DLD-1-celler: Anvendelser og indsigter vedrørende DLD-1-celler i forskning i tyktarmskræft
DLD-1 er en human kolorektal karcinomcellelinje, der ofte anvendes i kræftforskning. Den er et værdifuldt redskab til at undersøge forskellige aspekter af tyktarmskræft, herunder tumorudvikling, progression, underliggende molekylære mekanismer og respons på terapeutiske midler. DLD-1 er således fremragende til at forstå sygdommen og udvikle potentielle behandlingsstrategier.
- Vækstmedium
- RPMI 1640 med medietilsætninger, herunder 10 % føtal bovint serum (FBS), 2,1 mM stabilt glutamin og 2,0 g/L NaHCO3, anvendes til dyrkning af DLD-1-celler. Mediet bør udskiftes 2-3 gange om ugen.
- Fordoblingstid
- DLD-1-fordoblingstiden er ca. 15 timer.
- Væksttype
- DLD-1 er en adhærent human tyktarmskræftcellelinje. Cellerne vokser til monolag.
- Biosikkerhedsniveau
- BSL-1
- Fås hos
- Cytion — Bestil DLD-1
- Generelle egenskaber og oprindelse af DLD-1-celler
- Oplysninger om dyrkning af DLD-1-cellelinjen
- DLD-1-cellelinje: Fordele og begrænsninger
- Forskningsanvendelser af DLD-1-cellelinjen
- 5. Forskningspublikationer om DLD-1-celler
- Ressourcer til DLD-1-cellelinjen: Protokoller, videoer og mere
- Ofte stillede spørgsmål
Generelle egenskaber og oprindelse af DLD-1-celler
Inden en forsker begynder at arbejde med en cellelinje, er det første, han eller hun overvejer, dens oprindelse og generelle egenskaber. Dette afsnit af artiklen er en detaljeret introduktion til DLD-1-cellelinjen. Det vil dække følgende ofte stillede spørgsmål: Hvad er DLD-1-celler? Hvad er en DLD-1-kræftcellelinje? Hvad er mutationerne i DLD-1-cellelinjen? Hvad er størrelsen på en DLD-1-celle? Hvad er morfologien af DLD-1-celler?
- DLD-1, en tyktarmskræftcellelinje, stammer fra tyktarmen hos en 67-årig mandlig patient med kolorektal adenocarcinom. Den blev isoleret af D.L. Dexter og kolleger i perioden 1977-1979. Denne cellelinje har samme oprindelse som cellelinjerne HCT-8, HCT-15 og HRT-18.
- Ligesom kolorektal kræft har DLD-1-celler en mikrosatellit-ustabilitetsfænotype [1].
- DLD-1-mutationer omfatter KRAS, P53, BRAF, BRCA1 og BRCA2. På grund af DLD-1 P53-status, DLD-1 BRCA, DLD-1 BRCA2 og DLD-1 KRAS-mutation anses disse celler for ideelle til kræftstudier.
- Disse celler har en epitel-lignende morfologi.
- Størrelsen af DLD-1-cellelinjen er ca. 15 µm.
- Den humane kolorektale kræftcellelinje DLD-1 har en pseudodiploid karyotype. Omkring 86 % af cellerne har et modalt kromosomantal på 46. Der kan dog også forekomme polyploidi hos 17,1 % af cellepopulationen.
Oplysninger om dyrkning af DLD-1-cellelinjen
Inden du dyrker en cellelinje, skal du kende dens grundlæggende krav til cellekulturen. Dette afsnit fremhæver de vigtige punkter, du skal lære, inden du påbegynder arbejdet med DLD-1-cellelinjen. Dette omfatter: Hvad er DLD-1-fordoblingstiden? Hvad er DLD-1-dyrkningsmediet? Hvad er udsåningsdensiteten for DLD-1-celler? Hvordan dyrker man DLD-1-celler?
Vigtige punkter ved dyrkning af DLD-1-celler
Fordoblingstid:
DLD-1-fordoblingstiden er ca. 15 timer.
Adhærent eller i suspension:
DLD-1 er en adhærent human tyktarmskræftcellelinje. Cellerne vokser til monolag.
Udsåningstæthed:
DLD-1-celler udsættes med en tæthed på 1 til 2 x 104 celler/cm2. Adhærente celler vaskes med 1x phosphatbuffersaltvand (PBS) og inkuberes med passageringsopløsning (Accutase) ved stuetemperatur. Efter inkubation i 8 til 10 minutter tilsættes løsrevne celler til dyrkningsmediet og centrifugeres. Cellepelleten resuspenderes derefter forsigtigt, og cellerne hældes i nye dyrkningsbeholdere indeholdende vækstmedium.
Vækstmedium:
RPMI 1640 med medietilskud, herunder 10 % føtal bovint serum (FBS), 2,1 mM stabilt glutamin og 2,0 g/L NaHCO3, anvendes til dyrkning af DLD-1-celler. Mediet bør udskiftes 2-3 gange om ugen.
Vækstbetingelser:
DLD-1-kulturer opbevares i en befugtet inkubator ved 37 °C med en CO2-tilførsel på 5 %.
Opbevaring:
DLD-1-celler opbevares i dampfasen af flydende nitrogen eller i en elektrisk ultralavtemperaturfryser (ved en temperatur under -150 °C).
Fryseproces og medium:
CM-1- eller CM-ACF-frysemedier kan anvendes til at fryse DLD-1-cellerne. En langsom fryseproces anbefales altid, hvilket muliggør et gradvist fald i temperaturen på 1 °C, hvilket forhindrer cellerne i at få et chok og beskytter deres levedygtighed.
Optøningsproces:
Frosne celler optøs i et vandbad, der er forindstillet til 37 °C, i 40 til 60 sekunder, indtil der kun er en lille isklump tilbage. Derefter tilsættes cellerne til et frisk medium og centrifugeres. Dette trin er nødvendigt for at fjerne komponenter fra frysemediet fra cellerne. De opsamlede celler resuspenderes i et vækstmedium og overføres til kolben til vækst.
Biosikkerhedsniveau:
DLD-1-cellelinjen opbevares i laboratorier med biosikkerhedsniveau 1.
DLD-1-cellelinjen: Fordele og begrænsninger
I dette afsnit af artiklen gennemgår vi fordele og begrænsninger ved DLD-1-tyktarmskræftcellelinjen.
Fordele
De vigtigste fordele ved DLD-1-cellelinjen er:
Model for kolorektal kræft
DLD-1-celler har mutationer, der ofte findes hos patienter med kolorektal kræft, såsom DLD-1 KRAS-mutation, DLD-1 BRCA og DLD-1 BRCA2. Denne relevans gør dem til en klinisk passende cellemodel til undersøgelse af denne sygdom.
Tumorigen cellelinje
DLD-1-celler er tumorigeniske. De kan forårsage tumorer, når de injiceres i nude-mus. Derfor anvender forskere disse celler til at udvikle xenotransplantat-tumormodeller, der hjælper med at undersøge tumordannelse, -udvikling og -progression in vivo.
Begrænsninger
Begrænsningerne forbundet med DLD-1-cellerne er:
Heterogenitet
DLD-1-koloncancercellepopulationer udviser genetisk og fænotypisk heterogenitet. Dette kan påvirke generaliserbarheden af forskningsresultaterne.
Forskningsanvendelser af DLD-1-cellelinjen
DLD-1-cellelinjen tilbyder en række anvendelsesmuligheder inden for kræftforskning. Nogle fremtrædende anvendelser diskuteres i dette afsnit.
- Kræftundersøgelse: DLD-1-celler fungerer som en værdifuld in vitro-model til forståelse af de molekylære mekanismer, der ligger til grund for vækst, udvikling og progression af kolorektal kræft. Desuden anvendes de til at undersøge genekspression, signalveje og indflydelsen af specifikke genetiske mutationer på kræftcellers adfærd. Forskning udført i 2022 viste, at PI3K/Akt/YAP-signalkaskaden regulerer migrationen og invasionen af DLD-1-kolorektal kræftcellelinjen [2].
- Lægemiddeludvikling: Forskere anvender DLD-1-cellelinjen til at teste effektiviteten af kræftlægemidler og evaluere deres potentiale til behandling af tyktarmskræft. Dette bidrager til lægemiddeludvikling og effektiv bekæmpelse af sygdommen. En undersøgelse gennemført i 2022 anvendte DLD-1-kræftcellelinjen og undersøgte den kræftbekæmpende virkning af siliciumftalocyaniner, kemisk syntetiserede forbindelser. Undersøgelsens resultater tyder på, at disse forbindelser er potente kræftbekæmpende midler [3]. Interessant nok fandt en anden undersøgelse det kræftbekæmpende potentiale i et probiotisk-afledt P8-protein ved hjælp af DLD-1-celler [4].
5. Forskningspublikationer om DLD-1-celler
Dette afsnit vil fremhæve nogle få interessante og ofte citerede publikationer, der omhandler DLD-1-koloncarcinomcellelinjen.
Denne publikation er offentliggjort i Journal of Biologically Active Products from Nature (2022). Undersøgelsen fandt, at diosmin, et flavonoid, inducerede celledød i DLD-1-celler og også forårsagede cellecyklusstop; det kan således være et potentielt middel mod kræft.
Bromelain undertrykker effektivt Kras-mutant kolorektal kræft ved at stimulere ferroptose
Denne undersøgelse i Animal Cells and Systems (2018) foreslog, at bromelain, et enzym, undertrykker DLD-1 KRAS-mutationen og udøver potente cytotoksiske effekter.
Denne forskningsartikel blev offentliggjort i 2019 i tidsskriftet “Environmental Toxicology”. Undersøgelsen udforskede de antitumorvirkninger, som et naturligt stof, bergapten, har, ved hjælp af en DLD-1-kolorektal cellelinje.
Denne undersøgelse i tidsskriftet Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials (2023) fandt, at nanokompositter af curcumin/jernoxid er yderst effektive mod DLD-1-kolorektale kræftceller.
Denne forskningsartikel blev offentliggjort i 2020 i Turkish Journal of Biology. Undersøgelsen foreslog, at et naturprodukt, epibrassinolid-medieret aktivering af AKT i DLD-1-celler, stimulerer autofagi relateret til polyaminer.
Ressourcer til DLD-1-cellelinjen: Protokoller, videoer og mere
Her følger nogle ressourcer om DLD-1-celler:
- DLD-1-transfektion: Denne videovejledning er en omfattende guide til DLD-1-in vitro-transfektionsprotokollen.
- DLD-1-celler: Denne forskningsartikel beskriver kort kravene til DLD-1-cellekultur, herunder medier og dyrkningsbetingelser. Desuden kan den hjælpe dig med at lære den transfektionsprotokol, der anvendes til DLD-1-celler.
Følgende links indeholder protokollen for dyrkning af DLD-1, humane tyktarmskræftceller.
- DLD-1-cellelinje: Denne hjemmeside giver grundlæggende information om DLD-1-cellelinjen. Den vil hjælpe dig med at lære forskellige DLD-1-cellekulturprotokoller, herunder subkultivering og håndtering af kryopræserverede og prolifererende kulturer.
Referencer
- Gavrilas, L.I., et al., Pro-apoptotiske gener som nye mål for enkelt- og kombinationsbehandlinger med resveratrol og curcumin i kolorektal kræft. Food & function, 2019. 10(6): s. 3717-3726.
- Takeda, T., et al., PI3K/Akt/YAP-signalering fremmer migration og invasion af DLD-1-kolorektale kræftceller. Oncology Letters, 2022. 23(4): s. 1-9.
- Farajzadeh, N., et al., Anticanceraktivitet af nye siliciumphthalocyaniner mod den kolorektale adenocarcinomcellelinje (DLD-1). New Journal of Chemistry, 2022. 46(41): s. 19863-19873.
- An, B.C., et al., Anti-kræftvirkninger af probiotisk-afledt P8-protein i kolorektal kræftcellelinjen DLD-1. International Journal of Molecular Sciences, 2023. 24(12): s. 9857.