Udgivet: 2023 | Senest revideret: maj 2026

Forståelse af "passagenummer"

Begrebet "passagenummer" er centralt inden for cellekultur og henviser til det antal gange, en cellelinje er blevet subkultiveret eller overført til et nyt vækstmedium efter den indledende genoplivning fra kryopræservering eller modtagelse fra en referencecellebank. Denne måleenhed er afgørende for at spore en cellekulturs afstamning og historie.

Procesoversigt

• I rutinemæssig cellekulturpraksis overføres celler til et nyt medium, når de når en bestemt tæthed, for at opretholde væksten og forhindre overkonfluens. Hver sådan overførsel registreres som en passage.
• Traditionelt, når vi for eksempel modtog en cellelinje ved passage 60 fra deponenten, fortsatte vi fra dette passagenummer og øgede det ved hver subkultur. Denne praksis bevarede ganske vist den historiske tråd, men førte ofte til høje passagenumre fra starten. I betragtning af den omfattende og ofte årtier lange brug af visse cellelinjer, såsom HeLa-linjen, der blev etableret i 1951, er det ikke muligt at bestemme det samlede antal passager siden cellelinjens oprettelse.
• For at øge klarheden og kvaliteten i vores cellekulturprocesser reviderede vi denne tilgang i begyndelsen af 2023. Nu, når vi starter en kultur fra et nyt hætteglas, uanset passagenummeret fra deponenten, nulstiller vi og begynder at tælle forfra fra passage 1 for hver fremstillet batch.

Begrundelse

Passering er en afgørende procedure for at sikre sundheden og anvendeligheden af cellekulturer til forskning. Når celler vokser for meget, oplever de kontaktinhibering, hvilket reducerer deres proliferationshastighed, hvilket kan påvirke eksperimentelle resultater negativt. For at afbøde disse problemer implementerer Cytion strenge kontroller af de celletætheder, hvor subkultivering finder sted, og opretholder dermed lave passagenumre under fremstillingen af deres cellelinjer. Denne forholdsregel hjælper med at forhindre de negative virkninger af overdreven passagering, såsom morfologiske anomalier, ændringer i væksthastigheden og genetisk drift, som kan få cellerne til at afvige markant fra deres oprindelige tilstand. Langvarig subkultivering kan også øge risikoen for mikrobiel kontaminering.

Vores løfte

Vi sikrer, at de celler, der leveres til forskere, er så tæt på den oprindelige genetiske sammensætning og de fænotypiske egenskaber som muligt, hvilket øger pålideligheden af eksperimentelle data. Desuden bidrager Cytion ved omhyggeligt at dokumentere hver passage til sporbarheden og reproducerbarheden af forskningen, et tilsagn, der afspejler de høje standarder for praksis inden for cellekultur. Forskere opfordres til at føre nøjagtige optegnelser over passagenumre, både på dyrkningsbeholderne og i deres laboratoriejournaler, som reference for deres cellekulturers sundhed og historie.

Tips og almindelige fejl

Det er vigtigt at følge den korrekte protokol, men det kan være lige så vigtigt at forstå de almindelige faldgruber. Cellekulturprocedurer er følsomme over for små afvigelser i teknik, timing og reagenskvalitet. Følgende tips afspejler de bedste fremgangsmåder, som Cytions videnskabelige team anbefaler på baggrund af omfattende erfaring med cellekultur.

• Forvarm altid reagenser til 37 °C før brug for at minimere termisk chok for cellerne.
• Arbejd hurtigt, men omhyggeligt — minimer den tid, cellerne tilbringer uden for inkubatoren.
• Brug certificerede, mycoplasma-testede reagenser for at undgå kontaminering, der kan kompromittere forsøgsresultaterne.
• Dokumenter hvert trin, herunder passagenummer, dato og observationer af cellemorfologi.
• Valider din protokol med et lille pilotforsøg, før du opskalerer, for at undgå spild af dyre reagenser.

Anbefalede Cytion-reagenser

Cytion tilbyder en række validerede cellekulturreagenser, der er specielt designet til at understøtte denne protokol. Alle reagenser er testet for ydeevne med almindeligt anvendte cellelinjer og leveres med fuld dokumentation. Besøg cytion.com/Media-Reagents for at se hele sortimentet.