HT22-cellelinje
HT22 er en murin neuronal cellelinje, der ofte anvendes i neurovidenskabelig forskning. Den er værdifuld til at studere neurogenerative lidelser og teste potentielle neurobeskyttende terapier eller behandlinger. Desuden er HT22-cellerne glutamatfølsomme og bruges derfor til at undersøge glutamatinduceret toksicitet eller neuronal skade.
Denne artikel fremhæver de vigtige aspekter af HT22-celler, som kan hjælpe dig i dit forskningsarbejde. Den vil hovedsageligt diskutere:
- Generelle egenskaber og oprindelse af HT22-celler
- Information om dyrkning af HT22-cellelinjen
- Fordele og ulemper ved HT22-cellelinjen
- Forskningsanvendelser af HT22-cellelinjen
- Forskningspublikationer med HT22-celler
- Ressourcer til HT22-celler: Protokoller, videoer og meget mere
1. Generelle egenskaber og oprindelse af HT22-celler
Denne del af artiklen vil kaste lys over HT22-cellernes oprindelse og generelle egenskaber. Det er nødvendigt at kende disse oplysninger om en cellelinje, før man påbegynder arbejdet med den. Heri vil du lære: Hvad er HT22-celler? Hvad er HT22-hippocampuscellers morfologi? Hvad er HT22-cellestørrelsen?
HT22 er en kontinuerlig cellelinje, der stammer fra hippocampus-regionen i musehjernen. Det er en subklon af den parentale HT-4-cellelinje, der er udviklet ved udødeliggørelse af neuronalt væv fra mus via et temperaturfølsomt polyomavirus simian virus 40 (SV40) T-antigen.
Disse celler adskiller sig fra modne hippocampus-celler, da de mangler glutamat- og kolinerge receptorer som modne neuroner af hippocampus-oprindelse. Derfor er de ikke egnede til hukommelsesrelaterede forskningsstudier [1].
HT22-celler har et epitelcellelignende udseende.
2. Information om dyrkning af HT22-cellelinjen
HT22-celler bruges i neurovidenskabelige forskningslaboratorier. Før de dyrker disse celler, leder forskerne efter vigtige oplysninger om celledyrkning, der gør deres arbejde nemt og effektivt. Dette afsnit dækker alle de vigtigste punkter for dyrkning af HT22-celler. Det vil du få at vide: Hvad er HT22-cellernes fordoblingstid? Hvordan dyrker man HT22-celler? Hvad er protokollen for dyrkning af HT22-celler? Hvad er HT22-cellemediet?
Nøglepunkter for dyrkning af HT22-celler
|
Fordoblingstid: |
HT22-cellernes fordoblingstid er ca. 15 timer. |
|
Vedhæftende eller i suspension: |
HT22-celler er adhærente. |
|
Forhold mellem sub-kultivering: |
Subkultiveringsforholdet for HT22-hippocampusceller er 1:3 til 1:6. Kort fortalt fjernes mediet, og de adhærente celler skylles med 1 x PBS. Accutase-dissocieringsopløsning tilsættes kolben, og cellerne inkuberes i 8 til 10 minutter ved omgivelsestemperatur. Herefter tilsættes frisk dyrkningsmedie, og cellerne opsamles i et hætteglas til centrifugering. Den opnåede cellepellet resuspenderes omhyggeligt, og cellerne fordeles i en dyrkningskolbe til vækst. |
|
Vækstmedie: |
DMEM-mediet bruges til dyrkning af HT22-celler. Det er suppleret med 10 % FBS, 4,5 g/L glukose, 4 mM L-glutamin, 1,5 g/L NaHCO3 og 1,0 mM natriumpyruvat for at opnå optimal cellevækst. |
|
Vækstbetingelser: |
HT22-cellekulturer opbevares i en befugtet inkubator (37 °C temperatur) med 5 %CO2-forsyning . |
|
Opbevaring: |
Frosne HT22-celler kan opbevares ved en temperatur på under -150 °C enten i dampfasen af flydende nitrogen eller i en elektrisk fryser med ultra-lav temperatur på lang sigt. |
|
Fryseproces og medium: |
HT22-celler kan nedfryses i CM-1- eller CM-ACF-medier ved hjælp af en langsom nedfrysningsmetode. Denne proces tillader kun et fald på 1 °C i prøvens temperatur pr. minut, beskytter cellerne mod chok og hjælper med at bevare deres levedygtighed. |
|
Optøningsproces: |
Cellerne optøs i et 37 °C varmt vandbad i 40 til 60 sekunder, indtil der kun er en lille isklump tilbage. Derefter tilsættes kulturmedier til cellerne, og de centrifugeres for at fjerne komponenter fra frysemedierne. Cellepelleten resuspenderes, og cellerne hældes i den nye kolbe, der indeholder kulturmedier. Herefter inkuberes cellerne ved 37 °C i en inkubator i mindst 24 timer. |
|
Biologisk sikkerhedsniveau: |
Laboratorieindstillinger på biosikkerhedsniveau 1 er obligatoriske for dyrkning af HT22-celler. |
3. Fordele og ulemper ved HT22-cellelinjen
HT22-hippocampusceller er forbundet med nogle fordele og ulemper, der adskiller dem fra andre neuronale cellelinjer. Nogle bemærkelsesværdige fordele og ulemper ved cellelinjen er nævnt her.
Fordele og ulemper
Fordelene ved den murine neuronale cellelinje HT22 er:
-
Hurtig væksthastighed
HT22-celler har en fordoblingstid på 15 timer, hvilket muliggør hurtige og effektive eksperimenter og bidrager til rettidige forskningsresultater.
-
Udødeliggørelse
HT22 er en udødeliggjort cellelinje, der sikrer kontinuerlig vækst i længere perioder. Det giver konsekvent tilgængelighed af celler, reducerer tid og omkostninger og muliggør langvarige eksperimenter med ensartede resultater.
Ulemperne ved HT22
Ulemperne ved HT22-celler er:
-
Murin oprindelse
HT22-cellelinjen stammer fra hippocampusvæv fra musehjerner, som måske ikke fuldt ud repræsenterer kompleksiteten i menneskelige neuroncellers fysiologi og adfærd, hvilket begrænser deres overførselsrelevans.
4. Forskningsanvendelser af HT22-cellelinjen
HT22-cellerne bruges i vid udstrækning i neurobiologisk forskning. Et par lovende anvendelser af denne cellelinje diskuteres i dette afsnit af artiklen:
- Neurovidenskabelig forskning: HT22-celler anvendes i vid udstrækning til forskning i neurodegenerative sygdomme, dvs. Alzheimers og Parkinsons sygdom. De betragtes som et værdifuldt forskningsværktøj til undersøgelse af neurotoksicitet og oxidative stressmekanismer i forbindelse med disse sygdomme. Forskning udført i 2020 viste, at PI3K/AKT/CREB-stien er involveret i hyperglykæmi-induceret neurotoksicitet i HT22-celler [2]. På samme måde foreslog en nylig undersøgelse, at Nrf2/HO-1-vejen og NF- κB-signalaksen spiller en vigtig rolle i HT22-amyloidbetatoksicitet [3].
- Screening af lægemidler: HT22-celler bruges i vid udstrækning til testning og screening af lægemidler. De hjælper forskere med at identificere potentielle terapeutiske midler, der udviser neurobeskyttende effekter til bekæmpelse af neurodegenerative sygdomme. En undersøgelse udført i 2019 udforskede det neurobeskyttende potentiale af tetrahydro curcuminforbindelse i glutamatbehandlede HT22-hippocampusceller. Her fremkalder glutamat oxidativ stress i HT22-celler og forårsager celledød ved at aktivere mitogenaktiverede proteinkinaser [4].
5. Forskningspublikationer med HT22-celler
Her er nogle interessante forskningsartikler med HT22-cellelinjen:
Denne undersøgelse i International Journal of Molecular Medicine (2019) foreslog det neurobeskyttende potentiale af crocin, en forbindelse isoleret fra Crocus sativus L. i deL-glutamatskadedeHT22-celler.
Denne publikation i Neuropharmacology (2018) rapporterede, at oxindolderivater beskytter mod HT22-celledød induceret af oxidativ stress.
Ginsenoside Rb2 undertrykker glutamat-medieret oxidativ stress og neuronal celledød i HT22-celler
Denne forskningsartikel blev offentliggjort i Journal of Ginseng Research i 2019. Denne undersøgelse udforskede de neurobeskyttende virkninger af et naturprodukt, ginsenosid Rb2, ved hjælp af HT22-cellelinjen. Undersøgelsen viste, at ginsenosid rb2 effektivt reducerede glutamat-induceret oxidativ stress og celledød i murine hippocampusceller HT22.
Denne undersøgelse i Ecotoxicology and Environmental Safety (2021) evaluerede det cytotoksiske potentiale af sølvnanopartikler i HT22-cellelinjen.
Ferrostatin-1 beskytter HT-22-celler mod oxidativ toksicitet
Denne forskningsartikel blev offentliggjort i 2020 i Neural regeneration research. Den foreslog, at ferrostatin-1, en hæmmer af ferroptose, forhindrer oxidativ toksicitet i HT22-hippocampusceller.
6. Ressourcer til HT22-celler: Protokoller, videoer og meget mere
Nogle online-ressourcer om HT22-cellerne forklarer deres transfektions-, differentierings- og cellekulturprotokoller:
- HT22-transfektion: Dette dokument indeholder en optimeret protokol til HT22-transfektion i 24- og 96-brønds celledyrkningsplader.
- HT22-celledifferentiering: Denne artikel giver dig en omfattende vejledning om HT22-differentieringsprotokollen.
Følgende link indeholder HT22-celledyrkningsprotokollen:
- Subdyrkning af HT22-celler: Dette link hjælper dig med at lære subkultiveringsprotokollen for HT22-cellelinjen. Desuden vil det hjælpe dig med at lære protokollen til at fremkalde neurotoksicitet i celler.
- HT22 hippocampale celler: Denne hjemmeside indeholder mange nyttige oplysninger om HT22-cellernes fordoblingstid, medier og celledyrkningsprotokoller.
Referencer
- He, M., et al., Differentiering gør HT22-neuroner modtagelige for excitotoksicitet. Neural Regen Res, 2013. 8(14): p. 1297-306.
- Zhang, S., et al., Fisetin forhindrer HT22-celler fra høj glukoseinduceret neurotoksicitet via PI3K/Akt/CREB-signalvej. Frontiers in Neuroscience, 2020. 14: p. 241.
- Zhang, R.-l., et al., Beskyttende virkninger af berberin mod β-amyloid-induceret neurotoksicitet i HT22-celler via Nrf2/HO-1-vejen. Bioorganic Chemistry, 2023. 133: p. 106-210.
- Park, C.-H., et al., neurobeskyttende virkninger af tetrahydrocurcumin mod glutamat-induceret oxidativ stress i hippocampale HT22-celler. Molecules, 2019. 25(1): p. 144.