Wilms8-celler

800,00 €*

Produkterne leveres frosne på tøris i kryorør. Hvert kryorør indeholder typisk 3 × 10 ⁶ celler til adhærente linjer eller 5 × 10⁶ celler til suspensionslinjer (se batch-COA for detaljer).

Priser ekskl. afgifter plus forsendelsesomkostninger

cryovial

Produktnummer: 300416

Sikkerhedsdatablad

Produktblad

Aftale om overførsel af materiale

Beskrivelse	Wilms8-cellelinjen stammer fra en primær Wilms-tumor hos en pædiatrisk patient med en germline WT1-mutation. Denne cellelinje er karakteriseret ved en homozygot nonsensmutation i WT1-genet (c.1168 C>T, p.R390X), hvilket fører til et fuldstændigt tab af WT1-funktion. WT1 er afgørende for normal nyreudvikling, og dets inaktivering er et almindeligt træk i visse aggressive undertyper af Wilms-tumor, især dem, der udviser mesenkymal differentiering. Wilms8 er derfor en værdifuld model til at studere effekten af WT1-tab på tumorigenese, især i forbindelse med Wilms-tumorer, der opstår med en udpræget stromal komponent. Ud over WT1-mutationen har Wilms8-celler en mutation i CTNNB1-genet (p.S45A), som koder for β-Catenin, en vigtig regulator af Wnt-signalvejen. Mutationen på serin 45 forstyrrer den normale fosforyleringsproces, der fører til nedbrydning af β-Catenin, hvilket forårsager stabilisering og ophobning i kernen. Dette resulterer i en konstitutiv aktivering af Wnt-signalering, som driver celleproliferation og bidrager til de onkogene egenskaber ved Wilms8-cellelinjen. Samspillet mellem WT1-tab og afvigende Wnt-signalering i Wilms8 gør den til en afgørende model for at forstå de molekylære mekanismer, der ligger til grund for disse veje i Wilms-tumorbiologi. Wilms8-celler udviser en mesenkymfænotype, der er karakteriseret ved ekspression af vimentin og fravær af epitelmarkører som cytokeratin. Dette stemmer overens med den stromale differentiering, der blev observeret i den oprindelige tumor. Cellerne udviser en begrænset evne til at gennemgå yderligere mesenkymal differentiering, såsom at danne muskellignende celler under specifikke forhold. Proteomiske analyser af Wilms8 har afsløret aktivering af flere receptortyrosinkinaser (RTK'er), herunder PDGFRβ og AXL, som er involveret i nøgleprocesser som celleoverlevelse, migration og spredning. Aktiveringen af downstream-signalveje, især MAPK- og PI3K/AKT-vejene, bidrager yderligere til Wilms8-cellernes aggressive egenskaber. Samlet set fungerer Wilms8-cellelinjen som et vigtigt værktøj til at undersøge det molekylære grundlag for Wilms-tumor, der er drevet af WT1-tab og afvigende Wnt-signalering. Dens genetiske og fænotypiske egenskaber gør den til en robust platform til at studere samspillet mellem disse kritiske veje og til at identificere potentielle terapeutiske mål i Wilms-tumorer med en stromal komponent.
Organisme	Menneske
Væv	Nyre
Sygdom	Wilms-tumor
Anvendelser	In vitro-cellekulturmodel. Biokemiske undersøgelser

Alder	8 måneder
Køn	Mand
Etnicitet	Kaukasisk
Morfologi	Spindelformet
Celletype	Wilms-celler
Vækstegenskaber	Vedhæftende

Citat	Wilms8 (Cytion katalognummer 300416)
Biosikkerhedsniveau	1
NCBI_TaxID	9606
CellosaurusAccession	CVCL_A5SJ

Mutationsprofil	WT1-mutationsstatus: homozygot c.1168C>T, p.390x, LOH: , CTNNB1-mutationsstatus: heterozygot TCT>GCT, p.S45A

Kulturmedium	MSCGM-kit (fra Lonza)
Dissociationsreagens	Accutase
Subkulturer	Fjern det gamle medium fra de klæbende celler, og vask dem med PBS, der ikke indeholder calcium og magnesium. Brug 3-5 ml PBS til T25-kolber og 5-10 ml til T75-kolber. Dæk derefter cellerne helt med Accutase, brug 1-2 ml til T25-kolber og 2,5 ml til T75-kolber. Lad cellerne inkubere ved stuetemperatur i 8-10 minutter for at løsne dem. Efter inkubationen blandes cellerne forsigtigt med 10 ml medium for at resuspendere dem, og centrifugeres derefter ved 300xg i 3 minutter. Kassér supernatanten, resuspender cellerne i frisk medium, og overfør dem til nye kolber, der allerede indeholder frisk medium.
Frys medium	Som kryopræserveringsmedium bruger vi komplet vækstmedium (inklusive FBS) + 10 % DMSO for tilstrækkelig levedygtighed efter optøning eller CM-1 (Cytion-katalognummer 800100), som indeholder optimerede osmobeskyttende stoffer og metaboliske stabilisatorer for at forbedre genopretningen og reducere kryo-induceret stress.
Optøning og dyrkning af celler	Bekræft, at hætteglasset forbliver dybfrosset ved levering, da cellerne sendes på tøris for at opretholde optimale temperaturer under transport. Ved modtagelsen skal du enten straks opbevare kryohætteglasset ved temperaturer under -150 °C for at sikre, at cellernes integritet bevares, eller gå videre til trin 3, hvis øjeblikkelig dyrkning er påkrævet. Ved øjeblikkelig dyrkning optøs hætteglasset hurtigt ved at nedsænke det i et 37 °C varmt vandbad med rent vand og et antimikrobielt middel og røre forsigtigt i 40-60 sekunder, indtil der kun er en lille isklump tilbage. Udfør alle efterfølgende trin under sterile forhold i en flowhætte, og desinficer kryovialet med 70 % ethanol, før det åbnes. Åbn forsigtigt det desinficerede hætteglas, og overfør cellesuspensionen til et 15 ml centrifugerør, der indeholder 8 ml kulturmedium ved stuetemperatur, og bland forsigtigt. Centrifuger blandingen ved 300 x g i 3 minutter for at adskille cellerne, og kassér omhyggeligt supernatanten, der indeholder resterende frysemedium. Resuspender forsigtigt cellepelleten i 10 ml frisk dyrkningsmedium. For klæbende celler deles suspensionen mellem to T25-kulturkolber; for suspensionskulturer overføres alt mediet til en T25-kolbe for at fremme effektiv celleinteraktion og -vækst. Overhold etablerede subkulturprotokoller for fortsat vækst og vedligeholdelse af cellelinjen, hvilket sikrer pålidelige eksperimentelle resultater.
Inkubationsatmosfære	37°C, 5%_CO2, befugtet atmosfære.
Overfladebehandling af flasker	Ingen
Fryseprocedure	Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.
Forsendelsesbetingelser	Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.
Opbevaringsforhold	For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Sterilitet	Mycoplasma-kontaminering udelukkes ved hjælp af både PCR-baserede assays og luminescensbaserede mycoplasma-detektionsmetoder. For at sikre, at der ikke er nogen bakterie-, svampe- eller gærforurening, underkastes cellekulturerne daglige visuelle inspektioner.
HLA-alleler	A: '02:01:01, '03:01:01 B: '15:01:01, '37:01:01 C: '04:01:01, '06:02:01 DRB1: '08:01:01G, '11:01:01 DQA1: '04:01:01, '05:05:01 DQB1: '03:01:01, '04:02:01 DPB1*: '03:01:01, '06:01:01 E: '01:03:02

Hvis du kun vil bruge Cytion-cellelinjer til intern forskning på et enkelt forskningssted, skal du udfylde og underskrive vores materialeoverførselsaftale (MTA) og sende den sammen med din ordre.

Ved kommerciel anvendelse – herunder, men ikke begrænset til, arbejde mod betaling, kvalitetskontrol, produktfrigivelse, diagnostisk brug eller regulatoriske undersøgelser – bedes du udfylde formularen til tilsigtet brug, så vi kan udarbejde en aftale, der er skræddersyet til dit projekt.

Bemærk: MTA gælder kun for visse cellelinjer. Hvis denne meddelelse og MTA-dokumentet vises på en produktside, er aftalen gældende. For cellelinjer, der ikke er omfattet af MTA, vises der ingen henvisning til aftalen. MTA er ikke gyldig for kunder i Amerika, Kina eller Taiwan. Kontakt vores amerikanske afdeling for at modtage den relevante aftale.

Wilms8-celler

Generel information

Karakteristika

Regulatoriske data

Biomolekylære data

Håndtering

Kvalitetskontrol / Genetisk profil / HLA

Aftale om overførsel af materiale