gefroren auf Trockeneis in Kryoröhrchen versandt. Jedes Kryoröhrchen enthält in der Regel 3 ×106 Zellen für adhärente Linien oder 5 ×106 Zellen für Suspensionslinien (nähere Angaben finden Sie in der CoA der Charge)
Allgemeine Informationen
| Beschreibung | Die NCI-H1299-RFP-Zellen, die so modifiziert wurden, dass sie einen Reporter im DAPK1-Gen enthalten, sind nicht nur für die Untersuchung spezifischer Genaktivierung nützlich, sondern ermöglichen auch ein umfassenderes Verständnis dafür, wie Zellen auf epigenetische Medikamente insgesamt reagieren. Mit Hilfe einer Technik, die als Cap Analysis of Gene Expression (CAGE) bezeichnet wird, waren die Forscher in der Lage, Veränderungen an den Stellen im Genom aufzuzeigen, an denen die Transkription als Reaktion auf die Behandlung mit DNMTi (DAC), HDACi (SAHA oder SB939) oder deren Kombinationen beginnt. Diese Methode zeigt nicht nur die erwartete Reaktivierung des DAPK1-Gens, sondern auch das Auftreten neuer Transkriptionsstartstellen, so genannter behandlungsinduzierter, nicht annotierter TSSs (TINATs), vor allem unter Medikamentenbehandlung. Diese neuen Startstellen befinden sich in der Regel in Regionen des Genoms, in denen normalerweise keine Proteine gebildet werden, und führen zur Entstehung neuer RNA-Moleküle, die potenziell für Proteine kodieren könnten. Weitere Analysen zeigen, dass diese neuen RNA-Moleküle manchmal mit bereits vorhandenen fusionieren können, um so genannte TINAT-Exon-Fusionstranskripte zu bilden. Je nachdem, wie diese Transkripte gespleißt werden, können sie zu neuen, atypischen Proteinen werden. Dieser Prozess wurde durch Labortechniken bestätigt, die zeigen, dass diese Transkripte tatsächlich zur Produktion neuer Proteinformen führen können. Diese Proteine könnten innerhalb der Zelle abnorm interagieren oder vom Immunsystem als fremd erkannt werden, was neue Angriffspunkte für die Krebstherapie bieten könnte. Die Aktivierung dieser TINATs ist mit komplizierten Veränderungen der DNA-Methylierung und der Histonmodifikationen verbunden, was eine komplexe Interaktion zwischen diesen epigenetischen Faktoren unter medikamentöser Behandlung verdeutlicht. Insbesondere der kombinierte Einsatz von DAC und SB939 zeigt eine größere Wirkung und steigert die Expression dieser neuartigen Transkripte stärker als die alleinige Anwendung eines der beiden Medikamente. Das Verständnis dieser Wechselwirkungen und ihrer Ergebnisse trägt zur Klärung der Frage bei, wie epigenetische Therapien das Zellverhalten verändern, und eröffnet Möglichkeiten für neue Krebsbehandlungen, die sich diese komplexen molekularen Veränderungen zunutze machen. |
|---|---|
| Organismus | Menschen |
| Gewebe | Lunge |
| Krankheit | Großzelliges Karzinom |
Merkmale
| Morphologie | Epithelähnlich |
|---|---|
| Wachstumseigenschaften | Adhärent |
Regulatorische Daten
| Zitat | NCI-H1299-RFP (Cytion-Katalognummer 300272) |
|---|---|
| Biosicherheitsstufe | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| CellosaurusAccession | CVCL_xB25 |
Biomolekulare Daten
Handhabung
| Nährboden | RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiles Glutamin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820700a) |
|---|---|
| Supplemente | Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS |
| Dissoziationsreagenz | Accutase |
| Subkultivierung | Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten. |
| Splitverhältnis | Empfohlen wird ein Verhältnis von 1:3 bis 1:4 |
| Medienwechsel | 2 bis 3 Mal pro Woche |
| Einfriermedium | Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren. |
| Auftauen und Kultivierung von Zellen |
|
| Inkubationsatmosphäre | 37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre. |
| Kolbenbeschichtung | Um eine optimale Anheftung und Lebensfähigkeit nach dem Auftauen zu gewährleisten, empfehlen wir die Verwendung von kollagenbeschichteten Flaschen oder Platten. |
| Verfahren zum Einfrieren | Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager. |
| Versandbedingungen | Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager. |
| Lagerungsbedingungen | Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel. |
Qualitätskontrolle / Genetisches Profil / HLA
| Sterilität | Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen. Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft. |
|---|---|
| STR-Profil |
Amelogenin: x,y
PEZ6: LCLC-97TM1
|
-
Erforderliche Produkte
Erforderliche Produkte
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiles Glutamin, w: 2,0 g/L NaHCO3RPMI 1640 Medium, auch bekannt als RPMI-Medium, ist ein äußerst vielseitiges Zellkulturmedium, das in der biologischen Forschung zur Kultivierung verschiedener Säugetierzellen verwendet wird. Dieses Medium wurde 1966 von George E. Moore, Robert E. Gerner und H. Addison Franklin am renommierten Roswell Park Comprehensive Cancer Center entwickelt und hat seinen Namen von seinem Ursprung am Roswell Park Memorial Institute (RPMI).
Ursprünglich für das Wachstum menschlicher Leukämiezellen in Suspensions
- und Monolayerkulturen konzipiert, hat sich RPMI 1640 Medium durch Modifikationen von Forschern und kommerziellen Anbietern weiterentwickelt und ist heute für eine Vielzahl von Säugetierzellen geeignet. Es ist außergewöhnlich kompatibel mit Zelllinien wie HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, Astrozyten und Karzinomen.
RPMI 1640 Medium hebt sich von anderen Zellkulturmedien durch seine einzigartige Zusammensetzung ab. Es enthält eine erhebliche Menge an Phosphat, Aminosäuren und Vitaminen. Insbesondere enthält es Biotin, Vitamin B12 und PABA, die in Eagle's Minimal Essential Medium oder Dulbecco's Modified Eagle Medium nicht vorhanden sind. Außerdem weist RPMI 1640 Medium deutlich erhöhte Konzentrationen der Vitamine Inositol und Cholin auf. Es enthält jedoch keine Proteine, Lipide oder Wachstumsfaktoren. Daher ist in der Regel eine Ergänzung mit 10 % fötalem Rinderserum (FBS) erforderlich, um optimale Bedingungen für das Zellwachstum zu schaffen.
Das Puffersystem von RPMI 1640 Medium basiert auf Natriumbicarbonat und erfordert eine 5-10%ige CO2-Umgebung, um einen physiologisch angemessenen pH-Wert zu erhalten. Durch die Zugabe des Reduktionsmittels Glutathion unterscheidet sich dieses Medium weiter von anderen.
Qualitätskontrolle
Steril gefiltert
Lagerung und Haltbarkeit
Vor Licht geschützt bei +2°C bis +8°C lagern.
Nach dem Öffnen bei 4°C lagern und innerhalb von 6-8 Wochen aufbrauchen.
Versandbedingungen
Umgebungstemperatur
Pflege
Gekühlt bei +2°C bis +8°C im Dunkeln aufbewahren. Vermeiden Sie Einfrieren und häufiges Erwärmen auf +37°C, da dies die Produktqualität beeinträchtigt.
Erwärmen Sie das Medium nicht über 37°C und verwenden Sie keine unkontrollierten Wärmequellen wie Mikrowellengeräte.
Wenn nur ein Teil des Mediums verwendet werden soll, entnehmen Sie die erforderliche Menge und erwärmen Sie sie vor der Verwendung auf Raumtemperatur.
Zusammensetzung
Kategorie
Bestandteile
Konzentration (mg/L)
Aminosäuren
Glycin
10.00
L-Alanyl-L-Glutamin
434.40
L-Arginin
200.00
L-AsparaginH2O
56.82
L-Asparaginsäure
20.00
L-Cystin 2HCl
65.20
L-Glutaminsäure
20.00
L-Histidin HClH2O
20.27
L-Hydroxy-L-Prolin
20.00
L-Isoleucin
50.00
L-Leucin
50.00
L-Lysin HCl
40.00
L-Methionin
15.00
L-Phenylalanin
15.00
L-Prolin
20.00
L-Serin
30.00
L-Threonin
20.00
L-Tryptophan
5.00
L-Tyrosin 2Na 2H2O
28.83
L-Valin
20.00
Vitamine
p-Amino-Benzoesäure
1.00
D-Biotin
0.20
Cholinchlorid
3.00
D-Calciumpantothenat
0.25
Folsäure
1.00
myo-Inositol
35.00
Nicotinamid
1.00
Pyridoxin HCl
1.00
Riboflavin
0.20
Thiamin HCl
1.00
Vitamin B12
0.005
Anorganische Salze
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Andere Bestandteile
D-Glucose
2000.00
L-Glutathion Reduziert
1.00
Phenolrot Natriumsalz
5.3025,00 €*AccutaseVarianten: 100 mlAccutase Zelldissoziationsreagenz
- eine schonende Alternative zu Trypsin
Accutase ist eine Zellablösungslösung, die die Zellkulturindustrie revolutioniert. Es ist eine Mischung aus proteolytischen und kollagenolytischen Enzymen, die die Wirkung von Trypsin und Kollagenase nachahmt. Im Gegensatz zu Trypsin enthält Accutase keine Säugetier
- oder Bakterienbestandteile und ist sehr viel schonender für die Zellen, was es zu einer idealen Lösung für die routinemäßige Ablösung von Zellen von Standardplastikgefäßen für die Gewebekultur und adhäsionsbeschichteten Plastikgefäßen macht. In diesem Blogbeitrag gehen wir auf die Vorteile und Einsatzmöglichkeiten von Accutase ein und zeigen, wie es die Zellkultur verändert.
Vorteile von Accutase
Accutase hat mehrere Vorteile gegenüber herkömmlichen Trypsinlösungen. Erstens kann es immer dann eingesetzt werden, wenn eine sanfte und effiziente Ablösung von adhärenten Zelllinien erforderlich ist, und ist somit ein direkter Ersatz für Trypsin. Zweitens funktioniert Accutase sehr gut bei embryonalen und neuronalen Stammzellen, und es hat sich gezeigt, dass die Lebensfähigkeit dieser Zellen nach der Passage erhalten bleibt. Drittens bewahrt Accutase die meisten Epitope für die anschließende durchflusszytometrische Analyse, was es ideal für die Analyse von Zelloberflächenmarkern macht.
Außerdem muss Accutase bei der Passage von adhärenten Zellen nicht neutralisiert werden. Durch die Zugabe weiterer Medien nach der Zellteilung wird die Accutase verdünnt, so dass sie nicht mehr in der Lage ist, Zellen abzulösen. Dadurch entfällt der Schritt der Inaktivierung, und die Zellkulturtechniker sparen Zeit. Schließlich muss Accutase nicht aliquotiert werden, und eine Flasche ist im Kühlschrank 2 Monate lang haltbar.
Anwendungen von Accutase
Accutase ist ein direkter Ersatz für Trypsinlösung und kann für die Passage von Zelllinien verwendet werden. Darüber hinaus eignet sich Accutase gut zum Ablösen von Zellen für die Analyse vieler Zelloberflächenmarker mittels Durchflusszytometrie und für die Zellsortierung. Andere nachgeschaltete Anwendungen der Accutase-Behandlung umfassen die Analyse von Zelloberflächenmarkern, Viruswachstumstests, Zellproliferation, Tumorzellmigrationsassays, routinemäßige Zellpassage, Produktionsskalierung (Bioreaktor) und Durchflusszytometrie.
Zusammensetzung von Accutase
Accutase enthält keine Bestandteile von Säugetieren oder Bakterien und ist eine natürliche Enzymmischung mit proteolytischer und kollagenolytischer Enzymaktivität. Es ist in einer viel niedrigeren Konzentration als Trypsin und Kollagenase formuliert, wodurch es weniger toxisch und sanfter, aber genauso wirksam ist.
Wirksamkeit von Accutase
Accutase ist nachweislich effizient bei der Ablösung von Primär
- und Stammzellen und erhält die hohe Lebensfähigkeit der Zellen im Vergleich zu Enzymen tierischen Ursprungs wie Trypsin. 100 % der Zellen werden nach 10 Minuten zurückgewonnen, und dank der Selbstverdauung von Accutase ist es unbedenklich, Zellen bis zu 45 Minuten in Accutase zu belassen.
Zusammenfassung
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass Accutase eine leistungsstarke Lösung ist, die das Spiel in der Zellkultur verändert. Mit seiner sanften Natur, Effizienz und Vielseitigkeit ist Accutase die ideale Alternative zu Trypsin. Wenn Sie nach einer zuverlässigen und effizienten Lösung für die Zellablösung suchen, ist Accutase die richtige Lösung für Sie.75,00 €*PBSPhosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) ist eine weit verbreitete Pufferlösung in der biologischen und chemischen Forschung. Sie spielt eine entscheidende Rolle bei der Aufrechterhaltung des pH-Gleichgewichts und der Osmolarität während verschiedener experimenteller Verfahren, einschließlich Gewebeverarbeitung und Zellkultur. Unsere PBS-Lösung wird sorgfältig mit hochreinen Inhaltsstoffen formuliert, um Stabilität und Zuverlässigkeit bei jedem Experiment zu gewährleisten. Die Osmolarität und die Ionenkonzentration unserer PBS-Lösung sind denen des menschlichen Körpers sehr ähnlich, so dass sie isotonisch und für die meisten Zellen ungiftig ist.
Zusammensetzung unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung ist eine pH-angepasste Mischung aus hochreinen Phosphatpuffern und Kochsalzlösungen. Bei einer 1fachen Arbeitskonzentration enthält sie:
8000 mg/L Natriumchlorid (NaCl)
200 mg/L Kaliumchlorid (KCl)
1150 mg/L Natriumphosphat dibasisch wasserfrei (Na2HPO4)
200 mg/L Kaliumphosphat einbasig wasserfrei (KH2PO4)
Diese Zusammensetzung gewährleistet ein optimales pH
- und Ionengleichgewicht und eignet sich für eine breite Palette biologischer Anwendungen.
Anwendungen unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung ist ideal für verschiedene Anwendungen in der biologischen Forschung. Aufgrund ihrer isotonischen und ungiftigen Eigenschaften eignet sie sich für die Verdünnung von Substanzen und die Spülung von Zellbehältern. PBS-Lösungen, die EDTA enthalten, sind wirksam, um anhaftende und verklumpte Zellen abzulösen. Zweiwertige Metalle wie Zink sollten jedoch nicht zu PBS hinzugefügt werden, da dies zu Ausfällungen führen kann. In solchen Fällen werden Good's Puffer empfohlen. Außerdem ist unsere PBS-Lösung eine akzeptable Alternative zu viralen Transportmedien für den Transport und die Lagerung von RNA-Viren, einschließlich SARS-CoV-2.
Qualitätskontrolle
Steril gefiltert
Lagerung und Haltbarkeit
Vor Licht geschützt bei +2°C bis +25°C lagern.
Nach dem Öffnen bei 2°C bis 25°C lagern und innerhalb von 24 Monaten verbrauchen.
Versandbedingungen
Umgebungstemperatur
Pflege
Gekühlt bei +2°C bis +8°C im Dunkeln aufbewahren. Vermeiden Sie Einfrieren und häufiges Erwärmen auf +37°C, da dies die Produktqualität beeinträchtigt.
Erwärmen Sie das Medium nicht über 37°C und verwenden Sie keine unkontrollierten Wärmequellen wie Mikrowellengeräte.
Wenn nur ein Teil des Mediums verwendet werden soll, entnehmen Sie die erforderliche Menge und erwärmen Sie sie vor der Verwendung auf Raumtemperatur.
Zusammensetzung
Kategorie
Bestandteile
Konzentration (mg/L)
Salze
Kaliumchlorid
200
Kaliumphosphat monobasisch wasserfrei
200
Natriumchlorid
8000
Natriumphosphat zweibasisch wasserfrei
115020,00 €* -
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