AGS-celler – Undersøgelse af AGS-celler fra gastrisk adenokarcinom i kræftforskning
AGS-celler udgør en human gastrisk adenokarcinom-cellelinje, der er meget udbredt i biomedicinsk forskning. Den anvendes især til at studere mavekræftbiologi, herunder tumorvækst, udvikling, progression og terapeutiske interventioner. Derudover bruges den til at undersøge interaktioner mellem vært og patogen.
- Vækstmedium
- DMEM-medier indeholdende 10 % FBS, 4 mM L-glutamin, 4,5 g/L glukose, 1,5 g/L NaHCO3 og 1,0 mM natriumpyruvat anvendes til dyrkning af AGS-celler. Medierne bør udskiftes 2 til 3 gange om ugen.
- Fordoblingstid
- AGS-cellernes fordoblingstid ligger mellem 24 og 48 timer.
- Væksttype
- AGS-celler er adhærente. De vokser til monolag.
- Biosikkerhedsniveau
- BSL-2
- Fås hos
- Cytion — Bestil AGS
Generelle egenskaber og oprindelse af AGS-celler
Det er nødvendigt at kende en cellelinjes oprindelse og generelle egenskaber, før man begynder at arbejde med den. Dette afsnit vil dække følgende: Hvad er AGS-celler? Hvad er AGS-cellens oprindelse? Hvad er morfologien for AGS-kræftcellelinjen?
- AGS-cellelinjen stammer fra mavevævet hos en 54-årig kaukasisk kvinde med gastrisk adenokarcinom. Den blev isoleret i 1979 [1].
- AGS-celler har en epitelagtig morfologi.
- De gastriske epiteliale AGS-celler er hyperdiploide. Det modale kromosomantal for AGS-celler er 49, hvilket forekommer i næsten 60 % af cellerne. Polyploidi forekommer også i ca. 3,6 % af cellerne.
Oplysninger om dyrkning af AGS-cellelinjen
For at kunne håndtere og administrere en cellelinje korrekt skal du kende de grundlæggende begreber inden for dyrkning. Du bør især lære: Hvad er AGS-cellernes fordoblingstid? Hvad er AGS-cellemediet? Hvordan subkultiverer man AGS-celler? Hvilke frysemedier anvendes til gastriske epitel-AGS-celler?
Vigtige punkter ved dyrkning af AGS-celler
Fordoblingstid:
AGS-cellernes fordoblingstid ligger mellem 24 og 48 timer.
Adhærent eller i suspension:
AGS-celler er adhærente. De vokser til monolag.
Udsåningstæthed:
AGS-celler udsættes med en celletæthed på 1 x 104 celler/cm2. Cellerne danner et sammenhængende monolag ved denne tæthed på 3 til 5 dage. Efter fjernelse af gammelt medie skylles cellerne med 1 x PBS og inkuberes med Accutase-dissociationsopløsning. Løsnede celler blev resuspenderet i dyrkningsmedier og centrifugeret. Cellepelleten blev igen resuspenderet, og efter tælling af AGS-cellerne blev de overført til en ny kolbe til vækst.
Vækstmedium:
DMEM-medie indeholdende 10 % FBS, 4 mM L-glutamin, 4,5 g/L glukose, 1,5 g/L NaHCO3 og 1,0 mM natriumpyruvat anvendes til dyrkning af AGS-celler. Mediet bør udskiftes 2 til 3 gange om ugen.
Vækstbetingelser:
AGS-celler opbevares i en befugtet inkubator (ved 37 °C) med en CO2-tilførsel på 5 %.
Opbevaring:
Frosne AGS-celler opbevares i elektriske frysere ved en temperatur under -150 °C eller i væskeformet nitrogen i længere tid.
Fryseproces og medium:
CM-1- eller CM-ACF-medium anvendes til nedfrysning af AGS-celler. Nedfrysning af celler foregår ved en langsom nedfrysningsproces, der kun tillader et temperaturfald på 1 °C pr. minut og beskytter cellernes levedygtighed.
Optøningsproces:
Frosne maveepitelceller omrystes hurtigt i et 37 °C varmt vandbad i 40 til 60 sekunder. De optøede celler resuspenderes i frisk dyrkningsmedium og hældes i nye kolber til vækst. Efter 24 timers inkubation fornyes mediet for at fjerne komponenter fra frysemediet. I modsætning hertil centrifugeres de optøede celler, og elementer fra frysemediet fjernes. Derefter resuspenderes de høstede celler igen og hældes i kolben, der indeholder dyrkningsmediet.
Biosikkerhedsniveau:
Laboratoriemiljøer med biosikkerhedsniveau 2 er afgørende for AGS-cellekultivering.
AGS-cellelinje: Fordele og begrænsninger
Dette afsnit vil belyse nogle af de vigtigste fordele og begrænsninger forbundet med AGS-celler.
Fordele
De vigtigste fordele ved gastriske epitelceller (AGS-celler) er:
Let at dyrke
AGS-cellelinjen fra gastrisk karcinom er nem at vedligeholde i cellekulturlaboratorier. Den stiller ikke nogen komplicerede eller krævende krav til cellekulturen. Desuden udviser den gode vækstegenskaber, hvilket gør den til et ideelt valg til studier af gastrisk kræftbiologi.
Relevans for mavekræft
AGS-celler stammer fra humant gastrisk adenokarcinom, hvilket gør dem meget anvendte til at studere gastrisk karcinombiologi og terapeutiske interventioner.
Begrænsninger
Begrænsningen forbundet med AGS-cellelinjen er:
In vitro-cellemodel
AGS-celler dyrkes i biomedicinske forskningslaboratorier under kunstige betingelser. Derfor replikerer de muligvis ikke fuldt ud det in vivo-mikromiljø, der findes ved mavekræft, samt andre cellulære og molekylære interaktioner.
Anvendelser af AGS-celler
AGS-celler bruges specifikt til at studere mavekræftbiologi. De har mange andre lovende anvendelser inden for det biomedicinske felt. Nogle af de interessante forskningsanvendelser af AGS-celler er:
- Undersøgelse af mavekræft: AGS-celler er et fremragende forskningsværktøj til at undersøge de cellulære og molekylære mekanismer, der ligger til grund for vækst, metastase og invasion af mavekræft. Forskere anvender også gastriske epitel-AGS-celler til at undersøge forskellige cellulære processer, genetiske mutationer og signalveje i udviklingen af mavekræft. En undersøgelse fra Oncology Reports (2019) fandt, at mikroRNA-183-5p.1 fremmer tumorcellers proliferation, migration og invasion ved at hæmme Bcl 2/P53-signalkaskaden. Derudover nedregulerer det også TPM1-genet for at udøve disse effekter. Således foreslås både mikroRNA og TPM1 som effektive molekylære mål for udvikling af målrettede behandlinger mod mavekræft [2].
- Lægemiddelscreening: AGS-celler er almindeligt blevet anvendt til screening af nye og effektive lægemidler mod mavekræft. Forskere vurderer cytotoksicitet og effektivitet af potentielle lægemidler ved hjælp af AGS-cellelinjen. Der er også blevet gennemført studier med henblik på at identificere nye molekylære mål og udvikle nye målrettede behandlinger til bekæmpelse af gastriske karcinomer. Forskning udført i 2021 anvendte AGS-mavekræftceller og undersøgte den terapeutiske virkning af lægemidlet paclitaxel. Resultaterne afslørede, at paclitaxel inducerer en mitotisk katastrofe, en integreret mekanisme for apoptose eller celledød i AGS-celler. Derudover fremmede det også autofagi i mavekræftceller [3].
- Vært-patogen-interaktioner: AGS-kræftcellelinjen undersøger også vært-patogen-interaktioner. Dette hjælper forskerne med at forstå de cellulære mekanismer og reaktioner, der er involveret i en infektion. For eksempel observerede en undersøgelse gennemført i 2020, at små ikke-kodende RNA'er, der findes i ydre membranvesikler af Helicobacter pylori, mindsker interleukin 8-sekretionen i humane AGS-celler [4].
5. Forskningspublikationer om AGS-cellelinjen
Dette afsnit af artiklen vil omhandle nogle få interessante og mest citerede forskningspublikationer om AGS-celler.
Denne undersøgelse i Biomedicine & Pharmacotherapy (2020) foreslog, at salidrosid, et naturligt stof, inducerer beskyttende autofagi og celledød i gastriske epitelceller (AGS-celler) via modulering af PI3K/AKT/mTOR-signalvejen.
Denne undersøgelse blev offentliggjort i Biomedicine & Pharmacotherapy (2018). Den undersøgte de synergistiske antikræfteffekter af astragalus-polysaccharid og lægemidlet apatinib i AGS-celler. Undersøgelsens resultater afslørede, at astragalus forstærker apatinibs antitumorvirkninger via undertrykkelse af AKT-signalering.
Denne forskning i Journal of Ethnopharmacology (2018) foreslog, at curcuzedoalide, en naturlig forbindelse fra Curcuma zedoaria Roscoe-planten, bidrager til dens cytotoksiske potentiale mod AGS-celler.
Overekspression af FOXA1 hæmmer celleproliferation og EMT i humane AGS-celler fra mavekræft
Denne publikation i Gene (2018) foreslog, at opregulering af FOXA1 undertrykker proliferation af AGS-maveadenokarcinomceller samt epitel-til-mesenkym-overgang (EMT) og invasion.
sncRNA'er pakket af Helicobacter pylori-ydre membranvesikler dæmper IL-8-sekretionen i humane celler
Denne forskningsartikel blev offentliggjort i International Journal of Medical Microbiology i 2020. I denne undersøgelse blev AGS-celler anvendt til at studere interaktioner mellem vært og patogen. Resultaterne afslørede, at Helicobacter pylori indeholder noget ikke-kodende RNA i sine ydre membranvesikler, som påvirker IL-8-niveauerne i AGS-celler.
Ressourcer til AGS-cellelinjen: Protokoller, videoer og mere
Her følger nogle ressourcer om AGS-celler.
- Transfektionsprotokol for AGS-celler: Denne video er en trinvis vejledning til at lære transfektionsprotokollen for gastriske epitelceller (AGS-celler).
Følgende link indeholder protokollen for AGS-cellekultur.
- AGS-cellekulturprotokol: Denne hjemmeside indeholder nyttige oplysninger om AGS-cellemedier og cellekulturprotokoller. Kort sagt giver den en protokol til subkultivering af gastriske epitel-AGS-celler og håndtering af prolifererende og kryopræserverede AGS-kulturer.
- Subkultivering af AGS-celler: Denne side forklarer subkultiveringsproceduren for AGS-celler i detaljer.
Referencer
- Phuc, B.H., et al., Komparativ genomik af to vietnamesiske Helicobacter pylori-stammer, CHC155 fra en patient med gastrisk cancer uden for cardia og VN1291 fra en patient med duodenalsår. Scientific Reports, 2023. 13(1): s. 8869.
- Lin, J., et al., miRNA‑183‑5p. 1 fremmer migration og invasion af AGS-celler fra mavekræft ved at målrette mod TPM1. Rettelse i /10.3892/or. 2020.7902. Oncology reports, 2019. 42(6): s. 2371-2381.
- Khing, T.M., et al., Paclitaxels effekt på apoptose, autofagi og mitotisk katastrofe i AGS-celler. Scientific Reports, 2021. 11(1): s. 23490.
- Zhang, H., et al., sncRNA'er pakket af Helicobacter pylori-ydre membranvesikler dæmper IL-8-sekretionen i humane celler. International Journal of Medical Microbiology, 2020. 310(1): s. 151356.