B16-F10-celler – Undersøgelse af B16-F10-melanomcellelinjen i forskning i metastaser
B16-F10-celler udgør en melanomcellelinje, der stammer fra C57BL/6J-mus. De anvendes i vid udstrækning i hudkræftforskning. Forskere bruger disse celler til at studere tumorudvikling og -progression samt terapeutiske interventioner. Denne artikel vil dække de grundlæggende aspekter af B16-F10-melanomceller. Den vil især omfatte:
- Vækstmedium
- B16-F10-celler dyrkes i DMEM-mediet. Mediet tilsættes 10 % FBS, 4 mM L-glutamin, 1,5 g/L NaHCO3, 4,5 g/L glukose og 1,0 mM natriumpyruvat for at opnå optimal cellevækst. Mediet bør udskiftes 2 til 3 gange om ugen.
- Fordoblingstid
- Fordoblingstiden for B16-F10-celler er ca. 20,1 timer. Den kan variere fra 17 til 21 timer afhængigt af dyrkningsbetingelserne.
- Væksttype
- B16-F10 er en adhærent cellelinje. Cellerne vokser hurtigt og danner monolag.
- Biosikkerhedsniveau
- BSL-1
- Fås hos
- Cytion — Bestil B16-F10
- Oprindelse og generelle egenskaber ved B16-F10-cellelinjen
- Oplysninger om dyrkning af B16-F10-celler
- B16-F10-celler: Fordele og ulemper
- Forskningsanvendelser af B16-F10-celler
- Publikationer om B16-F10-cellelinjen
- Ressourcer til B16-F10-cellelinjen: Protokoller, videoer og mere
- Oprindelse og generelle egenskaber ved B16-F10-cellelinjen
- Oplysninger om dyrkning af B16-F10-celler
- B16-F10-celler: Fordele og ulemper
- Forskningsanvendelser af B16-F10-celler
- 5. Publikationer om B16-F10-cellelinjen
- Ressourcer til B16-F10-cellelinjen: Protokoller, videoer og mere
- Ofte stillede spørgsmål
Oprindelse og generelle egenskaber ved B16-F10-cellelinjen
Dette afsnit giver dig indsigt i oprindelsen og de særlige egenskaber ved B16F10-melanomtumorceller. Det vil hjælpe dig med at bruge cellelinjen effektivt i dit forskningsarbejde. Du vil hovedsageligt lære: Hvad er B16-F10-celler? Hvad stammer B16F10 fra? Hvad er morfologien for B16F12-cellelinjen? Hvad er størrelsen på B16F10-cellen?
- B16-F10 er en subklon af B16-tumorcellelinjen, der stammer fra hudvæv fra C57BL/6J-mus. Her blev B16F10-melanomceller udviklet efter intravenøs injektion af B16-linjen i immunkompromitterede eller syngene mus. Disse celler blev udvalgt på grund af deres potentiale til at danne metastaserede lungekolonier in vivo og blev derefter etableret efter ti cyklusser med dannelse af lungekolonier in vitro [1]. Den blev udviklet af Fidler og kolleger i 1976.
- B16-F10-cellelinjer har et epitelagtigt og spindelformet udseende.
- Den omtrentlige størrelse af B16-F10-celler er 15,4 ± 1,4 μm [2].
B16-F1- og B16-F10-celler
B16-F1- og B16-F10-celler stammer fra B16-modercellelinjen. Begge har samme oprindelse og besidder næsten ens karakteristika. Den væsentligste forskel er dog deres metastatiske evne. B16-F10-celler har et højt, mens B16-F1 har et lavt metastatisk potentiale [3].
Oplysninger om dyrkning af B16-F10-celler
Inden du håndterer og dyrker en cellelinje, skal du kende dens fordoblingstid, vækstmedier, betingelser og cellekulturprotokoller. Dette afsnit vil omhandle: Hvad er fordoblingstiden for B16-F10-celler? Hvordan dyrker man B16-F10-celler? Hvad er B16-F10-cellemediet? Hvilke dyrkningsbetingelser anbefales for B16-F10-celler?
Nøglepunkter for dyrkning af B16-F10-celler
Fordoblingstid:
Fordoblingstiden for B16-F10-celler er ca. 20,1 timer. Den kan variere fra 17 til 21 timer, afhængigt af dyrkningsbetingelserne.
Adhærent eller i suspension:
B16-F10 er en adhærent cellelinje. Cellerne vokser hurtigt og danner monolag.
Opdelingsforhold:
B16-F10-celler subkultiveres ved et delingsforhold på 1:2 til 1:4. Cellerne vaskes med phosphatbuffersaltvand (1x) og inkuberes derefter med Accutase-passageopløsning i 8 til 10 minutter ved stuetemperatur. Cellerne tilsættes frisk medium og centrifugeres. Den opsamlede cellepellet resuspenderes igen, og cellerne fordeles i den nye kolbe, der indeholder frisk dyrkningsmedium, i henhold til opdelingsforholdet.
Vækstmedium:
B16-F10-celler dyrkes i DMEM-mediet. Mediet tilsættes 10 % FBS, 4 mM L-glutamin, 1,5 g/l NaHCO3, 4,5 g/l glukose og 1,0 mM natriumpyruvat for at opnå optimal cellevækst. Mediet bør udskiftes 2 til 3 gange om ugen.
Vækstbetingelser:
B16-F10-celler dyrkes i en befugtet inkubator ved 37 °C med en 5 % CO2-tilførsel.
Opbevaring:
Frosne celler opbevares ved under -150 °C i en elektrisk ultralavtemperaturfryser eller i dampfasen af flydende nitrogen for at opretholde cellernes levedygtighed.
Fryseproces og medium:
B16-F10-celler fryses ned i CM-1- eller CM-ACF-medier til opbevaring. Til dette anbefales en langsom fryseproces, der kun tillader et temperaturfald på 1 °C pr. minut for at forhindre cellerne i at få et chok.
Optøningsproces:
Frosne B16-F10-celler optøs i et forudindstillet vandbad ved 37 °C i 40 til 60 sekunder. Derefter overføres cellerne til frisk medium og centrifugeres for at fjerne komponenter fra frysemediet. De opsamlede celler resuspenderes i et vækstmedium og hældes i kolber til dyrkning.
Biosikkerhedsniveau:
Der kræves et laboratorium med biosikkerhedsniveau 1 til håndtering og vedligeholdelse af B16-F10-cellelinjen.
B16-F10-celler: Fordele og ulemper
Ligesom andre cellelinjer har B16-F10 også nogle fordele og ulemper. Nogle væsentlige fordele og ulemper ved denne hudmelanomcellelinje diskuteres i dette afsnit.
Fordele
B16-F10-cellelinjen er meget udbredt i kræftforskning. Fordelene ved B16-F10-celler er:
Metastatisk potentiale
Hudmelanom B16F10-celler udviser et højt metastatisk potentiale, hvilket gør dem værdifulde til at studere kræftmetastaser og de underliggende mekanismer.
In vitro-tumormodel
B16-F10-celler fungerer som en in vitro-model til undersøgelse af kræftprogression og -vækst, hvilket hjælper forskere med at forstå de cellulære og molekylære mekanismer, der driver kræft.
Ulemper
Ulemperne ved B16-F10-cellelinjen er:
Mus-afledt cellelinje
B16-F10 er en mus-afledt cellelinje, hvilket begrænser dens anvendelighed til menneskespecifikke studier. Forskningsresultater fra disse celler kan ikke altid overføres direkte til menneskelig biologi.
Forskningsanvendelser af B16-F10-celler
B16-F10-cellelinjen anvendes i vid udstrækning i kræftforskning. Her beskrives nogle få lovende anvendelser af denne cellelinje.
- Kræftforskning: B16-F10-cellelinjen er en værdifuld model til at studere kræftcellers processer, herunder proliferation, invasion, migration og celledød eller apoptose. Desuden hjælper den forskere med at få indsigt i de molekylære mekanismer og signalveje, der driver disse cellulære processer. En undersøgelse gennemført i 2018 undersøgte CCR5's (C-C-kemokinreceptor type fem) rolle i melanomcellers epitel-til-mesenkymale celleovergang og metastase. Resultaterne afslørede, at CCR5-mangel begrænser tumorvækst og metastase, mens høj ekspression fører til øget vækst og metastase af B16-F10-celler. Yderligere forskning rapporterede, at CCR5 regulerer TGFβ1-ekspressionen, som regulerer PI3K/AKT/GSK3β-signalering for at fremme overgangen fra epitel til mesenkym og cellemigration [4].
- Lægemiddelafprøvning og -udvikling: B16F10-melanomtumorceller er meget aggressive og derfor velegnede til afprøvning af potentielle antitumorlægemidler og -behandlinger. Forskere anvender disse celler og vurderer forskellige forbindelsers effekt på cellevækst, proliferation og metastase, hvilket understøtter lægemiddeludviklingen. En undersøgelse udført i 2018 af Valentina Nanni og kolleger undersøgte de terapeutiske virkninger af et hydroalkoholisk ekstrakt af Spartiumjunceum-blomster. Undersøgelsen foreslog, at blomsterekstraktet var effektivt til at fremkalde senescens i B16-F10-celler, hvilket fører til hæmning af cellevækst og melanogenese, og dermed kan det udøve potentielle kræftbekæmpende aktiviteter [5].
5. Publikationer om B16-F10-cellelinjen
Her er nogle vigtige forskningspublikationer om B16-F10-melanomcellelinjen:
Denne undersøgelse blev offentliggjort i Nutrients (2020). Den foreslog, at etanoliske ekstrakter af Sorghum bicolor har en anti-melanogen effekt i hudmelanom B16F10-celler.
Calcitriol hæmmer proliferation og inducerer potentielt apoptose i B16–F10-celler
Forskningen, der blev offentliggjort i Medical Science Monitor Basic Research (2022), foreslog, at lægemidlet calcitriol udøver antitumorvirkninger i B16-F10-melanomceller ved at hæmme proliferation og inducere apoptose.
Denne artikel er offentliggjort i Biochemical and Biophysical Research Communications (2022). Resultaterne afslørede, at cardoler, resorcinol-lipider, udøver intens cytotoksicitet på B16-F10-cellelinjen.
Undersøgelsen, der er offentliggjort i Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2018), undersøgte det antimetastatiske potentiale af Ginkgo biloba-ekskarpekstrakt ved hjælp af B16-F10-celler.
Denne forskning i World Neurosurgery (2018) foreslog, at thymoquinon kan være en effektiv terapi mod intracerebrale metastatiske læsioner, da det undertrykker B16-F10-cellevækst og inducerer apoptose.
Ressourcer til B16-F10-cellelinjen: Protokoller, videoer og mere
B16F10-endotelceller er meget udbredt i hudkræftforskning. Her er nogle online ressourcer, der forklarer protokollerne for dyrkning og transfektion:
- Transfektion af B16F10-melanomceller: Denne videovejledning kan hjælpe dig med at lære transfektionsprotokollen for B16-F10-celler.
- B16-F10-transfektion: Dette dokument forklarer in vitro-DNA-transfektionsprotokollen for hudmelanom-B16F10-celler.
Følgende link indeholder cellekulturprotokollen for B16-F10-celler:
- Subkultivering af B16-F10: Denne hjemmeside indeholder nyttige oplysninger om B16F10-melanomtumorceller. Den omfatter vækstmedier, fordoblingstid, dyrkningsbetingelser og protokol for subkultivering af celler samt håndtering af kryopræserverede og proliferative kulturer.
Referencer
- Poste, G., et al., Sammenligning af de metastatiske egenskaber hos B16-melanomkloner isoleret fra dyrkede cellelinjer, subkutane tumorer og individuelle lungemetastaser. Cancer Research, 1982. 42(7): s. 2770-2778.
- Nakamura, M., D. Ono og S. Sugita, Mekanofenotypning af B16-melanomcellevarianter til vurdering af effektiviteten af (-)-epigallocatechingallat-behandling ved hjælp af en konisk mikrofluidisk enhed. Micromachines, 2019. 10(3): s. 207.
- Danciu, C., et al., Adfærd hos fire forskellige B16-musemelanomcelle-sublinjer: C57BL/6J-hud. Int J Exp Pathol, 2015. 96(2): s. 73-80.
- Liu, J., et al., Høj ekspression af CCR5 i melanom forstærker epitel-mesenkym-overgang og metastase via TGFβ1. The Journal of Pathology, 2019. 247(4): s. 481-493.
- Nanni, V., et al., Hydroalkoholisk ekstrakt af Spartium junceum L.-blomster hæmmer vækst og melanogenese i B16-F10-celler ved at inducere senescens. Phytomedicine, 2018. 46: s. 1-10.