MOLT-4-Zellen








Einführung in die MOLT-4-Zelllinie
Beschreibung | MOLT-4 ist eine T-Lymphoblasten-Zelllinie, die aus dem peripheren Blut eines 19-jährigen männlichen Patienten mit akuter lymphoblastischer Leukämie (ALL) im Rezidiv 1971 gewonnen wurde. Sie ist eine Schwesterzelllinie von MOLT-3, während MOLT-4 ein ungewöhnliches T-Zell-Antigenrezeptor-Gamma-Ketten-Gen-Rearrangement (T-Gamma) aufweist. MOLT-4-Zellen haben eine Verdopplungszeit von etwa 30 Stunden, wachsen in Suspension und sind in unbehandelten Nacktmäusen, mit Anti-Lymphozyten-Serum behandelten Mäusen und x-bestrahlten Mäusen tumorigen. MOLT-4-Zellen haben eine hypertetraploide Chromosomenzahl, wobei die modale Chromosomenzahl von 95 in 24 % der Zellen vorkommt, zeigen aber stabile und wiederkehrende strukturelle Anomalien der Chromosomen und eine längere Telomerlänge. MOLT-4 exprimiert eine Vielzahl von T-Zell-Markern wie CD1, CD2, CD3A, CD3B, CD3C, CD4, CD5, CD6 und CD7. Sie exprimieren auch hohe Mengen an terminaler Desoxynukleotidyltransferase (TdT). Die MOLT-4-Zelllinie produziert kein Immunglobulin oder Epstein-Barr-Virus. Der Patient, von dem die Zellen stammen, hatte zuvor eine multiresistente Chemotherapie erhalten. Es liegt eine G -> A-Mutation am Codon 248 des p53-Gens vor, und P53 wird nicht exprimiert. Die Linie war ursprünglich mit Mykoplasmen kontaminiert, wurde aber inzwischen mit Antibiotika geheilt. |
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Organismus | Menschen |
Gewebe | Peripheres Blut |
Krankheit | Akute lymphoblastische T-Leukämie bei Erwachsenen |
Synonyme | Molt-4, MOLT 4, Molt 4, MOLT.4, MOLT4, Molt4, GM02219, GM02219C, GM2219C, GM02219D |
Spezifikationen
Alter | 19 Jahre |
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Geschlecht | Männlich |
Ethnizität | Kaukasisch |
Morphologie | Runde Zellen |
Zelltyp | T-Lymphozyt |
Wachstumseigenschaften | Aufhängung |
Dokumentation
Zitat | MOLT-4 (Cytion Katalognummer 300115) |
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Biosicherheitsstufe | 1 |
Genetische Merkmale
Proteinexpression | p53 positiv |
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Antigenexpression | CD1 (49%), CD2 (35%), CD3 A (26%) B (33%) C (34%), CD4 (55%), CD5 (72%), CD6 (22%), CD7 (77%) |
Viren | Die Zellen produzieren kein Immunglobulin oder Epstein-Barr-Virus (Minowada, 1972). |
Produkte | Es werden hohe Mengen an terminaler Desoxynukleotidyltransferase (TdT) produziert |
Mutationsprofil | G -> A-Mutation am Codon 248 des p53-Gens, wird P53 nicht exprimiert (Rodrigues, 1990). |
Karyotyp | Hypertetraploid. Modalzahl: 96. Zwei X- und zwei Y-Chromosomen. |
Methoden der Zellkultivierung
Nährboden | RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiles Glutamin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820700a) |
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Mittlere Supplemente | Supplemente des Mediums mit 10% FBS |
Subkultivierung | Die Kulturen durch regelmäßige Zugabe oder Austausch des Mediums aufrechterhalten. Kulturen mit einer Dichte von 2 x 10^5 Zellen/ml anlegen und die Zellkonzentration für optimales Wachstum im Bereich von 1 x 10^5 bis 1 x 10^6 Zellen/ml halten |
Aussaatdichte | 1 x 10^5 Zellen/cm^2 |
Medienwechsel | 2 bis 3 Mal pro Woche |
Wiederherstellung durch Einfrieren | 24 bis 48 Stunden |
Einfriermedium | Verwenden Sie als Kryokonservierungsmedium ein komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion-Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren. |
Handhabung von kryokonservierten Kulturen |
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Qualitätssicherung von Molt-4-Leukämiezellen
Sterilität | Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen. Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft. |
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STR profile |
CSF1PO: 11,12
D13S317: 12,13
D16S539: 11,14
D5S818: 12
D7S820: 8,10,11
TH01: 6,8
TPOX: 8
vWA: 17,18
D3S1358: 15,16
D21S11: 28,29,30
D18S51: 12,13,17
Penta E: 14,15,16
Penta D: 8,12,13
D8S1179: 9,13,14
FGA: 22,24
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HLA-Allele |
A*: '01:01:01, '25:01:01
B*: '18:01:01, '57:01:01
C*: '06:02:01, '12:03:01
DRB1*: '07:01:01, '12:01:01
DQA1*: '02:01:01, '05:05:01
DQB1*: '02:02:01, '03:01:01
DPB1*: '02:01:02
E: '01:01:01G
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Erforderliche Produkte
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) ist eine weit verbreitete Pufferlösung in der biologischen und chemischen Forschung. Sie spielt eine entscheidende Rolle bei der Aufrechterhaltung des pH-Gleichgewichts und der Osmolarität während verschiedener experimenteller Verfahren, einschließlich Gewebeverarbeitung und Zellkultur. Unsere PBS-Lösung wird sorgfältig mit hochreinen Inhaltsstoffen formuliert, um Stabilität und Zuverlässigkeit bei jedem Experiment zu gewährleisten. Die Osmolarität und die Ionenkonzentration unserer PBS-Lösung sind denen des menschlichen Körpers sehr ähnlich, so dass sie isotonisch und für die meisten Zellen ungiftig ist.
Zusammensetzung unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung ist eine pH-angepasste Mischung aus hochreinen Phosphatpuffern und Kochsalzlösungen. Bei einer 1fachen Arbeitskonzentration enthält sie:
8000 mg/L Natriumchlorid (NaCl)
200 mg/L Kaliumchlorid (KCl)
1150 mg/L Natriumphosphat dibasisch wasserfrei (Na2HPO4)
200 mg/L Kaliumphosphat einbasig wasserfrei (KH2PO4)
Diese Zusammensetzung gewährleistet ein optimales pH
- und Ionengleichgewicht und eignet sich für eine breite Palette biologischer Anwendungen.
Anwendungen unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung ist ideal für verschiedene Anwendungen in der biologischen Forschung. Aufgrund ihrer isotonischen und ungiftigen Eigenschaften eignet sie sich für die Verdünnung von Substanzen und die Spülung von Zellbehältern. PBS-Lösungen, die EDTA enthalten, sind wirksam, um anhaftende und verklumpte Zellen abzulösen. Zweiwertige Metalle wie Zink sollten jedoch nicht zu PBS hinzugefügt werden, da dies zu Ausfällungen führen kann. In solchen Fällen werden Good's Puffer empfohlen. Außerdem ist unsere PBS-Lösung eine akzeptable Alternative zu viralen Transportmedien für den Transport und die Lagerung von RNA-Viren, einschließlich SARS-CoV-2.
Qualitätskontrolle
Steril gefiltert
Lagerung und Haltbarkeit
Vor Licht geschützt bei +2°C bis +25°C lagern.
Nach dem Öffnen bei 2°C bis 25°C lagern und innerhalb von 24 Monaten verbrauchen.
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Umgebungstemperatur
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Gekühlt bei +2°C bis +8°C im Dunkeln aufbewahren. Vermeiden Sie Einfrieren und häufiges Erwärmen auf +37°C, da dies die Produktqualität beeinträchtigt.
Erwärmen Sie das Medium nicht über 37°C und verwenden Sie keine unkontrollierten Wärmequellen wie Mikrowellengeräte.
Wenn nur ein Teil des Mediums verwendet werden soll, entnehmen Sie die erforderliche Menge und erwärmen Sie sie vor der Verwendung auf Raumtemperatur.
Zusammensetzung
Kategorie
Bestandteile
Konzentration (mg/L)
Salze
Kaliumchlorid
200
Kaliumphosphat monobasisch wasserfrei
200
Natriumchlorid
8000
Natriumphosphat zweibasisch wasserfrei
1150