DLD-1-celler: Anvendelser og indsigt i DLD-1-celler i forskning i kolorektal cancer
DLD-1 er en human kolorektal karcinomcellelinje, der ofte anvendes i kræftforskning. Den er et værdifuldt værktøj til at undersøge forskellige aspekter af tyktarmskræft, herunder tumorudvikling, progression, underliggende molekylære mekanismer og respons på terapeutiske midler. DLD-1 er således fremragende til at forstå sygdommen og udvikle potentielle behandlingsstrategier.
Denne artikel indeholder vigtige oplysninger om DLD-1-cellelinjen, som du bør kende, før du arbejder med den. Den vil dække:
- Generelle karakteristika og oprindelse af DLD-1-celler
- Oplysninger om dyrkning af DLD-1-cellelinjen
- DLD-1-cellelinjen: Fordele og begrænsninger
- Forskningsanvendelser af DLD-1-cellelinjen
- Forskningspublikationer om DLD-1-celler
- Ressourcer til DLD-1-cellelinje: Protokoller, videoer og meget mere
1. Generelle karakteristika og oprindelse af DLD-1-celler
Før man arbejder med en cellelinje, er forskerens første overvejelse dens oprindelse og generelle egenskaber. Dette artikelafsnit er en detaljeret introduktion til DLD-1-cellelinjen. Det vil dække følgende ofte stillede spørgsmål: Hvad er DLD-1-celler? Hvad er en DLD-1-cellelinje? Hvad er mutationerne i DLD-1-cellelinjen? Hvad er størrelsen på en DLD-1-celle? Hvad er DLD-1-cellernes morfologi?
- DLD-1, en cellelinje til tyktarmskræft, stammer fra tyktarmen hos en 67-årig mandlig patient med kolorektalt adenokarcinom. Den blev isoleret af D.L. Dexter og kolleger i 1977-1979. Denne cellelinje har samme oprindelse som HCT-8-, HCT-15- og HRT-18-cellelinjerne.
- Ligesom kolorektale kræftformer har DLD-1-celler en mikrosatellitinstabilitetsfænotype [1].
- DLD-1-mutationer omfatter KRAS, P53, BRAF, BRCA1 og BRCA2. På grund af DLD-1 P53-status, DLD-1 BRCA, DLD-1 BRCA2 og DLD-1 KRAS-mutation anses disse celler for at være ideelle til kræftundersøgelser.
- Disse celler har en epitellignende morfologi.
- Størrelsen på DLD-1-cellelinjen er ca. 15 µm.
- Den humane kolorektale cancercellelinje DLD-1 har en pseudodiploid karyotype. Omkring 86 % af cellerne har et modalt kromosomtal på 46. Der kan dog også forekomme polyploidi i 17,1 % af cellepopulationen.
2.oplysninger om dyrkning af DLD-1-cellelinjen
Før du dyrker en cellelinje, skal du kende dens grundlæggende krav til celledyrkning. Dette afsnit vil fremhæve de vigtige punkter, du skal lære, før du begynder at arbejde med DLD-1-cellelinjen. Dette inkluderer: Hvad er DLD-1's fordoblingstid? Hvad er DLD-1-kulturmediet? Hvad er udsåningstætheden for DLD-1-celler? Hvordan dyrker man DLD-1-celler?
Nøglepunkter for dyrkning af DLD-1-celler
|
Fordoblingstid: |
DLD-1's fordoblingstid er ca. 15 timer. |
|
Vedhæftende eller i suspension: |
DLD-1 er en adhærent cellelinje for human tyktarmskræft. Cellerne vokser i monolag. |
|
Udsåningstæthed: |
DLD-1-celler udsås med en tæthed på 1 til 2 x104 celler/cm2. De klæbende celler vaskes med 1x phosphatbuffersaltvand (PBS) og inkuberes med passageløsning (Accutase) ved omgivelsestemperatur. Efter 8 til 10 minutters inkubation tilsættes de løsrevne celler til kulturmediet og centrifugeres. Cellepelleten resuspenderes derefter omhyggeligt, og cellerne hældes i nye dyrkningsbeholdere, der indeholder vækstmedium. |
|
Vækstmedium: |
RPMI 1640 med medietilskud, herunder 10 % føtalt kvægserum FBS, 2,1 mM stabil glutamin og 2,0 g/L NaHCO3, anvendes til dyrkning af DLD-1-celler. Mediet skal udskiftes 2-3 gange om ugen. |
|
Vækstbetingelser: |
DLD-1-kulturer holdes i en 37 °C befugtet inkubator med 5 % CO2-forsyning. |
|
Opbevaring: |
DLD-1-celler opbevares i dampfasen af flydende nitrogen eller i en elektrisk ultra-lavtemperaturfryser (ved en temperatur på under -150 °C). |
|
Fryseproces og medium: |
CM-1 eller CM-ACF frysemedier kan bruges til at fryse DLD-1-cellerne. En langsom nedfrysningsproces anbefales altid, så temperaturen gradvist falder med 1 °C, hvilket forhindrer cellerne i at få et chok og beskytter deres levedygtighed. |
|
Optøningsproces: |
Frosne celler optøs i et vandbad, der er indstillet til 37 °C, i 40 til 60 sekunder, indtil der er en lille isklump tilbage. Bagefter tilsættes cellerne til et frisk medium og centrifugeres. Dette trin er nødvendigt for at fjerne komponenter fra frysemediet fra cellerne. De opsamlede celler resuspenderes i et vækstmedium og fordeles i kolben til vækst. |
|
Biologisk sikkerhedsniveau: |
DLD-1-cellelinjen vedligeholdes i laboratorier på biosikkerhedsniveau 1. |
3.dLD-1 cellelinje: Fordele og begrænsninger
I denne del af artiklen gennemgår vi fordele og begrænsninger ved DLD-1-cellelinjen til tyktarmskræft.
Fordele og begrænsninger
De vigtigste fordele ved DLD-1-cellelinjen er:
|
Model for kolorektal cancer |
DLD-1-celler har mutationer, der ofte findes hos patienter med kolorektal cancer, såsom DLD-1 KRAS-mutation, DLD-1 BRCA og DLD-1 BRCA2. Denne relevans gør dem til en klinisk passende cellemodel til undersøgelse af denne sygdom. |
|
Tumorigen cellelinje |
DLD-1-celler er tumorigeniske. De kan forårsage tumorer, når de injiceres i nøgne mus. Derfor bruger forskere disse celler til at udvikle xenograft-tumormodeller, der hjælper med at undersøge tumordannelse, -udvikling og -progression in vivo. |
Begrænsninger
De begrænsninger, der er forbundet med DLD-1-cellerne, er:
|
Heterogenitet |
DLD-1-cellepopulationer med tyktarmskræft udviser genetisk og fænotypisk heterogenitet. Det kan påvirke generaliserbarheden af forskningsresultaterne. |
4.forskningsanvendelser af DLD-1-cellelinjen
DLD-1-cellelinjen har en række anvendelsesmuligheder inden for kræftforskning. Nogle fremtrædende anvendelser diskuteres i dette afsnit.
- Undersøgelse af kræft: DLD-1-celler fungerer som en værdifuld in vitro-model til at forstå de molekylære mekanismer, der ligger til grund for vækst, udvikling og progression af kolorektal cancer. Desuden bruges de til at studere genekspression, signalveje og specifikke genetiske mutationers indflydelse på kræftcellers adfærd. Forskning udført i 2022 observerede, at PI3K/Akt/YAP-signalkaskaden regulerer migrationen og invasionen af DLD-1-cellelinjen for kolorektal cancer [2].
- Udvikling af lægemidler: Forskere bruger DLD-1-cellelinjen til at teste effektiviteten af lægemidler mod kræft og evaluere deres potentiale til behandling af tyktarmskræft. Det hjælper med at udvikle lægemidler og bekæmpe sygdommen effektivt. En undersøgelse udført i 2022 brugte DLD-1-cellelinjen og undersøgte anti-kræftaktiviteten af siliciumphthalocyaniner, kemisk syntetiserede forbindelser. Undersøgelsens resultater tyder på, at disse forbindelser er potente midler mod kræft [3]. Interessant nok fandt en anden undersøgelse kræftbekæmpelsespotentialet i et probiotisk afledt P8-protein ved hjælp af DLD-1-celler [4].
5.forskningspublikationer om DLD-1-celler
I dette afsnit fremhæves nogle få interessante og ofte citerede publikationer om DLD-1-cellelinjen for tyktarmskræft.
Denne publikation er i Journal of Biologically Active Products fra Nature (2022). Undersøgelsen viste, at diosmin, et flavonoid, inducerede celledød i DLD-1-celler og også forårsagede cellecyklusstop; dermed kan det være et potentielt middel mod kræft.
Bromelain undertrykker effektivt Kras-mutant kolorektal cancer ved at stimulere ferroptose
Denne undersøgelse i Animal Cells and Systems (2018) foreslog, at bromelain, et enzym, undertrykker DLD-1 KRAS-mutation og udøver potente cytotoksiske virkninger.
Denne forskningsartikel blev offentliggjort i 2019 i tidsskriftet "Environmental Toxicology". Undersøgelsen udforskede de antitumorale virkninger af en naturlig forbindelse, Bergapten, ved hjælp af en DLD-1-cellelinje.
Denne undersøgelse i Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials (2023) viste, at curcumin/jernoxid-nanokompositter er meget effektive mod DLD-1-kolorektalcancerceller.
Denne forskningsartikel blev offentliggjort i 2020 i Turkish Journal of Biology. Undersøgelsen foreslog, at et naturligt produkt, epibrassinolid-medieret aktivering af AKT i DLD-1-celler, stimulerer autofagi relateret til polyaminer.
6.ressourcer til DLD-1-cellelinjen: Protokoller, videoer og meget mere
Følgende er nogle få ressourcer om DLD-1-celler:
- DLD-1-transfektion: Denne videovejledning er en omfattende guide til DLD-1 in vitro-transfektionsprotokol.
- DLD-1-celler: Denne forskningsartikel beskriver kort kravene til DLD-1-celledyrkning, herunder medier og dyrkningsbetingelser. Desuden kan det hjælpe dig med at lære den transfektionsprotokol, der bruges til DLD-1-celler.
De følgende links indeholder protokollen til dyrkning af DLD-1, humane tyktarmskræftceller.
- DLD-1-cellelinje: Dette websted giver grundlæggende oplysninger om DLD-1-cellelinjen. Det vil hjælpe dig med at lære forskellige DLD-1-celledyrkningsprotokoller, herunder subdyrkning og håndtering af kryopræserverede og prolifererende kulturer.
Referencer
- Gavrilas, L.I., et al., Pro-apoptotiske gener som nye mål for enkelt- og kombinationsbehandlinger med resveratrol og curcumin i kolorektal cancer. Food & function, 2019. 10(6): p. 3717-3726.
- Takeda, T., et al., PI3K/Akt/YAP-signalering fremmer migration og invasion afDLD-1-kolorektalcancerceller. Oncology Letters, 2022. 23(4): p. 1-9.
- Farajzadeh, N., et al., Anticanceraktivitet af nye siliciumphthalocyaniner mod den kolorektale adenokarcinomcellelinje (DLD-1). New Journal of Chemistry, 2022. 46(41): p. 19863-19873.
- An, B.C., et al, Anti-Cancer Roles of Probiotic-Derived P8 Protein in Colorectal Cancer Cell Line DLD-1. International Journal of Molecular Sciences, 2023. 24(12): p. 9857.