HT22-cellelinje
HT22 er en murin neuronal cellelinje, der ofte anvendes i neurovidenskabelig forskning. Den er værdifuld til undersøgelse af neurodegenerative lidelser og afprøvning af potentielle neurobeskyttende terapier eller behandlinger. Desuden er HT22-cellerne glutamatfølsomme og anvendes derfor til at undersøge glutamatinduceret toksicitet eller neuronal skade.
- Vækstmedium
- DMEM-medie anvendes til dyrkning af HT22-celler. Det tilsættes 10 % FBS, 4,5 g/L glukose, 4 mM L-glutamin, 1,5 g/L NaHCO3 og 1,0 mM natriumpyruvat for optimal cellevækst.
- Fordoblingstid
- HT22-cellernes fordoblingstid er ca. 15 timer.
- Væksttype
- HT22-celler er adhærente.
- Biosikkerhedsniveau
- BSL-1
- Fås hos
- Cytion — Bestil HT22
Denne artikel fremhæver de vigtigste aspekter af HT22-celler, der kan hjælpe dig i dit forskningsarbejde. Den vil hovedsageligt omhandle:
- Generelle egenskaber og oprindelse af HT22-celler
- Oplysninger om dyrkning af HT22-cellelinjen
- Fordele og ulemper ved HT22-cellelinjen
- Forskningsanvendelser af HT22-cellelinjen
- Forskningspublikationer om HT22-celler
- Ressourcer til HT22-celler: Protokoller, videoer og mere
Generelle egenskaber og oprindelse af HT22-celler
Dette afsnit af artiklen vil belyse oprindelsen og de generelle egenskaber ved HT22-celler. Det er nødvendigt at kende disse oplysninger om en cellelinje, inden man påbegynder arbejdet med den. Her vil du lære: Hvad er HT22-celler? Hvad er morfologien af HT22-hippocampus-celler? Hvad er HT22-cellestørrelsen?
HT22 er en kontinuerlig cellelinje, der stammer fra hippocampus-regionen i musens hjerne. Det er en subklon af den oprindelige HT-4-cellelinje, der er udviklet ved immortalisering af murint neuronvæv via et temperaturfølsomt polyomavirus, simian virus 40 (SV40) T-antigen.
Disse celler adskiller sig fra modne hippocampus-celler, da de mangler glutamat- og kolinerge receptorer som modne neuroner af hippocampus-oprindelse. De er derfor ikke egnede til hukommelsesrelaterede forskningsstudier [1].
HT22-celler har et epitelcellelignende udseende.
Oplysninger om dyrkning af HT22-cellelinjer
HT22-celler anvendes i forskningslaboratorier inden for neurovidenskab. Inden dyrkningen af disse celler søger forskerne efter vigtige oplysninger om cellekulturen, der gør deres arbejde nemmere og mere effektivt. Dette afsnit dækker alle de vigtigste punkter vedrørende dyrkning af HT22-celler. Du vil få svar på: Hvad er HT22-cellernes fordoblingstid? Hvordan dyrker man HT22-celler? Hvad er HT22-cellekulturprotokollen? Hvad er HT22-cellemediet?
Vigtige punkter ved dyrkning af HT22-celler
Fordoblingstid:
HT22-cellernes fordoblingstid er ca. 15 timer.
Adhærent eller i suspension:
HT22-celler er adhærente.
Subkultiveringsforhold:
Subkultiveringsforholdet for HT22-hippocampus-celler er 1:3 til 1:6. Kort fortalt fjernes mediet, og de adhærente celler skylles med 1 x PBS. Accutase-dissocieringsopløsning tilsættes til kolben, og cellerne inkuberes i 8 til 10 minutter ved stuetemperatur. Derefter tilsættes frisk dyrkningsmedium, og cellerne opsamles i et hætteglas til centrifugering. Den opnåede cellepellet resuspenderes forsigtigt, og cellerne overføres til en dyrkningskolbe til vækst.
Vækstmedium:
DMEM-medie anvendes til dyrkning af HT22-celler. Det tilsættes 10 % FBS, 4,5 g/l glukose, 4 mM L-glutamin, 1,5 g/l NaHCO3 og 1,0 mM natriumpyruvat for optimal cellevækst.
Vækstbetingelser:
HT22-cellekulturer opbevares i en befugtet inkubator (37 °C) med en 5 % CO2-tilførsel.
Opbevaring:
Frosne HT22-celler kan opbevares ved temperaturer under -150 °C enten i dampfasen af flydende nitrogen eller i en elektrisk fryser med ultralav temperatur i længere tid.
Fryseproces og medium:
HT22-celler kan fryses ned i CM-1- eller CM-ACF-medier ved hjælp af en langsom fryseproces. Denne proces tillader kun et fald på 1 °C i prøvens temperatur pr. minut, beskytter cellerne mod chok og hjælper med at bevare deres levedygtighed.
Optøningsproces:
Cellerne optøs i et vandbad ved 37 °C i 40 til 60 sekunder, indtil der kun er en lille isklump tilbage. Derefter tilsættes dyrkningsmedium til cellerne, og de centrifugeres for at fjerne komponenter fra frysemediet. Cellepelleten resuspenderes, og cellerne hældes over i den nye kolbe, der indeholder dyrkningsmedium. Herefter inkuberes cellerne ved 37 °C i en inkubator i mindst 24 timer.
Biosikkerhedsniveau:
Laboratorieforhold på biosikkerhedsniveau 1 er obligatoriske for dyrkning af HT22-celler.
Fordele og ulemper ved HT22-cellelinjen
HT22-hippocampus-celler er forbundet med en række fordele og ulemper, der adskiller dem fra andre neuronale cellelinjer. Nogle bemærkelsesværdige fordele og ulemper ved cellelinjen nævnes her.
Fordele
Fordelene ved den murine neuronale HT22-cellelinje er:
-
Hurtig vækst
HT22-celler har en fordoblingstid på 15 timer, hvilket muliggør hurtig og effektiv eksperimentering og bidrager til rettidige forskningsresultater.
-
Immortalisering
HT22 er en immortalisert cellelinje, som sikrer kontinuerlig vekst over lengre perioder. Dette gir jevn tilgang til celler, reduserer tid og kostnader og muliggjør langvarige eksperimenter med konsistente resultater.
Ulemper
Ulemperne ved HT22-celler er:
-
Musoprindelse
HT22-cellelinjen stammer fra hippocampusvæv fra mus, hvilket muligvis ikke fuldt ud repræsenterer kompleksiteten i menneskelige neuroncellers fysiologi og adfærd, hvilket begrænser deres translationelle relevans.
4. Forskningsanvendelser af HT22-cellelinjen
HT22-cellerne anvendes i vid udstrækning i neurobiologisk forskning. I dette afsnit af artiklen diskuteres nogle få lovende anvendelser af denne cellelinje:
- Neurovidenskabelig forskning: HT22-celler anvendes i vid udstrækning i forskning i neurodegenerative sygdomme, dvs. Alzheimers og Parkinsons sygdom. De betragtes som et værdifuldt forskningsværktøj til at studere neurotoksicitet og mekanismer for oxidativt stress i forbindelse med disse sygdomme. Forskning udført i 2020 fandt, at PI3K/AKT/CREB-signalvejen er involveret i hyperglykæmi-induceret neural toksicitet i HT22-celler [2]. Tilsvarende foreslog en nylig undersøgelse, at Nrf2/HO-1-signalvejen og NF-κB-signalaksen spiller en væsentlig rolle i HT22-amyloid-beta-toksicitet [3].
- Lægemiddelscreening: HT22-celler anvendes i vid udstrækning til lægemiddelafprøvning og screening. De hjælper forskere med at identificere potentielle terapeutiske midler, der udviser neurobeskyttende effekter til bekæmpelse af neurodegenerative sygdomme. En undersøgelse fra 2019 undersøgte det neurobeskyttende potentiale af tetrahydrocurcumin-forbindelsen i glutamatbehandlede HT22-hippocampus-celler. Her inducerer glutamat oxidativt stress i HT22-celler og forårsager celledød ved at aktivere mitogen-aktiverede proteinkinaser [4].
5. Forskningsartikler om HT22-celler
Her er nogle interessante forskningsartikler om HT22-cellelinjen:
Denne undersøgelse i International Journal of Molecular Medicine (2019) foreslog det neurobeskyttende potentiale af crocin, et stof isoleret fra Crocus sativus L., i L-glutamat-beskadigede HT22-celler.
Denne publikation i Neuropharmacology (2018) rapporterede, at oxindolderivater beskytter mod HT22-celle død induceret af oxidativt stress.
Ginsenosid Rb2 undertrykker glutamat-medieret oxidativt stress og neuronal celledød i HT22-celler
Denne forskningsartikel blev offentliggjort i Journal of Ginseng Research i 2019. Denne undersøgelse undersøgte de neurobeskyttende virkninger af et naturprodukt, ginsenosid Rb2, ved hjælp af HT22-cellelinjen. Undersøgelsen fandt, at ginsenosid Rb2 effektivt reducerede glutamat-induceret oxidativt stress og celledød i murine hippocampus-celler HT22.
Denne undersøgelse i Ecotoxicology and Environmental Safety (2021) evaluerede det cytotoksiske potentiale af sølvnanopartikler i HT22-cellelinjen.
Ferrostatin-1 beskytter HT-22-celler mod oxidativ toksicitet
Denne forskningsartikel blev offentliggjort i 2020 i Neural regeneration research. Den foreslog, at ferrostatin-1, en hæmmer af ferroptose, forhindrer oxidativ toksicitet i HT22-hippocampus-celler.
Ressourcer til HT22-celler: Protokoller, videoer og mere
Nogle online ressourcer om HT22-celler forklarer deres transfektions-, differentierings- og cellekulturprotokoller:
- HT22-transfektion: Dette dokument indeholder en optimeret protokol for HT22-transfektion i 24- og 96-brønds cellekulturplader.
- HT22-celledifferentiering: Denne artikel giver dig en omfattende vejledning i HT22-differentieringsprotokollen.
Følgende link indeholder protokollen for HT22-cellekultur:
- HT22-celle-subkultivering: Dette link hjælper dig med at lære subkultiveringsprotokollen for HT22-cellelinjen. Desuden hjælper det dig med at lære protokollen til induktion af neurotoksicitet i celler.
- HT22-hippocampus-celler: Denne hjemmeside indeholder en masse nyttig information om HT22-cellers fordoblingstid, medier og cellekulturprotokoller.
Referencer
- He, M., et al., Differentiation renders susceptibility to excitotoxicity in HT22 neurons. Neural Regen Res, 2013. 8(14): s. 1297-306.
- Zhang, S., et al., Fisetin forhindrer HT22-celler i at udvikle højglukoseinduceret neurotoksicitet via PI3K/Akt/CREB-signalvejen. Frontiers in Neuroscience, 2020. 14: s. 241.
- Zhang, R.-l., et al., Berberins beskyttende virkninger mod β-amyloid-induceret neurotoksicitet i HT22-celler via Nrf2/HO-1-vejen. Bioorganic Chemistry, 2023. 133: s. 106-210.
- Park, C.-H., et al., Neurobeskyttende virkninger af tetrahydrocurcumin mod glutamat-induceret oxidativt stress i hippocampale HT22-celler. Molecules, 2019. 25(1): s. 144.