Hep3B-celler: Forskning og opdagelser inden for levercellekarcinom
HEP3B er en immortaliseret, humant afledt hepatocytkarcinomcellelinje. Den anvendes i vid udstrækning i forskning inden for hepatotoksicitet og lægemiddelmetabolisme. HEP3B har en betydelig transfektionseffektivitet, og derfor anvendes disse celler ofte til at studere udvikling og progression af leverkræft samt terapeutiske interventioner. Denne artikel dækker alle nødvendige oplysninger om HEP3B-cellelinjen for at hjælpe dig i dit arbejde med den. Den vil hovedsageligt omfatte:
- Vækstmedium
- EMEM-medier indeholdende 10 % FBS, 2,2 g/L NaHCO3, 2 mM L-glutamin og Earle's Balanced Salt Solution (EBSS) anvendes til dyrkning af HEP3B-celler.
- Fordoblingstid
- Fordoblingstiden for HEP3B-celler er ca. 36 timer.
- Væksttype
- Denne hepatomcellelinje er adhærent.
- Biosikkerhedsniveau
- BSL-1
- Fås hos
- Cytion — Bestil HEP3B
- Generelle karakteristika og oprindelse af HEP3B-celler
- Oplysninger om dyrkning af HEP3B-cellelinjen
- HEP3B-cellelinje: Fordele og begrænsninger
- Anvendelser af HEP3B-celler i forskning
- Publikationer om HEP3B-cellelinjen
- Ressourcer til HEP3B-cellelinjen: Protokoller, videoer og mere
- Generelle egenskaber og oprindelse af HEP3B-celler
- Oplysninger om dyrkning af HEP3B-cellelinjen
- HEP3B-cellelinjen: Fordele og begrænsninger
- Anvendelser af HEP3B-celler i forskning
- 5. Publikationer om HEP3B-cellelinjen
- Ressourcer til HEP3B-cellelinjen: Protokoller, videoer og mere
- Ofte stillede spørgsmål
Generelle egenskaber og oprindelse af HEP3B-celler
De vigtigste oplysninger, du har brug for om en cellelinje, er dens oprindelse og generelle egenskaber. Det kan hjælpe dig med at beslutte, hvordan den skal bruges i din forskning, og hjælpe dig med at håndtere den. Dette afsnit af artiklen dækker alle de væsentlige oplysninger om HEP3B's oprindelse og egenskaber. Her vil du lære: Hvad er Hep 3B-cellelinjer? Hvad er oprindelsen af Hep3B-celler? Hvad er morfologien af HEP3B-celler?
- HEP3B, en kontinuerlig human hepatomcellelinje, stammer fra levervævet hos en 8-årig afrikansk dreng med hepatocellulært karcinom (HCC). Den blev etableret af Aden og kolleger i 1979 på Barbara B. Knowles' laboratorium, Wistar Institute, Philadelphia, USA [1].
- HEP3B-celler har en integration af hepatitis B-virus (HBV)-genomet i deres kromosom.
- Disse hepatocytkarcinomceller udviser en epitelial morfologi.
- HEP3B-cellerne har et modalt kromosomantal på 60. I modsætning til HepG2 har de ikke et omarrangeret kromosom 1.
Hvad er forskellen mellem HepG2 og Hep3B?
HepG2 og HEP3B adskiller sig i antallet af kromosomer pr. celle. HEP3B indeholder 60 kromosomer, mens HepG2-celler i gennemsnit har 55 kromosomer. Desuden er HepG2 ikke-tumorigen og hepatitis B-negativ, mens HEP3B er tumorigen og HBV-positiv.
Oplysninger om dyrkning af HEP3B-cellelinjen
Kendskab til oplysninger om dyrkning af en cellelinje kan gøre det lettere for dig. Dette afsnit dækker alle de vigtigste punkter for dyrkning af HEP3B HBV-cellelinjen, herunder: Hvad er fordoblingstiden for Hep3B-celler? Hvad er HEP3B-dyrkningsbetingelserne? Hvordan dyrker man HEP3B HCC-celler?
Vigtige punkter ved dyrkning af HEP3B-celler
Fordoblingstid:
Fordoblingstiden for HEP3B-celler er ca. 36 timer.
Adhærent eller i suspension:
Denne hepatomcellelinje er adhærent.
Opdelingsforhold:
HEP3B-celler subkultiveres i et forhold på 1:2 til 1:4. Adhærente HEP3B-celler skylles med 1 x PBS og inkuberes derefter med Accutase-dissociationsopløsningen. Efter 8 til 10 minutter tilsættes frisk medie, og cellerne centrifugeres. De høstede celler resuspenderes derefter omhyggeligt og hældes i kolber indeholdende dyrkningsmedie i et anbefalet opdelingsforhold.
Vækstmedium:
EMEM-medie indeholdende 10 % FBS, 2,2 g/L NaHCO3, 2 mM L-glutamin og Earle's Balanced Salt Solution (EBSS) anvendes til dyrkning af HEP3B-celler.
Vækstbetingelser:
HEP3B-celler dyrkes i en befugtet inkubator ved 37 °C med en kontinuerlig tilførsel af 5 % CO2.
Opbevaring:
Frosne HEP3B-celler opbevares ved en temperatur under -150 °C i en elektrisk fryser eller i dampfasen af flydende nitrogen.
Fryseproces og medium:
Det anbefalede frysemedium til HEP3B-celler er CM-1 eller CM-ACF. Cellerne fryses ved hjælp af en langsom fryseproces, der kun tillader et temperaturfald på 1 °C pr. minut for at beskytte cellernes levedygtighed.
Optøningsproces:
Frosne celler optøs i et vandbad, der er forindstillet til 37 °C, i 40 til 60 sekunder. Derefter tilsættes disse celler til det friske vækstmedium og centrifugeres for at fjerne elementer fra frysemediet. De opsamlede celler resuspenderes og fordeles i nye kolber til vækst.
Biosikkerhedsniveau:
Der kræves et laboratorium med biosikkerhedsniveau 1 til dyrkning af HEP3B-celler.
HEP3B-cellelinjen: Fordele og begrænsninger
HEP3B er en meget udbredt cellelinje for levercellekarcinom. Dette afsnit vil fokusere på nogle af de vigtigste fordele og begrænsninger ved disse hepatomceller.
Fordele
De vigtigste fordele ved HEP3B-celler er:
Let at dyrke
HEP3B-celler stiller ingen særlige krav til cellekulturen, hvilket gør dem nemme at håndtere og vedligeholde i et forskningslaboratorium. Dette forenkler eksperimentelle procedurer.
Høj transfektionseffektivitet
HEP3B-celler udviser en bemærkelsesværdig transfektionseffektivitet, hvilket gør dem meget anvendte i genetisk manipulation og studier relateret til genekspression.
Tumorigenicitet
HEP3B er en tumorigen hepatocellulær carcinomcellelinje, der er i stand til at danne tumorer, når den injiceres i en immunkompromitteret mus. Dette hjælper med at studere kræftprogression og -udvikling ved hjælp af HEP3B-xenotransplantatmodeller.
HEP3B P53-status
HEP3B-celler har en P53-genmutation, der ligner den, der ses ved hepatocellulært karcinom (HCC) og andre kræftformer, hvilket gør dem relevante til at studere virkningerne af P53-mutationen på kræftens vækst, udvikling og progression.
Begrænsninger
Begrænsningen forbundet med HEP3B-cellelinjen er:
In vitro-cellemodel
HEP3B-cellelinjen fungerer som en in vitro-model for hepatocellulære karcinomceller (HCC). Den repræsenterer dog muligvis ikke fuldt ud kompleksiteten af HCC, som den findes i levende organismer. Derfor kan eksperimentelle resultater in vitro afvige fra dem, der observeres in vivo.
Anvendelser af HEP3B-celler i forskning
HEP3B-cellelinjen tilbyder flere forskningsanvendelser inden for biomedicinsk forskning. Nogle af de vigtigste forskningsanvendelser af HEP3B-cellerne omfatter:
- Kræftbiologi: HEP3B er en human hepatocellulær karcinomcellelinje. Det er en uvurderlig cellemodel til at undersøge de cellulære og molekylære mekanismer, der ligger til grund for udvikling og progression af HCC. Forskere bruger disse celler til at studere genetiske mutationer, cellulære processer og cellesignalveje forbundet med leverkræft. I en undersøgelse, der anvendte HEP3B-celler, fandt man for eksempel, at mikroRNA-223-3p regulerer NLRP3-inflammasomkomponenter, hæmmer proliferation og forstærker apoptosen af HEP3B-hepatocarcinomceller [2].
- Lægemiddelscreening og -udvikling: HEP3B-cellelinjen bruges også til at teste, screene og udvikle nye lægemidler mod leverkarcinom. Desuden bruges den til at evaluere toksicitet og effektivitet af forskellige kræftlægemidler og behandlinger. Forskere anvendte også disse hepatomceller til at undersøge lægemiddelmetabolisme. Forskere anvendte HEP3B-celler og vurderede det cytotoksiske potentiale af Cotinus coggygria-planteekstrakt på HEP3B-hepatocytkarcinomceller [3].
- Virusinfektioner: HEP3B er en hepatitis B-viruspositiv cellelinje; derfor anvendes den til at undersøge virusinfektioner, der kan føre til udvikling af leverkræft, dvs. HBV og HCV. Dette kan bidrage til en bedre forståelse af virusinfektioner og udvikling af potentielle antivirale behandlinger. For eksempel anvendte en undersøgelse HEP3B-hepatocyt-kræftceller og undersøgte ubiquitineringens betydning for spredningen af hepatitis C-virus. Resultaterne tyder på, at ubiquitin-specifik protease 15 (USP15) er involveret i spredningen af HCV via regulering af hepatocyt-specifikke funktioner, herunder dannelse af lipiddråber og HCV-RNA-translation [4].
5. Publikationer om HEP3B-cellelinjen
Dette afsnit af artiklen vil omhandle nogle interessante forskningspublikationer om HEP3B-celler.
Denne publikation i Biochemical and Biophysical Research Communications (2019) foreslog, at luteolin-forbindelsesinduceret endoplasmatisk retikulumstress kan udøve antitumorvirkninger i P53-nul HEP3B-celler på en P53-uafhængig måde.
Potentiel målretning af Hep3B-leverkræftceller ved hjælp af lupeol isoleret fra Avicennia marina
Denne undersøgelse i Archiv der Pharmazie (2021) foreslog et pentacyklisk triterpenoid, lupeol, som et potentielt kræftmiddel mod HEP3B-celler.
Denne artikel er offentliggjort i Molecular Medicine Reports (2017). Undersøgelsens resultater viser, at ethanolekstrakt fra Cnidium monnieri (L.) Cusson inducerer celledød (apoptose) og cellecyklusstop i hepatocarcinomcellerne HepG2 og HEP3B gennem regulering af p53- og Akt/GSK-3β-signalvejen.
Denne forskning, der blev offentliggjort i Biomolecules and Therapeutics (2020), foreslog, at auranofin udviser synergistisk aktivitet og fremmer den sulforafan-medierede apoptose af HEP3B-celler via aktivering af PI3K/AKT-vejen.
Circular RNA-0072309 har antitumorvirkninger i Hep3B-cellelinjen ved at målrette mod mikroRNA-665
Denne forskningsartikel i BioFactors (2023) foreslår, at cirkulært RNA-0072309 udøver antitumorvirkninger i hepatocellulære karcinomceller HEP3B ved at målrette mod miRNA-665.
Ressourcer til HEP3B-cellelinjen: Protokoller, videoer og mere
Her er nogle ressourcer om HEP3B-celler:
- HEP3B-transfektion: Denne video forklarer transfektionsprotokollen for HEP3B-celler.
- HEP3B-transfektionseffektivitet: Dette link hjælper dig med at lære om sammensætningen af HEP3B DMEM-medium, cellepassering og transfektionsprotokollen for HEP3B-celler. Derudover giver det information om optimering af HEP3B lipofectamine 3000-reagenset i din transfektionsprotokol.
Følgende link indeholder protokollen for HEP3B-cellekultur:
- HEP3B-dyrkningsbetingelser: Dette link hjælper dig med at lære protokollen for håndtering og vedligeholdelse af Huh7- og HEP3B-kulturer.
- HEP3B-celler: Denne hjemmeside indeholder masser af information om HEP3B-celler, herunder HEP3B-medier, protokollen for celledeling, optøning og håndtering af proliferative og kryopræserverede kulturer.
Referencer
- Puttahanumantharayappa, L.D., et al., Oprindelse og egenskaber ved hepatocellulære carcinomcellelinjer. Japanese J Gastroenterol Res, 2021. 1(8): s. 1040.
- Wan, L., et al., miRNA-223-3p regulerer NLRP3 for at fremme apoptose og hæmme proliferation af Hep3B-celler. Experimental and therapeutic medicine, 2018. 15(3): s. 2429-2435.
- Danjolli-Hashani, D. og S. Selen-Isbilir, Cytotoksisk virkning af Cotinus coggygria-ekstrakt på Hep3B-kræftcellelinjen. Natural Product Research, 2022: s. 1-4.
- Kusakabe, S., et al., USP15 deltager i spredningen af hepatitis C-virus gennem regulering af viral RNA-translation og dannelse af lipiddråber. Journal of Virology, 2019. 93(6): s. 10.1128/jvi. 01708-18.