B16-F10-celler - udforskning af B16-F10-melanomcellelinjen i metastaseforskning
B16-F10-celler er en melanomcellelinje, der stammer fra C57BL/6J-mus. De bruges i vid udstrækning til forskning i hudkræft. Forskere bruger disse celler til at studere tumorudvikling og -progression samt terapeutiske indgreb. Denne artikel vil dække de grundlæggende aspekter af B16-F10-melanomceller. Den vil især omfatte:
- Oprindelse og generelle karakteristika for B16-F10-cellelinjen
- Oplysninger om dyrkning af B16-F10-celler
- B16-F10-celler: Fordele og ulemper
- Forskningsanvendelser af B16-F10-celler
- Publikationer med B16-F10-cellelinje
- Ressourcer til B16-F10-cellelinje: Protokoller, videoer og meget mere
1. Oprindelse og generelle karakteristika for B16-F10-cellelinjen
Dette afsnit giver dig indsigt i oprindelsen og de særlige egenskaber ved B16F10-melanomtumorceller. Det vil hjælpe dig med at bruge cellelinjen effektivt i dit forskningsarbejde. Hovedsageligt vil du lære: Hvad er B16-F10-celler? Hvad stammer B16F10 fra? Hvad er morfologien i B16F12-cellelinjen? Hvad er størrelsen på B16F10-cellen?
- B16-F10 er en subklon af B16-tumorcellelinjen, der stammer fra hudvæv fra C57BL/6J-mus. Heri blev B16F10-melanomceller udviklet efter intravenøs indsprøjtning af B16-linjen i immunkompromitterede eller syngene mus. Disse celler blev udvalgt for deres potentiale til at danne metastaserede lungekolonier in vivo og blev derefter etableret efter ti cyklusser med dannelse af lungekolonier in vitro [1]. Den blev udviklet af Fidler og kolleger i 1976.
- B16-F10-cellelinjer har et epitellignende og spindelformet udseende.
- Den omtrentlige størrelse af B16-F10-celler er 15,4 ± 1,4 μm [2].
B16-F1- og B16-F10-celler
B16-F1- og B16-F10-celler stammer fra B16-forældrecellelinjen. Begge stammer fra det samme og har næsten samme egenskaber. Den største forskel er dog deres metastatiske evne. B16-F10-celler har et højt, mens B16-F1 har et lavt metastatisk potentiale [3].
2.information om dyrkning af B16-F10-celler
Før du håndterer og dyrker en cellelinje, skal du kende til dens fordoblingstid, vækstmedier, betingelser og celledyrkningsprotokoller. Dette afsnit vil diskutere: Hvad er fordoblingstiden for b16-f10-celler? Hvordan dyrker man B16F10-celler? Hvad er B16-F10-cellemediet? Hvilke dyrkningsbetingelser anbefales for B16-F10-celler?
Nøglepunkter for dyrkning af B16-F10-celler
|
Fordoblingstid: |
Fordoblingstiden for B16-F10-celler er ca. 20,1 timer. Den kan variere fra 17 til 21 timer, afhængigt af dyrkningsbetingelserne. |
|
Vedhæftende eller i suspension: |
B16-F10 er en adhærent cellelinje. Cellerne vokser hurtigt og danner monolag. |
|
Opdelingsforhold: |
B16-F10-celler subkultiveres i et splitforhold på 1:2 til 1:4. Cellerne vaskes med fosfatbuffersaltvand (1x) og inkuberes derefter med Accutase-passageringsopløsning i 8 til 10 minutter ved omgivelsestemperatur. Cellerne tilsættes frisk medium og centrifugeres. Den høstede cellepellet resuspenderes igen, og cellerne fordeles i den nye kolbe, der indeholder frisk dyrkningsmedie i henhold til splitforholdet. |
|
Vækstmedium: |
B16-F10-celler dyrkes i DMEM-mediet. Mediet er suppleret med 10 % FBS, 4 mM L-Glutamin, 1,5 g/L NaHCO3, 4,5 g/L Glukose og 1,0 mM Natriumpyruvat for at opnå den ideelle cellevækst. Mediet skal udskiftes 2 til 3 gange om ugen. |
|
Vækstbetingelser: |
B16-F10-celler dyrkes i en befugtet inkubator ved 37 °C med 5 % CO2-forsyning. |
|
Opbevaring: |
Frosne celler opbevares under -150 °C i en elektrisk ultra-lavtemperaturfryser eller i dampfasen af flydende nitrogen for at bevare cellernes levedygtighed. |
|
Fryseproces og medium: |
B16-F10-celler nedfryses i CM-1- eller CM-ACF-medier til opbevaring. Til dette anbefales en langsom fryseproces, der kun tillader et fald i temperaturen på 1 °C pr. minut for at forhindre, at cellerne får et chok. |
|
Optøningsproces: |
Frosne B16-F10-celler optøs i et forudindstillet 37 °C vandbad i 40 til 60 sekunder. Derefter tilsættes cellerne til frisk medium og centrifugeres for at fjerne komponenter fra frysemediet. De opsamlede celler resuspenderes i et vækstmedium og hældes i kolber til dyrkning. |
|
Biosikkerhedsniveau: |
Der kræves et laboratorium på biosikkerhedsniveau 1 for at håndtere og vedligeholde B16-F10-cellelinjen. |
3.b16-F10-celler: Fordele og ulemper
Ligesom andre cellelinjer har B16-F10 også nogle fordele og ulemper. Nogle væsentlige fordele og ulemper ved denne hudmelanomcellelinje diskuteres i dette afsnit.
Fordele og ulemper
B16-F10-cellelinjen er meget udbredt inden for kræftforskning. Fordelene ved B16-F10-celler er:
|
Metastatisk potentiale |
Hudmelanom B16F10-celler udviser et højt metastatisk potentiale, hvilket gør dem værdifulde til at studere kræftmetastase og underliggende mekanismer. |
|
In vitro-tumormodel |
B16-F10-celler fungerer som en in vitro-model til undersøgelse af kræftprogression og -vækst og hjælper forskere med at forstå de cellulære og molekylære mekanismer, der driver kræft. |
Ulemper
Ulemperne forbundet med B16-F10-cellelinjen er:
|
Cellelinje afledt af mus |
B16-F10 er en cellelinje, der stammer fra mus, hvilket begrænser dens anvendelighed til menneskespecifikke undersøgelser. Forskningsresultater fra disse celler kan ikke altid overføres til den menneskelige biologi. |
4.forskningsanvendelser af B16-F10-celler
B16-F10-cellelinjen bruges i vid udstrækning i kræftforskning. Nogle få lovende anvendelser af denne cellelinje diskuteres her.
- Kræftforskning: B16-F10-cellelinjen er en værdifuld model til at studere kræftcelleprocesser, herunder spredning, invasion, migration og celledød eller apoptose. Desuden hjælper den forskere med at få indsigt i molekylære mekanismer og veje, der driver disse cellulære processer. Et studie fra 2018 undersøgte CCR5's (C-C kemokinreceptor type fem) rolle i melanomcellers overgang fra epiteliale til mesenkymale celler og metastase. Resultaterne viste, at mangel på CCR5 begrænser tumorvækst og metastase, mens et højt udtryk fører til øget vækst og metastase af B16-F10-celler. Yderligere forskning rapporterede, at CCR5 regulerer TGFβ1-ekspression, som regulerer PI3K/AKT/GSK3β-signalering for at fremme overgangen fra epitel til mesenkym og cellemigration [4].
- Testning og udvikling af lægemidler: B16F10-melanomtumorceller er meget aggressive og derfor velegnede til at teste potentielle antitumorlægemidler og -behandlinger. Forskere anvender disse celler og vurderer effekten af forskellige stoffer på cellevækst, spredning og metastase, hvilket hjælper med at udvikle lægemidler. En undersøgelse udført i 2018 af Valentina Nanni og kolleger undersøgte de terapeutiske virkninger af Spartium junceum blomster hydroalkoholisk ekstrakt. Undersøgelsen viste, at blomsterekstraktet var effektivt til at inducere senescens i B16-F10-celler, hvilket fører til undertrykkelse af cellevækst og melanogenese og dermed kan udøve potentielle anti-cancer-aktiviteter [5].
5.publikationer med B16-F10-cellelinje
Her er nogle vigtige forskningspublikationer med B16-F10-melanomcellelinjen:
Denne undersøgelse blev offentliggjort i Nutrients (2020). Det foreslog, at Sorghum bicolor ethanolisk ekstrakt har en anti-melanogen effekt i hudmelanom B16F10-celler.
Calcitriol hæmmer proliferation og inducerer potentielt apoptose i B16-F10-celler
Forskningen, der blev offentliggjort i Medical Science Monitor Basic Research (2022), foreslog, at calcitriol-lægemidlet udøver antitumoreffekter i B16-F10-melanomceller ved at hæmme spredning og inducere apoptose.
Denne artikel er offentliggjort i Biochemical and Biophysical Research Communications (2022). Resultaterne afslørede, at kardoler, resorcinoliske lipider, udøver intens cytotoksicitet på B16-F10-cellelinjen.
Undersøgelsen, der blev offentliggjort i Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2018), undersøgte det antimetastatiske potentiale i Ginkgo biloba exocarp-ekstrakt ved hjælp af B16-F10-celler.
Denne forskning i World Neurosurgery (2018) foreslog, at thymoquinon kan være en effektiv behandling mod intracerebrale metastatiske læsioner, da den undertrykker B16-F10-cellevækst og fremkalder apoptose.
6.ressourcer til B16-F10-cellelinje: Protokoller, videoer og meget mere
B16F10 endotelceller bruges i vid udstrækning til forskning i hudkræft. Her er nogle online-ressourcer, der forklarer dens dyrknings- og transfektionsprotokoller:
- Transfektion af B16F10-melanomceller: Denne videovejledning kan hjælpe dig med at lære transfektionsprotokollen for B16-F10-celler.
- B16-F10-transfektion: Dette dokument forklarer in vitro DNA-transfektionsprotokollen for hudmelanom B16F10-celler.
Følgende link indeholder celledyrkningsprotokollen for B16-F10-celler:
- B16-F10 subkulturering: Dette websted indeholder nyttige oplysninger om B16F10-melanomtumorceller. Det omfatter vækstmedier, fordoblingstid, dyrkningsbetingelser og protokol for subkulturer samt håndtering af kryopræserverede og proliferative kulturer.
Referencer
- Poste, G., et al., Comparison of the metastatic properties of B16 melanoma clones isolated from cultured cell lines, subcutaneous tumors, and individual lung metastases. Cancer Research, 1982. 42(7): p. 2770-2778.
- Nakamura, M., D. Ono og S. Sugita, Mechanophenotyping of B16 Melanoma Cell Variants for the Assessment of the Efficacy of (-)-Epigallocatechin Gallate Treatment Using a Tapered Microfluidic Device. Mikromaskiner, 2019. 10(3): p. 207.
- Danciu, C., et al, Behaviour of four different B16 murine melanoma cell sublines: C57BL/6J-hud. Int J Exp Pathol, 2015. 96(2): p. 73-80.
- Liu, J., et al., Højt udtryk af CCR5 i melanom forbedrer epitelial-mesenchymal transition og metastase via TGFβ1. The Journal of Pathology, 2019. 247(4): p. 481-493.
- Nanni, V., et al., Hydroalkoholisk ekstrakt af Spartium junceum L. blomster hæmmer vækst og melanogenese i B16-F10 celler ved at inducere senescens. Phytomedicine, 2018. 46: p. 1-10.