Udgivet: 2023 | Senest revideret: maj 2026

Omfattende vejledning til bedste praksis inden for cellebanker

Oversigt over håndtering af cellekulturer

Effektiv håndtering af cellekulturer er afgørende for at bevare deres integritet til forsknings- og terapeutiske formål. Kontinuerlig eller langvarig dyrkning af cellelinjer kan føre til forskellige komplikationer, såsom:

• Mikrobiel kontaminering: Åbne kulturer er sårbare over for forskellige mikrobielle infektioner, der kan ændre cellernes adfærd og levedygtighed.
• Ændring af egenskaber: Vigtige cellulære egenskaber, såsom antigenekspression eller antistofproduktion, kan gå tabt over tid.
• Genetisk variation: Genomisk ustabilitet kan forekomme i cellelinjer, der er kendt for deres ustabile karyotyper, hvilket kan føre til upålidelige eksperimentelle resultater.
• Begrænset levetid: Visse celletyper har et begrænset antal delinger, før de går ind i senescens og holder op med at proliferere.
• Risiko for krydskontaminering: Langvarig dyrkning øger risikoen for, at en cellelinje kontaminerer en anden, hvilket resulterer i fejlagtige data.
• Ressourceintensitet: Langvarige kulturer kræver flere forbrugsvarer og øget arbejdskraft, hvilket øger omkostningerne betydeligt.

Strategisk tilgang til cellebanker

Et cellebanksystem er en strategisk tilgang til at mindske de ovennævnte risici. Det anbefalede system er Master Cell Banking-systemet, som omfatter følgende trin:

1. Indledende karantæne: Nyligt erhvervede cellekulturer bør isoleres og behandles under strenge karantæneforhold for at forhindre laboratoriekontaminering.
2. Etablering af token-lager: Efter den indledende kulturudvidelse bør et lille antal ampuller (3-5) kryopræserveres som et token-lager til brug i nødsituationer.
3. Oprettelse af mastercellebank: Udvid kulturerne fra en ampul i token-beholdningen for at oprette en mastercellebank, der består af et større antal ampuller (10-20 eller flere, afhængigt af det forventede forbrug).
4. Streng kvalitetskontrol: En delmængde af mastercellebanken gennemgår grundige kvalitetskontroltests, som omfatter vurdering af cellernes levedygtighed, bekræftelse af fraværet af mikrobielle kontaminanter og eventuelt gennemførelse af virus- og ægthedstest.
5. Udvikling af en arbejds-cellebank: En del af mastercellebanken bruges derefter til at oprette en arbejds-cellebank, som er den primære kilde til aktiv forskning og anvendelse.

Detaljerede protokoller for kvalitetskontrol

Kvalitetskontrol er en afgørende del af vedligeholdelsen af en cellebank. Den omfatter:

• Test af levedygtighed og antal: Sikring af, at cellerne er levende og til stede i tilstrækkeligt antal.
• Mikrobiel screening: Regelmæssig testning for bakterier, svampe og mycoplasma for at forhindre kompromitterede cellekulturer.
• Autentificeringsprocedurer: Bekræftelse af cellelinjernes identitet gennem metoder som DNA-profilering.

Anbefalinger til opbevaring og brug

De korrekte opbevaringsbetingelser er som følger:

• Dedikerede opbevaringsfaciliteter: Brug faciliteter, der er specielt designet til opbevaring af cellebanker, såsom flydende nitrogentanke eller elektriske frysere, for at forhindre krydskontaminering og sikre levedygtighed på lang sigt.

Konsistens og kvalitetssikring:

• Konsistent cellemateriale: Et cellebanksystem sikrer, at alt materiale, der anvendes i eksperimenter, stammer fra en konsistent kilde.
• Kontrolleret antal passager: Ved at anvende celler inden for et kontrolleret antal passager minimeres eksperimentel variabilitet.
• Just-in-time-dyrkningspraksis: Dyrkning af celler kun når det er nødvendigt bidrager til at bevare cellelinjens oprindelige egenskaber og reducerer omkostningerne forbundet med opretholdelse af kontinuerlige kulturer.